Biz plastik gömülü stent kesit en mükemmel teknik yardım için Bayan Angela Freund teşekkür ederim. Biz immünhistokimya boyama ile profesyonel yardım için de Bayan Roya Soltan ve Bayan Angela Freund teşekkür ederim.

1. Stent hazırlanması ve İmplantasyon <ol><li> Stent-dikmeler (Fort Wayne Metal, Castlebar, İrlanda) örgülü ve daha sonra Tekstil Teknolojisi ve Makine Mühendisliği, Almanya RWTH Aachen Üniversitesi (Şekil 1A) Enstitüsü&#39;nde istediğiniz boyuta kesti. </li><li> Implantasyondan önce, stentler forseps kullanılarak, 2 cm silikon tüp içine transfer edilir ve (Şekil 1A) ön uç adlandırılan, bir terminal ucunda en az 2 mm yerleştirilir. </li><li> Ön uç implantasyon için keskin bir uç sağlamak için, eğik olarak kesilmelidir. </li><li> Implantasyon önce, stent kayma sağlamak için, bol sulu olmalıdır. </li></ol> 2. Stent İmplantasyonu <ol><li> 10-12 haftalık erkek C57BL / 6 yabanıl tip fareler, 25-27 gram 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg ksilazin intraperitonal enjeksiyonu ile anestezi uygulanır. Uygun anesthetization refleksleri eksikliği ameliyat öncesinde doğruladı ve birsakal hareket. Anestezi altında, fare göz bepanthene krem ​​bir film kapsamındadır ise kuruluğu önlemek için. </li><li> Tıraş ve ventral boyun bölgesinde uygun dezenfeksiyon sonra, 1 cm küçük bir medyan kesi makas kullanarak, bir stereo mikroskop altında yapılır. Steril kavisli bir forseps ile 2 yağlı Oluşumu ayrıldıktan sonra, sol ortak karotid arter, trakea ile birlikte darbe görülebilir. </li><li> 1 sol karotis arter cm ve çatallanma ücretsiz hazırlıklı olmalıdır. 5/0 ipek iplik kullanarak 1 düğüm sol karotis arter etrafında bağlı olacak, 7/0 ipek ipler kullanarak 2 knot sol eksternal karotis arter etrafında bağlı olacak ve 7/0 ipek iplik kullanarak 1 düğüm bağlı olacaktır internal karotis arter etrafında (Şekil 1B). </li><li> Kan akışı daha sonra sıkıca yanı sıra, düğüm çevre çekerek dahili karotid arter ve harici karotid arter proksimal düğümlendiği bağlayıcı kesintiyekarotis arter ing. Geminin ortak ve dış karotid arter düz bir çizgi olan bir şekilde sabit olmalıdır. </li><li> Eksternal karotid arter küçük bir kesi bir Vannas makas kullanarak, proksimal düğüm yakın yapılır. Stent içeren silikon tüp bir kılavuz-tel kullanarak, önünde keskin ucu, dış karotis arter içine tanıtıldı. Stent istenilen konuma ulaştıktan sonra, silikon tüp kılavuz-tel üzerinden geri çekti ve stent (Şekil 1B) şekli-bellek genişletme izin verir. </li><li> Eksternal karotid arter distal düğüm böylece kan akışını geri, kesi ve iç ve karotis arter knot site kaldırılır close sıkıca bağlamak edilir. </li><li> Cilt kesisi 3-4 Michel dikiş klipleri ve Michel forcep kullanılarak kapatılır. Fare tam iyileşme kadar kırmızı ışık altına yerleştirilir. Bir analjezik tedavi gerekli değildir. </li><li>Plak 1-3 hafta sonra analiz edilebilir. Yeniden endotelizasyon incelemek için, önceki bir son zaman noktası gerekli olduğu (3-4 gün). Biz 4 hafta Bu cerrahi girişim sonrasında, özellikle minyatür stent biofunctionalize özgü kaplama kullanılarak, neoangiogenesis numunenin yaklaşık% 30&#39;unda oluşur stent bizim modelinde gözlenen. Bu farklı mekanizmaları ve başka bir patolojik sorun temsil ile, yeniden ve rejeneratif süreçleri için bir arka olan. Stent implantasyonu sonrası 3 hafta bir son zaman noktasında neoangiogenesis başlangıcı neden olduğu rejeneratif etkileri ile karıştırmak için değil faydalı olacaktır bu yan etkilerinin altında yatan mekanizmaları neointima oluşumu, in-stent darlık ve / veya analiz konsantre. </li></ol> 3. Plak oluşumu analizi <ol><li> Son zaman noktasında, hayvanlar 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg ksilazin intraperitonal enjeksiyonu ile anestezi uygulanır.Uygun anesthetization refleksleri ve sakal hareket eksikliği ameliyat öncesinde onaylanır. </li><li> Hayvanlar kalp içindeki kesilmesi ile öldürüldü. Kan serumundaki daha fazla analiz için toplanır. </li><li> Göğüs boşluğu açılması ve PBS% 4 paraformaldehid (PFA) çözümü ile kalp içindeki ponksiyon, bir vücut perfüzyon ile yıkandıktan sonra 5 dakika boyunca gerçekleştirilir. Stent içeren sol karotid arter, parçalara doğrudan bir% 4 PFA bir çözeltiye yerleştirilmiş ve en az 16 saat sonra plastik embbeded edilir. </li><li> 50 mikron kalınlığında kesitler gördüm bir elmas bant ile plastik-gömülü örneklerinden yapılmaktadır. </li><li> Plak boyutunu ölçmek için, Giemsa boyama yapılır. </li><li> Kabın stentli alanı içinde yeniden endotelizasyon oranını incelemek için, von Willebrand faktörü (vWF) için immünohistokimya gerçekleştirilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Ross, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+to+injury+and+atherogenesis.">Response to injury and atherogenesis.</a> Am. J. Pathol. 86, 675-684 (1977).</li><li>Virmani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+the+vulnerable+plaque.">Pathology of the vulnerable plaque.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47, 13-18 (2006).</li><li>Farb, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+acute+and+chronic+coronary+stenting+in+humans.">Pathology of acute and chronic coronary stenting in humans.</a> Circulation. 99, 44-52 (1999).</li><li>Weber, C., Noels, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis:+current+pathogenesis+and+therapeutic+options.">Atherosclerosis: current pathogenesis and therapeutic options.</a> Nat. Med. 17, 1410-1422 (2011).</li><li>Lenzen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+and+outcome+of+patients+with+established+coronary+artery+disease:+the+Euro+Heart+Survey+on+coronary+revascularization.">Management and outcome of patients with established coronary artery disease: the Euro Heart Survey on coronary revascularization.</a> Eur. Heart J. 26, 1169-1179 (2005).</li><li>Babapulle, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hierarchical+Bayesian+meta-analysis+of+randomised+clinical+trials+of+drug-eluting+stents.">A hierarchical Bayesian meta-analysis of randomised clinical trials of drug-eluting stents.</a> Lancet. 364, 583-591 (2004).</li><li>Wiviott, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intensive+oral+antiplatelet+therapy+for+reduction+of+ischaemic+events+including+stent+thrombosis+in+patients+with+acute+coronary+syndromes+treated+with+percutaneous+coronary+intervention+and+stenting+in+the+TRITON-TIMI+38+trial:+a+subanalysis+of+a+randomised+trial.">Intensive oral antiplatelet therapy for reduction of ischaemic events including stent thrombosis in patients with acute coronary syndromes treated with percutaneous coronary intervention and stenting in the TRITON-TIMI 38 trial: a subanalysis of a randomised trial.</a> Lancet. 371, 1353-1363 (2008).</li><li>van Werkum, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+coronary+stent+thrombosis:+the+Dutch+Stent+Thrombosis+Registry.">Predictors of coronary stent thrombosis: the Dutch Stent Thrombosis Registry.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 53, 1399-1409 (2009).</li><li>Finn, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+responses+to+drug+eluting+stents:+importance+of+delayed+healing.">Vascular responses to drug eluting stents: importance of delayed healing.</a> Arterioscler. Thromb Vasc. Biol. 27, 1500-1510 (2007).</li><li>Joner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+drug-eluting+stents+in+humans:+delayed+healing+and+late+thrombotic+risk.">Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 48, 193-202 (2006).</li><li>Cines, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+in+physiology+and+in+the+pathophysiology+of+vascular+disorders.">Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.</a> Blood. 91, 3527-3561 (1998).</li><li>Hristov, M., Weber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+characterization,+pathophysiology,+and+possible+clinical+relevance.">Endothelial progenitor cells: characterization, pathophysiology, and possible clinical relevance.</a> J. Cell Mol. Med. 8, 498-508 (2004).</li><li>Rabelink, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+progenitor+cells:+more+than+an+inflammatory+response?.">Endothelial progenitor cells: more than an inflammatory response?.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 834-838 (2004).</li><li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+evaluation+of+drug-eluting+stents+for+peripheral+applications:+recommendations+from+an+expert+consensus+group.">Preclinical evaluation of drug-eluting stents for peripheral applications: recommendations from an expert consensus group.</a> Circulation. 110, 2498-2505 (2004).</li><li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+neointimal+response+to+coronary+artery+injury+in+pigs+and+dogs.+Implications+for+restenosis+models.">Differential neointimal response to coronary artery injury in pigs and dogs. Implications for restenosis models.</a> Arterioscler. Thromb. 14, 395-400 (1994).</li><li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restenosis+and+the+proportional+neointimal+response+to+coronary+artery+injury:+results+in+a+porcine+model.">Restenosis and the proportional neointimal response to coronary artery injury: results in a porcine model.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 19, 267-274 (1992).</li><li>Ali, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+in-stent+stenosis+in+ApoE+knockout+mice:+insights+from+a+novel+mouse+model+of+balloon+angioplasty+and+stenting.">Increased in-stent stenosis in ApoE knockout mice: insights from a novel mouse model of balloon angioplasty and stenting.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27, 833-840 (2007).</li><li>Chamberlain, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+in+situ+stenting.">A novel mouse model of in situ stenting.</a> Cardiovasc. Res. 85, 38-44 (2010).</li><li>Rodriguez-Menocal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+in-stent+restenosis.">A novel mouse model of in-stent restenosis.</a> Atherosclerosis. 209, 359-366 (2010).</li><li>Costa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+antimicrobial+peptides+(AMPs)+onto+biomaterial+surfaces.">Covalent immobilization of antimicrobial peptides (AMPs) onto biomaterial surfaces.</a> Acta Biomaterialia. 7, 1431-1440 (2011).</li><li>Soehnlein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+cathelicidin+protects+from+neointimal+hyperplasia.">Neutrophil-derived cathelicidin protects from neointimal hyperplasia.</a> Science Translational Medicine. 3, 103ra198 (2011).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

In-stent trombozu ve restenoz riskini azaltmak için ve ilaç salınımlı stentler, bir hayvan modelinde stent implantasyonu kolay, basit ve erişilebilir yöntemi için yeni kaplama gelişimini sürdürmek için gereklidir. Fare stent ve bu ilaçların etkinliğini sonra arteriyel yeniden karmaşık mekanizmaları incelemek için ideal bir sistem sağlar. Fare in-stent restenoz için mevcut modeller zordur, yüksek cerrahi beceri gerektiren ve kanama veya felç 17-19 gibi komplikasyonlar açısından yüksek risk anlamına. Örneğin, kabın balon dilatasyon ve daha sonra bir alıcı fare 17. karotid artere stentli kademeli transplantasyonundan sonra bir verici fare göğüs aort içine stent implantasyonu modelinde, pato-mekanizmalarının çalışma değildir sadece donör malzeme alıcı reaksiyonu ile değil, aynı zamanda vaza vazorum ve adventisyanın büyük zarar etkilenmiştir. Bir paslanmaz Stee implantasyonubalon dilatasyon-19 hemen sonra abdominal aort içine l stent nedeniyle Arteriyotomi sitede abdominal aorta tromboz veya kanama sonra arka bacak felç gibi yüksek bir mortalite oranı (% 35) takip etmektedir. Bir spiral şekilli femoral arter 18 ile abdominal aort içine nitinol-stent kendini genişletme İmplantasyon körü körüne sağ tarafta stent yerleştirmek için aorta femoral arterden dallanma birlikte stent yönlendiren çoğunlukla nedeniyle yüksek cerrahi beceri, ihtiyacı var. Bu prosedür, arka bacak yüksek bir femoral sinir hasar görme tehlikesi, bu nedenle felç tarafından takip edilir. Bu işlemler ile karşılaştırıldığında, fare stent implantasyonu bizim model yüksek cerrahi beceri gerekmez. Bizim modeli arter yeniden farklı ilaç-kaplama etkilerini analiz etmek için basit, kolay ve etkili bir yöntem sunuyor, stent yerleştirilmesi görüş altında yapılan ve zarar sinirler ya da diğer yapıların hiçbir risk söz konusudur. Comkarmaşık moleküler mekanizmaları geminin doğrudan erişim ile sadece, fare karotis arter stent bizim modelinde daha kolay araştırıldı, aynı zamanda farklı knock-out farelerde suşlarının varlığı nedeniyle olabilir. Bir sınırlama olarak, klinik prosedürü ile karşılaştırıldığında, bizim modeli sağlıklı fareler / arterler kullanır ve (değil-stent restenoz, ancak in-stent darlık) önceden var olan plaklar üzerinde stent gerçekleştirmez. Ayrıca stent-implantasyon öncesinde balon-dilatasyon yapmazlar. Bununla birlikte, her iki modelde de damar duvarının büyük hasar nedeniyle, reparatory süreç aynıdır. Ne yazık ki, metal türetilmiş eserler, neointimal büyümesinin in vivo izlenmesinde bir ultrason veya bilgisayar tomografisi gibi mevcut görüntüleme yöntemleri ile mümkün değildir. Başka bir sınırlayıcı faktör metal işleme bazı uzmanlık gerektiren metal bazlı stentlerin ince kesit vardır. Bu yöntemi kullanarak, biznötrofil-talimat LL-37 girişimsel tedavi 21 sonrası vasküler iyileşmesini sağlamak için yeni bir kavram sağlayan, restenoz-stent içinde azaltmak kaplı nitinol-stent minyatür biofunctionalized olduğunu, göstermek mümkün. Bu kısıtlamalara rağmen, bu model, şimdiye kadar, en uygun sistem olarak böylece para ve zaman tasarrufu, arteriyel yeniden sırasında moleküler olaylar stent ve etkileri için yeni ilaç-kaplamalar araştırmak gibi görünüyor. Ayrıca, bu model kolaylıkla her terapötik hipotez daha büyük bir hayvan ya da hoş olmayan ve beklenmedik etkileri önlemek için, insan için uygulamadan önce kontrol edilebilir, böylece, insan daha benzer hamster, adapte edilebilir.

Aterosklerozun ilerlemesini neden Kardiyovasküler hastalıklar sanayileşmiş ülkelerde önde gelen ölüm nedenidir. Ateroskleroz koroner damar yoluyla kan akışını etkileyen damar lümeni içine bir uzun plak oluşumu ile sonuçlanan endotel hasar 1 damar duvarının bir odak, enflamatuar fibro-proliferatif cevap, vardır. Iltihaplı plak 2 ince fibröz kapak rüptürü miyokard enfarktüsü sonucu% 75 üzerinde. Bu komplikasyon ölümcül olabilir bu yana, stent implantasyonu ile perkütan (koroner) anjiyoplasti (PTCA) Mevcut tıbbi uygulamada ilk tedavi seçeneği haline gelmiştir. Yöntem daralmış koroner arterin genişlemesi ve böylece kan akımının restorasyonu sağlar. Aynı zamanda, bu endotel ve damar duvarı 3&#39;e kadar bir oranda yaralanmasına neden olmaktadır. Bununla birlikte, bu tedavinin uzun süreli etki, bir aşırı arteryel remode ile sınırlıdırling ve restenoz 4. Stentler istihdam, PTCA akut damar kapanması sonra 5 revaskülarizasyon sağlayan karmaşık lezyonların tedavisinde daha etkili olmuştur. Bu yöntem, en az 10% 6 ile in-stent restenoz olayını azaltır. Bu avantajları yanında, koroner revaskülarizasyon için ilk seçenek tedavisi de in-stent trombozu ve restenoz yaşamı tehdit eden riskler taşımaktadır. In-stent trombozu trombositler ve yaralı sitesine fibrin büyük bir yapışma takip geminin bir de-endotelizasyon, neden olur. Hastaların% 26 in-stent trombozu ve miyokard infarktüsü 7 63% die muzdarip. Restenoz neointimal hiperplazi (göç ve çoğalması damar düz kas hücrelerinin (VSMC), hücre dışı matriks (ECM) birikimi ve yeniden içeren, damar duvarına mekanik yaralanma sonrası yara iyileşme sürecini ifade ederGeminin. Çoğu zaman, bir invazif yeniden girişim in-stent restenoz tromboz ve nedeniyle ciddi bir şekilde daralmış aterosklerotik damar dilatate için gerekli hale gelir. In-stent trombozu engellemek için, bir anti-trombotik bir ilaç ile uzun süreli tedavi 8 gereklidir. Restenoz önlemek için, ilaç salınımlı stentlerin yeni nesil bu birkaç ay 9,10 için bir polimer kaplama immünsupresif ilaçlar (örneğin sirolimus, everolimus, zotarolimus) ve anti-kanser ilaçlar (örneğin paklitaksel) gibi anti-proliferatif maddeler Zehir. Bu ilaçların neointima oluşumunu ve restenoz rağmen, inhibe yeniden endotelizasyon tarafından in-stent tromboz riski yüksek korur. Arteryel yaralanma sonra endotel bölmesinin bakım trombotik komplikasyonların önlenmesi için gereklidir. Fizyolojik koşullar altında, insan endotel küçük bir devir hızı 11 göstermektedir. Patoloji altındaogical koşullar, ancak endotelyal bütünlüğü olgun endotel hücreleri çevreleyen ve endotelyal progenitör hücreleri (EPC) dolaşan tarafından hızlı bir iyileşme 12,13 gereklidir, böylece bozulur. Büyük hayvanların 14-16 ya da fare aort arterde bu karmaşık moleküler mekanizmaların çalışma sınırlı veri 17-19 sunan, çok zor bir işlemdir. In-stent trombozu ve restenoz yeni modeller azaltmak için yeni stent-kaplama etkinliğini test etmek için zorunludur. Nitinol çünkü başarılı bir klinik kullanımda çıplak metal stent olarak kullanılan onun &#39;yüksek elastikiyet, şekil hafıza etkisi ve hastada iyi tolerans, bir stent için ideal bir platform temsil eder. Bu alaşım 20 kaplı ve farelerin karotid artere implante edilebilir 500 mikron, bir dış çapa sahip bir minyatür stent oluşturmak mümkün kıldı. Fare c için bir minyatür nitinol stent gelişimiarotid arter, stent implantasyonu ile oluşturulan hassas moleküler mekanizmalarının çalışma sağlar ve restenoz önlemek için hızlı ve verimli bir farklı ilaç-kaplamaların etkilerini test imkanı sunuyor. Ayrıca, farklı knock-out fareler suşları varlığını neointima büyüme ve in-stent trombozu yer alan farklı moleküllerin rolünü açıklığa kavuşturulması büyük bir avantaj sağlar.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nitinol-stents (self-made from nitinol-struts)</td>
			<td>Fort Wayne Metals, Castlebar, Ireland NiTi#1, superelastic, straight annealed, light oxide, diameter 500 &mu;m</td>
			<td>custom-made product</td>
			<td>Institute for Textile Technology and Mechanical Engineering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicon tube</td>
			<td>IFK Isofluor, Germany</td>
			<td>custom-made product</td>
			<td>diameter 500 &mu;m, section thickness 100 &mu;m, polytetrafluorethylene catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ/X9</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps</td>
			<td>FST, Germany</td>
			<td>91197-00</td>
			<td>standard tip curved 0.17 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine 10%</td>
			<td>CEVA, Germany</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine 2%</td>
			<td>Medistar, Germany</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthene</td>
			<td>Bayer, Germany</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>FST, Germany</td>
			<td>91460-11</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissor</td>
			<td>Aesculap, Germany</td>
			<td>OC 498 R</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5/0 Silk</td>
			<td>Seraflex</td>
			<td>IC 108000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7/0 Silk</td>
			<td>Seraflex</td>
			<td>IC 1005171Z</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guide-wire</td>
			<td>Abbott Vascular</td>
			<td>1001782-HC</td>
			<td>0.014-inch angioplastie guide-wire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michel suture clips</td>
			<td>Aesculap, Germany</td>
			<td>BN507R</td>
			<td>7.5 x 1.75 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michel Forcep</td>
			<td>Aesculap, Germany</td>
			<td>BN730R</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of stent implantation in the carotid artery for the study of restenosis

Son yıllarda stent geliştirmeye yapılan önemli gelişmelere rağmen, kalp-damar hastalıkları batı ülkelerinde ölümlerin ana nedeni olmaya devam etmektedir. Farklı ilaç salınımlı stentlerin geliştirilmesi sunduğu faydaları yanında, koroner revaskülarizasyon da in-stent trombozu ve restenoz yaşamı tehdit eden riskler taşımaktadır. Yeni tedavi stratejileri Araştırma stent ve restenoz süreçleri incelemek için uygun yöntemlerin eksikliği bozulur. Burada, gemi yeniden ve farklı ilaç kaplamaların etkileri moleküler mekanizmaları uygun bir şekilde çalışma imkanı sunuyor fare karotid arter, stent implantasyonu hızlı bir ve erişilebilir prosedürü açıklar.

<ol><li> Farelerin sol karotis arter içine bir minyatür nitinol stent implantasyonu 25-30 dakika sürer ve müdahale sırasında geminin hasar çoğunlukla nedeniyle% 10 ölüm oranı gösterir. Daha iyi bir yaşam oranı stent implantasyonu (% 5 ölüm oranı) bir ağırlığı fazla 25 g olan farelerde görülmektedir. Bu nedenle, 25-27 gr arası ağırlıkta implantasyon fareler için seçti. Ameliyattan sonra, fareler, 2-5 dakika ve örneğin felç gibi bir fiziksel yetersizliği, içinde anestezi kurtarmak gözlenmektedir. Stent implantasyonu stent kan akımı (Şekil 1C) tarafından yerinden olmadığını gösterdi sonra mikro-bilgisayarlı tomografi (Mikro-CT) görüntüleme bir hafta yapıldı. Ne yazık ki, bu görüntüler neointima oluşumunun analizleri metal türetilmiş eserler (Şekil 1D, 1E) nedeniyle mümkün değildir. </li><li> Biz hemen stent altında, geminin unstented alan herhangi bir gemi ya da endotel hasar görülmedi, (Şekil 2A) ile histolojik ve endotelin için spesifik boyama (Şekil 2B, anti-fare CD31 antikor) ile saptanabilir. Daha iyi bir bakış için, bölüm iki foton lazer tarama mikroskobu (Şekil 2B, 2C) ile taranmıştır. </li><li> 25-27 gr arası ağırlıkta fareler tarafından: stentli damar,% 15 kalıcı dilatasyon (arter, 1,15:1 oranı stent) tespit edilir. Neointima oluşumu ve trombüs oluşumu klasik histolojik boyamaları (örneğin Hematoxilin-eozin, Giemsa, Movat, Toluidin Mavi, Masson-üçlü boyası-Goldner, Şekil 3A, 3B) ile analiz edilebilir. Lamina eksterna ve uluslararası artık görünmez olduğu için, plak boyutu dış farkını ve luminal alanları (: 234566 ± 3315 mikron 2, lümen alanını ortalama: 12036 ± 2.662 mikron 2 plak çevresi mi demek) olarak hesaplanmıştır. Dış çevresi de (: 1.799 ± 14 mikron ortalama) ölçüldü. Analizi içinhücresel kompozisyon, bölümleri belirli işaretleri ile deplastified ve lekeli gerekir. Yeniden endotelizasyon için, bir Cy3-konjüge anti-CD31 antikoru kullanılmıştır ve düz kas hücre çoğalmasının bir FITC-konjuge anti-SMA antikoru (Şekil 3C) için. Stent implantasyonu bir hafta sonra: Yeniden endotelizasyon toplam luminal yüzeyi (23.07 ± 3.14% ortalama) CD-31 pozitif lekeli yüzdesi olarak hesaplanmıştır. </li></ol> Tabii ki, özel boyama sınırsız sayıda her laboratuvarlar &#39;deneyimine bağlı olarak, mümkündür. Miyozin ağır SMC&#39;lerin daha iyi tanımlanması için zinciri, aynı zamanda infiltre hücreler analizi (monositler, lenfositler) veya farklı enflamatuar sitokinlerin boyamalar analizi, aynı zamanda, çalışmanın amacı bağlı olarak gerçekleştirilebilir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50233/50233fig1highres.jpg" sr<html> c = &quot;/ files/ftp_upload/50233/50233fig1.jpg&quot; /&gt; Cerrahi işlem Şekil 1. Şematik genel bakış (A). Kan akışı sıkıca yanı sıra ortak karotid arter çevreleyen düğüm çekerek iç karotid arter ve harici karotid arter proksimal düğümlendiği bağlayıcı ile kesilir. Stent içeren silikon tüp harici karotid arter küçük bir kesikten dış karotis arteri içine yerleştirilir. Stent istenilen konuma ulaştıktan sonra, silikon tüp kılavuz-tel üzerinden geri çekti ve stent şekli-bellek genişletme izin verir. Cerrahi implantasyon (B) bir hafta sonra stent konumunu gösteren mikro-BT görüntüleri. Malzeme türetilmiş eserler nedeniyle, neointima büyüme analizi (C, D) mümkün değildir. 3fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/50233/50233fig2.jpg &quot;/&gt; Şekil 2,. Teknenin Unstented alanı Toluidin Mavisi (A) ve endotel spesifik boyama CD31 (B, C) ​​ile gösterildiği gibi, cerrahi işlem ile etkilenmez. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50233/50233fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50233/50233fig3.jpg" /> Şekil 3,. Plak analizi klasik histolojik boyamalar (örneğin, Masson-üçlü boyası-Goldner) (A) tarafından gerçekleştirilebilir. Organize trombüs bazı durumlarda, teknenin bir şekilde kapanmasına (B) görülmektedir, neointima içinde siyah boyalı fibrin çökelme ile tespit edilebilir. Yeniden endotelizasyon (Cy3, kırmızı) veya düz kas hücre çoğalması (FITC, yeşil) özel işaretleri kullanarak çift immünofloresan boyama ile tespit edildi.Counterstaining 4 &#39;,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI, mavi) (C) ile gerçekleştirildi. Biz (sağ, tek ok) yeniden endotelizasyon bir eksikliklerinin lümen göre stent dikmeler tamamlanmış bir yeniden endotelizasyon (sol, çift ok) fark ettim.

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis at JoVE.com

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Fare karotis arter stent implantasyonu bir modeli açıklanmıştır. Diğer benzer yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu işlem için uygun bir yol farklı ilaç salınımlı stent ve restenoz moleküler mekanizmaları için damar duvarı tepki olarak çalışma imkanı sunan, çok hızlı, basit ve erişilebilir.

Restenoz Çalışmaları Karotis Arter Stent İmplantasyonu bir murin Modeli

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

a-murine-model-stent-implantation-carotid-artery-for-study

Research

JoVE Journal

Medicine

25.2K Görüntüleme.  RWTH Aachen University. Fare karotis arter stent implantasyonu bir modeli açıklanmıştır. Diğer benzer yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu işlem için uygun bir yol farklı ilaç salınımlı stent ve restenoz moleküler mekanizmaları için damar duvarı tepki olarak çalışma imkanı sunan, çok hızlı, basit ve erişilebilir.

Video: A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

TSSB, Nöral Hematolojik ve Davranış Bağlantılı Revealing için Hayvan Modelinde Biyobelirteçler

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Tıp

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel stenting are crucial for translational approaches1,2.
The commonly used animal models include mice, rats, rabbits, and pigs3-5. However, the translation of these models into clinical settings remains difficult, since those biological processes are already studied in animal vessels but never performed before in human research models6,7. In this video we demonstrate a new humanized model to overcome this translational gap. The shown procedure is reproducible, easy, and fast to perform and is suitable to study the development of intimal hyperplasia and the applicability of diverse stents.
This video shows how to perform the stent technique in human vessels followed by transplantation into immunodeficient rats, and identifies the origin of proliferating cells as human.

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

This video shows a model to study the development of intimal hyperplasia after stent deployment using a human vessel (IMA) in an immunodeficient rat model.

İnsan internal meme arter (İMA) Transplantasyon ve Stent: In-Stent Restenozis Geliştirme Eğitim Bir İnsan Modeli

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in peripheral arterial bypass surgery as well as in arteriovenous fistulas.1-5 The experimental procedure of vein graft interposition in the common carotid artery by using the cuff-technique has been applied in several research projects to examine the aetiology of neointimal hyperplasia and therapeutic options to address it. 6-8 The cuff prevents vessel anastomotic remodeling and induces turbulence within the graft and thereby the development of neointimal hyperplasia.
Using the superior caval vein graft is an established small-animal model for venous arterialization experiment.9-11 This current protocol refers to an established jugular vein graft interposition technique first described by Zou et al., 9 as well as others.12-14 Nevertheless, these cited small animal protocols are complicated.
To simplify the procedure and to minimize the number of experimental animals needed, a detailed operation protocol by video training is presented. This video should help the novice surgeon to learn both the cuff-technique and the vein graft interposition. Hereby, the right external jugular vein was grafted in cuff-technique in the common carotid artery of 21 female Sprague Dawley rats categorized in three equal groups that were sacrificed on day 21, 42 and 84, respectively. Notably, no donor animals were needed, because auto-transplantations were performed. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice. In addition, the graft patency rate was 60 % for the first 10 operated animals and 82 % for the remaining 11 animals. The blood flow at the time of sacrifice was 8&plusmn;3 ml/min. In conclusion, this surgical protocol considerably simplifies, optimizes and standardizes this complicated procedure. It gives novice surgeons easy, step-by-step instruction, explaining possible pitfalls, thereby helping them to gain expertise fast and avoid useless sacrifice of experimental animals.

Neointimal hyperplasia is the primary cause of stenosis in arterialized veins. We propose a new protocol whereby the right external jugular vein is grafted using the cuff technique in the common carotid artery of Sprague Dawley rats. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice.

Sıçanlarda Common Karotid Arter interpozisyon Harici Juguler Ven Greft: Gelişmiş Mikrocerrahi Tekniği Eğitimi

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

Bir Perivasküler Drug Delivery Patch İmplantasyonunda ile Femoral Arter Tel Yaralanma sıçan Modeli

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to atherosclerotic plaque development or the rupturing of established plaques, interrupts normal blood flow leading to various morbidities such as myocardial infarction and stroke. In the clinic endovascular procedures such as angioplasty are commonly performed to reopen the lumen. However, these treatments inevitably damage the vessel wall as well as the vascular endothelium, triggering an excessive healing response and the development of a neointimal plaque that extends into the lumen causing vessel restenosis (re-narrowing). Restenosis remains a major cause of failure of endovascular treatments for atherosclerosis. Thus, preclinical animal models of restenosis are vitally important for investigating the pathophysiological mechanisms as well as translational approaches to vascular interventions. Among several murine experimental models, femoral artery wire injury is widely accepted as the most suitable for studies of post-angioplasty restenosis because it closely resembles the angioplasty procedure that injures both endothelium and vessel wall. However, many researchers have difficulty utilizing this model due to its high degree of technical difficulty. This is primarily because a metal wire needs to be inserted into the femoral artery, which is approximately three times thinner than the wire, to generate sufficient injury to induce prominent neointima. Here, we describe the essential surgical details to effectively overcome the major technical difficulties of this model. By following the presented procedures, performing the mouse femoral artery wire injury becomes easier. Once familiarized, the whole procedure can be completed within 20 min.

The mouse femoral artery wire injury model of restenosis is technically challenging. In this protocol we show the key technical details essential for successfully performing wire injury to induce consistent&#160;neointima for studies of restenosis.

Arter Restenozun bir fare modeli: Femur Tel Yaralanma Teknik Yönleri

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves focal endothelial-selective transgenesis, thereby allowing an investigator to determine the biological roles of endothelial-expressed transgenes and to quantify the in vivo transcriptional activity of DNA sequences in large artery endothelial cells. The method uses surgical isolation of rabbit common carotid arteries and an arteriotomy to deliver a transgene-expressing viral vector into the arterial lumen. A short incubation period of the vector in the lumen, with subsequent aspiration of the lumen contents, is sufficient to achieve efficient and durable expression of the transgene in the endothelium, with no detectable transduction or expression outside of the isolated arterial segment. The method allows assessment of the biological activities of transgene products both in normal arteries and in models of human vascular disease, while avoiding systemic effects that could be caused either by targeting gene delivery to other sites (e.g. the liver) or by the alternative approach of delivering genetic constructs to the endothelium by germ line transgenesis. Application of the method is limited by the need for a skilled surgeon and anesthetist, a well-equipped operating room, the costs of purchasing and housing rabbits, and the need for expertise in gene-transfer vector construction and use. Results obtained with this method include: transgene-related alterations in arterial structure, cellularity, extracellular matrix, or vasomotor function; increases or reductions in arterial inflammation; alterations in vascular cell apoptosis; and progression, retardation, or regression of diseases such as intimal hyperplasia or atherosclerosis. The method also allows measurement of the ability of native and synthetic DNA regulatory sequences to alter transgene expression in endothelial cells, providing results that include: levels of transgene mRNA, levels of transgene protein, and levels of transgene enzymatic activity.

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

This method is to introduce a transgene into the endothelium of rabbit carotid arteries. Introduction of the transgene allows the assessment of the biological role of the transgene product either in normal arteries or disease models. The method is also useful for measuring activity of DNA regulatory sequences.

Vivo Gen transferi için tavşan ortak Karotid arter endotel

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, intimal hyperplasia, and atherosclerosis. The goal of this article is to demonstrate a method for placing bilateral venous interposition grafts in a rabbit, then transducing the grafts with a gene transfer vector that achieves durable transgene expression. The method allows the investigation of the biological roles of genes and their protein products in normal vein graft homeostasis. It also allows the testing of transgenes for the activities that could prevent vein graft failure, e.g., whether the expression of a transgene prevents the neointimal growth, reduces the vascular inflammation, or reduces atherosclerosis in rabbits fed with a high-fat diet. During an initial survival surgery, the segments of right and left external jugular vein are excised and placed bilaterally as reversed end-to-side common carotid artery interposition grafts. During a second survival surgery, performed 28 days later, each of the grafts is isolated from the circulation with vascular clips and the lumens are filled (via an arteriotomy) with a solution containing a helper-dependent adenoviral (HDAd) vector. After a 20-min incubation, the vector solution is aspirated, the arteriotomy is repaired, and flow is restored. The veins are harvested at time points dictated by individual experimental protocols. The 28-day delay between the graft placement and the transduction is necessary to ensure the adaptation of the vein graft to the arterial circulation. This adaptation avoids rapid loss of transgene expression that occurs in vein grafts transduced before or immediately after grafting. The method is unique in its ability to achieve durable, stable transgene expression in grafted veins. Compared to other large animal vein graft models, rabbits have advantages of low cost and easy handling. Compared to rodent vein graft models, rabbits have larger and easier-to-manipulate blood vessels that provide abundant tissue for analysis.

This method describes the placement of interposition vein grafts in rabbits, the transduction of the grafts, and the achievement of durable transgene expression. This allows the investigation of physiological and pathological roles of transgenes and their protein products in grafted veins, and testing of gene therapies for vein graft disease.

Tavşan manken dayanıklı Transgene ifade juguler ven ortak karotid arter interpozisyonu Greftler için

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...