Biz video üretimi ona yardım için voice-over ve Bayan Elena Pirovano için Bayan Caroline Robertson ederim. Bu çalışma, Milano Bicocca Üniversitesi, &quot;Fondo di Ateneo 2011&quot; tarafından desteklendi.

1. Prob Tutucu (Tek Site veya Multi-site) nasil yapilir <ol><li> Gerekli malzemeler, doğal kauçuk, küçük plastik borular ve bir metal stileyi vardır. Prob tutucu hayvanın boyutu, Lazer Doppler probların sayısı ve boyutu ve izlenmesi gerekir serebral vasküler topraklarına özelleştirilebilir. </li><li> Ihtiyaç duyulan boyut (yaklaşık 10 mm bir sıçan için, 300 g x 10 mm), doğal kauçuk kesin. </li><li> İstenen stereotaksik koordinatlar göre, sondanın (ler) ve doğal kauçuk bregma bir şekilde işaretleyin; orta serebral arter oklüzyonu, iskemik çekirdek için tipik koordinatlar bregma -1 mm ile 5 mm yanal beklenir midline; periferik iskemik borderzone bölge için, beklenen koordinatlar bregma +2 mm, orta hat için lateral 2 mm olabilir. </li><li> Çok net bir X bregma yerini işaretleyin, bu kafatası için prob tutucu bağlamak için bir dönüm noktası olduğunu. &lt;/ Li&gt; <li> Küçük bir plastik tüp (boyutu prob boyutuna eşit olması gerekir) içine stile yerleştirin. </li><li> Sonda yerleştirilmelidir noktada doğal kauçuk içine stileyi yerleştirin; plastik boru da lastik içine sokulduğu kadar lastik içine itmek stileyi. </li><li> Stile çekin. </li><li> Birden probları gerekiyorsa, tekrar diğer prob pozisyonlar için 1.5-1.7 adımları. </li><li> Birden problar için Opsiyonel: probları daha iyi bir istikrar sağlamak amacıyla plastik tüpler etrafında bir bant sarın. </li><li> İsteğe bağlı: gelecekteki kullanımlar için çeşitli prob yuvaları kimyasal sterilizasyon gerçekleştirin. </li></ol> 2. Preoperatif Hazırlık <ol><li> MCAO inme modeli genellikle sağkalım cerrahi olarak yapılır. Bu durumda, hem bizim video gösterildiği (yaşam süresi 24 saat sonrası ameliyat), cerrah steril alet ve malzemeleri ile aseptik bir teknik kullanır. </li><li> Izofluran ile anestetize sıçan (% 3 simültanen faz,% 1.5 bakım). </li><li> Ameliyat masasında yüzüstü sıçan yerleştirin. </li><li> Yavaşça sıçan tıraş. </li><li> Bir gazlı bez antiseptik bir solüsyon uygulayın ve cildin dezenfekte edin. </li><li> % 2 Lidokain uygulayınız 5 subkutan kranialinde mg / kg. </li></ol> 3. Prob yerleştirme ve bozulmamış Kafatası üzerinde Güvenliğini <ol><li> Sağ paramedian cilt kesisi (sağ MCAO için) yapın ve kraniyal fasya (galea aponeurotica) ulaşmak için subkutan doku teşrih. </li><li> Kranial fasyaya sağ paramedian kesi yapın ve kafatası kemiği ulaşmak için künt diseksiyon; prob tutucu uygulaması için yeterince büyük bir kafatası kemiği alanı hazırlamak. </li><li> Lütfen dikkat: sondaj veya kemik incelmesi gerek. </li><li> Kafatası yüzeyi dezenfekte ve kurumaya Merbromin çözümü uygulayın. </li><li> Kafatası yüzeyinde kuruma hızlandırmak için bir saç kurutma makinesi (soğuk hava için ayarlanmış) kullanın. </li&gt; <li> Bu noktada, kranial sütürler ve bregma açıkça görülebilir. </li><li> Steril makasla kenarları keserek prob tutucu özelleştirin. </li><li> Dikkatle plastik tüplerin alt açılış (lütfen kaçınarak, prob tutucu altındaki yüzeye cerrahi yapıştırıcı küçük bir miktar (veteriner onaylı, Siyanoakrilat) Uygula: tutkal önemli miktarda optik prob yüzeyi arasındaki kalırsa kafatası, bu) bir düşük sinyal üretebilir ve çoklu kullanımdan sonra probun zarar verebilir. </li><li> Dikkatle X işareti ile bregma eşleşen, kafatası yüzeyinde prob tutucu uygulayın. Prob tutucu üzerinde hafif basınç uygulayın. </li><li> Cerrahi yapıştırıcı kurutma hızlandırmak için bir saç kurutma makinesi (soğuk hava için ayarlanmış) kullanın. </li><li> Prob tutucu ve hayvanın başının etrafında bir ameliyat ipliği bağlayarak prob tutucu sabitleyin; mandibula üzerinde cerrahi diş konumlandırmak için dikkatli olun, submandibular bölge ve inci kaçınarake boyun. </li><li> İsteğe bağlı: Bir optik jel (ortak bir ultrason veya elektrokardiyografi jel gibi) ile prob tutucu plastik tüp (ler) doldurun, bu LD sinyalin kalitesini artıracaktır. </li><li> Prob tutucu içinde sonda (s) yerleştirin ve LD debimetrenin gerçek okuma kontrol edin. Üreticinin talimatlarına göre LD debimetre kullanın. </li><li> Submandibular bölge ve boyun kaçınarak, mandibula üzerinde cerrahi diş konumlandırmak için dikkatli olun; hayvanın başının etrafında onları bağlıyor prob (lar) sabitleyin. </li></ol> 4. MCAO Serebral Perfüzyon İzleme <ol><li> Dikkatli bir sonda (ler) i ya da prob tutucu üzerinde çekiş kuvvetleri kaçınarak, yatar pozisyonda sıçan yerleştirin. </li><li> MCAO sırasında serebral perfüzyon izleme başlayın. </li></ol> 5. Prob Temizleme (lar) ve Prob Tutucu <ol><li> Sonda (s), prob tutucu ve hayvanın başı çevresinde dikişler kesin. </li><li> Yavaşça prob tutucu doğal kauçuk tabanı etrafında kraniyal yumuşak doku ve cildi teşrih künt. </li><li> Prob tutucu çıkarın. </li><li> Kafatası yüzeyi bir antiseptik solüsyon uygulayın. </li><li> Kranial cilt dikin. </li></ol> 6. Post-operatif Bakım <ol><li> Subkutan dehidratasyonu önlemek ve gaz anestezi durdurduktan sonra bir ısıtma pedi kullanarak hayvan sıcak tutmak için salin solüsyonu 2.5 ml uygulayın. </li><li> Sağkalım cerrahi için: subkutan Ketoprofen 4 mg / kg ile preemptif analjezi sağlamak ve 12 saat ameliyat sonrası aynı doz tekrarlanmalıdır </li><li> Bizim deneysel koşullar altında, ötenazi CO 2 inhalasyon ile 24 saat sonrası ameliyat yapıldı. </li></ol>

<ol>
	<li>Sutherland, B. A., Papadakis, M., Chen, R. L., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+blood+flow+alteration+in+neuroprotection+following+cerebral+ischemia.">Cerebral blood flow alteration in neuroprotection following cerebral ischemia.</a> J. Physiol. 589, 4105-4114 (2011).</li><li>Prinz, V., Endres, M., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3+Modeling+focal+cerebral+ischemia+in+rodents:+Introduction+and+overview.">Chapter 3 Modeling focal cerebral ischemia in rodents: Introduction and overview.</a> Rodent models of stroke. , (2010).</li><li>Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+reevaluation+of+the+intraluminal+thread+model+of+focal+cerebral+ischemia:+evidence+of+inadvertent+premature+reperfusion+and+subarachnoid+hemorrhage+in+rats+by+laser-Doppler+flowmetry.">A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry.</a> Stroke. 29, 2162-2170 (1998).</li><li>Riva, M., Pappad&#224;, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+monitoring+of+intracranial+collateral+flow+predicts+tissue+and+functional+outcome+in+experimental+ischemic+stroke.">Hemodynamic monitoring of intracranial collateral flow predicts tissue and functional outcome in experimental ischemic stroke.</a> Exp. Neurol. 233, 815-820 (2012).</li><li>Menon, B. K., Smith, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+leptomeningeal+score+on+CT+angiography+predicts+clinical+and+imaging+outcomes+in+patients+with+acute+anterior+circulation+occlusions.">Regional leptomeningeal score on CT angiography predicts clinical and imaging outcomes in patients with acute anterior circulation occlusions.</a> Am. J. Neuroradiol. 32, 1640-1645 (2011).</li><li>Bang, O. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collateral+flow+predicts+response+to+endovascular+therapy+for+acute+ischemic+stroke.">Collateral flow predicts response to endovascular therapy for acute ischemic stroke.</a> Stroke. 42, 693-699 (2011).</li><li>Shuaib, A., Butcher, K., Mohammad, A. A., Saqqur, M., Liebeskind, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collateral+blood+vessels+in+acute+ischaemic+stroke:+a+potential+therapeutic+target.">Collateral blood vessels in acute ischaemic stroke: a potential therapeutic target.</a> Lancet Neurol. 10, 909-921 (2011).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+Stroke+Model+Guidelines+for+preclinical+stroke+trials+(1st+edition).">Rodent Stroke Model Guidelines for preclinical stroke trials (1st edition).</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li><li>Shepherd, A. P., &#214;berg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laser-Doppler Blood Flowmetry. , (1990).</li><li>Ulu&#231;, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Akt&#252;re, E., Ba&#351;kaya, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+Cerebral+Ischemia+Model+by+Endovascular+Suture+Occlusion+of+the+Middle+Cerebral+Artery+in+the+Rat.">Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat.</a> J. Vis. Exp. (48), e1978 (2011).</li><li>Garcia, J. H., Wagner, S., Liu, K. F., Hu, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurological+deficit+and+extent+of+neuronal+necrosis+attributable+to+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.+Statistical+validation.">Neurological deficit and extent of neuronal necrosis attributable to middle cerebral artery occlusion in rats. Statistical validation.</a> Stroke. 26, 627-634 (1995).</li></ol>

Bu video-makale üretim için finansman bizim deneysel çalışmada gösterilmiştir Lazer Doppler aletleri üreten Moor Aletleri Ltd (Axminster, Devon, İngiltere), tarafından sağlanmıştır. Deneysel protokol (2010/63/EU laboratuar hayvanlarının kullanımı (DL 116/1992) ile ilgili ulusal kurallar uyarınca ve hayvan deneyleri için Avrupa Birliği Direktifi, Milano Bicocca Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmıştır ), İtalyan Sağlık Bakanlığı, proje lisans (n. 219/2011-B) altında.

Biz in-house bir veya MCAO prosedürü sırasında farelerin sağlam kafatasına birden (derin penetrasyon) ikiz fiber LD problar güvenli bir bağlanma için basit ve düşük maliyetli bir sistem geliştirdi. Düzgün bir sinyal algılama ve serebral perfüzyon başarılı bir izleme için ön koşuldur yana görünüşte önemsiz bir sorun olsa, kafatasına LD prob güvenilir bir eki almak, aslında bu deneysel ortamda önemli bir konudur. Böyle burr hole ve kemik vidaları gibi invazif işlemler, genellikle cerrahi süresini uzatmak ve kraniotomi ile ilgili daha fazla deneysel değişkenlerin tanıtmak ve bu araştırmacıların cesaretini ve LD izleme kullanarak onları kaçınabilir. Öte yandan, tek bir fiber kullanımı (düşük penetrasyon) kafatasının yüzeyine direkt olarak yapıştırılmış olması daha ince ve göreceli olarak kolay olan sondalar, düşük kalitede bir sinyal verir ve kafatası delme veya inceltme olmadan yetişkin fareler ile güvenli bir şekilde kullanılamaz. Biz doğal kauçuk, plastik borular ve metal bir stile gibi basit ve düşük maliyetli malzemeler kullanılır. Ismarlama prob tutucu birkaç dakika içinde üretilmiş ve deneysel koşullara adapte edilebilir. Bu prob yuvaları iskemik çekirdek veya aynı yarımkürede veya iki hemisfer arasında farklı arteriyel bölgede birden çok site izleme için klasik tek site izleme için, bir veya daha derin penetrasyon LD problar ağırlayacak. Birçok prob yuvaları üretilir, kimyasal sterilize ve gelecekte kullanılmak üzere saklanabilir. Soğuk hava ile hızlandırılmış Veteriner tarafından onaylanmış cerrahi yapıştırıcı (cyanoacrilate), istenen kafatası koordinatlara göre, sıçan kafatasının yüzeyine sağlam prob tutucu bağlamak için kullanılır. Son olarak, prob set-up daha sık dikişlerle yerine sabitlenir. Set-up bu LD prob genel zaman, mastering bu teknik sonra, yaklaşık 10 dk. As i gösterilirve periferik MCA topraklarında (LD prob 2: ağırlıklı bir halkalı bölge): n Bu video, rutin merkezi MCA topraklarında (iskemik çekirdek LD probu 1) serebral perfüzyon izlemek. Bizim son çalışmada LD probu 2 (% 52 ±% 16 SD, başlangıca göre ortalama) kan akımı değişiklikleri ve değişkenliği ile karşılaştırıldığında LD probu 1 (% 31 ± 6% SS, kıyasla daha yüksek olduğunu göstermiştir bazal) ve inme sonucu 4 tahmin etmek için de kullanılabilir. Biz bizim in-house geliştirilen sistem kullanmak istiyorum araştırmacılar için bazı sorun giderme önerileri sunabilir. Denemenin başında, erken dekolmanı önlemek için prob tutucu takmadan önce çok iyi kafatası yüzeyi (Merbromin ve soğuk hava ile) kuru dikkatli olun. Ayrıca, plastik tüpün açık ucu ve LD prob optik yüzey ile teması önlemek için, doğal kauçuk üzerinde yapıştırıcı uygulamak için zayıf bir sinyal verir ve sonda ile potansiyel zarar görmesini önlemek için emin olun. Hayvanın başı çevresinde dikiş bağlama işleminde (bu, çene kemiği üzerinden dikiş konumlandırma ile önlenir) solunum yolu obstrüksiyonu önlemek için dikkat edin. Problar konumlandırılması ve güvence sonra, çekişi değil prob kabloları için dikkatli olmak servikal cerrahi için sırtüstü pozisyonda hayvan açarken, bu adım genellikle iki kişi, bir hayvan tutan kişi ve prob kabloları tutan ikinci bir kişi gerektirir ve onları hafifçe konumlandırma istenen konuma. Son olarak, ikiz-fiber LD prob nihai kan kontaminasyonu kolayca üreticisi tarafından sağlanan temizlik talimatları izleyerek yönetilmektedir. Bu videoyu gösterildiği serebral perfüzyon izleme Bizim optimize sistem, sonda anda bu alanda ticari şirketler tarafından satılan set-up sistemlere daha kolay, daha hızlı ve daha güvenilir bir alternatif sağlayabilir. Ayrıca, diğer araştırmacılar tarafından bu sistemin kullanımı saplama artırabilir inanıyoruzserebral teminat terapötiklerin yeni nesil gelişimini sağlayan deneysel inme alanında serebral hemodinami, y.

Bu önemli bir konu genellikle paradoksal temel araştırma çalışmaları 1 tarafından ihmal edilmektedir yana inme patofizyolojisi ve tedavisi etkileyen hemodinamik faktörlere Translasyonel araştırma, uygulanması gerekmektedir. Serebral perfüzyon izleme doğru iskemik inme modelleme 2 için, gerekli, ancak kapatacağı araçtır. Kenara subaraknoid kanama 3 arteryel damar tıkanıklığı ve dışlama teyidi, sürekli serebral perfüzyon izleme perfüzyon açığı, intrakranial kollateral damarların fonksiyonel durumu ve yeni tedavi yaklaşımları hemodinamik etkisinin derecesi ve tutarlılığı hakkında yararlı bilgiler sağlayabilir. Grubumuzun yeni bir çalışma multi-site hemodinamik izleme intrakranial kollateral dolaşımın değerlendirilmesi ve infarkt ve fonksiyonel açığı 4 tahmin edebilirsiniz kullanılabilir göstermektedir. Bu deneysel bulgular consi vardırserebral kollateral dolaşımın fonksiyonel performans iskemik inme hastalarında 5, 6 klinik sonucunu belirlemede olduğunu gösterdi klinik çalışmalar ile stent. Bu nedenle, serebral teminatlar iskemik inme 7 akut faz potansiyel bir tedavi hedefi olarak savunulmuştur. Laser-Doppler (LD) araçların deneysel iskemik inme ve bunların kullanımı bu tema 8 yeni kurallar tarafından önerilen serebral perfüzyon ölçmek için kullanılan en yaygın araçtır. LD tek lif LD probları 9 kıyasla daha derin bir penetrasyon sağlayan ikiz elyaf LD probları ile küçük kortikal hacim aletleri ölçü mikrovasküler perfüzyon, lif ayrılık genişliği bağımlı olmak kaydedilen sinyal derinliği. Kan akımı değerleri yerine mutlak serebral kan akımı görece daha belirtmek keyfi perfüzyon üniteleri (PU) olarak ifade edilmiştir. PU Kalibrasyon genellikle istimal yapılırg motilite standartları, üreticinin talimatlarına göre. LD flowmetre aynı oturum içinde sürekli dinamik izleme ve nicel veri üretimi sağlar. Şu anda LD kullanımını sınırlamak teknik sorunlar arasında, önemli bir konu hayvanın kafatasına bir derin penetrasyon Lazer Doppler probu bir güvenli ve uzun süreli bağlanma elde edilir. Bu uzun süreli izlenmesi için gerekli olan ve çoklu problar bizim laboratuarında performans gibi farklı serebral arteriyel bölgeler için kullanılır eğer. Problar burr hole veya kranial vidaları kullanarak kafatasına bağlı eğer tek lif (düşük penetrasyon) LD probları basit cerrahi yapıştırıcı ile kafatası ekli ise zayıf sinyal ve güvensiz bağlanma oluşur ise, özellikle, uzamış ameliyat süresi, gereklidir. İkiz lif (derin penetrasyon) LD probları yüksek ve daha tutarlı sinyal verin, ama onlar tek bir fiber problar daha büyük ve az olamazcerrahi yapıştırıcı sadece kullanarak kafatasına tached. Bu videoda, biz sıçan intraluminal filament tarafından geçici orta serebral arter oklüzyon sırasında serebral perfüzyon izlenmesi için Optimize sistemi gösterir. Biz sağlam kafatası üzerinde serebral perfüzyon uzun süreli izlenmesi için kullanılacak tek veya birden fazla çift-fiber (derin penetrasyon) için etkili, özel yapım, düşük maliyetli sahibi LD probları, elde etmek için basit bir yöntem tarif. Sıçanlarda geçici MCAO için cerrahi prosedür Uluç ve arkadaşları tarafından 10 video madde olarak görülebilir ve bu görüntü de gösterilmemiştir.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> Ekipman </td></tr><tr><td> MoorVMS-LDF 2-kanal Lazer Doppler Monitörü </td><td> Moor Aletleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td> VP12 prob </td><td> Moor Aletleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Reaktif / Malzeme </td></tr><tr><td> Doccol silikon kaplı filament büyüklüğü 4-0, kaplama 0.39mm çaplı </td><td> Doccol Şirketi </td><td> 403956PK10 </td><td></td></tr><tr><td> Yeni doğmuş bebekler için Doğal kauçuk, örneğin ortak bir emzik </td><td></td><td></td><td> Çoklutedarikçileri </td></tr><tr><td> Metal stile, spinal iğne 18 GA x 90 mm ​​örn. </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Infüzyon 25 GA x 20 mm için belirlenen venden örneğin Plastik borular, </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Emilmeyen sütür, kaplamalı, örgülü ipek </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Siyanoakrilat cerrahi yapıştırıcı </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr><tr><td> Izofluran (% 100 v / v) veteriner kullanımı için </td><td></td><td></td><td> Birden tedarikçileri </td></tr></tbody></table>

optimized system for cerebral perfusion monitoring in the rat stroke model of intraluminal middle cerebral artery occlusion

Klinik öncesi inme araştırma translasyonel potansiyeli deneysel modelleme doğruluğuna bağlıdır. Akut iskemik inme hayvan modellerinde Serebral perfüzyon izleme başarılı arteriyel oklüzyon onaylamak ve subaraknoid kanama çıkarılmasına izin verir. Serebral perfüzyon izleme de inme sonucu güçlü bir belirleyici ve olası bir tedavi hedefi olarak ortaya çıkmaktadır intrakranial kollateral dolaşım, incelemek için kullanılabilir. Deneysel serebral iskemi için geçerli kurallar çerçevesinde Lazer Doppler perfüzyon izleme tanınan bir rolü olmasına rağmen, teknik zorluklar bir dizi bu sınırı yaygın kullanımı vardır. Önemli konulardan biri hayvanın kafatasına bir derin penetrasyon Lazer Doppler probu bir güvenli ve uzun süreli bağlanma elde edilir. Bu videoda, biz sıçan intraluminal filament tarafından geçici orta serebral arter oklüzyon sırasında serebral perfüzyon izlenmesi için Optimize sistemi gösterir. Biz i geliştirdin-house gerekirse multi-site izleme izin (derin penetrasyon) ikiz fiber Lazer Doppler problar için özel yapılmış tutucu elde etmek basit bir yöntem. Serebral perfüzyon sürekli ve uzun süreli izleme kolayca sağlam kafatası üzerinde elde edilebilir.

Geçici MCAO (60 dk) eksternal karotid arterin bir silikon kaplı filamanın takarak oluşturuldu. Filament sonra LD izleme altında, MCA kökeni internal karotis arter terminal sonuna kadar itildi. Ortak karotis arter ve pterygopalatin arterin geçici filament cerrahi yerleştirme sırasında tıkanmıştır. Cerrahi işlemin bir şematik temsili Şekil 1A &#39;de gösterilmiştir. İki LD problar konumlandırma kraniyal koordinatları yatan arteriyel alana göre seçilmiştir. Kollateral akımı arasındaki borderzone bölgede beklenen ise; jelatin mürekkep perfüzyon ile ön denemeler (Şekil 1B) iskemik çekirdek merkez MCA topraklarında (Probe 1 bregma -1 mm, orta hattan 5 mm) beklendiği olduğunu gösterdi orta ve ön serebral arterlerin kortikal dalları (bregma +2 mm, orta hattan 2 mm; Probe 2). Serebral hemodinami (Şekil 2) sırasında ve MCAO sonra, yani önce, cerrahi işlemin süresi boyunca çok site Laser Doppler problar kullanılarak incelenmiştir. MCAO sırasında serebral perfüzyon açığı küçüktü ve Probe 1 ile karşılaştırıldığında Prob 2 değişkenliğin yüksek bir derecede göstermiştir, iskemik koşullarda intrakranial kollateral fonksiyonel performanstaki arası bireysel farklılıkları ortaya koymak. Çoklu-site Laser Doppler izleme de proksimal ekstra-kranyal serebral arterlerin (karotis arter, internal karotis arter, pterygopalatin arter) oklüzyon sırasında serebral hemodinamik değişiklikleri incelemek için olanak sağlar. İnme sonucu kresil violet (Şekil 3), ve Garcia fonksiyonel neuroscore 11 ile boyanarak 19 ardışık bölümleri üzerinde hesaplanan, infarkt hacmi ile reperfüzyon sonrası 24 saat değerlendirildi. Spesifik belirteçler asso için İmmünohistokimyaiskemik beyin hasarı ile ilişkilidir intrakraniyal dolaşım çok yer hemodinamik izleme ile ilgili nöronal kayıp (Protein 2, map2 ilişkili mikrotübül) ve iskemik penumbra (ısı şoku proteini 70, Hsp70) topografik bir dağılım elde etmek üzere yapılmış, (Şekil 4). <img src="/files/ftp_upload/50214/50214fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50214/50214fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Sıçan intraluminal MCAO sırasında serebral perfüzyon izleme. Geçici MCAO için cerrahi işlem A. şematik gösterimi. Bir silikon kaplı filamanın eksternal karotis arter tanıtıldıktan sonra, MCA kökeni tıkamak için kullanılan ve internal karotis arter yoluyla itildi. Proksimal servikal arterlerin ya bağlandı (eksternal karotis arter) veya prosedürü sırasında (pterygopalatin arter ve karotis arter) geçici tıkalı edildidure. B. temsilcisi beyin jelatin-mürekkep boyandıktan sonra gösterilir. Jelatin-mürekkep çözümü Transcardiac perfüzyon reperfüzyon olmadan iskemi başlangıcından sonra 60 dk yapıldı. Normalde perfüze beyin jelatin-mürekkep ile boyanmış ve iskemik (perfüze olmayan) alanında boyanmadan kalırken (pembe renkli), siyah lekeli damarları ile gri renkli olarak ortaya çıkmıştır. LD iki prob konumlandırılması için kranyal koordinatlar gösterilmiştir. Probe 1 bregma gelen = -1 mm, orta hattan 5 mm; Prob 2 = bregma, orta hattan 2 mm +2 mm. <img src="/files/ftp_upload/50214/50214fig2.jpg" alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50214/50214fig2highres.jpg"/> Şekil 2. Çoklu-site Laser Doppler problar kullanılarak serebral hemodinamik kayıtları. Iskemik koşullarda işlevsel olarak aktif intrakranial kollateral anlaşılacağı tipik hemodinamik deseni gösterilir. Bu hayvanlarda, LD kayıtlarında küçük gösterdiProb 2 kanal er perfüzyon açığı, CCA oklüzyon ve MCA tıkanıklığı sırasında 1 kanal, Probe&#39;a karşılaştırıldı. MCA-O = orta serebral arter oklüzyonu. CCA-O = karotis arter oklüzyonu. PU = perfüzyon birimleri. <img src="/files/ftp_upload/50214/50214fig3.jpg" alt="Şekil 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50214/50214fig3highres.jpg"/> Şekil 3,. Infarkt hacminin hesaplanması için Temsilcisi beyin kesitleri histolojik koronal kesitler (50 um; n 250 mikron aralığı = 19; bregma +2.5 mm -3.0 mm). Kresil violet% 0,1 ile% 4 paraformaldehid ve lekeli giderilmiştir. Infarkt hacmi serebral ödem nedeniyle interhemisferik asimetri için düzeltilmiş ImageJ görüntü işleme yazılımı kullanılarak hesaplanmış ve mm 3 olarak ifade edilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50214/50214fig3large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> <img src = &quot;/ files/ftp_upload/50214/50214fig4.jpg&quot; alt = &quot;Şekil 4&quot; fo: content-width = &quot;6in&quot; fo: src = &quot;/ files/ftp_upload/50214/50214fig4highres.jpg&quot; /&gt; Şekil 4. Nöron kaybı ve yarı gölge moleküler belirteçlerin immün Temsilcisi ardışık beyin kesitleri gösterilmeyen, kresil violet% 0.1 (A) ile boyanmış veya nöron kaybı belirteçleri (protein 2, map2 ilişkili mikrotübül; B) ile immünhistokimyasal hangi. Ve iskemik penumbra (ısı şok protein-70, Hsp70; C).

Watch this Scientific Journal Video about Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

optimized-system-for-cerebral-perfusion-monitoring-rat-stroke-model

Research

JoVE Journal

Medicine

23.0K Görüntüleme.  University of Milano Bicocca. Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Video: Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Tıp

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...