Bu çalışma LB NIH R37 DK54824 ve R01 DK57284 hibe ile desteklenmiştir

Burada açıklanan tüm prosedürler Pittsburgh Üniversitesi IACUC komitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Çözümler <ol><li> Reçeteye göre Krebs çözeltisi hazırlayın. NaCl 118, KCl 4.7, CaCl2 1.9, MgSO 4 1.2, NaHCO3 24.9, KH 2 PO 4 1.2, dekstroz 11.7: mM Kompozisyon. </li><li> % 95 O2,% 5 CO2 ile Krebs havalandırır ve deney boyunca kullanılmak üzere bir 37 ° C su banyosu içine koyun. Bir yana koyun, oda sıcaklığında gece havalandırılmış Krebs çözeltisi 200 ml doku diseksiyon için kullanılır. </li><li> Havalandırılmış Krebs pH (~ 7.4) ve ozmolariteyi (~ 300 mOsm) ölçün. </li></ol> 2. Deney Seti-up (şematik Şekil 1A) <ol><li> (% 95 O2,% 5 CO2) 10 ml Krebs ile gaz odaları doldurun. </li><li> 37 ° C&#39;ye kadar ısıtmak için odaları su sirkülasyon pompası başlanması; gerekli ekipman açın: amplifikatör (ler), uyarıcı (ler) ve kayıt yazılımı. </li><li> 1 g ağırlık çeviricilerine kalibre. </li></ol> 3. Doku (Şekil 1B) : Aşağıdaki adımları; (~ 10-12 haftalık 200-250 gr) bir yetişkin naif dişi Sprague Dawley sıçanın kesesi çıkarın <ol><li> Diseksiyon alanı ve gerekli araçları hazırlayın: elektrikli tıraş, diş forseps, neşter bıçak, kesme makasları, Microscissors, iki diseksiyon forseps, doku klipleri (veya ipek dikiş), Krebs ile Sylgard kaplı diseksiyon çanak (yazarlar Dumont forseps # 3 tercih) doku diseksiyonu pimleri. </li><li> Indüksiyon odasında izofluran inhalasyonu (O 2% 4) ile hayvan anestezisi. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözlerin veteriner merhem kullanın. Sürekli solunum hızını, dış uyaranlara yanıt, ve refleks çekilme arka uzuv kaybı gözlemleyerek anestezi düzeyini izlemek. </li><li> Hayvan tıraş alt karın bir anestezi zamanrea. Bir orta hat karın kesi yoluyla pelvik organların maruz. Mesane ve üretra tanımlayın. Proksimal üretraya yakın mesane boynu kesilerek kesesi çıkarın. Havalandırılmış Krebs çözeltisi ile doldurulmuş Sylgard kaplı çanak hemen doku yerleştirin. </li><li> Gerekirse, bu zamanda ek doku kaldırmak: üretra, gastrointestinal (Gl) sistemi ve / veya prostat parçaları, vs </li><li> IACUC onaylanmış yöntemler (örneğin, anestezik doz aşımı ya da bir ikincil yöntem izledi CO 2 boğulma) kullanarak hayvan kurban. </li><li> Daha fazla diseksiyon için doku stabilize, mesane kubbesi, boyun ve üreterler yoluyla doku kesme işaretçilerine yerleştirin. Doku germeyin. Yağ, bağ dokusu, proksimal üretra ve üreter varsa çıkarın. </li><li> Düz bir sayfası oluşturmak için kubbeye tabanından mesane açın, serozayı tarafı aşağı / lümen tarafı yukarı (Şekil 1B). Doku her köşesinde kesme işaretçilerine yerleştirin. Mesane dom KaldırE ve boyun doku. </li><li> Deneyin amacı mukozasında (ürotelyum ve lamina propria - diyagram Şekil 1C bakınız) katkısını belirlemek için ise düz kas kasılması için, ile ve ekli mukozasında olmadan detrüsör şeritler özelliklerini karşılaştırın. Bunun için, şeritler dokusunun kesilmesi öncesinde, dikkatli bir şekilde, iris bir tahlil mikroskobu altında makas ve ince forseps yay kullanarak mukoza tabakasının çıkarın. Deneyin sonunda, mukoza tamamen çıkarılmasını teyit etmek için H &amp; E boyaması için şeritler sabitleyin. Bu prosedür, fare mesane daha fare mesane daha kolay olduğuna dikkat edin. </li><li> ~ 2 x 8 mm (Şekil 1B) şeritler halinde kubbe tabandan boyuna doku kesilir. Kravat ya da her şeridin iki ucunda bir doku klip ekleyin. NOT: Bir fare mesane, genellikle 4 şeritler halinde kesilebilir, ancak dilimlerin sayısını artırabilir veya azaltmak hayvan / mesane boyutuna bağlı olarak değişir. </li><li> Exper şerit aktarmaimental odaları. Bir doku kasılmasını ölçen bir kuvvet transformatörüne, her bir şeridin ucunu, sabit bir cam / metal çubuğun diğer takın. Not: Doku odaları boyutu (20 mi ya da daha büyük 0.2 mi) değişir. Kemirgen mesanesi için tipik odaları şeritler tamamen solüsyona daldırılır edilmesi için yeterli bir yükseklik sağlamak 5-20 mi vardır. Bazı odaları yerleşik uyarım elektrotları, başkaları ile değil gelir. Bakım türlü elektriksel alan stimülasyonu güvenilir değildir, tüm elektrotların bağlantıları iyi durumda olmasını sağlamak için alınmalıdır. </li><li> Temel tansiyon, 1 g (~ 10 mi) içindeki ulaşıncaya kadar yavaşça doku germe her şerit kuvvet belirli bir miktarda uygulanır. Başlangıçta doku başlangıç ​​gerilmesinde bir azalma olarak kaydedildiği dinlenmek eğilimindedir. Yıkama doku yaklaşık ve sıcak gazlı Krebs kullanarak her 15 dk her yıkamadan sonra 1 g temel gerginliğini ayarlayın. (Temel tansiyon istikrarlı doku ~ için 1-2 saat kadar ya da gelmesini sağlayınyani başka doku gevşeme). </li><li> ~ 5 dakika için ya da bir plato yanıt kadar banyoya doğrudan KCI (80 mM) eklenerek test dokusu canlılığı ulaşılır. KCI yüksek konsantrasyonlarda yanıtlar da deney sırasında ya da deneyin sonunda tekrarlanır ve (veri analiz bölümü altında normalleştirme bakınız) şeritler diğer ilaçlara yanıtları arasında ya da normalize etmek için kullanılabilmektedir. </li><li> Sıcak gazlı Krebs ile yıkayın doku birden çok kez (3-5x) doku ön arıtma koşulları dönmek için izin vermek. </li></ol> 4. Stimülasyon Protokolleri <ol><li> SCI, Yİ, veya yenidoğanlarda gibi farklı hayvan modellerinde düz kas şeritleri kullanmak, spontan myojenik aktivite veya düz kas tonusu üzerinde patoloji etkilerini araştırmak. Şekil 2 gelişimi sırasında mesane spontan aktivite değişiklikleri araştırmak amacıyla bu yöntemin kullanımını göstermektedir ve SKY sonrası. Buna ek olarak, çeşitli ilaç sp modüle etmek için de kullanılabilirontaneous faaliyet. Şekil 3, spontan aktivite ve düz kas üzerindeki KCNQ kanal modülatörlerinin, flupirtinin ve XE991, etkisini göstermektedir. </li><li> Doğrudan belirlenen zaman aralıklarında banyosuna konsantre stok çözeltilerinden bileşiklerin ilave edilmesi ile, farmakolojik düz kas uyarımı konstrukt konsantrasyon yanıt eğrileri için. Araç ve zaman etkilerinin hesaba paralel şeritler halinde ilaç ve araç kullanın. <ol><li> 1000x son çalışma konsantrasyonu istenilen Test bileşiklerinin stok çözeltileri hazırlanır. 10 5 M, 3 x 10 5 M, 10 4 M, 3 x 10 4 M, 10 3 M, 3 x 10 3 M: karbakol (CCH), bir muskarinik reseptör agonisti, aşağıda stoklarını 10 -2 M. Banyosu içinde nihai konsantrasyonlar 10 -5 M (Şekil 4C, D) ile 10 M -8. 10 -8 M, 10 -7: neuromedin B (NMB&#39;de), bir bombesin reseptör alt 1 agonisti için aşağıdaki stokları hazırlamakM, 10 -6 M, 10 5 M, 10 4 M, 10 3 M ve banyo içinde nihai konsantrasyonlar olarak 10 -11 M&#39;ye 10 -6 M CCh ve NMB Hem doku kasılmasını artması beklenmektedir. </li><li> Bu cevap, bir plato (Şekil 4C, D) ulaşana kadar bir 10 ml doku banyosuna için, kısa sürede her CCh stok çözeltisinden 10 ul ekle. Paralel şeritler halinde, taşıyıcının (su) eşit bir şekilde artırmıştır. Benzer şekilde, her neuromedin B stok çözeltisi 10 ul her ~ 5 dakika ekleyin. NOT: Şekil 4 farklı türlerden şeritler halinde düz kas tonusu üzerinde NMB&#39;de ve CCH uyarıcı etkisini gözlemleyin. </li><li> Bir uyarıcı madde, genellikle CCH veya KCl ile ön-sözleşmeli dokuda düz kasların gevşemesi özelliklerini incelemek. </li><li> Bir agonist tepkisini bloke etmek için, stimülasyon Agonisti önce doku penetrasyonu izin vermek için antagonisti ile 10-20 dakika boyunca ön-işleme tabi doku. </li></ol></li><li> Sinir stimülasyonu içindüz kas simülasyonu olarak da adlandırılan elektrik alan uyarımı (EFS) 3.13 adım 1 ila takip ve aşağıda açıklandığı gibi devam edin. EFS, seçici olarak düz kas sinirlerinin karşı aktif hale getirmek için tasarlanmıştır. Uyarılması için parametrelerin dikkatle doğrudan düz kas uyarmayı önlemek üzere seçilmelidir. <ol><li> Stimülasyon parametreleri Kurmak: Aşağıdaki adımlarda açıklanan ve Şekil 5A, B de gösterildiği gibi uyarıcı (tek darbeler veya trenler), süresi (darbe süresi ve tren süresi), sıklığı ve şiddeti, tipi. <ol><li> Tek darbe uyarım, seti darbe süresi, inter-uyaran aralığı ve istenen uyaranların sayısı için. Her zamanki stimülasyon süre parametreleri istenilen aralıklarla (Şekil 5A) teslim 0.05-0.3 msn süresince tek sinyallerdir. Uyaran yoğunluğu için adımı 4.3.1.4 izleyin. </li><li> Tren uyarılması için, tren süresini ve inter tren aralığını ayarlayın. Mesane dokusu için tipik değerler 3-10 sn en az 1 m teslim edilirayrı olarak (Şekil 5B). Doku yorgunluk (yani EFS kasılmaları kontrol döneminde azalma) oluşursa, arası tren aralığını artırın. </li><li> Bir tren bakliyat tren uyaranlara sıklığını (dizi Kurmak - Şekil 5B). 0.5-50 Hz arasındaki bir frekans tepkisi eğrisi. Kesesi için tipik frekans ATP ve ACh ile aracılık tekrar üretilebilir ve kararlı kasılmalar elde 10-20 Hz bulunmaktadır. Bu yöntem, kolinerjik ve sinirsel purinerjik mekanizmaların katkısını araştırmak için nasıl kullanılabileceğini gösteren Şekil 5 fare mesane şeritler EFS uyarısına frekansa bağımlı tepkiler dikkate alınmalıdır. </li><li> Uyaranın şiddeti Kurmak: daralmanın genlik bir plato ulaşıncaya kadar (kullanarak trenler frekans sabit tutarsanız) sistematik uyaran yoğunluğunu (voltaj) artar. </li><li> Bağlı olarak uyaran yoğunluğunu ayarlayınDeney hedefliyoruz. Amaç, nöral-uyarılmış kasılma artırmak için ise, o zaman kasılma büyüklüğü ~ maksimum kontraksiyonun% 50 olacak şekilde, submaksimal yoğunluğu kullanılır. Amaç, nöral-uyarılmış kasılma azaltmak için ise, daha sonra ~ en yüksek amplitüdde% 80 doku yorgunluğu önlemek için yoğunluğunu ayarlamak için. </li></ol></li><li> Stimülasyon parametreleri (süresi, sıklığı ve yoğunluğu) oluşturulduktan sonra, EFS- için 20-30 dk uyuşturucu testi öncesinde stabilize kasılmaları uyarılmış ~ izin verir. NOT: (; 0.5-1 mcM TTX) sinir iletim, Na + kanal blokörü, tetrodotoksin&#39;in blok sinir iletimi için EFS seçiciliği doğrulamak için. TTX nispeten kolay yıkar gibi, deney başında bu adımı gerçekleştirin. Buna ek olarak, (aşama 4.3.5 bkz. Aşağıda), deneyin sonunda bu gerçekleştirin. </li><li> Son işleme konsantrasyonları için 1,000x de stok çözelti hazırlayın: alfa, beta-metilen ATP (ABMA, purinerjik alıcı aktivatörüve desensitize edici) -2 10 E, atropin (muskarinik alıcı antagonisti) 3 M 10 (Şekil 5C). Şekil 6&#39;da başka örnekler dikkate alınmalıdır. 5HT4 reseptör agonisti, sisaprid ile (3 x 10 -6 M, 10 -6 M, 3 x 10 5 M, 10 5 M, 3 x 10 4 M, 10 4 M, 3 x 10 -3 M, 10 -3 M), doku kasılma ve SB-203186 (3 x 10 -3 M), bir 5HT4 reseptör antagonisti artırır sisapridi etkilerini tersine çevirir. </li><li> EFS (Şekil 5C) üzerindeki etkilerini ABMA atropin ve test edilmesi için, iki kontrol frekans tepkisi eğrileri gerçekleştirin. 10 uM&#39;lik bir son konsantrasyon elde etmek üzere banyo 10 -2 M ABMA 10 ul. Bu durum düz kas purinerjik reseptörlerinin doğrudan uyarılması doku küçülecek. Başlangıca yanıt döndükten sonra, frekans tepkisi eğrileri tekrarlayın. Son bir concentrat için 10 -3 M atropin 10 ul ekle1 uM&#39;lik iyonu temsil etmektedir. (Muskarinik reseptörleri bloke atropin için gerekli) ~ 10 dakika, tekrar frekans tepkisi eğrileri sonra. Paralel şeritler halinde, her bir adımda, taşıyıcı olarak, su, 10 ul ekle. Not: Şekil 6 &#39;da, diğer örnekler için, tanımlı zaman aralıklarında (~ 15 dakikada; tartışmaya bakınız) her sisaprid stok çözeltisi 10 ul doğrudan banyoya SB-203186 stok solüsyonu, 10 ul ve ardından ve üzerindeki etkisini izlemek daralma EFS neden oldu. Paralel şeritler halinde, aracın, 10 ul DMSO ilave edin. Sisapridin etkilerini incelemek, Şekil 6 &#39;da insan mesane karaciğer, akciğer dokularında EFS uyarılmış kasılma bir 5HT4 reseptör agonisti,. İlave olarak, insan mesane ve ileum dokularda EFS uyarılmış kasılmaları üzerindeki etkisini DMSO, sisapridin için araç, gözlemlemek . </li><li> EFS protokol sonunda Na + kanal blokörü, tetrodotoksin&#39;in (TTx ile nöral iletimi bloke ederek EFS seçiciliğini doğrulamak; 0.5-1 &amp;181. M). TTX dirençli kasılmalar hala varsa, daha sonraki deneylerde uyaran süresini ve yoğunluğunu ayarlamak için tavsiye edilir. </li></ol></li><li> Öncesi veya post-sinaptik sitelerinde (Şekil 7A) ilaçların etkilerini belirlemek için 4.3.2 izleyin 1. Karbakole tekrarlanabilir yanıtları oluşturulması ve EFS, daha sonra uyuşturucu X eklemek </li><li> Deneyin sonunda, sökülüp takılmasını veya şeritler çöz ekstra sıvı ortadan kaldırmak ve bir denge kullanarak her bir şeridin ağırlığı ölçmek için ince kağıt parçası üzerine nazikçe bekletin. Ayrıca, enine kesit alanı belirlemek için bir kumpas kullanılarak doku uzunluğunu ölçer. Bu bilgiler veri normalizasyonu için kullanılır (bölüm 5.4). </li></ol> 5. Veri Analizi Yeterli yazılımını kullanarak verileri analiz (örneğin, Windaq, LabChart). <ol><li> Spontan aktivite için, önce ve ilaç kaynaklı yanıt ve beni zirvesine en az 30 saniye, bir pencere seçmekaşure genlik ve Miyojenik aktivite sıklığı (Şekil 3). <ol><li> Mesane farklı parçaları arasındaki farklar vardır yanıtları kasılma olup olmadığını katkıda frekansların spektrumunu belirlemek için hızlı Fourier dönüşüm analizi kullanın (örneğin, boyun vs kubbe) veya geliştirme, patoloji, ve uyuşturucu 8 ile. </li></ol></li><li> Düz kas üzerindeki etkiler için, önce ve ilaç uyarımlı tepkisinin zirvesine en az 10-30 saniyelik bir pencere seçmek ve büzülme genlik ölçmektedir. </li><li> Nöral ile uyarılan kasılmaları üzerindeki etkiler için, önce ve ilaca bağlı yanıtının tepe noktasında kasılmaları eğrisi (en az 3) altında genlik, süresi ve alanı ölçer. Not: Bu, purinerjik ve kolinerjik bileşenler farklı olan bir kinetiğe sahiptir, çünkü EFS uyarılan kasılmaların eğri altındaki alanı, hem de amplitüd ve ölçmek gereklidir. Purinerjik bileşen hızlı ve geçicidir (ATP purinergi aktivekalsiyum hızlı akışını izin veren bu P2X1 c iyonotropik kanallar, daha sonra bu şekilde, eğri altındaki alan en yüksek amplitüdü yanıt daha az katkıda) desensitize. Kolinerjik bileşeni (ACh sonuçta bir daralma ikna etmek düz kas depolarize iyon kanallarını aktive hücre içi yolları aktive daha fazla zamana ihtiyaç metabotropik muskarinik reseptörleri aktive) yavaş ve sürekli olduğunu. Dolayısıyla, muskarin ile ilgili bölümü eğri altındaki alanın ölçülmesi ve daha iyi yakalanır. </li><li> Şeritler ve farmakolojik tedavilerde sonuçlarını karşılaştırmak mümkün veri normalleştirmek. Normalleştirme için seçilen parametre patolojik durum, araştırma veya deney tasarımı, test bileşikleri ile etkilenmemelidir. Bu parametreler, kullanım şerit ağırlığına enine kesit alanı, KCI tepkisinin (Şekil 4B), bir kasılma ajana en yüksek tepkinin maksimum tepki (Şekil 7B) ve%% &#39;si arasında,(Örneğin, CCh) veya rahatlatıcı maddeler (örneğin, papaverin). </li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Bu yazıda mesane fizyolojisi ve patolojisi, yanı sıra mesane bozukluklarının tedavisinde yeni ilaçların keşfini yardım ile ilgili önemli bilimsel sorular çok sayıda adrese kullanılabilir vitro düz kas kasılması yönteminde basit bir tarif. Biz, mesane düz kas kasılmasının, gelişim, patolojik ve farmakolojik özellikler (Şekil 2-4), sinir iletimini modülasyonu (Şekil 5-7A), tür farkları (Şekil 4), organ farklılıkları değer...

Mesane düz kas idrar eleme ortaya çıkarmak için idrar depolamaya izin vermek için gevşer ve sözleşmeler. Gevşeme içsel düz kas özellikleri ile ve detrusor beta adrenerjik reseptörleri (β insan 3 AR) aktive sempatik sinirler norepinefrin (NE) tonik salınımı, aracılık eder. Işeme sempatik girişini engellemek ve ACh / ATP mesane düz kasını 1 sözleşme için serbest parasempatik sinirleri aktive ederek elde edilir. Beyin ve / veya omurilik yaralanması, nörodejeneratif hastalıklar, diyabet, mesane çıkım tıkanıklığı veya interstisyel sistit gibi çeşitli patolojik durumlar, derinden hayatın 2 hastanın kalitesi üzerinde ciddi etkileri olan, mesane fonksiyon değiştirebilir. Düz kas, afferent ve efferent sinirleri ve / veya: Bu koşullar, bir veya daha fazla bileşen mesane etkileyerek düz kasının kasılma kuvveti üzerinde etkisimukoza. In vivo ve mesane fonksiyonu çalışma için birkaç in vitro yöntemler geliştirilmiştir. In vivo sistometri mesane fonksiyon temel ölçüsüdür. Bu fizyolojik koşullara yakın altında bilgileri toplama sağlayan bir sağlam hazırlanması olsa da, yumuşak kas şeritlerin kullanımı tercih edildiği durumlar da vardır. Bu, cerrahi ve / veya farmakolojik manipülasyonlar hayatta kalmasını ve in vivo preparasyonun stabilitesini veya etkileyebilecek durumlara dahil çalışmalar, insan doku veya pahalı kimyasal maddelerin kullanılmasını gerektirir zaman. Bu yöntem, aynı zamanda, mesane her bir bileşeninin ilaçlar, yaş ve patoloji etkilerinin incelenmesini kolaylaştırmaktadır, düz kas, mukoza, afferent ve efferent sinirleri yani. Mesane şeritler bilimsel bir dizi soru cevap birçok grup tarafından yılda istihdam edilmiştir. Bunlar eva için kullanıldımiyojenik spontan aktivitede bir değişiklik ölçmek üze- re patoloji ile indüklenen. Bu aktivite aşırı aktif mesane (AAM), aciliyeti ve sıklığı, belirtilere katkıda bulunduğuna inanılan ve bu nedenle AAM 3-9 için geliştirilen ilaç için bir hedef olduğunu. Mesane şeritler de rahatlama ya da düz kas kasılmasını ya ikna etmek için hedef olabilir iyon kanalları ve / veya reseptörleri ve / veya hücre içi yollar keşfetme amacı ile düz kas tonusunu modüle myojenik ve nöronal faktörleri araştırmak için kullanıldı 3,10- 13. Diğer çalışmalar patoloji 14,15 tarafından uyarılan vericileri ve ilgili reseptörleri ve değişiklikler de dahil olmak nörotransmisyonun doğasına odaklanmıştır. Buna ek olarak, yöntem, organ 19-21 ve ilaç yapı-aktivite ilişkisinin değerlendirilmesi 22-24 arasında, farklı türlerdeki 16-18&#39;den dokular arasındaki karşılaştırmalar için kullanılmıştır. Bu yöntemin bir uzantısı MEASUR için kullanılmıştırefferent sinirler 25 yerden verici salınımı üzerindeki ilaçların etkisini e. Ayrıca, dokuların (mesane, üretra, gastrointestinal sistem, GI) (araştırma için onaylanmış ameliyatlar veya organ donör dokudan), insan veya hayvan hasat ve spinal kord yaralanması (SKY), mesane çıkım tıkanıklığı dahil olmak üzere hayvan modellerinde çeşitli çeşitli (BOO), veya interstisyel sistit (IC) bu tekniği kullanılarak incelenmiştir edilebilir. Bu yazıda yukarıda belirtilen çeşitli bilimsel soruları için gerekli deneysel protokolleri ile birlikte bu yöntemin kullanımı, göstermektedir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:123px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Equipment</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Tissue Bath System with Reservoir</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">159920</td>
			<td style="width:180px;">isolated tissue baths</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Warm water recirculator pump</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">TPZ-749</td>
			<td style="width:180px;">to keep tissue baths to 37 C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Computer</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Data Acquisiton System</td>
			<td style="width:123px;">DataQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DI-710-UH</td>
			<td style="width:180px;">To view, record and analyze data</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td style="width:123px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SYS-TBM4M</td>
			<td style="width:180px;">Transducer amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Grass stimulator</td>
			<td style="width:123px;">Grass Technologies</td>
			<td>Model S88</td>
			<td style="width:180px;">Stimulator</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia System</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td>ACV-1205S</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:237px;"><a name="RANGE!A10">Anesthetizing Box</a></td>
			<td style="width:123px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">500116</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia Masks</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">AC-09508</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Materials and surgical instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">sylgard</td>
			<td>Dow Corning Corp</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:180px;">To pin, dissect &#38; cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3160-152</td>
			<td style="width:180px;">To dissect/cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:237px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:123px;">ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins</td>
			<td style="width:119px;">Size 5</td>
			<td style="width:180px;">To pin tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Bench Pad</td>
			<td style="width:123px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">56617-014</td>
			<td style="width:180px;">Absorbent bench underpads</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Rat surgical Kit</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INSRATKIT</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">2 Dumont #3 Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500064</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500092</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500236</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel blade</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500239</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Professional Clipper&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">CLP-223&#160;45</td>
			<td style="width:180px;">To remove fur</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Suture Thread</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18020-50</td>
			<td style="width:180px;">Tie tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Clips</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">158802</td>
			<td style="width:180px;">Attach tissue to rod/transducer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">1g weight</td>
			<td style="width:123px;">&#160;Mettler Toledo</td>
			<td>11119525</td>
			<td style="width:180px;">For transducer calibration</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Chemicals</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="170">
			<td height="170" style="height:170px;width:237px;">Krebs Solution:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium Chloride 
			Potassium Chloride 
			Monobasic Potassium Phosphate 
			Magnesium Sulfate 
			Dextrose 
			Sodium Bicarbonate 
			Calcium Chloride 
			Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:123px;">Sigma&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Sigma 
			EMD 
			Baker</td>
			<td style="width:119px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; S7653 
			P217-500 
			P285-3 
			M65-500 
			D16-500 
			S5761 
			CX0130-2 
			2444</td>
			<td style="width:180px;">To prepare Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:123px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">029405</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">&#160;Oxygen tank</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">ox251</td>
			<td style="width:180px;">To use with anesthesia system</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">Moxn00hn36D</td>
			<td style="width:180px;">To aerate Krebs solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology

Biz, bir in vitro mesane düz kas kasılmasını ölçmek için bir yöntem, ve fizyolojik ve farmakolojik düz kas özellikleri yanı sıra patoloji ile uyarılan değişiklikler araştırmak için kullanımını tarif eder. Bu yöntem, cerrahi ve farmakolojik preparatların istikrar ve sağkalımı etkilediği manipülasyonları, insan dokusunun kullanılması ve / veya pahalı kimyasalların kullanımı gibi in vivo deneylerde karşılaşılan başlıca metodolojik zorlukları, üstesinden gelirken, mesane fonksiyonlarının anlaşılmasına önemli bilgi sağlar. Aynı zamanda sağlıklı ve patolojik koşullarda her mesane bileşenin (yani düz kas, mukoza, sinirler) özelliklerini araştırmak için bir yol sağlar. Mesane, bir anestezi verilen hayvanın, Krebs çözeltisi içine yerleştirildi ve şeritler halinde kesilir kaldırılır. Şeritler Krebs çözeltisi ile sıcak doldurulmuş bir odacığm içine yerleştirilir. Bir ucu bir izometrik tensio bağlı olduğubüzülme kuvveti ölçmek için n, dönüştürücü, diğer uç, sabit bir çubuk takılır. Doku doğrudan banyosuna veya in vivo mesane kasılmaları tetikleyen benzer sinirleri aktive elektrik alan uyarımı elektrotlar tarafından bileşikler ekleyerek uyarılır. Bu yöntemin kullanılması, gelişme esnasında ve deneysel omurilik yaralanması sonrası kendiliğinden düz kas kontraktilitesini değerlendirmek göstermektedir, nörotransmisyon (ilgili vericileri ve alıcıları), yumuşak kas aktivitesinin modülasyonunda rol oynayan faktörler doğası, tek tek bileşenlerin mesane rolü, ve türleri ve farmakolojik maddelere yanıt organ farklılıklar. Buna ek olarak, verici serbest kalmasına ve / veya düz kas gevşemesi, ilaç yapı-aktivite ilişkileri ve değerlendirme dahil olan hücre içi yolları araştırmak için kullanılabilir. In vitro olarak, düz kaslar yöntemi yaygın olarak kullanılmaktadır fo50 yıldır r ve önemli ölçüde mesane fonksiyon anlayışımıza yanı sıra halen mesane yönetimi için klinik olarak kullanılan bileşiklerin ilaç gelişmesine katkıda veriler sağlamıştır.

Spontan andMyogenic Etkinlik Spontan Miyojenik etkinlik sonrası gelişim 6-9 ve patoloji (örneğin, SCI, Yİ) 3-5 ile değişikliğe uğrar önemli bir düz kas özelliğidir. Bu aktivite aşırı aktif mesane (AAM), 2 belirtilerine katkıda inanılmaktadır çünkü, onu modüle reseptörleri, hücre içi yollar ve farmakolojik ajanların bir değerlendirme, AAM ve diğer düz kas fonksiyon bozuklukları için etkili tedaviler gel...

Watch this Scientific Journal Video about Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology at JoVE.com

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Bu yazıda, farmakolojik ajanlar ve sinir uyarımına tepki olarak, düz kas kasılmalarını değerlendirilmesi için bir in vitro yöntem, bir basit, ancak güçlü sunar. Ana uygulamalar ilaç tarama ve anlayış doku fizyoloji, farmakoloji, patoloji ve vardır.

Alt Üriner Sistem Farmakoloji değerlendirin bir Yöntem olarak mesane düz kas Şerit Kasılabilme

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

bladder-smooth-muscle-strip-contractility-as-method-to-evaluate-lower

Research

JoVE Journal

Medicine

26.1K Görüntüleme.  University of Pittsburgh School of Medicine.  Bu yazıda, farmakolojik ajanlar ve sinir uyarımına tepki olarak, düz kas kasılmalarını değerlendirilmesi için bir in vitro yöntem, bir basit, ancak güçlü sunar. Ana uygulamalar ilaç tarama ve anlayış doku fizyoloji, farmakoloji, patoloji ve vardır. 

Video: Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, and persistent nerve and muscle impairments after hospital discharge.1-6 Using an explicit protocol with a structured approach to training and quality assurance of research staff, manual muscle testing (MMT) is a highly reliable method for assessing strength, using a standardized clinical examination, for patients following ARDS, and can be completed with mechanically ventilated patients who can tolerate sitting upright in bed and are able to follow two-step commands. 7, 8 
This video demonstrates a protocol for MMT, which has been taught to &ge;43 research staff who have performed &gt;800 assessments on &gt;280 ARDS survivors. Modifications for the bedridden patient are included. Each muscle is tested with specific techniques for positioning, stabilization, resistance, and palpation for each score of the 6-point ordinal Medical Research Council scale.7,9-11 Three upper and three lower extremity muscles are graded in this protocol: shoulder abduction, elbow flexion, wrist extension, hip flexion, knee extension, and ankle dorsiflexion. These muscles were chosen based on the standard approach for evaluating patients for ICU-acquired weakness used in prior publications. 1,2.

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and critical illness frequently develop long-lasting muscle weakness. Manual muscle testing (MMT) is a standardized clinical examination commonly used to measure strength of peripheral skeletal muscle groups. This video demonstrates MMT using the 6-point Medical Research Council scale.

Kritik Hastalarda Uygulanan Manuel Kas Testi: Ekstremite Kas Kuvveti Ölçme Yöntemi

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Tıp

Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Probe-based confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces during standard endoscopy. With applications currently in the respiratory1 and gastrointestinal tracts,2-6 CLE has also been explored in the urinary tract for bladder cancer diagnosis.7-10 Cellular morphology and tissue microarchitecture can be resolved with micron scale resolution in real time, in addition to dynamic imaging of the normal and pathological vasculature.7
The probe-based CLE system (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, France) consists of a reusable fiberoptic imaging probe coupled to a 488 nm laser scanning unit. The imaging probe is inserted in the working channels of standard flexible and rigid endoscopes. An endoscope-based CLE system (Optiscan, Australia), in which the confocal endomicroscopy functionality is integrated onto the endoscope, is also used in the gastrointestinal tract. Given the larger scope diameter, however, application in the urinary tract is currently limited to ex vivo use.11 Confocal image acquisition is done through direct contact of the imaging probe with the target tissue and recorded as video sequences. As in the gastrointestinal tract, endomicroscopy of the urinary tract requires an exogenenous contrast agent&mdash;most commonly fluorescein, which can be administered intravenously or intravesically. Intravesical administration is a well-established method to introduce pharmacological agents locally with minimal systemic toxicity that is unique to the urinary tract. Fluorescein rapidly stains the extracellular matrix and has an established safety profile.12 Imaging probes of various diameters enable compatibility with different caliber endoscopes. To date, 1.4 and 2.6 mm probes have been evaluated with flexible and rigid cystoscopy.10 Recent availability of a &lt; 1 mm imaging probe13 opens up the possibility of CLE in the upper urinary tract during ureteroscopy. Fluorescence cystoscopy (i.e. photodynamic diagnosis) and narrow band imaging are additional endoscope-based optical imaging modalities14 that can be combined with CLE to achieve multimodal imaging of the urinary tract. In the future, CLE may be coupled with molecular contrast agents such as fluorescently labeled peptides15 and antibodies for endoscopic imaging of disease processes with molecular specificity.

Probe-based confocal laser endomicroscopy enables real-time microscopy of the human urinary tract during cystoscopy, providing dynamic, intravital imaging of pathological states such as bladder cancer with cellular resolution. Endomicroscopy may augment the diagnostic accuracy of standard white light endoscopy and provide intraoperative image guidance to improve surgical resection.

İdrar Yolu ve Probe tabanlı Konfokal Lazer Endomikroskopi: Tekniği

Probe-based  confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology  that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces ...

A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. Urinary exosome vesicles, 40-100 nm in size, are released into the urine under normal conditions by cells from all nephron segments and may contain protein, mRNA and microRNA representative of their cell type of origin. Under conditions of renal dysfunction or injury, exosomes may contain altered proportions of these components, which may serve as biomarkers for disease. There are currently several methods available for isolation of urinary exosomes, and we have previously conducted an experimental comparison of each of these approaches, including three based on ultracentrifugation, one using a nanomembrane ultrafiltration concentrator, one using a commercial precipitation reagent and one using a modification of the precipitation technique using ExoQuick reagent that we developed in our laboratory. We found the modified precipitation method produced the highest yield of exosome particles, miRNA, and mRNA, making this approach suitable for the isolation of exosomes for subsequent RNA profiling. We conclude that the modified exosome precipitation method offers a quick, scalable, and effective alternative for the isolation of exosomes from urine. In this report, we describe our modified precipitation technique using ExoQuick reagent for isolating exosomes from human urine.

This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique.

Bir Modifiye Yağış Yöntemi İdrar eksozomlar yalıtmak için

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Farelerde Mesane Ağrı için bir model olarak Mesane Distansiyonunun Uyarılmış Visceromotor Cevapları

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

Aort Kalsifikasyon ve Enflamasyon Vasküler düz kas hücrelerinin ve Görüntüleme Kalsifikasyon

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Contractility Measurements of Human Uterine Smooth Muscle to Aid Drug Development

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We describe methods to measure ex vivo myometrium contractility. This assay can be used to investigate factors and molecules involved in the modulation of myometrial contraction and to determine their excitatory or inhibitory actions, and hence their therapeutic potential in vivo. Biopsies are obtained from women undergoing cesarean section delivery with informed consent. Fine strips of myometrium are dissected, clipped and attached to a force transducer within 1 mL organ baths superfused with physiological saline solution at 37 &#176;C. Strips develop spontaneous contractions within 2&#8211;3 h under set tension and remain stable for many hours (&#62;6 h). Strips can also be stimulated to contract such as by the endogenous hormones, oxytocin and vasopressin, which cause concentration-dependent modulation of contraction frequency, force and duration, to more closely resemble contractions in labor. Hence, the effect of known and novel drug leads can be tested on spontaneous and agonist-induced contractions.
This protocol specifically details how this assay can be used to determine the potency of known and novel agents by measuring their effects on various parameters of human myometrial contraction. We use the oxytocin- and V1a receptor antagonists, atosiban and SR49059 as examples of known compounds which inhibit oxytocin- and vasopressin-induced contractions, and demonstrate how this method can be used to complement and validate pharmacological data obtained from cell-based assays to aid drug development. The effects of novel agonists in comparison to oxytocin and vasopressin can also be characterized. Whilst we use the example of the oxytocin/ vasopressin system, this method can also be used to study other receptors and ion channels that play a role in uterine contraction and relaxation to advance the understanding of human uterine physiology and pathophysiology.

This article describes experimental protocols to study ex vivo contractions of human myometrium and their application in drug discovery. This technique is used to improve the understanding of myometrial physiology and pathophysiology as well as to validate pharmacological data from novel research probes or drug leads.

İnsan rahim düz kas yardım ilaç geliştirme için contractility ölçümleri

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We ...

Microelectrode Impalement Method to Record Membrane Potential from a Cannulated Middle Cerebral Artery

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ion channels and electrogenic pumps that regulate Vm in disease conditions could potentially alter Vm, vascular tone, and blood flow. Thus, a basic understanding of electrophysiology and the methods necessary to accurately record Vm in healthy and diseased states are essential. This method will allow modulating Vm using different pharmacological agents to restore Vm. Although there are several methods, each with its advantages and disadvantages, this article provides protocols to record Vm from cannulated resistance vessels such as the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. Middle cerebral arteries are allowed to gain myogenic tone in a myograph chamber, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes. The Vm signal is collected through an electrometer, digitized, and analyzed. This method provides an accurate reading of the Vm of a vessel wall without damaging the cells and without changing the membrane resistance.

The primary goal of this article is to provide details of how to record membrane potential (Vm) from the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. The cannulated middle cerebral artery is equilibrated to gain myogenic tone, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes.

Mikroelektrot Impalement yöntemi bir kanüle orta serebral arter membran potansiyelini kaydetmek için

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

Kantitatif analiz düz kas hücre soy izleme farelerin gelişmiş aterosklerotik lezyonları içinde hücresel kompozisyon

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

İdrar Fonksiyonel Testi için Erişkin Erkek İdrar Yolu Ultrasonografisi

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Palatable Western-style Cafeteria Diet as a Reliable Method for Modeling Diet-induced Obesity in Rodents

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health burden of obesity and its comorbid conditions highlight the need for better understanding of its pathogenesis, yet ethical constraints limit studies in humans. To this end externally valid models of obesity in laboratory animals are essential for the understanding of being overweight and obesity.&#160;While many species have been used to model the range of changes that accompany obesity in humans, rodents are most commonly used. Our laboratory has developed a western-style cafeteria diet that consistently leads to considerable weight gain and markers of metabolic disease in rodents. The diet exposes rodents to a variety of highly palatable foods to induce hyperphagia, modeling the modern western food environment. This diet rapidly induces weight gain and body fat accumulation in rats allowing for the study of effects of overeating and obesity. While the cafeteria diet may not provide the same control over macronutrient and micronutrient profile as purified high-fat or high-fat, high-sugar diets, the cafeteria diet typically induces a more severe metabolic phenotype than that observed with purified diets and is more in line with metabolic disturbances observed in the overweight and obese human population.

This protocol describes the use of a highly palatable, western-style cafeteria diet to model overeating and obesity in rodents. Here, we provide a detailed outline of food selection, preparation and measurement, and explain methodological factors that assist in generating a robust and reproducible phenotype.

Kemirgenlerde Diyetkaynaklı Obezitemodellemeiçin Güvenilir Bir Yöntem olarak Lezzetli Batı tarzı Kafeterya Diyet

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health ...