The research work presented in this manuscript was supported by a grant (HL107319 to Alan Daugherty and HL107326 to Lisa A. Cassis) from the National Institutes of Health of the United States of America. The content in this manuscript is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health. The publication of this manuscript was sponsored by DURECT Corporation.

Etik Beyanı: Fare çalışmaları Kentucky Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (: 2006-0009 IACUC protokol numarası) Üniversitesi onayı ile yapılır. Fareler ketamin (~ 210 mg / kg) ve ksilazin aşırı dozda kokteyl (~ 30 mg / kg) ile sona ermesi de ötenazi. AngII Tutarının Hesaplanması 1. NOT: Bu protokol, 4 erkek LDL reseptörü 4 hafta süreyle AngII (1000 ng / kg / dak) infüzyonu örneğini kullanarak, - / - fareler doymuş yağ bakımından zengin bir diyet ile beslenen. <ol><li> Infüzyon için gerekli AngII miktarını hesaplamadan önce fareler çalışma tartılır. </li><li> Deney için gerekli olan AngII kitle hesaplamak için şablonu (Tablo 1) kullanın. Şablonun adım 4&#39;te &quot;Pompa oranı&quot; olarak pompaların Öğretim belirtilen &quot;Terfi ortalama Rate&quot; kullanın. Manuel 5 ve 6 Adımlar - - şablonda, rekor Adımlar 1. 10 otomatik olarak hesaplanır. <ol><li> Şablonda olarak, varsayalımFareler 4 hafta içinde AngII 1000 ng / kg / dak enfüzyon boyunca vücut ağırlığının 1 g kazanacaktır. NOT: Her fare, fare zorlanma ve diyet gibi birçok değişkene bağlı olacaktır çok farklı vücut ağırlık artışı olabilir. Biz rutin önceki çalışmalardan kendi deneyimlerine dayanarak &quot;0&quot; veya &quot;1 gr&quot; kullanın. </li><li> Her pompa yaklaşık 250 ul gerektirdiğinden her fare için AngII çözümün bir 300 ul toplam hacmi hesaplayın. </li></ol></li></ol> AngII 2. Çözünme <ol><li> -20 ° C&#39;de de AngII şişeleri liyofilize edildi. Açmadan önce oda sıcaklığına AngII şişeleri dengelenmesi. </li><li> Steril plastik bir tüp içerisine hesaplanan AngII kitle (Tablo 1 &#39;de gösterildiği gibi 7,3 mg) tartılır. Not: AngII bir sulu çözelti, cama bağlanmak için güçlü bir afiniteye sahip olduğu başına The Merck Index, çözünme için cam tüpler kullanmayın. </li><li> (1200 mikron steril tuzlu su hesaplanan hacim eklemeLiyofilize AngII, kap içeren plastik bir tüp içerisine l) ve çözelti berrak hale gelinceye kadar inversiyon yolu ile iyice karıştırın. </li><li> Etiket fare numaraları # 1, # 2, # 3 ve kapaklar bireysel steril plastik tüpler üzerine 4. (0,5-1,5 ml). Aşama 1.2 ve Tablo 1 hesaplanan vücut ağırlığına göre her bir fare için bir laminer başlık altında AngII çözeltisi hazırlayın. <ol><li> Örneğin, tüp 1., daha sonra 296,4 ul AngII çözeltisi içine pipet 3.6 ul steril tuzlu ve yavaşça yukarı pipetleme ile iyice karıştırın. </li></ol></li><li> (Steril 4 mi) kapakları plastik borular üzerindeki etiket fare numaraları. Bu adım 3,13 tarif edildiği gibi pompalar kuluçka için kullanılacaktır. </li></ol> 3. Osmotik Pompa Dolum <ol><li> Pompanın ana gövdesine ve akış moderatörü (Şekil 1): iki ayrı bölümden pompaları edinin. Her kutu ayrı ayrı sarılır 10 pompa gövdeleri ve akış moderatörler vardır. Lot numarasını kaydedin. NOT: Her zaman giymekeldiven pompaların dış muhafazasına elinden aktarılan yağlar olumsuz işlevi pompalama etkileyecektir çünkü. İmplantın enfeksiyon riskini önlemek için, steril eldiven, gazlı bez, tüpler, dolum iğne kullanın ve pompalar hazırlamak için tekne tartın. </li><li> Bu kez açıldı saklanan edilemez, çalışma için gerekli olan pompa gövdeleri ve akış moderatörleri sadece numarasını açın. 10&#39;dan fazla pompa gerekiyorsa, farklı lot numaralı pompaları farklı ortalama Dolgu Hacmi ve Pompa Oranı beri pompa lot numaraları, bir çalışmada aynı olduğundan emin olun. </li><li> (Ana gövde ve moderatör akış hem de dahil olmak üzere) her pompanın tartılır ve 4 ondalık basamağa kadar ağırlık not (örneğin, fare no 1,1443 g 1). Şablonda (Tablo 1) &quot;Pompa Ağırlık boş&quot; olarak adlandırılan bu ağırlık, dolu oranını hesaplamak için kullanılır. </li><li> 1 cc steril şırınga pompa dolum iğne takın ve dikkatlice uygun gelen AngII çözümü ile şırınga doldurmaknumaralı plastik tüp. Bu enjektör içine hava çekme önlemek için önemlidir. </li><li> İğne aşağı konumlandırılmış ise şırınga dikkatle tüm hava kabarcıklarını çıkarın. Pompanın içine kabarcıklarının girişini önlemek için bu pozisyonda iğne / şırınga tutun. </li><li> Yavaşça pompa gövdesine doldurma iğne takın. Pompanın içine iğne ucu Advance. Sıkıca pompanın altındaki iğne ucu koymayın. </li><li> AngII çözümü ile pompayı doldurmak için yavaş yavaş şırınga pistonu itin. Pompa içindeki karanlık gölge dolum seviyesini gösterir. Doldurma hacmi Talimatları başına yaklaşık 246 ul. </li><li> Pompayı dolum durdurun ve sıvı boncuk pompa dışarı yükselir dikkatle kısa sürede iğne çıkarılır. </li><li> Hiçbir boşluk akış moderatör başkanı ve pompa gövdesinin üst (Şekil 1) arasında görülen kadar pompa gövdesinin üstündeki delikten pompanın içine akış moderatör yerleştirin. </li><li> Moderat yerleştirilmesiveya pompa vücuda akış moderatör açılması bazı sıvı sızıntı yol açar. Dikkatle moderatörler yerleştirilmesi sırasında sızan olabilir tüm ekstra sıvıyı kurulayın. </li><li> Dolu pompa tartılır. Şablonda &quot;Dolu Pompa Ağırlık&quot; altında kilo kaydedin. </li><li> Dolum Oranı (%) = (&quot;dolu&quot; Pompa Ağırlık - &quot;boş&quot;) hesaplayın 1000 / hacim x 100 doldurmak demek x. <ol><li> Oranı doldurma eşit veya% 100 daha fazla olmalıdır, Tablo 1. İdeal gösterildiği gibi Oranı Dolum hesaplayın. Doldurma oranı ise, dolum pompası &lt;% 95 (hava kabarcıkları pompa mevcut olabilir karıştığı). </li></ol></li><li> Moderatör kafası yukarı bakacak şekilde etiketlenmiş 4 ml tüp (Adım 2.5) doldurulur pompayı yerleştirin. Pompayı kapatmak için steril serum fizyolojik yeterli hacim ekleyin. Takılıncaya kadar tuzlu su tüp içinde pompa tutun. </li><li> 37 ºC inkübatör Yeri tüpleri. Inkübe kısmi astar izin ve sonra farelere implante O / N (en az 12 saat) pompalar. PompaAngII of ing fareler cerrahi öncesi AngII infüzyon sırasında ortaya çıkan herhangi bir potansiyel stres geri verir implantasyon sonrası yaklaşık 24 saat, başlar. </li></ol> Pompa İmplantasyonu 4. Hazırlık <ol><li> Otoklav (yerçekimi modu, kuru döngüsü, 15 dk) gazlı bez, pamuk bezlerden ve makas, hemostat, forseps, zımba dahil cerrahi aletler ve zımba en az 1 gün ameliyattan önce. </li><li> Bir prosedür odasında izofluran kullanarak anestezi buharlaştırıcı hazırlar. Laminer akış kaputu steril örtüler açın ve izofluran anestezisi için burun konisi yerleştirin. Laminar kaput betadin,% 70 etanol, steril su, boncuk sterilizatör, antiseptik ovucusu, bezlerden, gazlı bez ve dolu pompaları yerleştirin. </li><li> Don maske ve önlük, daha sonra temiz ellerle laminar kaput içinde bir dış örtü açın. Steril eldiven giyin ve steril iç paketini açın. </li></ol> Pompa İmplantasyonu 5. Cerrahi Prosedür <ol><li> Bir indüksiyon cham yerleştirin fare% 2 - 1.5 arasında bir akış hızında izofluran akışı ile ber. Yatma sonra 3 dakika - ek 2 için fare izleyin. Sol veya sağ omzunun üzerinden, bir çeyrek boyutu hakkında bir alan tıraş. </li><li> Izofluran çıkışı (Şekil 2A) bağlı bir koni ile aynı hizada olan burun, laminar kaput fare yerleştirin. Cerrahın dominant elin doğru farenin kafasını yerleştirin. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için farenin gözleri veteriner merhem kullanın. Fare ameliyat öncesi ağrı uyarısına yanıt olduğundan emin olun. Örneğin, pedal tepkisi ağrısı için iyi bir göstergedir. </li><li> Sürüntü ve% 70 etanol ile üç mendil ardından betadin traş bölgeyi silin. Don veya steril eldiven değiştirmek. </li><li> Ön bacak, omuz bıçak üzerinde kulağın arkasında ~ 1 cm&#39;lik kesi yapmak için bir cerrahi neşter kullanın. Bu kesi kuyruk dik olmalıdır. Sadece deri değil altta yatan dokuları kesmek için dikkatli olun. </li><li> Tut forcBir yandan eps kesi açın ve bir hemostat (Şekil 2B) kullanılarak derinin altında cilt altı tüneli yapmak için diğer elinizi kullanın. </li><li> Kuyruk doğru hemostat ucu Advance ve pompa için bir cep oluşturmak. Bu dikkatle bir kese açmak için deri altına hemostat çeneleri açarak gerçekleştirilir. Kesiden hemostat çekin. </li><li> Fare (Şekil 2C) arkasına yerleştirilmiş moderatör kafa ile kesi içine pompayı yerleştirin. Yavaşça cebine tamamen pompayı itin. Hiçbir gerginlik ya da derinin gerilmesi ile yarayı kapatmak için yeterli boş alan olmalıdır. </li><li> Bir pompa takıldıktan sonra, sıkı bir şekilde, kenarları karşılamak düzleştime, kesi her iki tarafı da tutam (Şekil 2D) kapatmak için 1 ya da 2, yara klipsleri yerleştirin. Yaranın tam kapanma olmasını sağlamak için Kesi sitesini inceleyin ve pompa sitesinde doğrudan basmak olmadığını. </li><li> Topikal lidokain krem ​​sürünBurun konisi temiz bir pamuk swab.Remove fare ile (% 4 ağırlık / ağırlık) ve bilinci yerine kadar bir ısıtma pedi üzerine yerleştirin. Kurtardıktan sonra, fare kafesine geri döner. </li><li> Fareler arasında 10 saniye boyunca bir kordon sterilize etme birimi içine cerrahi aletleri yerleştirin. Araçlar kullanılmadan önce soğumasını bekleyin. Fareler arasında antiseptik sıvı ile temizleyin eldivenler. Tam iyileşme sağlanana kadar tüm fareler izleyin. </li><li> Yakından ameliyat sonrası fareler izleyin. Fare sıkıntı, veya dehidrasyon kilo kaybı belirtileri gösteriyorsa - (0.3 ml 0.2) subkütan steril serum fizyolojik bir bolus enjekte edilir. Ilk 10 gün içinde en az günde iki kez fareler gözlemleyin ve daha sonra en az bir kez her gün. Herhangi fareler AngII infüzyon sırasında ölürseniz hemen nekropsi gerçekleştirin. Ameliyattan sonra 14 gün - 7 arası yara klipleri çıkarın. </li></ol> 6. Hasat, Tespit, Temizleme ve aortalarının Görüntüleme <ol><li> Ope kesti, ventral fare toraks ve batın boşluklar açmak kesmekn sağ atrium, aort kan kaldırmak için kalbin sol ventrikül ile tuzlu su ile serpmek ve aort 27 hasat. </li><li> 48 saat 27-24 süreyle% 4&#39;lük paraformaldehit veya% 10 nötr tamponlu formalin içinde en az 3 ml içeren plastik tüplere hasat aorta yerleştirin. </li><li> Dikkatlice adventisyal dokuları çıkarın. Iğnelerle siyah mum pin aorta. Aynı büyütme ile aort görüntüler elde. Şekil 3 &#39;de gösterildiği gibi, kalibrasyon her görüntüde bir cetvel içerir. </li></ol> Aorta 7. Tu yüz Görüntüleme <ol><li> Arkus aorta dış ve iç eğrilik uzunlamasına açık aort kesin ve innominate, sol karotis arter ve sol subklavyen arter dahil olmak üzere açık büyük dalları kesmek. Dış adventisyal siyah mum bitişik döşeme düz pim aorta. </li><li> Aynı büyütmede aortun intimal yüzeyinin yüz resmi tr edinin. Gösterisi olarak, kalibrasyon için her görüntüde bir cetvel ekleyinŞekil 4 n. </li></ol>

<ol>
	<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+(gelatinase+B)+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms.">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li><li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride.">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> J Surg Res. 99 (2), 371-376 (2001).</li><li>Daugherty, A., Cassis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+angiotensin+II+infusion+promotes+atherogenesis+in+low+density+lipoprotein+receptor+-/-+mice.">Chronic angiotensin II infusion promotes atherogenesis in low density lipoprotein receptor -/- mice.</a> Ann NY Acad Sci. 892 (1), 108-118 (1999).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li><li>Deng, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urokinase-type+plasminogen+activator+plays+a+critical+role+in+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm.">Urokinase-type plasminogen activator plays a critical role in angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm.</a> Circ Res. 92 (5), 510-517 (2003).</li><li>King, V. L., Trivedi, D., Gitlin, J. M., Loftin, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+cyclooxygenase-2+inhibition+with+celecoxib+decreases+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+mice.">Selective cyclooxygenase-2 inhibition with celecoxib decreases angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 1137-1143 (2006).</li><li>Uchida, H. A., Poduri, A., Subramanian, V., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urokinase-type+plasminogen+activator+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+augments+rupture+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms.">Urokinase-type plasminogen activator deficiency in bone marrow-derived cells augments rupture of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2845-2852 (2011).</li><li>Wang, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+increases+urokinase-type+plasminogen+activator+expression+and+induces+aneurysm+in+the+abdominal+aorta+of+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II increases urokinase-type plasminogen activator expression and induces aneurysm in the abdominal aorta of apolipoprotein E-deficient mice.</a> Am J Pathol. 159 (4), 1455-1464 (2001).</li><li>Bruemmer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II-accelerated+atherosclerosis+and+aneurysm+formation+is+attenuated+in+osteopontin-deficient+mice.">Angiotensin II-accelerated atherosclerosis and aneurysm formation is attenuated in osteopontin-deficient mice.</a> J Clin Invest. 112 (9), 1318-1331 (2003).</li><li>Gavrila, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+E+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+angiotensin+II-infused+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Vitamin E inhibits abdominal aortic aneurysm formation in angiotensin II-infused apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (8), 1671-1677 (2005).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgE+actions+on+CD4++T+cells,+mast+cells,+and+macrophages+participate+in+the+pathogenesis+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms.">IgE actions on CD4+ T cells, mast cells, and macrophages participate in the pathogenesis of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> EMBO Mol Med. 6 (7), 952-969 (2014).</li><li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase.">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li><li>Usui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammasome+activation+by+mitochondrial+oxidative+stress+in+macrophages+leads+to+the+development+of+angiotensin+II-induced+aortic+aneurysm.">Inflammasome activation by mitochondrial oxidative stress in macrophages leads to the development of angiotensin II-induced aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 127-136 (2015).</li><li>Mellak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+mobilizes+spleen+monocytes+to+promote+the+development+of+abdominal+aortic+aneurysm+in+apoe-/-+mice.">Angiotensin II mobilizes spleen monocytes to promote the development of abdominal aortic aneurysm in apoe-/- mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 378-388 (2015).</li><li>Krishna, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antagonist+of+thrombospondin-1+promotes+abdominal+aortic+aneurysm+progression+in+the+angiotensin+II-infused+apolipoprotein-E-deficient+mouse.">Peptide antagonist of thrombospondin-1 promotes abdominal aortic aneurysm progression in the angiotensin II-infused apolipoprotein-E-deficient mouse.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 389-398 (2015).</li><li>Norman, P. E., Curci, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+effects+of+tobacco+smoke+on+the+pathogenesis+of+aortic+aneurysm.">Understanding the effects of tobacco smoke on the pathogenesis of aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1473-1477 (2013).</li><li>Daugherty, A., Powell, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+highlights+of+ATVB:+aneurysms.">Recent highlights of ATVB: aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (4), 691-694 (2014).</li><li>Liu, J., Daugherty, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+and+abdominal+aortic+aneurysms:+an+update.">Angiotensin II and abdominal aortic aneurysms: an update.</a> Curr Pharm Design. , (2015).</li><li>Rateri, D. L., Howatt, D. A., Moorleghen, J. J., Charnigo, R., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+infusion+of+angiotensin+II+in+apoE(-/-)+mice+promotes+macrophage+recruitment+with+continued+expansion+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Prolonged infusion of angiotensin II in apoE(-/-) mice promotes macrophage recruitment with continued expansion of abdominal aortic aneurysm.</a> Am J Pathol. 179 (3), 1542-1548 (2011).</li><li>Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+dissection+precedes+formation+of+aneurysms+and+atherosclerosis+in+angiotensin+II-infused,+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (9), 1621-1626 (2003).</li><li>Daugherty, A., Cassis, L. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+pathologies+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms.">Complex pathologies of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 12 (8), 624-628 (2011).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D. L., Charo, I. F., Owens, A. P., Howatt, D. A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+infusion+promotes+ascending+aortic+aneurysms:+attenuation+by+CCR2+deficiency+in+apoE-/-+mice.">Angiotensin II infusion promotes ascending aortic aneurysms: attenuation by CCR2 deficiency in apoE-/- mice.</a> Clin Sci (Lond). 118 (11), 681-689 (2010).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell-specific+deficiency+of+Ang+II+type+1a+receptors+attenuates+Ang+II-induced+ascending+aortic+aneurysms+in+LDL+receptor-/-+mice).">Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptors attenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor-/- mice).</a> Circ Res. 108 (5), 574-581 (2011).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+endothelial+or+smooth+muscle+cell-specific+angiotensin+II+type+1a+receptors+does+not+influence+aortic+aneurysms+or+atherosclerosis+in+LDL+receptor+deficient+mice.">Depletion of endothelial or smooth muscle cell-specific angiotensin II type 1a receptors does not influence aortic aneurysms or atherosclerosis in LDL receptor deficient mice.</a> PLoS One. 7 (12), 10-1371 (2012).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+induces+region-specific+medial+disruption+during+evolution+of+ascending+aortic+aneurysms.">Angiotensin II induces region-specific medial disruption during evolution of ascending aortic aneurysms.</a> Am J Pathol. 184 (9), 2586-2595 (2014).</li><li>Davis, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cell+deletion+of+low-density+lipoprotein+receptor-related+protein+1+augments+angiotensin+II-induced+superior+mesenteric+arterial+and+ascending+aortic+aneurysms.">Smooth muscle cell deletion of low-density lipoprotein receptor-related protein 1 augments angiotensin II-induced superior mesenteric arterial and ascending aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 155-162 (2015).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+experimental+designs+for+atherosclerosis+studies+in+mice.">Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.</a> Methods. 36 (2), 129-138 (2005).</li><li>Henriques, T. A., Huang, J., D'Souza, S. S., Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orchidectomy,+but+not+ovariectomy,+regulates+angiotensin+II-induced+vascular+diseases+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Orchidectomy, but not ovariectomy, regulates angiotensin II-induced vascular diseases in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Endocrinology. 145 (8), 3866-3872 (2004).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+of+AT2+receptors+augments+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms+and+atherosclerosis.">Antagonism of AT2 receptors augments angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms and atherosclerosis.</a> Br J Pharmacol. 134 (4), 865-870 (2001).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+receptor-associated+protein+attenuates+angiotensin+II-induced+atherosclerosis+in+hypercholesterolemic+mice+without+influencing+abdominal+aortic+aneurysms.">Deficiency of receptor-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms.</a> Atherosclerosis. 220 (2), 375-380 (2011).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D., Lu, H., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording,+a+tail-cuff+method.">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> J Vis Exp. (27), e1291 (2009).</li></ol>

Bu makalenin yayınlanması Alzet ™ tarafından desteklenmektedir.

AngII subkutan teslim ozmotik pompalar farelerde aort anevrizması uyarılması için rutin bir yaklaşımdır. Birçok laboratuvarlarda elde edilen verilere dayanarak, bu AAAS 3,4 ve farelerde taas 22-26 hem çalışmak için güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntem olduğunu tutarlı bulgular olmuştur. Bu nedenle, bu fare modeli, insan aort anevrizması çeşitli özellikler özetlediği ve bu yıkıcı hastalıklar içine mekanistik anlayışlar sağlayan bir modeli olarak kabul edilir. Yaşlanma insanlarda AAA için bir risk faktörü olduğu da, sistematik olarak farelerde AngII kaynaklı AAA için çalışılmamıştır. 48 hafta 4,5,7 - Ancak, insidans ve AngII kaynaklı AAA şiddeti 8 yaşındayken farelerde benzer görünür. TAA oluşumunda belirgin yaşa bağlı farklılıklar gösterir yoktu 24 hafta 22-26, - Halen 8 yaşındayken farelerde AngII kaynaklı taas rapor sadece bir kaç çalışma vardır. Dişi fareler AngII 4,28 ile aşılanmış erkek farelere göre AAA çok daha düşük bir oranda bulunur. Bu AngII kaynaklı AAA sıklığı sırasıyla% 30&#39;dan daha az karşılık% 50&#39;den fazla olduğu normo-hiperkolesterolemik farelerde daha hiper çok daha yüksek olduğunu fazlalaştı. AngII infüzyonu sırasında hem normo ve hiperkolesterolemik farelerde - (% 30 yaklaşık 10) Ayrıca, aort rüptürü sıktır. 1000 ng / kg bir oranda AngII infüzyonu / dakika LDL reseptörü gibi hiperkolesterolemik fareler içine - / - fareler Batı diyet ya da apoliprotein (apoE) beslenen - / - fareler normal ya da Batı diyet ile beslenen, AAA maksimal etkiye sahiptir geliştirme 3,4,29. Bu infüzyon hızı Hiperkolesterolemik farelerde ilgi bir geni manipüle AAAS azaltmak için beklenen bir çalışma için en uygunudur. Hiperkolesterolemik farelerde bir manipülasyon AAAS artırmak için beklenen ise, 500 ng / kg / dakika veya 30 altında bir oranda AngII demlenmeye önerilir. AAA aksine, herhangi bir demo oradaerkek cinsiyet veya hiperkolesterolemi ve AngII kaynaklı taas 25 arasında nstrated ilişki. Ilgi konusu bir gen manipülasyonu TAA&#39;lar artırmak için beklenen, ancak, benzer şekilde AAA için biz AngII enfüzyon için 1000 ng / kg / dak daha düşük bir infüzyon hızı önerilir. Bu AngII kaynaklı aort anevrizmalarının bu insidans ve şiddeti bireysel farelerin arasında ve çalışmalar arasında farklılık bilmek de önemlidir. Fareler aort anevrizması geliştirmek yoksa, potansiyel bir ihtimal AngII başarıyla farelere teslim edilmemiş olabilir olmasıdır. AngII yüksek bir infüzyon hızının geçerli olabilmesi için, örneğin, 1000 ng / kg / dakika, kan basıncı ölçümü invaziv olmayan bir kuyruk ağzı yöntemi 31 kullanmadan önce ve AngII infüzyonla yapılması tavsiye edilmektedir. 1000 ng / kg bir oranda AngII infüzyon / dakika farelerinde sistolik kan basıncı artar. Ayrıca, plazma renin konsantrasyonları AngII r üzerinde olumsuz geribildirim beri AngII infüzyon sırasında veya fesih ölçülen olabilirenin salgı. Bu nedenle, AngII infüzyon plazma renin konsantrasyonlarında azalmalar yol açar. AngII ile aşılanmış bir fare hiçbir belirgin aort patolojileri, kan basıncı hiçbir artış ve plazma renin konsantrasyonuna hiçbir azalma varsa, AngII implante osmotik mini pompa sayesinde verimli bir şekilde teslim edilmediğini işaret eder. Biz çalışmamızda bu fareyi çıkarmadan öneriyoruz. Bazı fareler artmış sistolik kan baskılara rağmen aort anevrizması geliştirmek ve plazma renin konsantrasyonlarını azalma olmadığını dikkat etmek de önemlidir. Bu fareler kalmalıdır. Özet olarak, AngII infüzyon farelerde aort anevrizması uyarılması için ozmotik pompalar kullanılarak deri altından implantasyonu ile elde edilir. Bu yöntem, AAAS ve TAA&#39;lar hem incelemek için kullanılır belirlenen süreler için tanımlanmış bir oranda sürekli olarak AngII sunar.

Aort anevrizmaları ölüme yol açan genellikle rüptür portends ve aort kalıcı luminal genişleme gösterirler. Bu hastalık sırasıyla Abdominal aort anevrizmalarının (AAAs) ve torakal aort anevrizmalarının (TAA&#39;lar) olarak adlandırılır abdominal ve torakal aort bölgelerde, hem de oluşur. Nedeniyle moleküler mekanizmaları ve patofizyolojik süreçlerin eksik anlayış, aort anevrizmalarının iki tip genişleme veya delinmesine engel olabilir kanıtlanmış tıbbi tedavi yoktur. Hasta örneklerini edinme ve AAA mekanizmalarının tanımlanması odaklanarak, doğrudan insanlarda araştırma deneyleri yapmak zor olduğundan sık sık hayvan modellerinde yola çıkılarak olmuştur. Yaygın olarak kullanılan bir hayvan modeli, farelere anjiyotensin II (AngII) subkutan infüzyondur. Bu tür intra-aortik elastaz perfüzyon veya laparotomi 1,2 gerektiren kalsiyum klorür peri-aort uygulama, bu metho olarak farelerde, AAAS başlatılması için, diğer cerrahi yöntemlere göred vücut boşluğuna giriş gerektiren ve minimal cerrahi uzmanlık gerektiren 3,4 vermez. AAAS indüklemek için ozmotik pompalar aracılığıyla AngII deri altından infüzyon başlangıçta düşük yoğunluk lipoprotein (LDL) reseptörünün bildirilmiştir - / - fareler apoE daha sonra bir doymuş yağ bakımından zengin bir diyet 3 beslenen ve - / - fareler normal laboratuar diyetiyle 4 beslenir. Pek çok yeni çalışma AngII normolipidemik farelerde 5-7 AAAS indüklediğini göstermiştir. Beslerken AngII yaklaşımı AAAS neden ve bu model insan AAA gözlenen birçok özellik özetlediği bu yana moleküler mekanizmaları yanı sıra (örneğin, 5-15) potansiyel tedavi stratejileri geliştirilmesini araştırmak için uygulanmıştır. Örneğin, sigara, yaşlanma ve erkek cinsiyet gibi insan AAA risk faktörleri de farelerde 16,17 yılında AngII kaynaklı AAAS çoğaltmak. İnsanlarda AAA&#39;ların ile hiperkolesterolemi dernek açıklama gerektirir. Ancak, olmak vartutarlı en hiperkolesterolemi farelerde 18 AAAS AngII kaynaklı yükselmeye yol açtığını ortaya. Farelerde AngII kaynaklı AAA patolojileri ölçüde heterojen ve bunun sonucunda makrofaj infiltrasyonu, kolajen degradasyonu, trombotik oluşumu ve çözünürlük ve neovaskülarizasyon 19-21 ile karakterize edilir. İnsanlarda en sık AAA infrarenal aort konumu tersine, farelerde AAAs suprarenal aort bölgesinde meydana AngII kaynaklı. AngII kaynaklı AAA başka yerde özelliği transmural tromboz yol açan, transmural medial molası veriliyor. İnsanlarda AAA patolojik gelişim münhasıran nedeniyle erken evrelerde gelen anevrizmal dokuların eksikliği çalışılmamıştır çünkü transmural elastin kopma insanlarda meydana belirsizdir. Farelere AngII infüzyon da ağırlıklı olarak en yaygın bölge insanlarda taas için çıkan aorta ile sınırlıdır torakal aort bölgenin derin genişlemesine yol açar <s&gt; 19,22-26 kadar. AngII kaynaklı AAA benzer TAA&#39;lar insan taas 25 birçok özellik özetlemek AngII infüzyon sırasında uyarılan. Bununla birlikte, AngII kaynaklı AAA aksine, AngII kaynaklı TAA&#39;lar hiperkolesterolemi ile bağlantılı değildir ve cinsiyet farkları yoktur. Farelere deri altı AngII infüzyon genel amacı patolojik özellikleri ve AAA ve taas moleküler mekanizmaları incelemektir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="711">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Angiotensin II</td>
			<td>Bachem</td>
			<td>H-1705</td>
			<td>compound used to induce aortic aneurysms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alzet Osmotic Pumps</td>
			<td>DURECT Corporation</td>
			<td>Alzet Model 2004</td>
			<td>feasible for 28-day infusion in mice weighed &#62; 20 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturated fat-enriched diet</td>
			<td>Harlan Teklad</td>
			<td>TD.88137</td>
			<td>42% calories/calories to stimulate hypercholesterolemia in LDL receptor -/- mice</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subcutaneous angiotensin ii infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals. This article introduces a standard protocol used to induce aortic aneurysms via subcutaneous infusion of angiotensin II (AngII) from implanted osmotic pumps. This protocol includes calculation of AngII amount and dissolution, osmotic pump filling, implantation of osmotic pumps subcutaneously, observation after pump implantation, and harvest of aortas to visualize aortic aneurysms in mice. Subcutaneous infusion of AngII through osmotic pumps following this protocol is a reliable and reproducible technique to induce both abdominal and thoracic aortic aneurysms in mice. Infusion durations range from a few days to several months based on the purpose of the study. AngII 1,000 ng/kg/min is sufficient to provide maximal effects on abdominal aortic aneurysmal formation in male hypercholesterolemic mouse models such as apolipoprotein E deficient or low-density lipoprotein receptor deficient mice. Incidence of abdominal aortic aneurysms induced by AngII infusion via osmotic pumps is 5 - 10 times lower in female hypercholesterolemic mice and also lower in both genders of normocholesterolemic mice. In contrast, AngII-induced thoracic aortic aneurysms in mice are not hypercholesterolemia or gender-dependent. Importantly, multiple features of this mouse model recapitulate those of human aortic aneurysms.

4 erkek LDL reseptörü - / - Protokol bölümünde açıklanan farenin AngII infüzyonu 4 hafta sonra kurban edilmiştir. Aort, hasat temizlenmiş ve aort dilatas- görselleştirmek için görüntülenmiştir. (Şekil 3A AAAs), artan bölgenin genişleme (TAA&#39;lar Şekil 3B) veya her iki bölgenin genişleme (AAA ve TAA&#39;lar hem varlığı, Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, aort böbreküstü bölgenin genişleme dahil olmak üzere birçok farklı özelliklere sahip Şekil 3C), morfoloji ise tek fare) Şekil 3D (fena halde normaldi. Şekil 3A&#39;da kırmızı çizgi ile gösterildiği gibi abdominal aorta dilatasyonu, böbrek üstü bölgede ex vivo maksimum genişliği ölçülerek belirlenir. Şekil 4 &#39;de gösterildiği gibi aort dilatasyonu artan ölçmek için, aort kesilerek açılır ve tutturulmuş edildi. Intimal yüzey alanı th çevrili çıkan aort bölgesinde (alanında ölçülmüştürŞekil 4A) e kırmızı çizgileri taas ölçmek için. Cetvel iki Şekiller 3 ve 4 &#39;de gösterildiği gibi, ölçümleri standardize etmek için her resim dahil edilmiştir. <img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig1.jpg" /> . Bir ana gövde ve bir akış moderatör: doldurulmuş osmotik pompa Şekil 1. Temsilcisi görüntü Her pompa iki ayrı bölümden oluşmaktadır. AngII Pompa gövdesini doldurduktan sonra, akış moderatör pompası mühür eklenir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53191/53191fig2.jpg" /> Pompa implantasyon cerrahi Şekil 2. İşlem (A) Fare izofluran ve oksijen salan sürekli olarak, bir burun hunisi olan bir laminer başlık yerleştirilir.; (B) düz bir hemostat subkutan tünel yapmak için cilt kesisi içine yerleştirilir; (C) Pompa sokulur<html> cilt kesisi nazikçe; (D) cilt kesi pompa yerleştirilmesinden sonra zımbalanır. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53191/53191fig3.jpg" /> Ile aşılanmış farelerden alınan Şekil 3. Aort görüntü (ex vivo) AngII AngII 1000 ng / kg / dak bir erkek LDL reseptörü infüze edildi -. / - 28 gün süre ile farelerin. (A) AAAs trombozu eşliğinde; Kırmızı çizgi (2.05 mm) böbreküstü bölgede maksimal aort genişliği ölçüsünü gösterir. Fena halde normal bir abdominal aort ile aort dilatasyon (TAA) Artan (B); (C) Artan ve böbreküstü aort bölgelerinde (TAA&#39;lar ve AAAs) hem de derin dilatasyon; (D) artan veya böbrek üstü aort bölge ya hiçbir belirgin dilatasyon ile fena halde normal bir aort. 4.jpg &quot;/&gt; Şekil AngII AngII 1000 ng / kg / dk erkek LDL reseptörü infüze edildi ile aşılanmış farelerin torakal aort bölgelerin 4. Tu yüz görüntüleri - 28 gün boyunca farelerin -. /. Kırmızı çizgi ile belirtilen yüzey alanı aortik arkın kısmı dahil asendan aort bölgeyi temsil eder. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 1 </td><td colspan="2"> Doz gerekli </td><td></td><td> 1000 </td><td colspan="2"> ng / kg / dakika </td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td colspan="3"> Vücut ağırlığını (büyük fare) Başlangıç </td><td> 24.8 </td><td> g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td colspan="3"> Toplam tahmini vücut ağırlık kazancı </td><td> 1 </td><td> g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 </td><td> Pompalama hızı </td><td></td><td></td><td> 0.25 </td><td> ul / saat </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td colspan="2"> NuFarelerin mber </td><td></td><td> 4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td colspan="2"> Hayvan için doz saatte </td><td></td><td> 1518 </td><td> ng </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> Kons gerekli </td><td></td><td></td><td> 6072 </td><td> ng / | il </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td colspan="2"> 300 ul çözüm için </td><td></td><td> 1.82 </td><td colspan="2"> mg / 300 ul </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"> ÇÖZÜM GEREKLİ </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td colspan="2"> Toplam AngII (mg) </td><td></td><td> 7.3 </td><td> mg </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 </td><td colspan="2"> Tuzlu su içinde çözülmüş ve# 160; </td><td></td><td> 1200 </td><td> ul </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mouse </td><td> Vücut ağırlığı </td><td> Seyreltme faktörü </td><td colspan="2"> Hacim (ul) </td><td colspan="2"> Pompa Ağırlık (g) </td><td> Dolgulu Oran </td></tr><tr><td> # </td><td> (g) </td><td></td><td> AngII </td><td> Tuzlu </td><td> Boş </td><td> Dolu </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296,4 </td><td> 3.6 </td><td> 1,1443 </td><td> 1,3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278,2 </td><td> 21.8 </td><td> 1,1677 </td><td> 1,4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263,7 </td><td> 36.3 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="7"> Seyreltme faktörü = en büyük fare fare / vücut ağırlığı, vücut ağırlığı </td><td></td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Mouse </td><td> Vücut ağırlığı </td><td> Seyreltme faktörü </td><td colspan="2"> Hacim (ul) </td><td colspan="2"> Pompa Ağırlık (g) </td><td> Dolgulu Oran </td></tr><tr><td> # </td><td> (g) </td><td></td><td> AngII </td><td> Tuzlu </td><td> Boş </td><td> Dolu </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296,4 </td><td> 3.6 </td><td> 1,1443 </td><td> 1,3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278,2 </td><td> 21.8 </td><td> 1,1677 </td><td> 1,4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263,7 </td><td> 36.3 </td><td> 1,1438 </td><td> 1,3904 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: osmotik pompalar aracılığıyla 28 günlük infüzyon için hesaplama.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Ozmotik pompalar deri altından implantasyonu bileşiklerinin uzun süreli ve tutarlı bir teslimat için uygun bir yaklaşım sağlar. Bu yaklaşım, farelerde abdominal ve torakal aort anevrizması, hem incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Ozmotik kullanarak Subkutan Anjiotensin II İnfüzyon Farelerde İndükler Aort anevrizmaları Pompalar

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

subcutaneous-angiotensin-ii-infusion-using-osmotic-pumps-induces

Research

JoVE Journal

Medicine

36.7K Görüntüleme.  University of Kentucky.  Ozmotik pompalar deri altından implantasyonu bileşiklerinin uzun süreli ve tutarlı bir teslimat için uygun bir yaklaşım sağlar. Bu yaklaşım, farelerde abdominal ve torakal aort anevrizması, hem incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. 

Video: Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

Damar Hastalığı Çalışmaları Farelerde Ortotopik Aort Nakli

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Tıp

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound and aortic blood pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is raised then lowered incrementally by intravenous infusion of vasoactive drugs phenylephrine and sodium nitroprusside. Aortic diameter is measured for each pressure step to characterize the pressure-diameter relationship of the ascending aorta. Stiffness indices derived from the pressure-diameter relationship can be calculated from the data collected. Calculation of arterial compliance is described in this protocol.
This technique can be used to investigate mechanisms underlying increased aortic stiffness associated with cardiovascular disease and aging. The technique produces a physiologically relevant measure of stiffness compared to ex vivo approaches because physiological influences on aortic stiffness are incorporated in the measurement. The primary limitation of this technique is the measurement error introduced from the movement of the aorta during the cardiac cycle. This motion can be compensated by adjusting the location of the probe with the aortic movement as well as making multiple measurements of the aortic pressure-diameter relationship and expanding the experimental group size.

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We describe a technique for measuring aortic stiffness from its pressure-diameter relationship in vivo in mice. Aortic diameter is recorded by ultrasound and aortic pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is changed incrementally and the resulting diameter is measured.

Artan Aort Katılığa Ölçme<em&gt; İn Vivo</em&gt; Ultrason Kullanımı Farelerde

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound ...

Neurodegeneration in an Animal Model of Chronic Amyloid-beta Oligomer Infusion Is Counteracted by Antibody Treatment Infused with Osmotic Pumps

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It is well established that synapse loss and ensuing neurodegeneration are the best predictors for memory impairments in AD. Latest studies have emphasized the neurotoxic role of soluble amyloid-beta oligomers (A&#946;o) that begin to accumulate in the human brain approximately 10 to 15 yr before the clinical symptoms become apparent. Many reports indicate that soluble A&#946;o correlate with memory deficits in AD models and humans. The A&#946;o-induced neurodegeneration observed in neuronal and brain slice cultures has been more challenging to reproduce in many animal models. The model of repeated A&#946;o infusions shown here overcome this issue and allow addressing two key domains for developing new disease modifying therapies: identify biological markers to diagnose early AD, and determine the molecular mechanisms underpinning A&#946;o-induced memory deficits at the onset of AD. Since soluble A&#946;o aggregate relatively fast into insoluble A&#946; fibrils that correlate poorly with the clinical state of patients, soluble A&#946;o are prepared freshly and injected once per day during six days to produce marked cell death in the hippocampus. We used cannula specially design for simultaneous infusions of A&#946;o and continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps. This innovative in vivo method can now be used in preclinical studies to validate the efficiency of new AD therapies that might prevent the deposition and neurotoxicity of A&#946;o in pre-dementia patients.

To study the effects of A&#946;o in vivo, we developed a model based on repeated hippocampal infusions of soluble A&#946;o coupled with continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps to counteract the neurotoxic effect of A&#946;o.

Kronik Amiloid beta Oligomer İnfüzyon bir hayvan Modelinde Nörodejenerasyon Osmotik Pompalar ile Antikor Tedavisi infüzyon ile giderilir

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

Farelerde Minimal İnvaziv Enine Aort Konstrüksiyon

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to perform a partial thoracotomy to visualize the transverse aortic arch. However, the surgical trauma caused by the thoracotomy in open-chest models changes the respiratory physiology as the ribs are dissected and left unattached after chest closure. To prevent this, we established a minimally invasive, closed chest approach via lateral thoracotomy. Herein we approach the aortic arch via the 2nd intercostal space without entering the chest cavities, leaving the mouse with a less traumatic injury to recover from. We perform this operation using standard laboratory settings for open chest TAC procedures with equal survival rates. Apart from maintaining physiological breathing patterns due to the closed chest approach, the mice seem to benefit by showing rapid recovery, as the less invasive technique appears to facilitate a fast healing process and to reduce immune response after trauma.

Here, we present a protocol of Transverse Aortic constriction (TAC) via a lateral thoracotomy. This technique is a minimally invasive, closed chest surgical procedure aiming to simulate pressure overload and heart failure in mice utilizing standard TAC laboratory settings.

Transvers aort daralma farelerde ikna etmek için kapalı-göğüs manken

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Improved Registration of 3D CT Angiography with X-ray Fluoroscopy for Image Fusion During Transcatheter Aortic Valve Implantation

The fusion of 3D anatomical models derived from high-fidelity pre-interventional computed tomography angiography (CTA), and x-ray (XR) fluoroscopy to facilitate anatomical guidance is of huge interest for complex cardiac interventions like TAVI procedures with cerebral protection. Co-registration of CTA and XR has been introduced either based on additional intraoperative non-/contrast-enhanced cone-beam computed tomography (CBCT) or two separate aortograms. With the related increase of radiation exposure and/or contrast agent (CA) dose, a potential additional risk for the patient is introduced. Here, we propose a modified co-registration approach making use of arteriograms of the iliofemoral arteries, routinely performed during the femoral puncture and sheath introduction. On-the-fly refinement of the co-registration during the on-going procedure enables accurate co-registration without any additional angiograms, thus reducing CA, XR dose and procedure time, while simultaneously improving operator confidence and procedure safety.

The aim of this study was to improve the co-registration for image fusion (IF) of pre-interventional CT data with real-time x-ray (XR) fluoroscopy during transfemoral transcatheter aortic valve implantation (TAVI).

3D BT anjiyografi ile x-ışını floroskop kayıt Transcatheter aort kapak implantasyonu sırasında görüntü Fusion için geliştirilmiş

The fusion of 3D anatomical models derived from high-fidelity pre-interventional computed tomography angiography (CTA), and x-ray (XR) fluoroscopy to ...

Electrocardiogram Recordings in Anesthetized Mice using Lead II

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and pharmacological information regarding the electrocardiogram. However, making electrocardiogram measurements in small animals in vivo, such as mice, has been challenging. To this end, we used an electrocardiogram recording method in anesthetized mice with many advantages: it is a technically simple procedure, is inexpensive, has short measuring time, and is affordable, even in young mice. Despite the limitations with using anesthesia, comparisons between control and experimental groups can be performed with enhanced sensitivity. We treated mice with agonists and antagonists of the autonomic nervous system to determine the validity of this protocol and compared our results with previous reports. Our ECG protocol detected increased heart rates and QTc intervals on treatment with atropine, decreased heart rates and QTc intervals after carbachol treatment, and higher heart rates and QTc intervals with isoprenaline but did not note any change in ECG parameters on administration of propranolol. These results are supported by previous reports, confirming the reliability of this ECG protocol. Thus, this method can be used as a screening approach to making ECG measurements that otherwise would not be attempted due to high cost and technical difficulties.

We present an ECG protocol that is technically easy, inexpensive, fast, and affordable in small mice, and can be performed with enhanced sensitivity. We suggest this method as a screening approach for studying pharmacological agents, genetic modifications, and disease models in mice.

Kurşun II kullanarak Anestezili Farelerde Elektrokardiyogram Kayıtları

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and ...

The Intra-Aortic Balloon Pump

Cardiogenic shock remains one of the most challenging clinical syndromes in modern medicine. Mechanical support is being increasingly used in the management of cardiogenic shock. Intra-aortic balloon pump (IABP) is one of the earliest and most widely used types of mechanical circulatory support. The device acts by external counterpulsation and uses systolic unloading and diastolic augmentation of aortic pressure to improve hemodynamics. Although IABP provides less hemodynamic support when compared with newer mechanical circulatory support devices, it can still be the mechanical support device of choice in appropriate situations because of its relative simplicity of insertion and removal, need for smaller size vascular access and better safety profile. In this review, we discuss the equipment, procedural and technical aspects, hemodynamic effects, indications, evidence, current status and recent advances in the use of IABP in cardiogenic shock.

We describe the steps for the percutaneous implantation of the intra-aortic balloon pump (IABP), a mechanical circulatory support device. It acts by counterpulsation, inflating at the onset of diastole, augmenting diastolic aortic pressure and improving coronary blood flow and systemic perfusion, and deflating before systole, reducing left ventricular afterload.

Aort İçi Balon Pompası

Cardiogenic shock remains one of the most challenging clinical syndromes in modern medicine. Mechanical support is being increasingly used in the ...

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the kidney capsule in most rodent preclinical islet transplantation studies. This model is commonly used because murine intrahepatic islet transplantation is technically challenging, and a high percentage of mice could die from surgical complications, especially bleeding from the injection site post-transplantation. In this study, two procedures that can minimize the incidence of post-infusion portal vein bleeding are demonstrated. The first method applies an absorbable hemostatic gelatin sponge to the injection site, and the second method involves penetrating the islet injection needle through the fat tissue first and then into the portal vein by using the fat tissue as a physical barrier to stop bleeding. Both methods could effectively prevent bleeding-induced mouse death. The whole liver section showing islet distribution and evidence of islet thrombosis post-transplantation, a typical feature for intrahepatic islet transplantation, were presented. These improved protocols refine the intrahepatic islet transplantation procedures and may help laboratories set up the procedure to study islet survival and function in pre-clinical settings.

Here we present refined surgical procedures on successfully performing intraportal islet transplantation, a clinically relevant but technically challenging surgical procedure, in mice.

Farelerde İntrahepatik Adacık Transplantasyonu Sırasında İnfüzyon Sonrası Portal Ven Kanamasının En Aza İndirgenmesi

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...