The authors would like to thank the following funding sources NIH ES020353 and the Colgate-Palmolive Alternative Research Grant award for making this work possible.

Besleme Bakterilerin 1. Hazırlık NOT: Bu kısım besleme bakteri (E. coli OP50) hazırlanmasını anlatır. <ol><li> E. tek bir koloni yalıtmak aseptik olarak lizojeni suyu (LB) agar plakadan coli soy OP50 otoklave LB suyu 300 ml içine inoküle. </li><li> Doygunluğa ulaşıncaya kadar inoküle kültür, 200 rpm&#39;de ve 37 ° C&#39;de bir çalkalayıcı içinde gece boyunca büyümeye izin verin. </li><li> 6, steril, önceden tartılmış 50 ml konik tüp içine OP50 aktarın. 6000 rpm&#39;de (5000 x g) 5 dakika boyunca santrifüj ile bakteriler Pelet. </li><li> Süpernatantı atın ve steril M9 50 ml bakteri yıkayın. Iki kez tekrarlayın. </li><li> İkinci yıkamadan sonra hiçbir M9 tüp bırakılırsa sağlamak, kalan M9 kaldırın. </li><li> Bakteriler pellet içeren tüp tartılarak pelet ağırlığı belirlemek ve 50 ml konik tüp ağırlığı çıkarılır. </li><li> Pelet i yeniden süspansen, M9, 100 mg / ml &#39;lik bir konsantrasyonda ilave edilebilir. </li><li> Solucan kültürü için kullanılana kadar 4 ° C &#39;de OP50 çözeltisi saklayın. </li></ol> Nematod Büyüme Orta (NGM) Petri Tabaklar 2. Hazırlık NOT: Bu kısım plakaları C olan NGM Petri kapları hazırlanmasını tarif etmektedir elegans solucanlar rutin laboratuvarda muhafaza edilir. <ol><li> NGM agar ortamı otoklava. </li><li> Steril prosedürler kullanılarak, bir peristaltik pompa kullanılarak 6 cm Petri kapları içine NGM agar çözeltisi 17 ml dağıtmak. NOT: plakalarda agar sabit bir miktarının bir plaka geçerken mikroskop refocusing ihtiyacını azaltır. </li><li> Ağarı katılaştırmak izin ve fazla nemin buharlaşmasını sağlamak için kullanımdan önce, 2-3 gün süre ile, oda sıcaklığında plakalar bırakın. </li><li> Steril tekniği kullanarak NGM plakaları Tohum. OP50 sıvı kültürü 1-2 damla uygulayın ve bir cam çubuk kullanarak yayılır. Emin olun değilplakaların kenarlarına bakteri çim tüm yol yaymak için. </li><li> OP50 çim solucanlar büyümeye plakaları kullanılarak önce oda sıcaklığında 1-2 gün boyunca büyümeye izin verin. </li></ol> Bir Senkron Worm Nüfus 3. Hazırlık NOT: C. yaşam döngüsü elegans embriyonik aşamada, dört larva evreleri (L1-L4) ve yetişkinlik oluşur. Bu bölüm, solucanlar yaşa senkron nüfusun hazırlanmasını tarif etmektedir. Ağartma işleminin ardından C.elegans ile temas eden bütün maddeler steril olması gerekmektedir. <ol><li> Gün 1 - Hamile Worm Nüfus hazırlanması <ol><li> Solucan nüfusunun çoğunluğu starved L1 larva oluşur hangi NGM tabak kullanın. </li><li> Steril bir solucan L1 larva almak toplayın ve taze 6 cm NGM plakalar aktarabilirsiniz OP50 ile ekildi. Solucanların çoğunluğu gebe yetişkin kadar 20 ° C&#39;de yaklaşık 65 saat süre ile inkübe edilir. Içinplaka aşırı kalabalık önlemek ve her yeni NGM plaka L1 larvaların fazla bir veya iki küme aktarmak değil, solucanlar bakteri tüketmeden büyümeye izin. </li></ol></li><li> 4. Gün - Bir Senkronize L1 Larva Nüfus kurulması <ol><li> M9 1-2 ml ile yıkayarak NGM plakaları gebe solucanları toplayın ve bir konik 15 ml tüp aktarabilirsiniz. </li><li> Gebe solucanlar yaklaşık 5-10 dakika için 15 ml konik tüp altına sediment edelim. Solucan pelet bozmadan süpernatantı. </li><li> 2-4 mikrosantrifüj tüplerine solucan pelet aktarın ve ağartma maddesi / NaOH çözeltisi 1 ml. Oda sıcaklığında 2-3 dakika inkübe edin. Tüm solucanlar öldü onaylamak için stereomicroscope altında reaksiyonun ilerlemesini izleyin. Embriyolar ölebilir gibi daha uzun 5 dakika çamaşır suyu yok. </li><li> 3000 rpm&#39;de (900 x g), 1 dakika süreyle santrifüjlenerek solucanları toplayın. Süpernatantı ve steril M9 1 ml ekleyinTepkimeyi nötrleştirmek. </li><li> 3000 rpm&#39;de (900 x g), 1 dakika için santrifüjleme ile iki kere solucanlar yıkayın. </li><li> Süpernatantı ve en fazla 100-200 ul M9 ekleyin. </li><li> Bir cam Pasteur pipeti solucanın bir damla ekleyin kullanma / M9 embriyolar yumurtadan izin 20 ° C&#39;de en az 24 saat süreyle bunları NGM plakaları temizlemek ve inkübe karıştırın. NOT: Gıda olmadan larvaları büyüme L1 aşamada durdurulur. </li></ol></li><li> Gün 5 - Senkronize L4 larvaları Nüfus kurulması <ol><li> M9 1-2 ml plakaları yıkayarak açık NGM plakaları L1 larvaları toplayın ve bir konik 15 ml tüp aktarabilirsiniz. </li><li> Yaklaşık olarak 5 dakika boyunca 15 ml konik tüp alt ölü büyütülmüştür tortu olsun. </li><li> Yeni bir konik 15 ml tüp içinde L1 solucanlar süpernatant, toplamak ve 2600 rpm&#39;de (1000 x g), 2 dakika süreyle santrifüjlenerek solucanlar çökeltilmesi. </li><li> Süpernatant le kaldıryaklaşık 500 ul aving. </li><li> Bir stereomikroskop kullanılarak damla 10 ml içinde solucanlar sayısının sayılmasıyla M9 çözeltisi solucan konsantrasyonunun belirlenmesi. En az 5 damla sayın. </li><li> 20-25 solucanlar / ul solucanlar konsantrasyonu ayarlayın ve OP50 ile seribaşı NGM plakalar solucan / M9 karışımı 50 ul ekleyin. </li><li> Onlar L4 sahne ulaşana kadar L1 senkronize nüfus büyümeye izin (hafta sonuna kadar inkübasyon için) 15 ° C&#39;de 65 saat inkübe. </li></ol></li></ol> 96 oyuklu plakalar içerisinde Chemicals Worms 4. maruz NOT: Bu bölümde Pxol1 kullanımını açıklar :: C içeren GFP transkripsiyonel muhabiri C. elegans suşu anöploidinin uyarılması için taranmaktadır. <ol><li> M9 1-2 ml plakaları yıkayarak açık NGM plakaları L4 larvaları toplayın ve bir konik 15 ml tüp aktarabilirsiniz. </li><li> Altına L4 solucanlar tortu Let15 mi, yaklaşık 5-10 dakika boyunca konik boru. Solucan pelet bozmadan süpernatantı. </li><li> M9 3-5 mi ekleyin ve bir stereo mikroskop kullanarak damla 10 ml içinde solucanlar sayısının sayılmasıyla M9 çözeltisi solucan konsantrasyonunu belirler. Her bir numune için en az 5 damla sayın. </li><li> M9 1000 solucanlar / ml&#39;lik bir konsantrasyonda yeniden süspanse solucanlar. </li><li> Bölüm 1 OP50 bakteri sulandırmak M9 ile 10 kat. Alt sıcaklık solucan gelişimini etkiler, çünkü yeniden süspanse bakteriler oda sıcaklığına ulaşmasını emin olun. </li><li> İlk (aşama 4,4) sonsuz / M9 karışımı, 100 ul ve ardından 2 ml derin, yuvarlak tabanlı 96 oyuklu plakanın her oyuğuna (adım 4.5 den) ile seyreltildi OP50 bakteri 400 ul, bir çok kanallı pipet kullanarak. Sonunda, her bir çukura 500 ul, 100 solucanlar olacaktır. </li><li> Önerilen son Concentr ulaşmak için, istenen kuyulara test kimyasal veya uygun denetim ya 0.5 ul ekle100 mcM tirme, bir konsantrasyon yaygın C kimyasal ekranlarında kullanılan elegans 12. % 0.1 bir son konsantrasyonda etanol ya da DMSO çözücü kontrol Açığa. NOT: Pozitif kontrol olarak nokodazolun (100 mcM) kullanılmasını tavsiye ederiz. </li><li> Yapışkan film kullanarak plaka Seal. Kuyular arasındaki çapraz bulaşmayı önlemek için plaka mühür emin olun. </li><li> Alüminyum folyo ile plaka sarın. </li><li> Zaman uygun uzunlukta (24 veya 65 saat) için uygun sıcaklıkta bir çalkalayıcı (170-180 rpm) plaka aktarın. oda sıcaklığı solucan büyümesini etkiler; yaklaşık 20 ° C sıcaklığı muhafaza. </li></ol> Bir 384-oyuklu bir plaka içerisinde Hamile Worms 5. Görüntü Alma NOT: Bu bölüm, ergin hermafrodit bireyler rahim içinde embriyo GFP tanımının görüntülenmesi için, görüntü maruz Pxol1 :: GFP solucanlar içeriği yüksek mikroskop kullanımını tarif eder. IçinHer 384 oyuklu plaka elenecek, 4 x 96-delikli plakadan solucanlar kullanır. <ol><li> Çalkalayıcı kimyasal maruz bırakıldıktan sonra, 10-15 dakika boyunca 96 gözlü plaka kalan büyütülmüştür plakasının tabanına kadar tortu izin sağlar. </li><li> Bir çok kanallı pipet kullanarak, plakanın alt solucanlar rahatsız etmemek için çok dikkatli olmak, M9 350 ul kaldırın. </li><li> M9 1 ml ve tekrar adım 5.1 ile solucanlar yıkayın. </li><li> Bir çok kanallı pipet kullanarak, plakanın alt solucanlar rahatsız etmemek için vey dikkat ederek, M9 1 ml çıkarın. </li><li> Bir çok kanallı pipet kullanarak, geri kalan M9 solucanlar tekrar süspansiyon ve 96 oyuklu plakalar solucan / M9 karışımı 100 ul toplamak ve siyah bir duvar / şeffaf tabanlı 384-kuyucuklu plak kuyu içine yükleyin. 384-kuyulu plakanın tüm kaynaklar yüklü kadar, 4 x 96-delikli plakadan solucanlar kullanarak tekrarlayın. NOT: Bu önemlidir arttırmak için bütün bölümler aynı hacmi içingörüntü elde etme sürecinde verimlilik ve otofokus hızı. Her iyi 80 ila 100 solucanlar arasında içermelidir. </li><li> Her bir oyuğa, levamizol (100 uM), 1 ul ekle ve solucanlar yaklaşık 30 dakika boyunca inkübe edin. Not: Levamisole bir asetilkolin reseptörü agonisti olarak görev yapar ve solucan hareketsiz. </li><li> Otomatik görüntüleme sağlayabilen bir widefield içeriği yüksek mikroskop plaka aktarın. </li><li> Görüntü elde etmek için, üreticinin talimatlarına göre bir içeriği yüksek görüntü elde etme ve analiz yazılımı kullanmak. Kuyu başına 1 görüntü elde etmek 4X hedefi seçin. </li><li> Görüntü elde etme başlamadan önce, 2160 x 2,160 maruz ve görüntü çözünürlüğü 45 msn GFP görüntüleme parametrelerini ayarlamak. </li><li> Kuyudaki solucanlar toplam sayısına bölünmesiyle GFP pozitif solucanlar sayısı gibi verileri toplayın, ikinci ölçü kuyuları arasında nispeten tutarlı olmak. </li></ol>

<ol>
	<li>Office, U. G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+No.+GAO-06-1032T.">Report No. GAO-06-1032T.</a> Actions are needed to improve the effectiveness of EPA&#8217;s chemical review program. Testimony before the Committee on Environment and Public Works. US Senate. , (2009).</li><li>Fragouli, E., Wells, D., Delhanty, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+abnormalities+in+the+human+oocyte.">Chromosome abnormalities in the human oocyte.</a> Cytogenet Genome Res. 133 (2-4), 107-118 (2011).</li><li>Hassold, T., Hunt, P. A., Sherman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trisomy+in+humans:+incidence,+origin+and+etiology.">Trisomy in humans: incidence, origin and etiology.</a> Curr Opin Genet Dev. 3 (3), 398-403 (1993).</li><li>Heron, M., Hoyert, D. L., Murphy, S. L., Xu, J., Kochanek, K. D., Tejada-Vera, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths:+final+data+for+2006.">Deaths: final data for 2006.</a> Natl Vital Stat Rep. 57 (14), 1-134 (2009).</li><li>Hunt, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meiosis+in+mammals:+recombination,+non-disjunction+and+the+environment.">Meiosis in mammals: recombination, non-disjunction and the environment.</a> Biochem Soc Trans. 34 (Pt 4), 574-577 (2006).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS.Genetics. 91 (1), 67-94 (1979).</li><li>Nicoll, M., Akerib, C. C., Meyer, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-chromosome-counting+mechanisms+that+determine+nematode+sex.">X-chromosome-counting mechanisms that determine nematode sex.</a> Nature. 388 (6638), 200-204 (1997).</li><li>Kelly, K. O., Dernburg, A. F., Stanfield, G. M., Villeneuve, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+msh-5+is+required+for+both+normal+and+radiation-induced+meiotic+crossing+over+but+not+for+completion+of+meiosis.">Caenorhabditis elegans msh-5 is required for both normal and radiation-induced meiotic crossing over but not for completion of meiosis.</a> Genetics. 156 (2), 617-630 (2000).</li><li>Allard, P., Kleinstreuer, N. C., Knudsen, T. B., Colaiacovo, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Screening+Platform+for+the+Rapid+Assessment+of+Chemical+Disruption+of+Germline+Function.">A Screening Platform for the Rapid Assessment of Chemical Disruption of Germline Function.</a> Environ Health Perspect. 121 (6), 717-724 (2013).</li><li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Toxicity Testing in the 21st Century: A Vision and a Strategy. , (2007).</li><li>Boyd, W. A., Smith, M. V., Kissling, G. E., Freedman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medium-+and+high-throughput+screening+of+neurotoxicants+using+C.+elegans.">Medium- and high-throughput screening of neurotoxicants using C. elegans.</a> Neurotoxicol Teratol. 32 (1), 68-73 (2010).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Burada anlatılan yöntem germlıne Toksik maddelerin belirlenmesi için ilk büyük ölçekli stratejisini oluşturmaktadır. Bu sadakatle germ disfonksiyon için bir vekil olarak kullanılan erken embriyolar anöploidi indüksiyon raporları GFP transgenik Pxol-1 :: GFP içeren suşu kullanımını gerektirir. yöntem, bir C dikkat senkronizasyon gerektirir elegans solucan nüfus ve otomatik yüksek içerik mikroskobu ile GFP pozitif solucanlar görüntüleme ardından 96 kuyulu formatta kim...

Amerika Birleşik Devletleri ticaret için kayıtlı yaklaşık 87,000 kimyasallar, bu potansiyel sağlık etkileri 1 için test edilmiştir henüz sadece az sayıda bulunmaktadır. Test edilmiş olanların, sadece bir kısmı özellikle kadın germ hücre gelişimi ve farklılaşması sırasında memelilerde erken üreme olayların değişiklik belirlenmesinde zorluk nedeniyle kısmen üreme sağlığı etkileri için değerlendirilmiştir. Gerçekten de, birinci öz değişmesine ait olaylar dişi memelilerde embriyonik gelişiminin erken evrelerinde yer alan ve dolayısıyla erişim ve tarama amaçları için uygun sayıda toplama zordur. germ kuşaklar arasındaki önemli bağlantıyı sağlar, ve uygun fonksiyon hücresel ve kromozomal bölünme karmaşık programın kesin yürütme mayoz olarak adlandırılan bağlıdır. Öz değişmesine ait işlemin bozulması fertilite düşüklüğü ve üretimi ile sonuçlanabilirkromozom anormal sayıda gamet ve embriyo, bir durum anöploidi olarak adlandırılan. Mayoz kromozom ayrımı hataları insan sağlığı için son derece önemlidir. Kromozom anomalileri 1 150 canlı doğumda sıklığı, Trizomi 21, 18 ve 13 gibi en yaygın türleri 2,3 olan X ve Y kromozomu hataları ile, yaygındır. Ayrıca, kromozomal kökenli olanlar dahil olmak üzere, konjenital malformasyonlar, ABD 4 çevresel etkiler kromozomal ayrımı ve davranışlarını etkileyebilir fikri bebek ölüm önde gelen nedenidir 5 yeni değil, ama yine de tam olarak anlaşılamamıştır. İnsan doğurganlık, erken gelişim ve genel üreme sağlığı engellemesini çevremiz içine kimyasalların hangi araştırmak için bu nedenle çok önemlidir. Memeli modelleri, bu sınırlamaları sebebi olarak, &lt;yuvarlak kurt üreme toksisitesini test etmek amacıyla yüksek verimli bir ekran deneyi geliştirdikem&gt; C. elegans. Biz küçük boyutu, düşük maliyet, kısa üreme döngüsü, germ hücrelerinin yüksek oranda ve manipülasyon 6 kolaylığı olarak bu yaygın olarak kullanılan genetik model sistem tarafından sunulan birçok önemli özelliği seferber ettik. Solucanlar 96-oluklu plaka ya da yüksek hacimli sıvı kültürlerde yetiştirilebilir ve bu nedenle şeffaflığının doğrudan fluoresan muhabir saptanması için plakalar üzerinde görüntülenebilir. Aşağıda tarif edilen deney, bu özelliklerin avantajının ortaya germline bozulması ve embriyonik anöploidisi uyarılmasını tespit etmek için flüoresan raportör Pxol-1 :: GFP ihtiva eden bir sonsuz soyunun yararlanır. Bu muhabir gerginlik kullanımı esas hermafroditik solucan nüfus erkeklerin genellikle nadir görülmesi dayanmaktadır. Bu erkek (&lt;% 0.2) doğal X kromozomu 7 ayrılığı içinde hatasından kaynaklanmaktadır. Ancak, germ bozulma sık otozomal ayrılığı hatalara yol açarve heterochromosomes nedeniyle, erkek fenotip (X missegregation) yanı sıra, embriyonik öldürücülüğü (autosome missegregation) olarak yükseltilmiş bir oranı ile, her iki ilişkilidir. Embriyonik öldürücülük sorunu engellemeyi kolay kolay erkeklerde uyarılmasını tespit etmek için, bir erkek-özgü promoteri (xol-1), yine de, solucanların rahim içinde bulunan erken embriyolar GFP ekspresyonunu tahrik etmek için kullanılır. Bu nedenle, GFP ifade embriyo görünümü anöploid embriyoların varlığı için bir vekil olarak kullanılmaktadır. Bu yöntem, daha önce germlin bakım ve mayoz 8,9 karışmış genleri tanımlamak için kullanılır olmuştur. Kimyasal tarama Uyarlanmış, bu suş yüksek verimli ekranına bir ortamda kullanılır. Önemlisi, gerilme sadakatle kimyasalların aneugenicity raporları ve memeli üreme uç noktalara 10 nedenle alakalı. Burada anlatılan tahlil seyir ilaç ve kimya sanayi ayarlarında toksikoloji özellikle yararlı olacaktırhızla üreme uç noktaları yönelik kimyasalların toksisite değerlendirmek için. Ayrıca, bu deney tamamen 21. yüzyıl raporunda 11 Toksik vurgulanan devlet öncelikleri ile aynı hizaya.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="975">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:129px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:255px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">60mm vented, sharp edge Petri Dishes</td>
			<td style="width:129px;">Tritech</td>
			<td>T3315</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Agar</td>
			<td>Apex</td>
			<td>20-274</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:473px;">Axygen 96 Well Clear Round Bottom 2mL Polypropylene Deep Well Plate</td>
			<td style="width:129px;">Corning</td>
			<td>P-DW-20-C-S</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Bactopeptone</td>
			<td style="width:129px;">Apex</td>
			<td>20-261</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Bacto-tryptone</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP1421-2</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Bleach</td>
			<td style="width:129px;">Clorox</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Calcium Chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>AA12316-A1</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cholesterol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>ICN10138225</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">DMSO</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>IC19018680</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">E. coli (OP50)</td>
			<td style="width:129px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Ethanol 200 proof</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>EM-4455S</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Greiner CELLSTAR 384 well plates</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1937-32EA</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageXpress Micro XLS System&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Levamisole hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Fluka</td>
			<td style="width:119px;">31742</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesium Sulfate Anhydrous (MgSO4)</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>97061-438</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MetaXpress High Content Image Acquisition &#38; Analysis Software&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Rayon Films for Biological Cultures</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>60941-086</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:473px;">Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S318</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:473px;">Sodium Phosphate Dibasic (Na2HPO4)</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td>BDH0316</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:473px;">Stereomicroscope&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">SMZ 745</td>
			<td style="width:255px;">This microscope has a total magnification form 3.35x to 300x. Any microscope with similar characteristics will work.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:473px;">TY2441 C. elegans, Pxol-1::GFP reporter strain&#160;</td>
			<td style="width:129px;">Caenorhabditis Genetics Center</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:473px;">Yeast extract</td>
			<td style="width:129px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">212750</td>
			<td style="width:255px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

comprehensive assessment of germline chemical toxicity using the nematode caenorhabditis elegans

Çevremizde bulunan kimyasalların binlerce üreme toksisitesinin belirlenmesi, çevre sağlığı alanında en kabartan zorluklardan biri olmuştur. Bu omurgalı hayvanların yüksek sayıda ihtiyaç duymadan, (1) doğru (2) yüksek verimli moda bir orta bunu yapmak üreme süreçlerinin tuşları özelliklerini özetlemek ve edebilirsiniz model sistemler azlığı kısmen kaynaklanmaktadır. Biz nematod C. burada bir tahlil açıklamak Anöploid embriyoların indüksiyon izleyerek germlıne Toksik maddelerin hızla belirlenmesini sağlar elegans. GFP muhabiri hattının kullanımı yaparak, germ bozulma kaynaklanan kromozom ayrımı hataları kolayca görülebilir ve otomatik floresan mikroskobu ile ölçülebilir. Böylece toksisitesi bileşiklerin özel bir dizi tarama birkaç gün içinde bir 96- 384-kuyucuklu bir plaka biçiminde gerçekleştirilebilir. Pozitif h ikincil analizionun kromozom anomalileri mayoz bozulma veya erken embriyonik kromozom ayrımı hataları kaynaklanan olup olmadığını belirlemek için yapılabilir. Tamamen, bu deney, kimyasal maruziyet aşağıdaki germlıne disfonksiyonu hızlı değerlendirilmesi için hızlı ilk geçiş stratejisini temsil eder.

Gibi mikrotübül zehir nokodazol gibi kimyasal ajanlara Pxol-1 :: GFP raportör soyunun maruz (Şekil 1) DMSO kontrolü ile karşılaştırıldığında açık ergin hermafrodit bireyler rahmine GFP ifade oğulcukların yüksek bir oranda, indüklenmesine yol açacaktır. GFP pozitif embriyolar diğer embriyolar hem de hayvan bağırsağında görülen bir oto-floresan gözlenen zayıf eşiğe göre belirgin parlaktır. Maruz solucanlar doğrudan 384 çukurlu tabaklarda görüntülenmiş ve en...

Watch this Scientific Journal Video about Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

We describe the detailed steps of a high-throughput chemical assay in the nematode Caenorhabditis elegans used to assess germline toxicity. In this assay, disruption of germline function following chemical exposure is monitored using a fluorescent reporter specific to aneuploid embryos.

Nematod kullanma Germline Kimyasal zehirlilik Kapsamlı Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

comprehensive-assessment-germline-chemical-toxicity-using-nematode

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

8.0K Görüntüleme.  University of California, Los Angeles. We describe the detailed steps of a high-throughput chemical assay in the nematode Caenorhabditis elegans used to assess germline toxicity. In this assay, disruption of germline function following chemical exposure is monitored using a fluorescent reporter specific to aneuploid embryos.

Video: Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Human Pluripotent Stem Cell Based Developmental Toxicity Assays for Chemical Safety Screening and Systems Biology Data Generation

Efficient protocols to differentiate human pluripotent stem cells to various tissues in combination with -omics technologies opened up new horizons for in vitro toxicity testing of potential drugs. To provide a solid scientific basis for such assays, it will be important to gain quantitative information on the time course of development and on the underlying regulatory mechanisms by systems biology approaches. Two assays have therefore been tuned here for these requirements. In the UKK test system, human embryonic stem cells (hESC) (or other pluripotent cells) are left to spontaneously differentiate for 14 days in embryoid bodies, to allow generation of cells of all three germ layers. This system recapitulates key steps of early human embryonic development, and it can predict human-specific early embryonic toxicity/teratogenicity, if cells are exposed to chemicals during differentiation. The UKN1 test system is based on hESC differentiating to a population of neuroectodermal progenitor (NEP) cells for 6 days. This system recapitulates early neural development and predicts early developmental neurotoxicity and epigenetic changes triggered by chemicals. Both systems, in combination with transcriptome microarray studies, are suitable for identifying toxicity biomarkers. Moreover, they may be used in combination to generate input data for systems biology analysis. These test systems have advantages over the traditional toxicological studies requiring large amounts of animals. The test systems may contribute to a reduction of the costs for drug development and chemical safety evaluation. Their combination sheds light especially on compounds that may influence neurodevelopment specifically.

The protocols describe two in vitro developmental toxicity test systems (UKK and UKN1) based on human embryonic stem cells and transcriptome studies. The test systems predict human developmental toxicity hazard, and may contribute to reduce animal studies, costs and the time required for chemical safety testing.

Kimyasal Güvenlik Tarama ve Sistem Biyolojisi Veri Üretimi Gelişim Toksisite Tahliller Tabanlı İnsan Pluripotent Kök Hücre

Efficient protocols to differentiate human pluripotent stem cells to various tissues in combination with -omics technologies opened up new horizons for in ...

Gelişim Biyolojisi

Salinity-dependent Toxicity Assay of Silver Nanocolloids Using Medaka Eggs

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and seawater. Tests of the toxicity of chemicals and assessments of their ecological risks to aquatic organisms are frequently performed in freshwater, but the toxicity of chemicals to aquatic organisms depends on pH, temperature, and salinity. There is no method, however, for testing the salinity dependence of toxicity to aquatic organisms. Here, we used medaka (Oryzias latipes) because they can adapt to freshwater, brackish water, and seawater. Different concentrations of embryo-rearing medium (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, and 30x) were employed to test the toxicity of silver nanocolloidal particles (SNCs) to medaka eggs (1x ERM and 30x ERM have osmotic pressures equivalent to freshwater and seawater, respectively). In six-well plastic plates, 15 medaka eggs in triplicate were exposed to SNCs at 10 mg/L&#8722;1 in different concentrations of ERM at pH 7 and 25 &#176;C in the dark.
We used a dissecting microscope and a micrometer to measure heart rate per 15 sec and eye diameter on day 6 and full body length of the larvae on hatching day (section 4). The embryos were observed until hatching or day 14; we then counted the hatching rate every day for 14 days (section 4). To see silver accumulation in embryos, we used inductively coupled plasma mass spectrometry to measure the silver concentration of test solutions (section 5) and dechorionated embryos (section 6).The toxicity of the SNCs to medaka embryos obviously increased with increasing salinity. This new method allows us to test the toxicity of chemicals in different salinities.

Embryonic stages are the most susceptible to xenobiotics. Although chemical toxicity depends on salinity, no method exists to test the salinity dependence of toxicity to aquatic organisms. Here, we describe a new and high-throughput method for determining the salinity dependence of toxicity to aquatic embryos.

Medaka Yumurta kullanma Gümüş Nanocolloids tuzluluk bağımlı zehirlilik Deneyi

Salinity is an important characteristic of the aquatic environment. For aquatic organisms it defines the habitats of freshwater, brackish water, and ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple cellular and developmental processes principally via activation of ERK, the terminal kinase of the pathway. Tight regulation of ERK activity is essential for normal development and homeostasis; overly active ERK results in excessive cellular proliferation, while underactive ERK causes cell death. C. elegans is a powerful model system that has helped characterize the function and regulation of RTK-RAS-ERK signaling pathway during development. In particular, the RTK-RAS-ERK pathway is essential for C. elegans germline development, which is the focus of this method. Using antibodies specific to the active, diphosphorylated form of ERK (dpERK), the stereotypical localization pattern can be visualized within the germline. Because this pattern is both spatially and temporally controlled, the ability to reproducibly assay dpERK is useful to identify regulators of the pathway that affect dpERK signal duration and amplitude and thus germline development. Here we demonstrate how to successfully dissect, stain, and image dpERK within the C. elegans gonad. This method can be adapted for spatial localization of any signaling or structural protein in the C. elegans gonad, provided an antibody compatible with immunofluorescence is available.

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

We present an immunofluorescence&#160;imaging-based method for spatial and temporal localization of active ERK in the dissected C. elegans gonad. The protocol described here can be adapted for visualization of any signaling or structural protein in the C. elegans gonad, provided a suitable antibody reagent is available.

Aktif ERK Mekansal ve Zamansal Analizi<em&gt; C. elegans</em&gt; Germline

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein are molecular motors that regulate anterograde and retrograde transport, respectively. These motors use microtubule networks as rails. Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a powerful model organism to study axonal transport and IFT in vivo. Here, I describe a protocol to observe axonal transport and IFT in living C. elegans. Transported cargo can be visualized by tagging cargo proteins using fluorescent proteins such as green fluorescent protein (GFP). C. elegans is transparent and GFP-tagged cargo proteins can be expressed in specific cells under cell-specific promoters. Living worms can be fixed by microbeads on 10% agarose gel without killing or anesthetizing the worms. Under these conditions, cargo movement can be directly observed in the axons and cilia of living C. elegans without dissection. This method can be applied to the observation of any cargo molecule in any cells by modifying the target proteins and/or the cells they are expressed in. Most basic proteins such as molecular motors and adaptor proteins that are involved in axonal transport and IFT are conserved in C. elegans. Compared to other model organisms, mutants can be obtained and maintained more easily in C. elegans. Combining this method with various C. elegans mutants can clarify the molecular mechanisms of axonal transport and IFT.

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a good model to study axonal and intracellular transport. Here, I describe a protocol for in vivo recording and analysis of axonal and intraflagellar transport in C. elegans.

Caenorhabditis elegans nöron hücre içi taşıma analiz immobilizasyon

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein ...

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are facilitated by the transparency of the animal, the ability to do forward and reverse genetic assays, the relative ease of generating fluorescently labeled proteins, and the use of fluorescent dyes that can either be microinjected into the early embryo or incorporated into its food (E. coli strain OP50) to label cellular organelles (e.g. 9-diethylamino-5H-benzo(a)phenoxazine-5-one and (3-{2-[(1H,1&#39;H-2,2&#39;-bipyrrol-5-yl-kappaN(1))methylidene]-2H-pyrrol-5-yl-kappaN}-N-[2-(dimethylamino)ethyl]propanamidato)(difluoro)boron). Here, we present the use of a fluorescent pH-sensitive dye that stains intestinal lysosomes, providing a visual readout of dynamic, physiological changes in lysosomal acidity in live worms. This protocol does not measure lysosomal pH, but rather aims to establish a reliable method of assessing physiological relevant variations in lysosomal acidity. cDCFDA is a cell-permeant compound that is converted to the fluorescent fluorophore 5-(and-6)-carboxy-2&#39;,7&#39;-dichlorofluorescein (cDCF) upon hydrolysis by intracellular esterases. Protonation inside lysosomes traps cDCF in these organelles, where it accumulates. Due to its low pKa of 4.8, this dye has been used as a pH sensor in yeast. Here we describe the use of cDCFDA as a food supplement to assess the acidity of intestinal lysosomes in C. elegans. This technique allows for the detection of alkalinizing lysosomes in live animals, and has a broad range of experimental applications including studies on aging, autophagy, and lysosomal biogenesis.

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

A step-by-step guide to probe loss of lysosomal acidity in the intestine of C. elegans using the pH-sensitive vital dye 5(6)-carboxy-2&#39;,7&#39;-dichlorofluorescein diacetate (cDCFDA)

Bağırsak hayatın Caenorhabditis elegans lizozomal Alkalinization değerlendirilmesi

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and chromosome dynamics. While the germline is an excellent model, the analysis is often two dimensional due to the time and labor required for three-dimensional analysis. Major readouts in such studies are the number/position of nuclei and protein distribution within the germline. Here, we present a method to perform automated analysis of the germline using confocal microscopy and computational approaches to determine the number and position of nuclei in each region of the germline. Our method also analyzes germline protein distribution that enables the three-dimensional examination of protein expression in different genetic backgrounds. Further, our study shows variations in cytoskeletal architecture in distinct regions of the germline that may accommodate specific spatial developmental requirements. Finally, our method enables automated counting of the sperm in the spermatheca of each germline. Taken together, our method enables rapid and reproducible phenotypic analysis of the C. elegans germline.

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

We present an automated method for three-dimensional reconstruction of the Caenorhabditis elegans germline. Our method determines the number and position of each nucleus within the germline and analyses germline protein distribution and cytoskeletal structure.

Çekirdeklerin dağıtım, proteinler ve sitoiskeleti çalışmaya Caenorhabditis elegans Germline sayısal analizi

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

Cell cycle analysis in eukaryotes frequently utilizes chromosome morphology, expression and/or localization of gene products required for various phases of the cell cycle, or the incorporation of nucleoside analogs. During S-phase, DNA polymerases incorporate thymidine analogs such as EdU or BrdU into chromosomal DNA, marking the cells for analysis. For C. elegans, the nucleoside analog EdU is fed to the worms during regular culture and is compatible with immunofluorescent techniques. The germline of C. elegans is a powerful model system for the studies of signaling pathways, stem cells, meiosis, and cell cycle because it is transparent, genetically facile, and meiotic prophase and cellular differentiation/gametogenesis occur in a linear assembly-like fashion. These features make EdU a great tool to study dynamic aspects of mitotically cycling cells and germline development. This protocol describes how to successfully prepare EdU bacteria, feed them to wild-type C. elegans hermaphrodites, dissect the hermaphrodite gonad, stain for EdU incorporation into DNA, stain with antibodies to detect various cell cycle and developmental markers, image the gonad and analyze the results. The protocol describes the variations in the method and analysis for the measurement of S-phase index, M-phase index, G2 duration, cell cycle duration, rate of meiotic entry, and rate of meiotic prophase progression. This method can be adapted to study the cell cycle or cell history in other tissues, stages, genetic backgrounds, and physiological conditions.

Cell Cycle Analysis in the C. elegans Germline with the Thymidine Analog EdU

An imaging-based method is described that can be used to identify S-phase and analyze cell cycle dynamics in the C. elegans hermaphrodite germline using the thymidine analog EdU. This method requires no transgenes and is compatible with immunofluorescent staining.

C. elegans Germline timidin Analog EdU ile hücre döngüsü analizi

Cell cycle analysis in eukaryotes frequently utilizes chromosome morphology, expression and/or localization of gene products required for various phases ...

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented protocol uses this model to determine the pathogenicity caused by the mitis group streptococci via the production of H2O2. The mitis group streptococci are an emerging threat that cause many human diseases such as bacteremia, endocarditis, and orbital cellulitis. Described here is a protocol to determine the survival of these worms in response to H2O2 produced by this group of pathogens. Using the gene skn-1 encoding for an oxidative stress response transcription factor, it is shown that this model is important for identifying host genes that are essential against streptococcal infection. Furthermore, it is shown that activation of the oxidative stress response can be monitored in the presence of these pathogens using a transgenic reporter worm strain, in which SKN-1 is fused to green fluorescent protein (GFP). These assays provide the opportunity to study the oxidative stress response to H2O2 derived by a biological source as opposed to exogenously added reactive oxygen species (ROS) sources.

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans is an excellent model to dissect host-pathogen interactions. Described here is a protocol to infect the worm with members of the mitis group streptococci and determine activation of the oxidative stress response against H2O2 produced by this group of organisms.

Oksidatif stres nedeniyle Mitis grubu streptokok Caenorhabditis elegans içinde eğitim

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented ...

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female reproductive tract. While in vitro studies suggest that sperm of internally fertilizing animals can respond to various cues from their surroundings, the inability to visualize their behavior inside the female reproductive tract creates a challenge for understanding sperm migration and mobility in its native environment. Here, we describe a method using C. elegans that overcomes this limitation and takes advantage of their transparent epidermis. C. elegans males stained with a mitochondrial&#160; dye are mated with adult hermaphrodites, which act as modified females, and deposit fluorescently labeled sperm into the hermaphrodite uterus. The migration and motility of the labeled sperm can then be directly tracked using an epi-fluorescence microscope in a live hermaphrodite. In wild-type animals, approximately 90% of the labeled sperm crawl through the uterus and reach the fertilization site, or spermatheca. Images of the uterus can be taken 1 h after mating to assess the distribution of the sperm within the uterus and the percentage of sperm that have reached the spermatheca. Alternatively, time-lapse images can be taken immediately after mating to assess sperm speed, directional velocity and reversal frequency. This method can be combined with other genetic and molecular tools available for the C.elegans to identify novel genetic and molecular mechanisms that are important in regulating sperm guidance and motility within the female reproductive tract.

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Sperm must successfully navigate through the oviduct to fertilize an oocyte. Here, we describe an assay for measuring sperm migration within the C. elegans hermaphrodite uterus. This assay can provide quantitative data on sperm distribution within the uterus after mating, as well as on speed, directional velocity, and reversal frequency.

Ölçme sperm rehberlik ve motilite içinde Caenorhabditis elegans hermafrodit üreme yolu

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female ...

Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

During the aging process, many cells accumulate high levels of damage leading to cellular dysfunction, which underlies many geriatric and pathological conditions. Post-mitotic neurons represent a major cell type affected by aging. Although multiple mammalian models of neuronal aging exist, they are challenging and expensive to establish. The roundworm Caenorhabditis elegans is a powerful model to study neuronal aging, as these animals have short lifespan, an available robust genetic toolbox, and well-cataloged nervous system. The method presented herein allows for seamless isolation of specific cells based on the expression of a transgenic green fluorescent protein (GFP). Transgenic animal lines expressing GFP under distinct, cell type-specific promoters are digested to remove the outer cuticle and gently mechanically disrupted to produce slurry containing various cell types. The cells of interest are then separated from non-target cells through fluorescence-activated cell sorting, or by anti-GFP-coupled magnetic beads. The isolated cells can then be cultured for a limited time or immediately used for cell-specific ex vivo analyses such as transcriptional analysis by real time quantitative PCR. Thus, this protocol allows for rapid and robust analysis of cell-specific responses within different neuronal populations in C. elegans.

Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

Here, we present a protocol for simple isolation of specific groups of live neuronal cells expressing green fluorescent protein from transgenic Caenorhabditis elegans lines. This method enables a variety of ex vivo studies focused on specific neurons and has the capacity to isolate cells for further short-term culturing.

Roundworm Caenorhabditis elegans belirli neuron nüfus yalıtım

During the aging process, many cells accumulate high levels of damage leading to cellular dysfunction, which underlies many geriatric and pathological ...