The Watts Laboratory through the years, and Dr. Marlene Cohen and Kathy Schenck for teaching us this assay over two decades ago. NIGMS R25GM074119 supported development of this teaching module for a Short Course in Integrative and Systems Pharmacology held on the campus of MSU from 2005 to 2013.

NOT: Bu yazıda anlatılan tüm işlemler, Michigan State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından belirlenen kurallara göre yapılır. 1. Sistem Hazırlama ve Kurulum <ol><li> 50 ml doku banyolarına kadar kullanan bir doku banyosu daralma deney için gerekli olan miktardır fizyolojik tuz çözeltisi (PSS), 5 L olun; PSS tarifi için bakınız Tablo 2. Gerekli doku yıkama sayısına göre çarpılarak sonra doku banyoları sayısı çarpı banyo hacmi çarpılarak ve toplam gerekli hacmi hesaplayın. <ol><li> PSS yapma bir rehber olarak Tablo 2 kullanın. Suyun yaklaşık 4 L tuzları çözülür. Not: HPLC - Tip I su önerilir </li><li> Son çözelti, 1.6 mM kalsiyum, bu yüzden çözeltisine (dihidrat tuzu kullanılarak, eğer 147 g / L), 1 M CaCI2 çözeltisi 8 ml ilave edilir. </li><li> 5 L. Quantum sufficit PSS çözümü </li></ol&gt; </li><li> Çevrimli ısıtılmış su banyosunda açarak 37 ° C doku banyo sistemi önceden ısıtın. Kritik Adım: Sistemin her bir bileşeni birbirlerine seri olarak bağlandığından emin olun, su-ceketli olduğunu. akış yönü çok önemlidir - en yüksek dikenli bağlantı en düşük dikenli bağlantısında ve dışarı her bileşenin içine su akışını sağlamak. </li><li> Veri toplama sistemi açın. Deney öncesinde kuvvet dönüştürücüler en az 15 dakika Güç sıcaklığını dengelemek için. NOT: Çoğu kuvvet dönüştürücüler sıcaklık değişimlerine duyarlı ve enerji uygulandıktan sonra ilk termal sürüklenme sergileyen gerilme ölçerler kullanır. </li><li> Lansman veri toplama yazılımı ve veri toplama sistemi ile bağlantıyı sağlamak. Veri kayıt etkinleştirme üretim talimatlarını takip edin. </li><li> Kuvvet dönüştürücüler doku doku banyosu ve veri kayıt başlamadan önce yerleştirilmeden önce kalibre emin olun; foKalibrasyon için llow üretici talimatları. </li><li> % 95 O 2 /% 5 CO 2 medikal dereceli gaz silindiri doku banyo sistemi bağlayın ve gaz kaçakları kontrol ve sistemi basınç. </li><li> PSS ile doku banyo rezervuarları doldurun ve çözüm süresi optimum sıcaklığa gelmesini bekleyin. Başbakan sistemi ve sistem ve boru içinde herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarmak. </li><li> PSS tampon oksijenatlar ve deney sırasında doku banyosunda tanıtılacak ilaçları dağıtmak için Brown hareketi sağlayan tutarlı çözüm havalandırma sağlamak için doku banyo havalandırıcılar kontrol edin. Emin olun havalandırma / kabarcıklar veri kayıtları bozacak doku hareketi, neden olmaz; Gerekirse gaz akışını azaltmak. NOT: Doku banyo ve veri toplama sistemi artık denemeyi başlatmak için hazırız. </li></ol> 2. Doku Hazırlanması <ol><li> İdeal olarak, hayvan dokuları incelemek kullanımdan hemen önce ve i doğrudan yernGoogle&#39;a PSS. NOT: Bazı dokular gecede 4 ° C&#39;de PSS kaydedilebilir, ancak uygun kontroller uzun süreli depolamadan sonra doku işlevini doğrulamak için yapılmalıdır; Bölüm 6&#39;ya bakınız. </li><li> Bu egzersiz doku olarak aorta kullanın. </li><li> Kurumsal kurallarına uygun olarak sıçan anestezisi ve aşağı sıçan dorsal yüzü koyun. Bir ayak-tutam ve bu ağrılı uyaranlara refleks yanıtın kaybı yoluyla anesthetization onaylayın. NOT: Bu protokol, bir intraperitoneal enjeksiyon yoluyla verilen pentobarbital 70 mg / kg kullanılır. Kemirgen anestezi için kurumsal düzenlemeler farklı olabilir. </li><li> Göğüs kafesinin altındaki diyafram boyunca makasla bir kesi oluşturarak bir pnömotoraks oluşturun. Ardından, sternum göğüs kafesi altından kesi devam bisect. </li><li> Parçalara ayır veya omurganın üstünde olan bu organları bir kenara koyun ve omurga boyunca doğrudan yatıyor aort bulun. NOT: Bu step aorta dışarı incelemek için açık bir çalışma alanı sağlar. </li><li> Aorta tüm bağlantıları Sever; ve yemek borusu, akciğer, vb diyafram düzeyinde omurga dik aort kesti. </li><li> Yavaşça forseps ile aort tutun ve omurga aorta incelemek için makas kullanın. Kalbe doğru omurga ve iş bitişik alt diyafram alanında diseksiyonu başlatın. Dokuya zarar verebilir aort dokusu, fazladan çekmeyin önlem veya römorkör almak emin olun. </li><li> Hemen PSS içeren hazırlanmış diseksiyon çanak aort yerleştirin. NOT: halkalar halinde aort diseksiyonu iyi siyah silastik temeli olan bir diseksiyon çanak yapılır. Bu diseksiyon çanak sırasında stabilite sağlayan aorta kanül ve çanak vidalanmış kullanılabilir tellerin kullanımı için izin verir. Siyah arka plan diseksiyon yardımcı kontrast sağlar. Bakım endotelinde olarak kanüle telleri alınmalıdırial hücre tabakası damarın lümeninin karşı telin aşırı sürtünmesi ile temizlenebilir. </li><li> Bir tel alın ve bir ucunda küçük bir 90 ° açı yapacak ve kılavuz tel çapa silastik temele açılı ucunu itin. Diseksiyon çanak bütün aort yerleştirin. </li><li> Forseps ile kılavuz telin ucunu tutun ve yavaşça aort lümenine tel iplik. </li><li> Forseps kullanın ve tel üzerine aorta kaydırın. Kılavuz telin serbest ucu görünür, eğri hafifçe tel ve doku stabilize etmek için çanak silastik temele serbest ucunu yerleştirin. </li><li> Aorta beyaz ve biraz lifli görünene kadar küçük vannas makas ve forseps kullanarak, vb perivasküler adipoz doku ve diğer tüm yabancı doku, kan pıhtıları, kaldırın. </li><li> Tel temizlenmiş aort çıkarın ve genişliği yaklaşık 3-5 mm halkalarda aorta kesmek için makas kullanın. </li><li> Ti bir çiftinin bir üyesi üzerinde bir aort halkası yerleştirinkanca tutup hafifçe kanca üzerine halka slayt forseps kullanarak ssue kanca. İkinci kanca ile bu işlemi tekrarlayın. Arapsaçı yok kanca sağlamak için özen; Şekil 3&#39;e bakınız. </li><li> Her kanca takılı farklı bir ipek sütür olduğunu kontrol edin. Öte yandan bağladılar kuvvet dönüştürücü olacak bir 10-4 cm uzunluğunda bir parça dikiş iken bir kanca, bir cam veya paslanmaz çelik çubuk bağlantı için izin veren ipek küçük düğümlü döngü olduğunu kontrol edin; Şekil 3&#39;e bakınız. Not: aort kanca tespit edildikten sonra, doku, doku banyosu içine monte edilmek üzere hazır olduğu; Şekil 3&#39;e bakınız. </li><li> Tekrar ikinci doku banyo odasında ikinci bir aort halka monte etmek, 2,14-2,15 adımları. </li></ol> Bath 3. Doku Sıralama <ol><li> Bu sistemde, doku banyoları kendilerini sabit olduğuna dikkat edin. Şu anda, sıcaklık gelmek için çözüm ısındı, gazlı PSS ile doku banyoları doldurun ve izinör. </li><li> Ipek sütür ile, paslanmaz çelik çubuk üzerinde peg doku hazırlama kanca birini kravat. Doku banyosu odasına Bu amaca yerleştirin. Bir halka standı çubuğu bağlayın ve tampon dalmış doku tutmak için PSS ile dolu boyama çanak diğer ucunu yerleştirin; Şekil 3&#39;e bakınız. <ol><li> Doku banyo odasında çubuk ve doku yerleştirin ve doku tamamen PSS batırılır ve çubuk güvenli olduğundan emin olun; Şekil 3&#39;e bakınız. </li><li> Kuvvet dönüştürücü diğer sütür kravat ve doku ve kuvvet dönüştürücü arasındaki dikiş gevşekliği terk emin olun. NOT: Bu gevşek mikrometre ayarlayarak tarafından silinecektir; Şekil 3&#39;e bakınız. </li></ol></li><li> İkinci aort halka ve doku banyo odasının için bu adımları tekrarlayın. </li></ol> 4. Pasif Gerginlik Ayarı NOT: Her doku düz kas hücrelerinin optima cevap hangi bir uzunluğa (Lo) sahiptirLly. Ön deneyler, her bir doku tipi için yapılması gereken bu uzunluk incelenecek elde uygun germe gerilimini belirlemek için. sıçan aort 4 g optimal pasif germe gerilimi vardır. <ol><li> 2 g gerilimi artırmak ve platoya ulaşması dokuya beklemek mikrometre / kremayer kullanın. Plato ulaşıldığında, tansiyonu başka 2 gr artırmak ve yayla dokusu bekleyin. Not 2 g başlangıç ​​gerilimi ayarlamak ve platoya ulaşıldıktan sonra aort halkalarında, Doku daha sonra ~ 1.6 g dinlenmek. 2 g ikinci bir uygulama ~ doku tekrar dinlenmek ve gerginlik azalacaktır hangi 3.6 g, doku getirecek. Bu durumda, toplam gerilim, 4 g sonra, program bir gerilim yaklaşık 3.2 g göstermelidir. </li><li> İkinci aort halka ve doku banyo odasının için bu adımları tekrarlayın. </li></ol> 5. Dengeleme ve İlaç Yapımı <ol><li> Için doku dengelenmesiDokuya pasif gerilim uygulandıktan sonra 60 dak. </li><li> Denge aşamasında, dokuya her 15-20 dakikada yıkayın. Dokular banyo boşaltın ve ısıtılmış hazneden PSS ile PSS&#39;in değiştirin. NOT: Bu süre boyunca, doku pasif bir gerilim kaybı ile gösterilmiş olduğu, gevşetir. </li><li> Bu süre boyunca, yani ilaç içerisinde çok küçük hacimli, istenen konsantrasyon elde etmek için gerekli olan, bir banyo gerçek konsantrasyonda en az 1000 kat daha fazla konsantre olması için gereken deney için olan ilaçların hazırlanması. </li></ol> 6. İlk Mücadelesi <ol><li> Dengeleme dönemi sonunda, dokuya son bir kez yıkayın verileri kaydetmek, ve tüm girdileri sıfır yeniden. </li><li> Doku yanıt hangi (aktif kasılmalara neden olur bileşik) bir agonisti seçin. NOT: sıçan torasik aorta ise, arteriyel düz kas aktif nedeniyle innervasyonunun bir alfa adrenerjik reseptör agonist küçüleceğiniSempatik sinir sistemi tarafından dokusudur. Bir adrenerjik agonisti adrenerjik agonistler gevşemesine neden olduğu göz önüne alındığında bağırsak dokularında faydalı olmaz. Bu durumda böyle bir asetilkolin (kolinerjik reseptörü) gibi bir alıcı agonisti kullanılabilir. Fenilefrin ve asetilkolin bir alternatif örneğin ilk sorun, yüksek potasyum (K) olmayan bir reseptör agonisti kullanmaktır. Düz kasta, yüksek K dolaylı açık kalsiyum kanallarını çalışır ve böylece düz kas bütünlüğünün genel endeksi olarak görülüyor. <ol><li> Doku banyosuna 10 -5 M fenilefrin ekleyerek ilk meydan veya uyandırma meydan gerçekleştirin. 50 ml doku banyosuna bu yoğunluğa ulaşabilmek 10 -2 M fenilefrin çözeltisi 50 ul ekleyin. Not: PSS 50 ml 50 ul nihai konsantrasyon değerden 1,000x az olacak şekilde, bir 1 / 1,000 seyreltme ya da 10 -5, M. Doku banyosu c içinde hacim ve hacim tutarlı bakım Bilgihamber nihai ilaç konsantrasyonunun saptanması için çok önemlidir. </li></ol></li><li> Veri eğimi sıfır olduğunda, doku banyosuna 10 -5 M fenilefrin ekleyin ve tepe ve ardından yayla daralma izin. Sonrası deneysel analiz yardımcı olmak için her deney olayı kaydetmek için emin olun. </li><li> Plato sonra, boşaltma ve yeni PSS ile doku banyo odasını dolumu ile iyice agonist yıkayın. Hem de bu olayları kaydetmek için emin olun. NOT: Dikkat etmeniz gereken bir kural banyosunda agonist konsantrasyonu her yıkama ile 10 kat azalır olmasıdır. Fazla 3-4 yıkar gerekebilir rağmen geri aşağı denge temel tonu (gerilim) için doku getirmek. </li><li> Devam etmeden önce ~ 10 dakika için temel sesi doku dinlensin. </li></ol> 7. Deney NOT: Prazosin, bir alfa adrenerjik reseptör antagonisti, konsantrasyon ve onaya kaydırmaya doku banyo odasına tanıtılacakonse eğrisi fenilefrin (PE) için; Bu bir ispat husumet olduğunu. <ol><li> Bir banyo için araç eklemek (H2O) &#39;in prazosin çözülmüştür. Başka, prazosin uygun konsantrasyonunu ekleyin. Bu durumda, bir 5 x 10 -9 M veya banyoda 5 nM bir konsantrasyon elde etmek için, diğer bir banyo aracın 25 ul ve prazosin 10 -5 M konsantrasyonda 25 ul ekle. NOT: Aracın eklenmesi bu örnekte gereksiz gibi görünse de, vazoaktif olmak için potansiyeli (örneğin, DMSO, etanol, asetat) sahip diğer araçlar kullanırken, bunu yapmak zorunludur. Bu vazoaktif olmak için çok az kanıt varsa bile gelen araç ekleyin. </li><li> Hamam araç / prazosini bırakın ve 1 saat doku yıkama yok. <ol><li> Dokular dengeye iken, agonist (PE) çok sayıda konsantrasyonları hazırlamak. Örneğin, &lt;yanıt ortaya çıkaran konsantrasyon (konsantrasyona, geniş bir yelpazede yer alır/ Maksimal yanıt (aşmak konsantrasyonlarda em&gt; 10 -9 M PE), örneğin, 10 -4 M PE). Konsantrasyon-cevap eğrileri, 10 -1 M stok çözeltisinden PE altı ayrı stok çözeltileri (10 -6 -10 -1 M) seri seyreltileri yapmak doğada logaritmik olduğundan. Her bir konsantrasyon için gerekli hacmi tüm banyo (yani&gt; 300 ul) için gerekli üç toplam hacim biraz daha büyük olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> Tablo 1 &#39;de tarif edildiği gibi, agonist ilave devam edin. Not: Bu deney PE kümülatif konsantrasyon yanıt eğrisi oluşturur; Her yineleme dikkate zaten banyoya ilave madde miktarını alır. Artık daralma artırmak kadar ilaveler meydana veya tüm eğri plato etti. <ol><li> Doku eşik ulaşılana kadar tek tek her ilaç konsantrasyonu ekleyin. </li><li> Hiçbir değişiklik meydana gelirse, bir sonraki konsantrasyon eklemekserisi; Tablo 2&#39;ye bakınız. NOT: Bu eklemeler zamanlaması kullanılan agonist bağlıdır. Örneğin, norepinefrin ve fenilefrin daralma hızla gelişir ve birkaç dakika içinde plato gerekir. Buna karşılık, endotelin-1 daralma yavaş gelişir ve yakınında 45 dakika boyunca plato olmayabilir. Diğer deneyler sürece, bu gibi bir eğrinin inşaatından sonra doku üzerinde yapılabilir gibi (1) madde yıkar dışarı; ve (2) doku, normal kasılma davranışı döner ve önceki uyarılara etkilenmez olmadığını ortaya konabilir. </li></ol></li></ol> 8. Veri Analizi <ol><li> Önce ve bir müdahaleden sonra hemen verileri kaydetmek emin olun (örneğin, uyandırma veya tam eğri). </li><li> Bul ve veri analizine yardımcı olacak her doku banyo odası / giriş kanalı, doku taban ayarlamak. </li><li> Taban ayarlandıktan sonra, her bir konsantrasyon için maksimum yanıtını bulmak ve chan kayıtbaşlangıca ge. Sırayla konsantrasyonlarının her gezinmek ve temel vardiya kaydedin. </li><li> Elde edilen verilerin grafik. Herhangi bir grafik programında yapın. NOT: Graph Pad Prizma farmakolog için tasarlanmış, ve bu burada sunulan deney türü için idealdir. </li></ol>

<ol>
	<li>Kenakin, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+classification+of+drugs+and+drug+receptors+in+isolated+tissues.">The classification of drugs and drug receptors in isolated tissues.</a> Pharmacol. Rev. 36, 165-222 (1984).</li><li>Scheindlin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+history+of+modern+pharmacology.">A brief history of modern pharmacology.</a> Modern Drug Discovery. 4, 87-88 (2001).</li><li>Christopoulos, A., El-Fakahany, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualitative+and+quantitative+assessment+of+relative+agonist+efficacy.">Qualitative and quantitative assessment of relative agonist efficacy.</a> Biochem. Pharmacol. 58, 735-748 (1999).</li><li>Arunlakshana, O., Schild, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+quantitative+uses+of+drug+antagonists.">Some quantitative uses of drug antagonists.</a> Br. J. Pharmacol. Chemother. 14, 48-58 (1959).</li><li>Christopoulos, A., Kenakin, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=protein-coupled+receptor+allosterism+and+complexing.">protein-coupled receptor allosterism and complexing.</a> Pharmacol. Rev. 54, 323-374 (2002).</li><li>Braverman, A. S., Kohn, I. J., Luthin, G. R., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prejunctional+M1+facilitory+and+M2+inhibitory+muscarinic+receptors+mediate+rat+bladder+contractility.">Prejunctional M1 facilitory and M2 inhibitory muscarinic receptors mediate rat bladder contractility.</a> Am. J. Physiol. 274, R517-523 (1998).</li><li>Singh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulins+from+scleroderma+patients+inhibit+the+muscarinic+receptor+activation+in+internal+anal+sphincter+smooth+muscle+cells.">Immunoglobulins from scleroderma patients inhibit the muscarinic receptor activation in internal anal sphincter smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 297, G1206-1213 (2009).</li><li>Goadsby, P. J., Adner, M., Edvinsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+endothelin+receptors+in+the+cerebral+vasculature+and+their+lack+of+effect+on+spreading+depression.">Characterization of endothelin receptors in the cerebral vasculature and their lack of effect on spreading depression.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 16, 698-704 (1996).</li><li>Colquhoun, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agonist-activated+ion+channels.">Agonist-activated ion channels.</a> Br. J. Pharmacol. 147, S17-26 (2006).</li><li>Wyllie, D. J., Chen, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+the+time+to+study+competitive+antagonism.">Taking the time to study competitive antagonism.</a> Br. J. Pharmacol. 150, 541-551 (2007).</li><li>Schild, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pA,+a+new+scale+for+the+measurement+of+drug+antagonism.+1947.">pA, a new scale for the measurement of drug antagonism. 1947.</a> Br. J. Pharmacol. 120 (4), 29-46 (1997).</li><li>Oshita, M., Kigoshi, S., Muramatsu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+two+distinct+alpha+1-adrenoceptor+subtypes+in+rabbit+thoracic+aorta.">Pharmacological characterization of two distinct alpha 1-adrenoceptor subtypes in rabbit thoracic aorta.</a> Br. J. Pharmacol. 108, 1071-1076 (1993).</li><li>Hiraoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+and+functional+characterization+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+the+rat+prostate.">Binding and functional characterization of alpha1-adrenoceptor subtypes in the rat prostate.</a> Eur. J. Pharmacol. 366, 119-126 (1999).</li><li>Cooke, P. H., Fay, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+fiber+length,+ultrastructure,+and+the+length-tension+relationship+of+mammalian+smooth+muscle.">Correlation between fiber length, ultrastructure, and the length-tension relationship of mammalian smooth muscle.</a> J. Cell Biol. 52, 105-116 (1972).</li><li>Davis, M. J., Gore, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Length-tension+relationship+of+vascular+smooth+muscle+in+single+arterioles.">Length-tension relationship of vascular smooth muscle in single arterioles.</a> Am. J. Physiol. 256, H630-H640 (1989).</li><li>Davis, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-month+serotonin+infusion+results+in+a+prolonged+fall+in+blood+pressure+in+the+deoxycorticosterone+acetate+(DOCA)+salt+hypertensive+rat.">One-month serotonin infusion results in a prolonged fall in blood pressure in the deoxycorticosterone acetate (DOCA) salt hypertensive rat.</a> ACS Chem. Neurosci. 4, 141-148 (2013).</li><li>Heppner, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve-evoked+purinergic+signalling+suppresses+action+potentials,+Ca2++flashes+and+contractility+evoked+by+muscarinic+receptor+activation+in+mouse+urinary+bladder+smooth+muscle.">Nerve-evoked purinergic signalling suppresses action potentials, Ca2+ flashes and contractility evoked by muscarinic receptor activation in mouse urinary bladder smooth muscle.</a> J. Physiol. 587, 5275-5288 (2009).</li><li>Burdyga, T. V., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+mechanisms+whereby+temperature+affects+excitation-contraction+coupling+in+smooth+muscle.">On the mechanisms whereby temperature affects excitation-contraction coupling in smooth muscle.</a> J. Gen. Physiol. 119, 93-104 (2002).</li><li>Hyvelin, J. M., O'Connor, C., McLoughlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+changes+in+pH+on+wall+tension+in+isolated+rat+pulmonary+artery:+role+of+the+RhoA/Rho-kinase+pathway.">Effect of changes in pH on wall tension in isolated rat pulmonary artery: role of the RhoA/Rho-kinase pathway.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 287, L673-L684 (2004).</li><li>Tykocki, N. R., Thompson, J. M., Jackson, W. F., Watts, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ryanodine+receptors+are+uncoupled+from+contraction+in+rat+vena+cava.">Ryanodine receptors are uncoupled from contraction in rat vena cava.</a> Cell Calcium. 53, 112-119 (2013).</li></ol>

Authors have nothing to disclose.

Bir araştırma aracı olarak izometrik kuvvet ölçümü 150 yaşında, ama kasılma dokularda 2 reseptör karakterizasyonu için prototip tekniği olmaya devam ediyor. Bu tekniğin güç basitliği ve çok yönlülük olup: bir antagonistin varlığında veya yokluğunda, bir agonist arasında artan konsantrasyonları ile tetiklenen tepkileri kaydederek bir bilgi sayısız her ilacın farmakolojik özellikleri ve reseptör ile ilgili elde edilebildiği o 3-5 bağlar. Bu tür deneyler ayrıca, kullanılan antagonistler rekabetçi olmayan doğaya karşı rekabet ilgili bilgilerin yanı sıra reseptör heterojenliği ve spesifik olmayan ilaç etkileri 6-8 toplamak. Bu nedenle, bu izole edilmiş bir organ banyosu deney basit permütasyon ile, agonist kaynaklı kas büzülmesine neden reseptörlerinin nispeten tam farmakolojik profili elde edilebilir. Agonizmi açısından, inciBelirli bir doku, bir agonist e nispi etkinlik (Emax) ve güçte (EC50), aynı doku 1 diğer agonistlerin yanıtlarına göre hesaplanır ve edilebilir. Bizim deneyde, sıçan aort araç ya da önceden daralma doku banyosuna α 1 adrenerjik agonisti fenilefrin ilave edilmesi ve üretilmesi için bir saat α 1 adrenerjik reseptör antagonisti, prazosin (5 nM) ya da birlikte inkübe edildi. Modifiye sonuçları 2 sunar Şekil Yeşil tepkiler max olarak işaretlenmiş PE tarafından elde edilen maksimum kasılma ile işaretlenmiş Şekil 1., ½ maksimum kasılma gibi işaretlenir ve daha sonra cevap olduğunu neden olduğu PE konsantrasyonu ile ilişkili. Bu değerler belirlenmesi yarım maksimum (% 50) tepki ya da EC50 değeri elde eden bir agonistinin etkili konsantrasyonu tespitidir. Ne yazık ki, agonist bağımlı parametre kullanılarakreseptör bağlanma özellikleri 9 karmaşık olabilir belirlemek için tek başına s. Sabit antagonisti ayrışma (pKa B) log 10 mol antagonist -log 10: İdeal olarak, reseptör antagonistleri kullanarak ek deneyler, bir ilacın ve bir reseptörü arasındaki etkileşimin tanımlanması için önemli olan iki önemli parametrelerin hesaplanmasına imkan gerekli konsantrasyonu, konsantrasyon-yanıt eğrisinde iki kat sağa doğru bir kaymaya (pA2) 10 çıkarmak için. K B ve pA 2 kazanç onlar agonist-bağımsız değerlerdir ve hatta farklı dokular 11 arasında sabit kalması aslında onların kullanışlılığı Hem. Başka hesaplanmaktadır 50 değerleri Şekil 2 &#39;de verilerden pKa B, aşağıdaki denklem kullanılarak hesaplanabilir ve EC&#39;ye göre: = 2 x 10 8 M prazosin yokluğunda EC50 Öncesi AK 50prazosin sence = 7 x 10 -6 M Aşağıdaki denklemde K B çözün: log (dr-1) = [B] log - K B log Nerede: [B] antagonisti konsantrasyonunu = veya 5 x 10 -9 M log (5 x 10 -9 M) = -8.3 dr = yokluğunda antagonist / EC 50 varlığında AT 50 değer doz oranı. Sağa doğru bir kayma ise, bu değer, birden daha fazla olacaktır. Böylece: dr = 7 x 10 -6 M / 2 x 10 -8 M veya 700 x 10 -8 M / 2 x 10 -8 M = 700/2 = 350 [B] ve dr için yerine: K B log - = -8 (350-1) log 2.54 = -8 - KB log pKa B = 10.54 Prazosinin bir α 1 adrenerjik recept ile etkileşime girdiğinde prazosin Bu değer, elde değerlerle tutarlıfenilefrinle daralma aracılık adrenerjik reseptör α 1 adrenerjik reseptör olduğunu düşündüren ya da 12,13,. Birkaç adım bu deneylerin başarısı için kritik öneme sahiptir. Dokular, doku yaşabilirliği kaybını önlemek için ayrıldıktan sonra, PSS kalmalıdır. Herhangi bir izometrik kas hazırlık pasif gerginlik 14,15 karşı maksimum güç üretir optimal uzunluk-gerilim ilişkisi vardır. Bu protokolde tarif edilen deneme için, en iyi pasif gerilim önceden dokuya pasif gerilim 0.5 g kısa bir süre ilave artışlarla saptanmıştır. Doku tonu olmadan başlamalı ve dengeleme için 30 dakika sonra, doku aktif sesi üretilir KCI (80 mM) bir maksimum konsantrasyonu ile meydan. Daha sonra, doku yıkandı ve bazal tonu geri bırakıldı. Başlangıçta 15 dakika sonra pasif geriliminin bir diğer 0.5 gr yerleştirilmiş ve bu işlem, bir plato kadar tekrarlanırAktif gerginlik ek pasif gerilim ile elde edilmiştir. Hazırlık deneylerinde, pasif gerginlik 4 g aort halkalarında maksimal etkin gerilim yaratma amaçlı belirlendi ve böylece gerilim bu toplam miktarı önce dengeleme için çalma üzerine yerleştirilir. Prosedürel, önceden pasif germe uygulaması sıfıra en iyi, ama deney öncesinde herhangi bir zamanda yapılabilir. Deney ya da diseksiyon herhangi bir noktada, dokuları germe Aşırı olumsuz doku canlılığını ve deneysel sonuçlar etkileyecektir. Bu adım, aşırı streç en yüksek olasılığı olduğu gibi, banyoda dokuları yerleştirirken Bu en zorunludur. Sayısı ve süresi yeterli yıkama, yeniden üretilebilir etkileri için gereklidir. İkinci zorluk çok yakında dokular başlangıç ​​gerilim döndü ilk mücadeleden sonra, ya da önce, anormal tepkiler neden olacaktır. Döner antagonistleri / inhibitörleri araştırıldığında ise, dokular inhibi olarak, ilave Agonisti önce yıkanmamalıdırtor konsantrasyonu azalacaktır. Izole organ banyosu deneyleri için önemli avantaj ve dezavantajları vardır. Dezavantajları: Dokular kanca halkaları cerrahi olarak çıkarılması veya yerleştirilmesi sırasında hasar farklı derecelerde karşılaşabilirsiniz. Endotel hücre aort halkasının iç astar olduğu bu hücre tabakasına zarar vermemek için, bakım kanca halka yerleşiminde alınmalıdır. Dokular ayrıca, doku banyosu içindeki uygun olduğu zaman belirgin bir biçimde farklı uzunluklara sahip olabilir, ve bu tespit eder; tüm dokular aynıdır. Bu doğrultuda, dokular zaman kontrolleri, her deney için gerekli kontrol olmak gibi o gün boyunca yanıt değişebilir. Bu iyi bir örnek tipik bir 8 saat deney sırasında% 100 kontraktilite maksimum geliştirir kobay trakea olduğunu. Suda zayıf ölçüde çözünür olan ilaçlar PSS çökelebilir. Son olarak, toplu birnd agonist reseptör duyarsızlaştırma oluşursa bir agonist, farklı sonuçlara neden olabilir olan bir ilacın kümülatif olmayan ilaveler; anjiotensin II hızlı Taşiflaksi gösterir böyle bir ilaçtır. Avantajları: Doku banyo deneylerinin temel avantajlarından biri gerçek zamanlı olmasıdır; o yaşanıyor ve hızla sonuç yapmak ve bir deney sırasında sonraki adımlar, yanı sıra gidermenize planı gibi bir deney görebilirsiniz. Bir deney yapmak için bir gün sürer. Multipl dokular tipik haliyle, bir hayvan, kendi kontrolü olarak görev yapabilir, öyle ki, bir hayvandan elde edilebilir ve bu, bir deney gücü ekler. Ilacın doku nispeten saf karşılığının test edilmesi için, böylece bir diğer faktörlere doku izole edilebilir. Bu tür bir doku banyosu sistemi in vitro deneyler, aynı zamanda bir in vivo deney göre ilacın küçük bir miktarının kullanılmasını sağlar. Burada tarif edilen temel deneysel tasarım olabiliryaygın olarak ilave parametrelerin kaydedilmesi ya da diğer dış uyaranların giriş sağlamak için değiştirilebilir. Örneğin, elektrot eklenmesi innerve sinir 16,17 elektrik alan uyarımı için izin verir. Termal veya pH sondaları eklenmesiyle, kasılmaları üzerindeki sıcaklık ve pH etkileri de 18,19 ölçülebilir. Benzer bir şekilde, oksijen, kısmen veya hipoksi nedenli etkilerini değerlendirmek için N2 ile tam olarak sübstitüe edilmiş olabilir. Bundan başka, bu video kullanılan izometrik kontraktilite ölçüm aynı temel prensiplerin hücre içi kalsiyum 20 izometrik gerilim gelişim ve değişikliklerin eşlik eden ölçümüne olanak sistemleri geliştirmek için de kullanılabilir. Sistemleri, bu hızla yanıt sırasında bir doku örneği dondurarak bulunduğu için sinyal transdüksiyonu, hali hazırda, incelenen, bir sinyal iletim yolu sisteminin aktivitesi biyokimyasal kontrol edilebilir, öyle ki. eşdeğeri varyasyonBunu yapmak için de kullanılabilir ipment çok büyüktür. Bütün bu sistem, inşa veya otomatik iki el, birden fazla farklı şirketlerden satın alınabilir. Bu protokolde kullanılan doku banyoları ve doku sahipleri in-house Michigan State Üniversitesi Makine mağazaları tarafından el üfleme (doku banyoları) ve el inşa (sahipleri) idi.

farmakoloji disiplini, 150 yılı aşkın bir süredir izole organ banyosu sistemi kullandı. Bu sistemin çok yönlülüğü hipertansiyon, kalp yetmezliği, diyabet, gastrointestinal hastalık, mesane gibi hastalıklar ya da bozuklukları olan bireylerin milyonlarca tedavi etmiş tedavilerin temelini oluşturan bu bilgi ile, reseptörleri ve reseptör sinyal iletimini karakterize dünya çapında bilim adamları izin verdi disfonksiyon, astım ve yutma bozuklukları, sadece birkaç isim. Doku, bir doku olarak işlev sağlar gibi bu gün için, izole organ banyosu, ilaç geliştirme ve temel araştırma önemli bir yüzünü kalır. Bu vallahi derste, resmi protokol reseptör karakterizasyonu izin izometrik daralma ölçen bir izole organ banyosu deney, veri kullanan bir görsel ve sanal deney göstermek için paylaşılır. Bu tekniğin en önemli avantajı, doku yaşayan olmasıdırvücuda alakalı bir fizyolojik sonuç (kasılma veya gevşeme) ile bir bütün dokusu gibi nd fonksiyonlar. Bu adımlar (ilaç-reseptör etkileşimi, sinyal iletimi, ikinci haberci nesil, düz kas uyarılabilirliğindeki değişim ve doku fonksiyonunda değişiklik) bir sentezidir. Diğer teknikler bu adımların her birinin çalışma (örneğin radyo-ilaç afinite, ikinci haberciler ölçümü için bağlayıcı) izin verirken, izole organ banyosu tekniği tüm bu adımların 1 entegrasyonu sağlar. Diğer bir avantajı doku işlevini koruyarak hücresel ortamda vs dokuda daha anlamlı olan önemli farmakolojik değişkenlerin hesaplanmasına imkan olduğunu; incelenen ilaçların bir bütün olarak vücutta nasıl çalışacağını yakın geliyor.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="863">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:203px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LabChart Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td></td>
			<td>7.2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PowerLab (4 channel)&#160;</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuadBridge (4 channel)</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML112</td>
			<td>ML112</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Grass Adapter Cable</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>MLAC11</td>
			<td>MLAC11</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Grass Force-Displacement Transducer</td>
			<td>Grass Instrument Co</td>
			<td>FT03</td>
			<td>FT03</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Grass Transducer Cable</td>
			<td>Grass Instrument Co</td>
			<td>TAC-7 REV-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BNC to BNC Cable</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>MLAC01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IsoTemp 2100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>IC-2100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Bath</td>
			<td>Multiple Sources&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physiological Salt Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>PSS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Braided Silk Suture</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>51-7615</td>
			<td>SP104</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ring Stand</td>
			<td>Humboldt MFG Co</td>
			<td>H-2122 7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Dishes</td>
			<td>Handmade with Silicone</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tygon Tubing</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>63010-100</td>
			<td>R-3603</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hose Clamps</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co</td>
			<td>06832-08</td>
			<td>SNP-8</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50ml Muscle Bath</td>
			<td>Eberhartglass Blowing</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250ml Warming Chambers</td>
			<td>Eberhartglass Blowing</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gas Dispersion Tube</td>
			<td>Ace Glass</td>
			<td>7202-06</td>
			<td>7202-02</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micrometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Custom Stands</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Three-Prong Clamps</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td>Talon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">S-Connector</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td>Talon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Hooks</td>
			<td>Hand Made in House</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Stereomicroscope MZ6</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>10447254</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Source</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12562-36</td>
			<td>12562-36</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Culture Petri Dish</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td></td>
			<td>7740 Glass</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard Silicone Elastomer</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td></td>
			<td>Sylgard 170 Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas Scissors</td>
			<td>George Tiemann &#38; Co</td>
			<td>160-150</td>
			<td>160-150</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Splinter &#38; Fixation Forceps</td>
			<td>George Tiemann &#38; Co</td>
			<td>160-55</td>
			<td>160-55</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of smooth muscle function in the isolated tissue bath-applications to pharmacology research

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues. While this technique has been implemented for over 100 years, the versatility, simplicity and reproducibility of this assay helps it to remain an indispensable tool for pharmacologists and physiologists alike. Tissue bath systems are available in a wide array of shapes and sizes, allowing a scientist to evaluate samples as small as murine mesenteric arteries and as large as porcine ileum &#8211; if not larger. Central to the isolated tissue bath assay is the ability to measure concentration-dependent changes to isometric contraction, and how the efficacy and potency of contractile agonists can be manipulated by increasing concentrations of antagonists or inhibitors. Even though the general principles remain relatively similar, recent technological advances allow even more versatility to the tissue bath assay by incorporating computer-based data recording and analysis software. This video will demonstrate the function of the isolated tissue bath to measure the isometric contraction of an isolated smooth muscle (in this case rat thoracic aorta rings), and share the types of knowledge that can be created with this technique. Included are detailed descriptions of aortic tissue dissection and preparation, placement of aortic rings in the tissue bath and proper tissue equilibration prior to experimentation, tests of tissue viability, experimental design and implementation, and data quantitation. Aorta will be connected to isometric force transducers, the data from which will be captured using a commercially available analog-to-digital converter and bridge amplifier specifically designed for use in these experiments. The accompanying software to this system will be used to visualize the experiment and analyze captured data.

Agonizmi açısından, belirli bir dokuda bir agonist nispi etkinliği (Emax) ve güçte (EC50) hesaplanır ve aynı dokuda 1 diğer agonistlerin yanıtlarıyla karşılaştırıldığında edilebilir. Bizim deneyde, sıçan aort araç ya da önce (Şekil 1) ya da doku banyosuna α 1 adrenerjik agonisti fenilefrin ilave edilmesi ve daralma üretilmesi için bir saat boyunca α 1 adrenerjik reseptör antagonisti, prazosin (5 nM) ya da birlikte inkübe edildi. Şekil 2, Şekil 1 hediye sonuçları değiştirilmiş. Yeşil tepkiler PE tarafından elde edilen maksimum kasılma yanıtı olduğunu neden olduğu max, ½ maksimum kasılma gibi işaretlenir ve daha sonra PE konsantrasyonu ile ilişkili olarak işaretlenmiş işaretlediğiniz. Bu değerler belirlenmesi yarım maksimum (% 50) tepki ya da EC elde eden bir agonistinin etkili konsantrasyonu belirlenmesi olan <sub&gt; 50 değer. Bu Sigmoidal eğriler için lojistik fonksiyonları AK 50 değerlerinin eğri uydurma ve hesaplama için kullanılabilir kullanan bu example.Computer yazılım donegraphically oldu. Oluşturma ve bu sonuçlara, bu konsantrasyon-tepki eğrisi oluşturmak üzere agonist hem düşük hem de yüksek konsantrasyonlarda kullanılması önemlidir. Yeterli puan istikrarlı bir temel ve maksimum plato göstermek için olmadan, AK 50 ve E MAX sadece tahmin edilebilir. Bu, bu örnekteki grafik yapıldı. Sigmoidal eğriler için lojistik işlevleri kullanır Bilgisayar yazılımı EC 50 değerleri eğri uydurma ve hesaplama için kullanılabilir. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52324/52324fig1highres.jpg" /> Şekil 1:. Doku Banyosu şematik Karikatür çift duvara yerleştirilen bir doku halka temsil, su ceketli doku bainci. Tampon giriş ve çıkış odasının tabanına entegre bir 3-yollu vana cam tarafından düzenlenir. O2 / CO2 PSS ya da gaz sızmasını önlemek için bir conta ile sızdırmaz bir havalandırıcı yoluyla köpürtülür. Devridaim girişi uygun devridaim korumak ve sıcaklık düzensizliğinin neden olur hava cepleri oluşumunu önlemek için çıkış altındadır. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52324/52324fig2highres.jpg" /> Şekil 2:. Sıçan Göğüs Aort + Endotel Yukarıdaki dört ayrı deneyler (farklı hayvan ve farklı renklerle temsil edilen farklı set up farklı araştırmacılar tarafından yapılan) PE kaynaklı daralma kaydırmaya prazosin yeteneğini test etmek göstermektedir. Prazosin (5 nM) açık bir şekilde paralel bir şekilde PE kaynaklı kasılma eğrisi sağa doğru kaymıştır. Şekil 3: Sıçan Toraks Aort + Endotel Grafik yokluğu (araç) PE EC 50 değerlerinin tahmini ve antagonist varlığı (prazosin).. Yeşil hat (C grubu) sadece işaretlenmiş. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always"><tbody><tr><td> Tuz </td><td> MW (g / mol) </td><td> 5 Litre </td><td> SON mM </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> (Gram) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 58,45 </td><td> 37.99 </td><td> 130 </td></tr><tr><td> KCI </td><td> 74,56 </td><td> 1.75 </td><td> 4.7 </td></tr><tr><td> KH2PO4 </td><td> 136.1 </td><td> 0,8 </td><td> 1.18 </td></tr><tr><td> MgSO4• 7H20 </td><td> 246,5 </td><td> 1.45 </td><td> 1.17 </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> 84,21 </td><td> 6.25 </td><td> 14.9 </td></tr><tr><td> Üzüm şekeri </td><td> 180,16 </td><td> 5 </td><td> 5.5 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> 380 </td><td> 0.05 </td><td> 0.03 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: normal fizyolojik tuzlu çözelti (PSS) Tarif Bu deneyde kullanılan bikarbonat tamponlu PSS içeriği.. Bütün tuzlar molekül ağırlıkları ve istenen konsantrasyon elde etmek için dH 2 O 5 L &#39;sine ilave miktarda bulunuyor. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Banyosunda konsantre </td><td> Agonist eklenmesi banyosuna yapılan </td></tr><tr><td> 1 x 10 -9 M </td><td> 50 ml 1 x 10 -6 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -9 M </td><td> 100 mi, 1 x 10-6 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -8 M </td><td> 35 mi, 1 x 10 5 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 8 M </td><td> 100 mi, 1 x 10 -5 </td></tr><tr><td> 1 x 10 7 M </td><td> 35 mi, 1 x 10 4 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 7 M </td><td> 100 mi, 1 x 10 4 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -6 M </td><td> 35 mi, 1 x 10 3 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -6 M </td><td> 100 mi, 1 x 10 3 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 5 M </td><td> 35 mi, 1 x 10 -2 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 5 M </td><td> 100 ml 1 x 10 -2 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 4 M </td><td> 35 mi, 1 x 10 -1 M </td></tr></tbody></table> Tablo 2:., Doku banyosu katkı agonist konsantrasyonları agonistinin miktarı, ön maddeye, her banyo için eklenecekPerly kümülatif konsantrasyon-tepki eğrilerini oluşturmak. istenen banyo konsantrasyonu agonistinin artan konsantrasyonlarının ardışık miktarlarda ilave edilmesi sureti ile elde edilir. Her bir ek dikkate banyosu içinde zaten mevcut olan agonist konsantrasyon alır. Bu agonistin tek bir konsantrasyonda artan miktarlarda kullanmaktan sonuçlanacak olan, organ banyosunda hacmindeki artışı en aza indirmek için yapılır.

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research at JoVE.com

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

This protocol describes the measurement of isometric contraction in an isolated smooth muscle preparation, using an isolated tissue bath system and computer-based data acquisition.

Farmakoloji Araştırma İzole Doku Banyo-uygulamalarda Düz Kas Fonksiyon Ölçümü

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

measurement-smooth-muscle-function-isolated-tissue-bath-applications

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Biology

Unit 1

Drugs Acting on Autonomic Nervous System: Adrenergic Agonists and Antagonists Agents

SCIENTISTS IN ACTION

135.8K Görüntüleme.  Michigan State University. This protocol describes the measurement of isometric contraction in an isolated smooth muscle preparation, using an isolated tissue bath system and computer-based data acquisition. 

Video: Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ from internal stores, and allows multiple cells to be monitored simultaneously to assess, for example, coupling in syncytial tissue. Subcellular Ca2+ transients are common in smooth muscle, yet are difficult to measure accurately because of the problems caused by their stochastic occurrence, over an often wide field of view, in an organ that it prone to contract. To overcome this problem, we've developed a series of imaging protocols and analysis routines to acquire and then analyse, in an automated fashion, the frequency, location and amplitude of such events. While this approach may be applied in other contexts, our own work involves the detection of local purinergic Ca2+ transients for locating transmitter release with submicron resolution. 
ATP is released as a cotransmitter from autonomic nerves, where it binds to P2X1 receptors on the smooth muscle of the detrusor and vas deferens. Ca2+ enters the smooth muscle, resulting in purinergic neuroeffector Ca2+ transients (NCTs). The focal Ca2+ transients allow the optical monitoring of neurotransmitter release in a manner that has many advantages over electrophysiology. Apart from the greatly improved spatial resolution, optical recording has the additional advantage of allowing the recording of transmitter release from many distinguishable sites simultaneously. Furthermore, the optical plane of focus is easier to maintain or correct during long recording series than is the repositioning of an intracellular sharp microelectrode. 
In summary, a method for imaging of Ca2+ fluorescence is outlined which details the preparation of tissue, and the acquisition and analysis of data. We outline the use of several scripts for the analysis of such Ca2+ transients.

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Details methods for high-resolution Ca2+ imaging of smooth muscle within isolated organs, including: preparation of the tissue, image acquisition and data analysis.

Odak Ca 2 +</supDüz kas> Geçici Algılama

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

Biyoloji

The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation

Throughout the body, the maintenance of homeostasis requires the constant supply of oxygen and nutrients concomitant with removal of metabolic by-products. This balance is achieved by the movement of blood through the microcirculation, which encompasses the smallest branches of the vascular supply throughout all tissues and organs. Arterioles branch from arteries to form networks that control the distribution and magnitude of oxygenated blood flowing into the multitude of capillaries intimately associated with parenchymal cells. Capillaries provide a large surface area for diffusional exchange between tissue cells and the blood supply. Venules collect capillary effluent and converge as they return deoxygenated blood towards the heart. To observe these processes in real time requires an experimental approach for visualizing and manipulating the living microcirculation.
The cremaster muscle of rats was first used as a model for studying inflammation using histology and electron microscopy post mortem1,2. 
The first in vivo report of the exposed intact rat cremaster muscle investigated microvascular responses to vasoactive drugs using reflected light3. However 
curvature of the muscle and lack of focused illumination limited the usefulness of this preparation. The major breakthrough entailed opening the muscle, 
detaching it from the testicle and spreading it radially as a flat sheet for transillumination under a compound microscope4. While shown to be a valuable 
preparation to study the physiology of the microcirculation in rats5 and hamsters6, the cremaster muscle in mice7 has proven particularly useful in dissecting 
cellular pathways involved in regulating microvascular function8-11 and real-time imaging of intercellular signaling12. 
The cremaster muscle is derived from the internal oblique and transverse abdominus muscles as the testes descend through the inguinal canal13. 
It serves to support (Greek: cremaster = suspender) and maintain temperature of the testes. As described here, the cremaster muscle is prepared as a thin flat sheet 
for outstanding optical resolution. With the mouse maintained at a stable body temperature and plane of anesthesia, surgical preparation involves freeing the muscle 
from surrounding tissue and the testes, spreading it onto transparent pedestal of silastic rubber and securing the edges with insect pins while irrigating it 
continuously with physiological salt solution. The present protocol utilizes transgenic mice expressing GCaMP2 in arteriolar endothelial cells. GCaMP2 is a 
genetically encoded fluorescent calcium indicator molecule12. Widefield imaging and an intensified charge-coupled device camera enable in vivo study of 
calcium signaling in the arteriolar endothelium.

A tissue preparation is described for visualization and experimental manipulation of the living microcirculation. In anesthetized male mice, the thin, highly vascularized cremaster muscle is prepared for intravital microscopy to study microvascular networks including arterioles, capillaries and venules. This preparation is readily adapted for rats and hamsters.

Mikrosirkülasyon intravital Görüntüleme Fare Cremaster&#39;ın kas Hazırlık

Throughout the body, the maintenance of homeostasis requires the constant supply of oxygen and nutrients concomitant with removal of metabolic ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to replenish depleted endoplasmic reticulum (ER) or sarcoplasmic reticulum (SR) Ca2+ stores1,2. Since Ca2+ is a ubiquitous second messenger, it is not surprising to see that SOCE plays important roles in a variety of cellular processes, including proliferation, apoptosis, gene transcription and motility. Due to its wide occurrence in nearly all cell types, including epithelial cells and skeletal muscles, this pathway has received great interest3,4. However, the heterogeneity of SOCE characteristics in different cell types and the physiological function are still not clear5-7.
The functional channel properties of SOCE can be revealed by patch-clamp studies, whereas a large body of knowledge about this pathway has been gained by fluorescence-based intracellular Ca2+ measurements because of its convenience and feasibility for high-throughput screening. The objective of this report is to summarize a few fluorescence-based methods to measure the activation of SOCE in monolayer cells, suspended cells and muscle fibers5,8-10. The most commonly used of these fluorescence methods is to directly monitor the dynamics of intracellular Ca2+ using the ratio of F340nm and F380nm (510 nm for emission wavelength) of the ratiometric Ca2+ indicator Fura-2. To isolate the activity of unidirectional SOCE from intracellular Ca2+ release and Ca2+ extrusion, a Mn2+ quenching assay is frequently used. Mn2+ is known to be able to permeate into cells via SOCE while it is impervious to the surface membrane extrusion processes or to ER uptake by Ca2+ pumps due to its very high affinity with Fura-2. As a result, the quenching of Fura-2 fluorescence induced by the entry of extracellular Mn2+ into the cells represents a measurement of activity of SOCE9. Ratiometric measurement and the Mn+2 quenching assays can be performed on a cuvette-based spectrofluorometer in a cell population mode or in a microscope-based system to visualize single cells. The advantage of single cell measurements is that individual cells subjected to gene manipulations can be selected using GFP or RFP reporters, allowing studies in genetically modified or mutated cells. The spatiotemporal characteristics of SOCE in structurally specialized skeletal muscle can be achieved in skinned muscle fibers by simultaneously monitoring the fluorescence of two low affinity Ca2+ indicators targeted to specific compartments of the muscle fiber, such as Fluo-5N in the SR and Rhod-5N in the transverse tubules9,11,12.

The extent of store-operated Ca2+ entry (SOCE) can be monitored using fluorescent Ca2+ indicators. Mn2+ quenching of such indicators assays SOCE in cultured cells and skeletal muscle fibers. A technique allowing spatial and temporal resolution of SOCE by confocal imaging of mechanically skinned muscle fibers is also described.

Canlı hücreler Mağaza çalışan Kalsiyum Giriş Floresans tabanlı Ölçümü: Kültür Kanseri Hücre gelen İskelet Kası Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, fatigability, and recovery after fatigue can be obtained to assess specific aspects of the excitation-contraction coupling (ECC) process such as excitability, contractile machinery and Ca2+ handling ability. This method removes the nerve and blood supply and focuses on the isolated skeletal muscle itself. We routinely use this method to identify genetic components that alter the contractile property of skeletal muscle though modulating Ca2+ signaling pathways. Here, we describe a newly identified skeletal muscle phenotype, i.e., mechanic alternans, as an example of the various and rich information that can be obtained using the in vitro muscle contractility assay. Combination of this assay with single cell assays, genetic approaches and biochemistry assays can provide important insights into the mechanisms of ECC in skeletal muscle.

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

We describe a method to directly measure muscle force, muscle power, contractile kinetics and fatigability of isolated skeletal muscles in an in vitro system using field stimulation. Valuable information on Ca2+ handling properties and contractile machinery of the muscle can be obtained using different stimulating protocols.

İzole İskelet Kaslar Kasılma, çabuk yorulma ve Alternans Ex Vivo Değerlendirilmesi

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Contraction or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries determines the artery diameter and thereby controls flow of blood through the vessel and contributes to systemic blood pressure. The contraction process is regulated primarily by cytosolic calcium concentration ([Ca2+]cyt), which is in turn controlled by a variety of ion transporters and channels. Ion channels are common intermediates in signal transduction pathways activated by vasoactive hormones to effect vasoconstriction or vasodilation. And ion channels are often targeted by therapeutic agents either intentionally (e.g. calcium channel blockers used to induce vasodilation and lower blood pressure) or unintentionally (e.g. to induce unwanted cardiovascular side effects).
Kv7 (KCNQ) voltage-activated potassium channels have recently been implicated as important physiological and therapeutic targets for regulation of smooth muscle contraction. To elucidate the specific roles of Kv7 channels in both physiological signal transduction and in the actions of therapeutic agents, we need to study how their activity is modulated at the cellular level as well as evaluate their contribution in the context of the intact artery.
The rat mesenteric arteries provide a useful model system. The arteries can be easily dissected, cleaned of connective tissue, and used to prepare isolated arterial myocytes for patch clamp electrophysiology, or cannulated and pressurized for measurements of vasoconstrictor/vasodilator responses under relatively physiological conditions. Here we describe the methods used for both types of measurements and provide some examples of how the experimental design can be integrated to provide a clearer understanding of the roles of these ion channels in the regulation of vascular tone.

Measurements of Kv7 (KCNQ) potassium channel activity in isolated arterial myocytes (using patch clamp electrophysiological techniques) in parallel with measurements of constrictor/dilator responses (using pressure myography) can reveal important information about the roles of Kv7 channels in vascular smooth muscle physiology and pharmacology.

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional measures of muscle health. In this video article, we demonstrate a method to measure force generation during contraction of zebrafish larval trunk muscle. Force measurements are accomplished by placing an anesthetized larva into a chamber filled with a salt solution. The anterior end of the larva is tied to a force transducer and the posterior end of the larva is tied to a length controller. An isometric twitch contraction is elicited by electric field stimulation and the force response is recorded for analysis. Force generation during contraction provides a measure of overall muscle health and specifically provides a measure of muscle function. Although we describe this technique for use with wild-type larvae, this method can be used with genetically modified larvae or with larvae treated with drugs or toxicants, to characterize muscle disease models and evaluate treatments, or to study muscle development, injury, or chemical toxicity.

Force measurements can be used to demonstrate changes in muscle function due to development, injury, disease, treatment or chemical toxicity. In this video, we demonstrate a method to measure force during a maximal contraction of zebrafish larval trunk muscle.

Zebra balığı Larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında Kuvvet Ölçümü

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on changes in intracellular calcium ([Ca2+]i) and nitric oxide (NO). In order to understand how [Ca2+]i, NO and downstream molecules are handled by a blood vessel in response to vasoconstrictors and vasodilators, we developed a novel technique that applies calcium-labeling (or NO-labeling) dyes with two photon microscopy to measure calcium handling (or NO production) in isolated blood vessels. Described here is a detailed step-by-step procedure that demonstrates how to isolate an aorta from a rat, label calcium or NO within the endothelial or smooth muscle cells, and image calcium transients (or NO production) using a two photon microscope following physiological or pharmacological stimuli. The benefits of using the method are multi-fold: 1) it is possible to simultaneously measure calcium transients in both endothelial cells and smooth muscle cells in response to different stimuli; 2) it allows one to image endothelial cells and smooth muscle cells in their native setting; 3) this method is very sensitive to intracellular calcium or NO changes and generates high resolution images for precise measurements; and 4) described approach can be applied to the measurement of other molecules, such as reactive oxygen species. In summary, application of two photon laser emission microscopy to monitor calcium transients and NO production in the endothelial and smooth muscle cells of an isolated blood vessel has provided high quality quantitative data and promoted our understanding of the mechanisms regulating vascular function.

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Vascular cell functiondepends on activity of intracellular messengers. Described here is an ex vivo two photon imaging method that allows the measurement of intracellular calcium and nitric oxide levels in response to physiological and pharmacological stimuli in individual endothelial and smooth muscle cells of an isolated aorta.

Hücre içi Ca İki foton Görüntüleme<sup&gt; 2+</sup&gt; Bir İzole Sıçan Aort Kullanım ve Endotel Nitrik Oksit Üretimi ve düz kas hücreleri

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall health. A significant portion of intracellular Ca2+ content is found within the SR stores in VSMCs. As the only intracellular organelle with a close association to the surrounding extracellular space through plasma membrane-SR junctions, the SR can be considered to constitute the first line of response to any irregularity in Ca2+ transients, or stress experienced by the cell. Among its many functions, one of the most important is its role in the transmission of Ca2+-regulated signals throughout the cell to induce further cell-wide reactions downstream. The more common use of cytoplasmic Ca2+ indicators in this regard is overall insufficient for research into the highly dynamic changes to the intraluminal SR Ca2+ store that have yet to be fully characterized. Here, we provide a detailed protocol for the direct and clear measurement of luminal SR Ca2+. This tool is useful for investigation into the nuanced changes in SR Ca2+ that have significant subsequent effects on the normal function and health of the cell. Fluctuations in SR Ca2+ content specifically can provide us with a significant amount of information pertaining to cellular responses to disease or stress conditions experienced by the cell. In this method, a modified version of a SR-targeted Ca2+ indicator, D1SR, is used to detect Ca2+ fluctuations in response to the introduction of agents to cultured rat aortic smooth muscle cells (SMCs). Following incubation with the D1SR indicator, confocal fluorescence microscopy and fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based imaging are used to directly observe changes to intraluminal SR Ca2+ levels under control conditions and with the addition of agonist agents that function to induce intracellular Ca2+ movement.

Currently, most available calcium indicators are used to quantify cytoplasmic calcium transients as indirect measures of calcium released from the sarcoplasmic reticulum in cultured smooth muscle cells. This protocol describes the use of a specific FRET-based indicator that allows direct measurement of calcium signals within the sarcoplasmic reticulum lumen.

Kullanımı Kültür düz kas hücrelerinin sarkoplazmik retikulum içinde Kalsiyum Değişiminin Ölçülmesi FRET tabanlı Konfokal Görüntüleme

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs from the coronary circulation. Hearts with intact aortic arches were removed and perfused via retrograde Langendorff with digestion solution containing 300 Units/ml of collagenase type II, 0.1 mg/ml soybean trypsin inhibitor and 1 M CaCl2. The perfusates were collected at 15 min intervals for 90 min, pelleted by centrifugation, resuspended in plating media, and plated on tissue culture dishes. VSMCs were characterized by presence of SM22&#945;, &#945;-SMA, and vimentin. One of the main advantages of using this technique is the ability to isolate VSMCs from the coronary circulation of mice. Although the small number of cells obtained can limit some of the applications for which the cells can be utilized, isolated coronary VSMCs can be used in a variety of well-established cell culture techniques and assays. Studies investigating VSMCs from genetically modified mice can provide further information about structure-function and signaling processes associated with vascular pathologies.

The purpose of this protocol is to demonstrate the isolation and culture techniques of murine primary vascular smooth muscle cells (VSMCs) from the coronary circulation. Once VSMCs have been isolated, they can be used for many standard culture techniques.

Murin Koroner Damar düz kas hücrelerinin izolasyonu

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

Fare İzole perfüze Böbrek Tekniği

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...