Bu çalışma, R01 GM088156 ve T32 HL007713-18 tarafından desteklenmiştir. Biz doğrulma refleks cihazı montaj yardım ettikleri için Pennsylvania Araştırma Enstrümantasyon Shop Üniversitesi&#39;nden Bill Pennie ve Michael Carman teşekkür etmek istiyorum.

Burada özetlenen hayvanları kapsayan tüm işlemler Pennsylvania Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. 1.. Test Düzeneği genel bakış <ol><li> Test düzeneği 24 açık akrilik silindir odalarında, uzunluğu 10 cm ve çapı 5 cm (200 ml toplam hacim) oluşur. Bu boyut, tipik bir yetişkin için 25 g bir fare için uygundur. Chambers gaz giriş ve çıkışı için her bir ucunda bağlantı noktaları vardır. Hayvanların kolayca odacık içine yüklenebilir, böylece çıkış ucu çıkarılabilir. Kauçuk o-ring contalar silindir odaları çıkarılabilir sonunu mühürlemek için kullanılır ise gaz liman açıklıklar dikkatle, teflon bant ile kapatılır. </li><li> Her bir odacık, bir su banyosu içine oturan bir raf üzerine monte edilir. (Gaz giriş altında) bölmelerin sadece alt kısmı sular, böylece raf monte edilir. Kararlılık için, bölmenin arka ucu bir destek üzerinde durur, böylece tüm odacıklıer yatay oturur. Bu banyosu ile tüm odasının Hatta teması sağlar. </li><li> Polietilen boru bir anestezik bir buharlaştırıcı, bir oksijen tankı bağlanır, ve daha sonra bir 10 L / dk akış ölçer geçer. Boru eşit akış 24 bölmelerin her birine ve bir ajan analiz teslim sağlamak için eşit uzunlukta 25 küçük çaplı bir direnç ayrılır. </li><li> Vakum hatları gaz girişine karşı sonunda her odası çıkış. Bu üfledi karbondioksit rebreathing ortadan kaldıran tek yönlü akışını destekler. Vakum hatları bir in-house emiş hattına bağlamak için bir manifoldunda birleştirir. Ana vakum hattı boyunca bir pop-off vanası, her odasının içinde atmosferik basınç koşulları sağlar. </li><li> Banyo tam olarak her bölmenin tabanına temas etmesine yeterli miktarda su ile doldurulur. Su, pompa ile sürekli bir 37 o C banyo içinde döndürülür ve korunur. </li></ol> 2. Önce Pozlama Sistemini Kontrol <ol><li> Chalt su banyosunun sıcaklığı banyosu boyunca 37 o C. </li><li> 5 L / dk &#39;lık bir oranda (bölmesinin + madde analiz için 200 ml / dakika) oksijen akış. Su altında her bir bölmeyi daldırın ve sızıntı gösteren her ikisi de kabarcıkların veya bölmenin içine su girişi için, bak. Deneye başlamadan önce herhangi bir sızıntı mühür. </li><li> Her bölme için, akışı, 25 gaz hatlarının her biri boyunca dengeli olduğundan emin olmak için, odacık doğrultusunda sonra, 500 ml / dk bir akış ölçer bağlayın. Bu, her bir odacık 200 ml / dk bir akış alır, böylece giriş 5 L / dak akışları eşit olarak dağıtılacak sağlar. Beklenen akışı almayan herhangi bir bölmesi, giriş ve tıkanmaları kontrol çıkışının boru olmalıdır. </li><li> % 100 oksijen akan 0.00% izofluran bir okuma sağlamak için ajan analizörü kalibre. </li></ol> 3. İmplant Sıcaklık Transponder <ol><li> Bir hafta öncesinde alışkanlık için,% 2 izofluran ile her fare uyutmak. </li><li> Betadin dorsal boyun alan sterilize. </li><li> Steril, paketlenmiş enjektör iğnesi kullanarak kürek kemikleri arasında bir sıcaklık transponder deri altına enjekte edilir. </li><li> Enfeksiyon ve transponder göç günlük enjeksiyon siteyi izleyin. </li></ol> 4. Test Chambers Hayvanlar alışmakta <ol><li> Dört gün ilk tarhiyat öncesi,% 100 oksijen akan ile 2 saat boyunca tek tek odalarına tüm fareleri yerleştirin. </li><li> Önceki nedeniyle yeni bir çevreye stresin karıştırıcı etkilerini önlemek için değerlendirmesine dört gün için yineleyin günlük 4.1. </li></ol> 5. Sen Anestezik Duyarlılık etkilerini test etmek için İstek Farmakolojik Müdahale gerçekleştirin <ol><li> Bu müdahale kanül 26 ile beyin 24, intravenöz veya intraperitonal enjeksiyonla 25, ya da belirli bir beyin bölgesinde bir ilacın teslimat belirli bir kısmını bir stereotaksik enjeksiyonu olabilir,. </li><li> Bu işlemler kendilerini naif bir hayvana göre anestezik duyarlılığı değişebilir Çünkü, uygun bir kontrol grubu araç enjeksiyonları ile aynı prosedürü geçmesi gerekir. </li><li> Adım aşağıda 6&#39;da gösterildiği gibi anestezik duyarlılığı belirlenmesi artırılması ve / veya azalan bir adım adım yapmak planlıyorsanız farmakolojik müdahale eylem uygun bir şekilde uzun bir süreye sahip olduğundan emin olun, aksi halde 7. adıma geçin. </li></ol> 6. Basamaklı EC 50 İndüksiyonunda Belirlenmesine ve Doğuşu kullanarak Anestezik Hassasiyeti değerlendirin <ol><li> % 100 oksijen akan bireysel odalarına her hayvan yerleştirin. </li><li> 15 dakika boyunca% 0.4 * için izofluran konsantrasyonu ayarlayın. Bu sürenin son 2 dakika boyunca, fare sırt üstüne yatınldı kadar yavaşça bölmeyi haddeleme her hayvanın doğrulma refleksini değerlendirmek. Doğrulma refleksi fare tüm geri yükleme yapabiliyor, ancak ve ancak sağlam kabul edilir2 dakika içinde odasının zemini olan pençelerin. <ol><li> *% 0.4 izofluran C57BL/6J fareler bir subhypnotic doz olduğuna dikkat edin. Her farenin ilk adımda doğrulma reflekslerini kesilmesi durumunda, başlangıç ​​dozu çok büyüktü ve sonraki günlerde azaltılmalıdır. </li></ol></li><li> Her bir fare için düzeltme refleksi durumunu kaydetme ve sıcaklık verileri her bir fare için tarar. Şablon kayıt Tablo 1 &#39;de gösterilmiştir. </li><li> 15 dakika boyunca% 0,05 ~ tarafından izofluran konsantrasyonu artırmak ve adım 7.2 tekrarlayın. Tüm hayvanlar doğrulma refleksini kaybetmiş kadar bu yapmaya devam. </li><li> İsteğe bağlı: (adım 6.3) tüm hayvanlar doğrulma refleksini kavuştular kadar adım adım izofluran azalan dozlarda için aynı işlemi tekrarlayın. </li><li> , Deney sonunda izofluran kapatın ve 15 dakika boyunca% 100 oksijen ile tüm sistemi temizlemek için. Bu fareler evlerinde kafeslerde iade edilmeden önce kurtarmak gibi hipoksiyi önlemek için yardımcı olacak ve experime koruyacakanestezik maruz nter. </li><li> İsteğe bağlı: hayvan veya anestezik konsantrasyonları sayısı sayısı nedeniyle kaynak veya süre kısıtlamaları ile sınırlı ise, eğri-fit parametre tahminleri-özellikle Tepesi yamaç olabilir hakir, yanlış düşük hata tahmin var. Bu gibi durumlarda, tam doğru Tepesi eteğinden parametresini ve ilgili hata tahmini elde etmek için en fazla iki ek deneysel gün adımda 6,1-6,6 &#39;de tarif edilen anestezi hassasiyet ölçümü tekrar etmek gerekli olabilir. </li></ol> 7. Ortaya Time ile Anestezik Hassasiyet Kısa vadeli Değişiklikleri değerlendirin <ol><li> % 100 oksijen akan bireysel odalarına her hayvan yerleştirin. </li><li> Vahşi tip C57BL/6J fareler 20 için indüksiyon ED 99 karşılık% 1.2, izofluran konsantrasyonu ayarlayın. Akut müdahale aksiyon beklenen süresine bağlı olarak, 30-60 dakika boyunca muhafaza edilir. </li><li> In lorr Onaylanazikçe fareler kadar her odasını haddeleme bütün hayvanların sırtlarında yerleştirilir. </li><li> Izofluran kapatın ve% 100 oksijen akışı. Her hayvan kendi doğrulma refleksini kavuşur kadar ölçün. Bu, haznenin kat Dört bacak yerleştirilmesi ile tanımlanan ve sağlam bir doğrulma refleksi ile arka arkaya üç testin varlığı ile teyit edilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zur+theorie+der+alkoholnarkose.+I.+Mittheilung.+Welche+Eigenschaft+der+An#228;sthetica+bedingt+ihre+narkotische+Wirkung?.">Zur theorie der alkoholnarkose. I. Mittheilung. Welche Eigenschaft der An#228;sthetica bedingt ihre narkotische Wirkung?.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 42, 109-137 .</li><li>Overton, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Studien &#252;ber die Narkose: Zugleich ein Beitrag zur allgemeinen Pharmakologie. , (1901).</li><li>Bignall, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+levels+of+neural+organization:+the+righting+reflex+as+a+model.">Ontogeny of levels of neural organization: the righting reflex as a model.</a> Exp. Neurol. 3 (3), 566-573 (1974).</li><li>Franks, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anaesthesia:+from+molecular+targets+to+neuronal+pathways+of+sleep+and+arousal.">General anaesthesia: from molecular targets to neuronal pathways of sleep and arousal.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (5), 370-386 (2008).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab. Anim. 27 (1), 30-39 (1993).</li><li>Schernthaner, A., Lendl, C., Busch, R., Henke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+evaluation+of+three+medetomidine--midazolam--ketamine+combinations+for+neutering+of+ferrets+(Mustela+putorius+furo)].">Clinical evaluation of three medetomidine--midazolam--ketamine combinations for neutering of ferrets (Mustela putorius furo)].</a> Berliner und M&#252;nchener tier&#228;rztliche Wochenschrift. 121 (1-2), 1-10 (2008).</li><li>Mohammad, F. K., Zangana, I. K., Abdul-Latif, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medetomidine+sedation+in+sheep.">Medetomidine sedation in sheep.</a> Zentralblatt f&#252;r Veterin&#228;rmedizin. Reihe A. 40 (5), 328-331 (1993).</li><li>Nicholls, E. A., Louie, G. L., Prokocimer, P. G., Maze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Halothane+anesthetic+requirements+are+not+affected+by+aminophylline+treatment+in+rats+and+dogs.">Halothane anesthetic requirements are not affected by aminophylline treatment in rats and dogs.</a> Anesthesiology. 65 (6), 637-641 (1986).</li><li>Tung, A., Szafran, M. J., Bluhm, B., Mendelson, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+Deprivation+Potentiates+the+Onset+and+Duration+of+Loss+of+Righting+Reflex+Induced+by+Propofol+and+Isoflurane.">Sleep Deprivation Potentiates the Onset and Duration of Loss of Righting Reflex Induced by Propofol and Isoflurane.</a> Anesthesiology. 97 (4), 906-911 (2002).</li><li>Pal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Minimum+Alveolar+Concentration+for+Isoflurane+and+Sevoflurane+in+a+Rodent+Model+of+Human+Metabolic+Syndrome.">Determination of Minimum Alveolar Concentration for Isoflurane and Sevoflurane in a Rodent Model of Human Metabolic Syndrome.</a> Anesth. 2 (2), 297-302 (2012).</li><li>Eger, E. I., Saidman 2nd, ., J, L., Brandstater, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+dependence+of+halothane+and+cyclopropane+anesthesia+in+dogs:+correlation+with+some+theories+of+anesthetic+action.">Temperature dependence of halothane and cyclopropane anesthesia in dogs: correlation with some theories of anesthetic action.</a> Anesthesiology. 26 (6), 764-770 (1965).</li><li>Vitez, T. S., White, P. F., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2nd+Effects+of+hypothermia+on+halothane+MAC+and+isoflurane+MAC+in+the+rat.">2nd Effects of hypothermia on halothane MAC and isoflurane MAC in the rat.</a> Anesthesiology. 41 (1), 80-81 (1974).</li><li>Antognini, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+eliminates+isoflurane+requirements+at+20+degrees+C.">Hypothermia eliminates isoflurane requirements at 20 degrees C.</a> Anesthesiology. 78 (6), 1152-1156 (1993).</li><li>McKenzie, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+on+the+anaesthetic+potency+of+halothane,+enflurane+and+ethanol+in+Daphnia+magna+(Cladocera:+Crustacea).">Effects of temperature on the anaesthetic potency of halothane, enflurane and ethanol in Daphnia magna (Cladocera: Crustacea).</a> Comp. Biochem. Physiol. C. 101 (1), 15-19 (1992).</li><li>Icaza, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane-Induced+Changes+in+Righting+Response+and+Breathing+are+Modulated+by+RGS+Proteins.">Isoflurane-Induced Changes in Righting Response and Breathing are Modulated by RGS Proteins.</a> Anesth. Analg. 109 (5), 1500-1505 (2009).</li><li>Drexler, B., Antkowiak, B., Engin, E., Rudolph, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+anesthetic+targets+by+mouse+molecular+genetics+approaches.">Identification and characterization of anesthetic targets by mouse molecular genetics approaches.</a> Can. 2 (2), 178-190 (2011).</li><li>Wafford, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiating+the+role+of+gamma-aminobutyric+acid+type+A+(GABAA)+receptor+subtypes.">Differentiating the role of gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptor subtypes.</a> Biochem. 32 (Pt3), 553-556 (2004).</li><li>Lakhlani, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substitution+of+a+mutant+&#945;2a-adrenergic+receptor+via+"hit+and+run"+gene+targeting+reveals+the+role+of+this+subtype+in+sedative,+analgesic,+and+anesthetic-sparing+responses+in.">Substitution of a mutant &#945;2a-adrenergic receptor via "hit and run" gene targeting reveals the role of this subtype in sedative, analgesic, and anesthetic-sparing responses in.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 94 (18), 9950-9955 (1997).</li><li>Sonner, J. M., Gong, D., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+Occurring+Variability+in+Anesthetic+Potency+Among+Inbred+Mouse+Strains.">Naturally Occurring Variability in Anesthetic Potency Among Inbred Mouse Strains.</a> Anesth. 91 (3), 720-726 (2000).</li><li>Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+modular+chambers+for+rapid+evaluation+of+anesthetic+sensitivity.">High throughput modular chambers for rapid evaluation of anesthetic sensitivity.</a> BMC Anesthesiol. 6 (1), 13 (2006).</li><li>Hu, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypnotic+Hypersensitivity+to+Volatile+Anesthetics+and+Dexmedetomidine+in+Dopamine+&#946;-Hydroxylase+Knockout+Mice.">Hypnotic Hypersensitivity to Volatile Anesthetics and Dexmedetomidine in Dopamine &#946;-Hydroxylase Knockout Mice.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Kelz, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+role+for+orexins+in+emergence+from+general+anesthesia.">An essential role for orexins in emergence from general anesthesia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (4), 1309-1314 (2008).</li><li>Moore, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Activation+of+Sleep-Promoting+VLPO+Neurons+by+Volatile+Anesthetics+Contributes+to+Anesthetic+Hypnosis.">Direct Activation of Sleep-Promoting VLPO Neurons by Volatile Anesthetics Contributes to Anesthetic Hypnosis.</a> Curr. 22 (21), 2008-2016 (2012).</li><li>Kirby, E. D., Jensen, K., Goosens, K. A., Kaufer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+Surgery+for+Excitotoxic+Lesion+of+Specific+Brain+Areas+in+the+Adult+Rat.">Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat.</a> J. Vis. Exp. (65), e4079 (2012).</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats.">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J. Vis. Exp. (67), e2771 (2012).</li><li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survivable+Stereotaxic+Surgery+in+Rodents.">Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents.</a> J. Vis. Exp. (20), e880 (2008).</li><li>Szymusiak, R., Alam, N., Steininger, T. L., McGinty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep-waking+discharge+patterns+of+ventrolateral+preoptic/anterior+hypothalamic+neurons+in+rats.">Sleep-waking discharge patterns of ventrolateral preoptic/anterior hypothalamic neurons in rats.</a> Brain Res. (1-2), 178-188 (1998).</li><li>Nelson, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sedative+component+of+anesthesia+is+mediated+by+GABAA+receptors+in+an+endogenous+sleep+pathway.">The sedative component of anesthesia is mediated by GABAA receptors in an endogenous sleep pathway.</a> Nat. Neurosci. 5 (10), 979-984 (2002).</li><li>Li, K. Y., Guan, Y., Krnjevi&#263;, K., Ye, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propofol+Facilitates+Glutamatergic+Transmission+to+Neurons+of+the+Ventrolateral+Preoptic+Nucleus.">Propofol Facilitates Glutamatergic Transmission to Neurons of the Ventrolateral Preoptic Nucleus.</a> Anesthesiology. 111 (6), 1271-1278 (2009).</li><li>Friedman, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Conserved+Behavioral+State+Barrier+Impedes+Transitions+between+Anesthetic-Induced+Unconsciousness+and+Wakefulness:+Evidence+for+Neural+Inertia.">A Conserved Behavioral State Barrier Impedes Transitions between Anesthetic-Induced Unconsciousness and Wakefulness: Evidence for Neural Inertia.</a> PLoS ONE. 5 (7), e11903 (2010).</li><li>Lu, J., Greco, M. A., Shiromani, P., Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+lesions+of+the+ventrolateral+preoptic+nucleus+on+NREM+and+REM+sleep.">Effect of lesions of the ventrolateral preoptic nucleus on NREM and REM sleep.</a> J. Neurosci. 20 (10), 3830-3842 (2000).</li><li>Sun, X., Whitefield, S., Rusak, B., Semba, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+analysis+of+suprachiasmatic+nucleus+projections+to+the+ventrolateral+preoptic+area+in+the+rat.">Electrophysiological analysis of suprachiasmatic nucleus projections to the ventrolateral preoptic area in the rat.</a> Eur. J. Neurosci. 14 (8), 1257-1274 (2001).</li><li>Ma, J., Shen, B., Stewart, L. S., Herrick, I. A., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+septohippocampal+system+participates+in+general+anesthesia.">The septohippocampal system participates in general anesthesia.</a> J. Neurosci. 22 (2), RC200 (2002).</li><li>Leung, L. S., Ma, J., Shen, B., Nachim, I., Luo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+lesion+enhances+general+anesthesia+response.">Medial septal lesion enhances general anesthesia response.</a> Exp. Neurol. , (2013).</li><li>Solt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylphenidate+Actively+Induces+Emergence+from+General+Anesthesia.">Methylphenidate Actively Induces Emergence from General Anesthesia.</a> Anesthesiology. 115 (4), 791-803 (2011).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Tek bir fare lorr değerlendirilmesi bir görünüşte basit bir görev olmasına rağmen, bu hayvanların bir grup güvenilir veri toplamak amacıyla konular arasında aynı fizyolojik koşullarını korumak için temeldir. Burada sunulan sıkı düzenlenmiş, yüksek kapasiteli lorr cihaz deneyler standardize ve verimliliği en üst düzeye çıkarmak için bir yol sunar. Termoregülasyonu ve eşit akış dağılımının temel ilkelerini izleyerek, bu sistem kolaylıkla yeniden ve bireysel deneyselciler ihtiyaçları...

Genel anestezik türlerinin geniş bir yelpazede, henüz ilaç gibi farklı bir sınıfı, tüm bir tek nokta zor olmaya devam etmektedir ortaya nasıl olarak bir açıklama hipnozun bir tersinir durumuna yol kabiliyetleri ile tanımlanır. Teoriler bir dizi hipnoz 1,2 temel olarak genel membran aksaklıkları önerilen anestezi potansiyeli ve lipid çözünürlüğü arasındaki Meyer-Overton korelasyon ile başlayarak, yıllar boyunca oturtulması edilmiştir. Daha yeni bulgular nöron sinyalini etkileyen protein hedefleri anestezik etkilerine katkıda bulunmak olduğunu göstermektedir. Fareler, çünkü murin ve insan anestezi yanıt arasındaki homoloji, bu teorileri keşfetmek için vazgeçilmez bir model olduğu kanıtlanmıştır. Bir fare genel anestezi altında kendi öznel bilinci hakkında sorular olamaz rağmen, bazı ilkel refleksler kemirgen hipnoz gibi yararlı vekil önlemleri hizmet vermektedir. Doğumdan sonraki ilk birkaç gün içinde, fareler refleksif bir doğrulma resp geliştirmekonse pasif olarak yatar pozisyonda 3 konuyor engeller. Bir Fare, doğrulma refleksini kaybeder hangi anestezi dozu insan hipnotik dozlarda 4 ile iyi korelasyon. Doğrulma refleksi (lorr) kaybının değerlendirilmesi farelerde anestezi hassasiyeti test hem de sıçan, kobay, tavşan, gelincik, koyun, köpek ve 5-8 dahil olmak üzere diğer türlerin çeşitli için yaygın olarak kullanılan bir laboratuvar standart haline gelmiştir. Lorr bir türün üyelerinin ortaya çıkar, verilen bir anestetik dozu oldukça tutarlıdır ancak çevresel faktörlerden önemli ölçüde değiştirilebilir. Örneğin, uyku-yoksun fareler volatil ve intravenöz anestezik 9 ve yüksek aerobik kapasite ile sıçanlarda hem de daha duyarlı izofluran 10 daha az duyarlıdır. Hipotermi da türlerin 11-14 geniş bir spektrum hipnozun için gerekli olan pek çok anestetik dozunu azaltmak için gösterilmiştir. Sıraylagüvenilir bir lorr deney hayvanlarının bir grup meydana geldiği anestezi dozu belirlemek için, bu değerlendirme ortam dikkatlice, stres en aza indirmek euthermia korumak ve tüm deneklere ilaç eşit miktarda sunmak için kontrol edilmesi çok önemlidir. Doğal olarak, genetik faktörler de anestetik hassasiyeti 15-18 değiştirmek bilinmektedir. Sonuç olarak, dikkatli bir göz, aynı zamanda genetik kökenli 19 için kontrol verilmelidir. Bir sürekli 37 o C ortamı muhafaza ederken 24 fareden her birine denk bir şekilde temin edilebilir gaz halinde anestetik bir cihaz geliştirdiler. Bizim maruz odaları şeffaf silindirik tasarımı hızlı lorr değerlendirilmesi ve telemetrik fizyolojik ölçümlerin kolay entegrasyon sağlar. Bu sistem, doğru bir vahşi tip farelerde 20 çıkması için izofluran, halotan ve sevofluran indüksiyon EC 50 ve zamanı ölçmek için gösterilmiştir. Ayrıca kullanmışgenetik mutasyonlar ve hedeflenen hipotalamik lezyonlar 21-23 ile farelerde anestezi duyarlılık değişimleri gözlemlemek için bu sistem. Burada anestezik duyarlılığı bizim kontrollü bir ortam aygıtını kullanarak farmakolojik müdahalenin ardından değerlendirilebilir hangi iki yolu açıklanmaktadır. Volatil anestezi indüksiyon ve ortaya duyarlılık kararlı hal fenotipleme 8-10 saat gerektirir ve dolayısıyla en iyi şekilde kronik veya uzun etkili farmakolojik müdahaleler gibi deneysel koşullar değişmez, hangi çalışmalar için hazırlanmıştır. Ancak, olan etkileri zaman içinde önemli ölçüde dağıtmak kısa etkili tedaviler için biz de stereotaksi hedefli mikroenjeksiyon ya da önemli ölçüde anestezi çıkmasını etkileyebilir intravenöz ilaç tedavileri aşağıdaki refleksi değişiklikleri değerlendirmek için basit bir prosedür mevcut. Bu testler Subj herhangi bir sayı için adapte olabilir, bu kontrollü bir çevre sistemi için potansiyel uygulamalar küçük bir alt kümesini temsil edertürlerin çeşitli ects inhale terapötik herhangi bir tür almak için.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="461">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of the Reagent</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:115px;">Oxygen</td>
			<td style="width:88px;">Airgas</td>
			<td style="width:88px;">OX300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:88px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:171px;">Any volatile anesthetic of interest may be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of Material</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 10 SLPM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2309</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 500 SCCM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2305</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:115px;">Anesthetic agent analyzer/gas indicator</td>
			<td style="width:88px;">AM Bickford</td>
			<td style="width:88px;">FI-21 Riken</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Heating water pump</td>
			<td style="width:88px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">13-874-175</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Temperature transponders</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">IPTT-300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">RF temperature reader</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">DAS-6007</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing changes in volatile general anesthetic sensitivity of mice after local or systemic pharmacological intervention

Genel anestezi istenen bir uç nokta da hipnoz olarak da bilinen, bilinçsizlik durumudur. Hayvanlarda hipnotik durum tanımlama insan hastalarda daha az basittir. Kemirgenlerde hipnoz için yaygın olarak kullanılan davranış vekil refleksini (lorr), ya da hayvan artık dorsal kırılganlığını önlemek için onların doğuştan içgüdüsü yanıt noktayı doğrulma kaybıdır. Biz dikkatle sıcaklık dalgalanmaları dahil ve gaz akışlarını değişen potansiyeli karıştırıcılar, kontrol altında tutarken, aynı anda 24 farelerde lorr değerlendirmek için bir sistem geliştirdik. Sabit bir anestetik maruz kaldıktan sonra doğrulma refleksi (RORR) içinde dönmek için gecikme ile ölçüldüğü gibi bu odalar anestetik duyarlılığının değerlendirilmesinde güvenilir izin verir. Ile ölçülen Alternatif olarak, anestezik konsantrasyonunda kademeli artış (veya düşüş) kullanılarak, odaları da indüksiyon (ya da ortaya çıkması) bir halkın duyarlılığının tespitine imkanEC 50 ve Tepesi yamaç. Son olarak, burada açıklanan kontrollü çevre odaları solunan diğer ilaçların verilmesinde, toksikoloji çalışmaları ve vital bulgular aynı anda gerçek zamanlı izleme dahil olmak üzere alternatif kullanımları, çeşitli için adapte edilebilir.

Şekil 1, bir farmakolojik müdahale uzun vadeli etkileri belirlemek için bir adım adım lorr deneyinin yararlı olduğunu göstermektedir. Ibotenik asit (IBA) çoğu zaman sürekli nöronal lezyonlara neden olduğu bir eksitotoksin olarak kullanılan glutamaterjik N-metil-D-aspartat (NMDA) reseptör bir agonisttir. Burada iki taraflı olarak C57BL/6J fareler ventrolateral preoptik alanı (VLPO) bir hafta önce testten içine% 1 IBA 10 nl enjekte edilir. Bu çekirdekteki nöronların çoğunluğu uyan...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention at JoVE.com

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

Doğrulma refleksinin kaybı uzun laboratuvar hayvanlarında, aynı zamanda hipnoz denilen, bilinç kaybı için standart bir davranış vekil olarak görev yapmıştır. Farmakolojik müdahaleler kaynaklanan uçucu anestetik duyarlılıkla değişiklikler herhangi bir solunan terapötik teslim için adapte edilebilir, dikkatli bir şekilde kontrol edilen yüksek verimli değerlendirme sistemi ile tespit edilebilir.

Yerel ya da Sistemik Farmakolojik Müdahale sonrası Farelerin Uçucu Genel Anestezik Hassasiyet Değişiklikleri değerlendirilmesi

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

assessing-changes-volatile-general-anesthetic-sensitivity-mice-after

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Pharmacology

Medicine

Unit 1

Local Anesthetics

Drugs for Pain Management: Opioid Analgesics and General Anesthetics

SCIENTISTS IN ACTION

13.5K Görüntüleme.  Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania.  Doğrulma refleksinin kaybı uzun laboratuvar hayvanlarında, aynı zamanda hipnoz denilen, bilinç kaybı için standart bir davranış vekil olarak görev yapmıştır. Farmakolojik müdahaleler kaynaklanan uçucu anestetik duyarlılıkla değişiklikler herhangi bir solunan terapötik teslim için adapte edilebilir, dikkatli bir şekilde kontrol edilen yüksek verimli değerlendirme sistemi ile tespit edilebilir. 

Video: Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

Fetal Alkol Pozlama bir Zebra balığı Modelinde teratojenik değişiklikler değerlendirilmesi

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Tıp

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. However, due to the small size of the mouse, technical details of the intraoperative monitoring procedure suitable for the mouse were rarely described. Previously we have reported a monitoring procedure to obtain hemodynamic parameters for rats. Now, we adapted the procedure to acquire systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice, a species ten-fold smaller than rats. This film demonstrates the instrumentation of the animals as well as the data acquisition process needed to assess systemic and hepatic hemodynamics in mice. Vital parameters, including body temperature, respiratory&#160;rate&#160;and heart&#160;rate were recorded throughout the whole procedure. Systemic hemodynamic parameters consist of carotid artery pressure (CAP) and central venous pressure (CVP). Hepatic perfusion parameters include portal vein pressure (PVP), portal flow rate as well as the flow rate of the common hepatic artery (table 1). Instrumentation and data acquisition to record the normal values was completed within 1.5 h. Systemic and hepatic hemodynamic parameters remained within normal ranges during this procedure.
This procedure is challenging but feasible. We have already applied this procedure to assess hepatic hemodynamics in normal mice as well as during 70% partial hepatectomy and in liver lobe clamping experiments. Mean PVP after resection (n= 20), was 11.41&#177;2.94 cmH2O which was significantly higher (P&#60;0.05) than before resection (6.87&#177;2.39 cmH2O). The results of liver lobe clamping experiment indicated that this monitoring procedure is sensitive and suitable for detecting small changes in portal pressure and portal flow rate. In conclusion, this procedure is reliable in the hands of an experienced micro-surgeon but should be limited to experiments where mice are absolutely needed.

This film demonstrates how to acquire systemic and hepatic hemodynamics in mice. The whole monitoring includes acquisition of vital parameters, systemic blood pressure, central venous pressure, common hepatic artery flow rate, and portal vein pressure as well as the portal flow rate in mice.

Farelerde Sistemik ve Karaciğer Hemodinamik Parametrelerin İzleme

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE)

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

Normal Farelerde% 70 hepatektomi sonrası Vasküler ve Parankimal Rejenerasyon görselleştirme

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological conditions. Partial hepatectomy also facilitates the increased engraftment and proliferation of transplanted cells by accelerating neovascularization and cell migration towards the liver. Here, we describe a simple protocol for performing 30% hepatectomy and transplantation of cells in the spleen of a non-obese diabetic/severe combined immunodeficient NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mouse. 
In this procedure, two small incisions are made. The first incision is to expose and resect the left lobe of the liver, and another small incision is made to expose the spleen for the intrasplenic transplantation of cells. This procedure does not require any specialized surgical skills, and it can be completed in 5-7 minutes with less stress and pain, faster recovery, and better survival. We have demonstrated the transplantation of hepatocytes isolated from a green fluorescent protein (GFP) expressing mouse (Transgenic C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), as well as hepatocyte like cells of human origin (NeoHep) in partially hepatectomized NOD.SCID mice.

We have described a protocol for performing partial hepatectomy (PHx) and cell transplantation via spleen in NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mice. In this protocol, an incision is made to expose and resect the left lobe of the liver followed by another incision for the intrasplenic transplantation of cells.

Hepatositlerin intrasplenic nakli düğümde kısmi Hepatectomy sonra. SCID fareler

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Isolation of Regenerating Hepatocytes after Partial Hepatectomy in Mice

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream single-cell applications is challenging. A marked accumulation of lipids within regenerating hepatocytes is observed during the first 2 days of normal liver regeneration in mice. This so-called transient regeneration-associated steatosis (TRAS) is temporary but partially overlaps the major proliferative phase. Density-gradient purification is the backbone of most existing protocols for the isolation of primary hepatocytes. As gradient purification relies on the density and size of cells, it separates non-steatotic from steatotic hepatocyte populations. Therefore, fatty hepatocytes often are lost, yielding non-representative hepatocyte fractions. 
The presented protocol describes an easy and reliable method for the in vivo isolation of regenerating hepatocytes regardless of their lipid content. Hepatocytes from male C57BL/6 mice are isolated 24-48 h after hepatectomy by a classic two-step collagenase perfusion approach. A standard peristaltic pump drives the warmed solutions via the catheterized inferior vena cava into the remnant, using a retrograde perfusion technique with outflow through the portal vein. Hepatocytes are dissociated by collagenase for their release from the Glisson's capsule. After washing and careful centrifugation, the hepatocytes can be used for any downstream analyses. In conclusion, this paper describes a straightforward and reproducible technique for the isolation of a representative population of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. The method may also aid the study of fatty liver disease.

Lipid-laden hepatocytes are inherent to liver regeneration but are usually lost upon density-gradient centrifugation. Here, we present an optimized cell isolation protocol that retains steatotic hepatocytes, yielding representative populations of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice.

Farelerde Parsiyel Hepatektomi Sonrası Rejenere Hepatositlerin İzolasyonu

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream ...

Salidrosid'in MCF-7 Hücre Göçünü ve Proliferasyonunu Baskılama Mekanizması

Exploring the Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Salidroside in Inhibiting MCF-7 Cell Proliferation and Migration

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer mechanisms have been only incompletely elucidated. Hence, this protocol intended to decode the potential of Sal in regulating the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway in the malignant proliferation of human breast cancer MCF-7 cells. First, the pharmacological activity of Sal against MCF-7 was evaluated by CCK-8 and cell scratch assays. Moreover, the resistance of MCF-7 cells was measured by migration and Matrigel invasion assays. For cell apoptosis and cycle assays, MCF-7 cells were processed in steps with annexin V-FITC/PI and cell cycle-staining detection kits for flow cytometry analyses, respectively. The levels of reactive oxygen species (ROS) and Ca2+ were examined by DCFH-DA and Fluo-4 AM immunofluorescence staining. The activities of Na+-K+-ATPase and Ca2+-ATPase were determined using the corresponding commercial kits. The protein and gene expression levels in apoptosis and the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway were further determined using western blot and qRT-PCR analyses, respectively. We found that Sal treatment significantly restricted the proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells with dose-dependent effects. Meanwhile, Sal administration also dramatically forced MCF-7 cells to undergo apoptosis and cell cycle arrest. The immunofluorescence tests showed that Sal observably stimulated ROS and Ca2+ production in MCF-7 cells. Further data confirmed that Sal promoted the expression levels of pro-apoptotic proteins, Bax, Bim, cleaved caspase-9/7/3, and their corresponding genes. Consistently, Sal intervention prominently reduced the expression of the Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1&#945;, and FoxO1 proteins and their corresponding genes. In conclusion, Sal can be used as a potential herb-derived compound for treating breast cancer, as it may reduce the malignant proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells by inhibiting the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway.

Yazar Spotlight: Meme Kanseri Tedavisinde Salidrosid'in Moleküler Mekanizmalarını Keşfetmek 

The present protocol describesa comprehensive strategy for evaluating the pharmacological action and mechanism of salidroside in inhibiting MCF-7 cell proliferation and migration.

MCF-7 Hücre Proliferasyonunu ve Migrasyonunu İnhibe Etmede Salidrosidin Farmakolojik Etkisinin ve Moleküler Mekanizmasının Araştırılması

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer ...

Romatoid Artrit Hastaları için Egzersiz Programı Geliştirilmesi

Evaluation of Changes in Hydration and Body Cell Mass with Bioelectrical Impedance Analysis after Exercise Program for Rheumatoid Arthritis Patients

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown benefits for RA patients, its impact on hydration and body cell mass remains uncertain. The presence of pain, inflammation, and joint changes often restrict activity and make traditional body composition assessments unreliable due to altered hydration levels. Bioelectrical impedance is a commonly used method for estimating body composition, but it has limitations since it was primarily developed for the general population and does not consider changes in body composition. On the other hand, bioelectrical impedance vectorial analysis (BIVA) offers a more comprehensive approach. BIVA involves graphically interpreting resistance (R) and reactance (Xc), adjusted for height, to provide valuable information about hydration status and the integrity of the cell mass.
Twelve women with RA were included in this study. At the beginning of the study, hydration and body cell mass measurements were obtained using the BIVA method. Subsequently, the patients participated in a six-month dynamic exercise program encompassing cardiovascular capacity, strength, and coordination training. To evaluate changes in hydration and body cell mass, the differences in the R and Xc parameters, adjusted for height, were compared using BIVA confidence software. The results showed notable changes: resistance decreased after the exercise program, while reactance increased. BIVA, as a classification method, can effectively categorize patients into dehydration, overhydration, normal, athlete, thin, cachectic, and obese categories. This makes it a valuable tool for assessing RA patients, as it provides information independent of body weight or prediction equations. Overall, the implementation of BIVA in this study shed light on the effects of the exercise program on hydration and body cell mass in RA patients. Its advantages lie in its ability to provide comprehensive information and overcome the limitations of traditional body composition assessment methods.

Yazar Spotlight: Düşük Vücut Hücresi Kütlesi Olan Hastalarda Hastalık Risk Faktörlerini Analiz Etmek için BIVA'nın Uygulanması 

This protocol assesses alterations in hydration and body cell mass status using bioelectrical impedance vectorial analysis following a dynamic exercise program designed for patients with rheumatoid arthritis. The dynamic exercise program itself is detailed, highlighting its components focused on cardiovascular capacity, strength, and coordination. The protocol details steps, instruments, and limitations.

Romatoid Artrit Hastalarında Egzersiz Programı Sonrası Hidrasyon ve Vücut Hücre Kütlesindeki Değişikliklerin Biyoelektrik Empedans Analizi ile Değerlendirilmesi

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown ...