Halletmemgereken Frede ve Susanne Schulz onların teknik destek için teşekkür ederiz. Bu çalışma hiçbir fon aldı.

Bu iletişim kuralı için hayvan deney LANUV Recklinghausen (#84-02.04.2016.A374) Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Genel olarak, bu yordam yetişkin fareler üzerinde gerçekleştirilir > 10 hafta-in yaş. Ancak, genç hayvanlar üzerinde de bu ameliyatı gerçekleştirmek mümkündür. Cerrahi alet kullanmadan önce sterilize ve aseptik koşullar altında gerçekleştirilecek tüm adımlardır.
1. anestezi ve entübasyon indüksiyon
<ol><li>Buprenorfin 0,1 µg/g vücut ağırlığı intraperitoneally ağrı için enjekte. 0.1 mg/kg buprenorfin her 8 h mayi enjeksiyonlari önümüzdeki üç gün ameliyat sonrası için yineleyin.</li>
	<li>İndüksiyon için fareyi isoflurane 3.0 Vol % 1 L/min bir oksijen akışı ile ayarlayın Buharlaştırıcı bağlandığı bir anestezi indüksiyon kutuya yerleştirin.</li>
	<li>Derin narkoz bir dokunsal uyarana inducing tarafından emin olun. Not: Artış Vol % isoflurane ilâ %5, anestezi indüksiyon başarısız olur veya narkoz yeterince derin değil.</li>
	<li>Refleks devamsızlık emin olmak için fare kuyruk tutam. Refleksleri tam olmaması durumunda, fareyi en iyi havalandırma kurulum için tartmak (bkz. 1,12).</li>
	<li>37 ° c prosedürü boyunca vücut ısısını korumak için bir ısı kontrollü ameliyat masasına için fareyi hareket ettirin.</li>
	<li>Fare burun narkoz korumak için anestezi indüksiyon kutuya bağlı plastik bir koni yerleştirin.</li>
	<li>Fare üst kesici dişler naylon dikiş ile düzeltmek. Bir yapışkan bant ile ekstremitelerde bağlayacaktın.</li>
	<li>Yeterli bir narkoz yeniden sağlamak için pens ucu ile arka pençe üzerinde basınç uygulayın. Bir geri çekilme, yokluğunda refleks aşağıdaki adımlara devam edin. Not: anestezi indüksiyon başarısız olur veya narkoz yeterince derin değil isoflurane birim % artırmak ve para çekme refleks olmaması için bekleyin.</li>
	<li>Steril oftalmik yağ kuruma anestezi altında önlemek için kornealar yerleştirin.</li>
	<li>Rektal travması rektal sonda yağlayın. Çekirdek ısısı 37 ° c emin olmak için bir rektal sıcaklık probu takın</li>
	<li>Boğaz ve üreticinin yönergelerine göre depilatory krema ile üst göğüs depilate. Krem 1 dakika sonra silin. Gerekiyorsa, başarılı kadar bu adımı yineleyin. Not: kanama durumunda pamuk uçlu temizleme bezi kullanın.</li>
	<li>% 70 etanol ile depilated alanı temizleyin. O zaman povidone-iyot yerel cilt dezenfeksiyon 3 kez ve en az 3 dakika için geçerli.</li>
	<li>Fizyolojik parametreler vantilatör ayarlarını. Solunum hızı 150/dak ve deprem birimleri için 8-10 µL/g vücut ağırlığı (BW) için ayarlayın.</li>
	<li>Steril eldiven yenisini koymak. Cerrahi mikroskop altında fare yerleştirin ve steril bir delikli örtü fareyi getirin.</li>
	<li>Derinin orta hat 3 mm çene kemiğinde aşağı 2nd kaburga altında deşmek. Orta hat ve bağ dokusu submandibular bezinin tanımlar. O zaman açılı juatify forseps yavaşça bezi, orta hat açık açık iki Forseps ile bölmek ve trakeal kas incelemek için kullanın.</li>
	<li>Trakea yavaşça para trakeal kasları apart açık açık juatify Forseps ile çekerek hazırlayın.</li>
	<li>Boğaz daha kolay entübasyon koşulları için düzeltmek ve yavaşça nefes borusu içinde entübasyon kanülü (OD 1.2 mm) eklemek için Forseps ile dil üzerinde çek. Entübasyon tüpü trake içinde doğrudan görselleştirme ve uygun göğüs hareketi için denetleyerek doğrulayın.</li>
	<li>İsoflurane konsantrasyonu % 2 isoflurane 1.0 L/dak ve %100 O2bir akış ile entübasyon sonra ayarlayın. Not: solunum hareketleri durmayın veya fareler başlamak dokunaklı, ilk solunum hızı 180/dk'ya kadar artırın. Fare nefes kendiliğinden duruncaya kadar isoflurane konsantrasyon gerekirse, %3.5 ikincil olarak artırmak. Sızdırmazlık veya yetersiz dolgu Buharlaştırıcı en sık karşılaşılan sorunlar değerlendirin.</li>
	<li>Alternatif olarak, aşağıdaki alt adımlarda önerilen entübasyon gerçekleştirin.<ol>
<li>Bir tabloda bir 60 ° açıyla fareyi getirin.</li>
		<li>Fare yapışkan bant ile ekstremite bağlamak ve baş yaslanmak.</li>
		<li>Soğuk ışık kaynağı doğrudan deri gırtlak yukarıda yerleştirin.</li>
		<li>Dil Forseps ile ses telleri görselleştirmek için yavaşça çekin.</li>
		<li>Ses telleri bir IV-kanül (24 G) bir plastik tüp takın ve plastik tüp havalandırma ayarları takın.</li>
		<li>Solunum entübasyon synchrone göğüs hareketleri tarafından onaylamak için kanül bağlayın. Not: solunum hareketleri durmayın veya fareler başlamak dokunaklı, ilk solunum hızı 180 dk başına kadar artırın. İkincil olarak fare nefes kendiliğinden duruncaya kadar gerekirse, isoflurane konsantrasyonu % 3,5 artırın. Sızdırmazlık veya yetersiz dolgu Buharlaştırıcı en olası sorunlar değerlendirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. ameliyat öncesi Doppler ölçüm
<ol><li>Her iki Karotid arter Trakea yatıyordu hangi adjunct yavaşça bağ dokusu ayrı Forseps ile çekerek hazırlayın.</li>
	<li>Sağ ve sol Karotis arter 45 ° den küçük bir açı, 20 MHz Doppler sonda bazı steril ultrason jeli ile ucu yerleştirin.</li>
	<li>Yavaş yavaş taşımak için lateral ve medial Doppler sinyali bulmak ve sinyali en iyi duruma getirmek için prob prob döndürün.</li>
	<li>Doppler yazılım akım hızları sağ ve sol ortak Karotid arter bir bilgisayarda depolamak ve görüntülemek için kullanın.</li>
</ol>3. Torakotomi
<ol><li>Steril Eldivenler, tek tek her fare için birtakım cerrahi sitesi enfeksiyonları önlemek için kullanın.</li>
	<li>2nd interkostal alan bir makas ile aşağı cilt kesi genişletin.</li>
	<li>2nd interkostal alan görsel olarak kaburga sayarak tanımlamak ve sonra açık açık bu alanı juatify Forseps ile nüfuz. Not: 1st kaburga köprücük kemiği altında bulunur ve 2nd interkostal alan ilk görünür kaburga (Yani 2nd kaburga) ve 3rd kaburga arasında buldum, çünkü bu nedenle görünür değil.</li>
	<li>2nd interkostal boşluk forseps ipuçları yardımı ile açın ve traktör yerleştirin.</li>
	<li>Timus açık bir görüntülemek için ameliyat masasına bağlı bir lastik bant ekartör ayarlayın.</li>
	<li>Kanama durumunda pamuk ipucu kullanın ve yüzeysel damarları 2 min için tuşuna basın.</li>
</ol>4. bantlama transvers aort
<ol><li>Orta hat ve bağ dokusu tanımlamak için % 200 için büyütme oranını ayarlamak. O zaman açılı forseps yavaşça timus bölmek için kullanın. Aort açıkça görülebilir kadar yağ dokusunda kaldırın.</li>
	<li>Bir tünel ile bağlama forseps (bkz. şekil 1) brachiocephalic arter ile sol ortak Karotid arter arasındaki transvers aort altında açılı hazırlayın. 6.0 dikiş sonu iyi forseps yardımıyla tutun ve aort altında iş parçacığı geçmek.</li>
	<li>Arch diğer taraftan ikinci Forseps ile iplik al.</li>
	<li>İğne olarak kullanmak için bir 27 G 3 mm uzun parça uzunluğu kesilmiş bir TAC-ligasyonu için boşluk ekleyici 19-25 g vücut ağırlığı ve 26 G iğne fareler için ayırıcı olarak Tartım fareler için > 25 g BW.</li>
	<li>Dikkatle spacer transvers aort paralel yer.</li>
	<li>Çıta üzerinde gevşek bir çift düğüm hazırlamak ve spacer paralel aortaya en iyi yerleşim sağlamak. İlk atış kravat ve hızlı bir şekilde ikinci bir aykırı atmak gerçekleştirmek. Rondela derhal kaldırın.</li>
	<li>Sham fare kontrolü için yapmak, aort ligasyonu atlama aynı iletişim kuralını uygulayın.</li>
	<li>2nd interkostal boşluk 6.0 polipropilen sütür ile kapatın. Ne zaman birleştirilmesi (ligasyon) hastalığının damarları özellikle dikkat.</li>
	<li>Deri 6.0 polipropilen sütür bir sürekli dikiş deseni kullanarak dikiş.</li>
</ol>5. onay transvers aort başarılı ligasyonu
<ol><li>Olarak bölümde 2 45 ° açıyla boynun her iki tarafında bir 20 MHz Doppler sondası yerleştirin.</li>
	<li>Her tarafta akım hızları belge. Not: Başarılı bir TAC Şekil 2' de gösterildiği gibi Doppler akım hızı tarafından doğrulanabilir. 4-10 sağ ve sol Karotis arter genellikle arasında bir akış hızı oranı yeterli TAC garanti eder (bkz. Şekil 2).</li>
</ol>6. kalp hasat
<ol><li>Narkoz adımları 1.2 göre neden. ve 1.3.</li>
	<li>Fareyi bir ötenazi odasında getirin ve birim/dakika % 10-30'u yerinden için karbon dioksit akış hızı ayarlayın.</li>
	<li>Fareyi bir ameliyat masasında bağlayacaktın. Daha fazla çözümleme için bir kanül ile inferior vena kava makas ve hasat kan ile karın açın.</li>
	<li>Diyafram ve sternal kemik güçlü makasla kesmek ve kalp kaldırın.</li>
	<li>Tüm arter ve bağ dokusu kalp ağırlığında önce çıkarın.</li>
	<li>Sağ ventrikül ve sol ventrikül septum ayırın ve her iki örnekleri tartın.</li>
	<li>Her iki doku örnekleri sıvı azot dondur.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research.">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods Mol Biol Clifton NJ. 573, 115-137 (2009).</li><li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cardiac+surgery:+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies.">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16 (3), 349-360 (2004).</li><li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy.">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (18), 8277-8281 (1991).</li><li>deAlmeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transverse+Aortic+Constriction+in+Mice.">Transverse Aortic Constriction in Mice.</a> J Vis Exp JoVE. (38), (2010).</li><li>Grossman, W., Jones, D., McLaurin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wall+stress+and+patterns+of+hypertrophy+in+the+human+left+ventricle.">Wall stress and patterns of hypertrophy in the human left ventricle.</a> J Clin Invest. 56 (1), 56-64 (1975).</li><li>Hartley, C. J., Reddy, A. K., Madala, S., Michael, L. H., Entman, M. L., Taffet, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy.">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med Biol. 34 (6), 892-901 (2008).</li><li>Reddy, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulsed+Doppler+signal+processing+for+use+in+mice:+applications.">Pulsed Doppler signal processing for use in mice: applications.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 52 (10), 1771-1783 (2005).</li><li>Shioura, K. M., Geenen, D. L., Goldspink, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cardiac+function+with+the+pressure-volume+conductance+system+following+myocardial+infarction+in+mice.">Assessment of cardiac function with the pressure-volume conductance system following myocardial infarction in mice.</a> Am J Physiol - Heart Circ Physiol. 293 (5), H2870-H2877 (2007).</li><li>Zhang, B., Davis, J. P., Ziolo, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+Catheterization+in+Mice+to+Measure+the+Pressure+Volume+Relationship:+Investigating+the+Bowditch+Effect.">Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect.</a> JoVE J Vis Exp. (100), e52618 (2015).</li><li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+response+to+pressure+overload+in+129S1/SvImJ+and+C57BL/6J+mice:+temporal-+and+background-dependent+development+of+concentric+left+ventricular+hypertrophy.">Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 292 (5), H2119-H2130 (2007).</li><li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+models+of+heart+failure:+development+of+novel+therapies,+past+and+present.">Small animal models of heart failure: development of novel therapies, past and present.</a> Circ Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li><li>Zaw, A. M., Williams, C. M., Law, H. K. W., Chow, B. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+Invasive+Transverse+Aortic+Constriction+in+Mice.">Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice.</a> J Vis Exp JoVE. (121), (2017).</li><li>Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+Minimally+Invasive+Transverse+Aortic+Constriction+in+Mice+for+Induction+of+Left+Ventricular+Hypertrophy.">Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy.</a> J Vis Exp. (127), (2017).</li><li>Kim, S. -. C., Boehm, O., Meyer, R., Hoeft, A., Kn&#252;fermann, P., Baumgarten, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Murine+Closed-chest+Model+of+Myocardial+Ischemia+and+Reperfusion.">A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion.</a> J Vis Exp JoVE. (65), (2012).</li><li>Veldhuizen, R. A., Slutsky, A. S., Joseph, M., McCaig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+mechanical+ventilation+of+isolated+mouse+lungs+on+surfactant+and+inflammatory+cytokines.">Effects of mechanical ventilation of isolated mouse lungs on surfactant and inflammatory cytokines.</a> Eur Respir J. 17 (3), 488-494 (2001).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Hipertansiyon TAC nedeniyle hızla başlayan klinik hipertrofisi aortik stenoz veya Hipertansiyon neden farklıdır. Yine de, kalp yetmezliği ikna etmek için küçük hayvan modellerinin kullanımı pek çok avantajı vardır ve bu nedenle, birçok müfettişler11tarafından seçilir. Bu kapalı göğüs model cerrahi tekniği fareler4transvers aort daralma ikna etmek için zaten varolan modeller geliştirir.
Aort altında geçiş için en önemli adımdır. Aort çevresinde çok sıkı dikiş böbrekler gibi önemli organlara kan akımı ölümcül bir azalmasına neden olabilir. Hagen-Poiseuille Kanunu göre esas olarak RADIUS üzerinde bağımlı akışıdır. Bu nedenle, bazı ağırlık adapte çubukları bizim iletişim kuralında kullanılmıştır. Bu yordamı bu model daha evrensel olarak uygulanabilir, özellikle açısından çok genç ya da yaşlı fareler, bireysel deneysel ayarına bağlı olarak yapar.
Cerrahi travma kendisi bir bağışıklık yanıtı neden olmaktadır ve önlemek için mutlak bir minimum azaltılmalıdır etkileri deforme etme. Hızlı kurtarma ve yüksek sağkalım oranları özellikle karmaşık hayvan modellerinde, zorunludur. Tarihsel olarak, insan hastalarda Torakotomi, göğüs kafesi farelerde TAC ameliyattan sonra geri yüklenmez. Bu nedenle, restitüsyon fizyolojik solunum hareketleri için ücretsiz yüzen kaburga, göğüs kemiği için yeniden bağlanmaz nedeniyle sınırlıdır.
Minimal invaziv tekniklerdir TAC için de kullanılmış yanında diğer12,13. Her iki model bir ensizyon ve bir üst kısmi yöntemdir ile aort ulaşılır. Her iki model açık göğüs modeller daha az invaziv olmakla birlikte, cerrahlar kaburga veya aort ulaşmak için göğüs kemiği bölümlerini kaldırmanız gerekir. İnanıyoruz ki bütün göğüs kafesi AIDS daha hızlı iyileşme fizyolojisi bakımı. Bu nedenle, bu protokol zaten varolan iletişim kuralları geliştirir ve cerrahi travma yardımcı olur en aza indirmek.
Bazen açıklanan4,14, olduğu gibi daha apikal cerrahi erişim nedeniyle, ameliyat sonrası bir hiperenflasyon akciğer atelectasis veya pneumothoraces, önlenmesi için gerekli değildir. Bu erişim Ekspiratuar tüp sıkma tarafından varolan modellerinde atelectasis açmak için indüklenen akciğerlerinin bir barotrauma engeller. Bu iletişim kuralı bir bireyselleştirilmiş fizyolojik havalandırma strateji de içerir. O bir tek tek adapte havalandırma barotrauma gibi komplikasyonlar Ventilatör ilişkili azaltmada yardımcı tahminde için cazip olduğunu. Bir ağırlık adapte havalandırma strateji sistemik sitokin üretim üzerindeki etkileri havalandırma tarafından15önlemek için kullanıldı.
Sonuç olarak, bu tekniklerin farelerde kalp hipertrofisi inducing bir alternatif ve geliştirilmiş modeli temsil eder.
Torakotomi kaçınarak travma minimize rağmen iltihap azalma ile ilgili olarak üstün etkisi Bu yayında gösterilmez. Ne yazık ki, hayvanları koruma tarafından belirlenen sınırlamalar bize bu minimal invaziv model yıl için zaten kurulduktan çünkü açık göğüs TAC karşılaştırma için minimal invaziv TAC ile paralel olarak gerçekleştirmek izin vermedi. Bu nedenle, bu ifadeler grubumuza önceki deneyimlerine dayanarak.

Fare modelleri genellikle insan hastalıkları1taklit etmek için kullanılır. Transvers aort daralma (TAC) basınç aşırı ikna etmek için kullanılır ve sol ventrikül pituiter2. Açık göğüs TAC modeli farelerde Rockman vd tarafından doğrulandı 3 ve cerrahi işlem DeAlmeida vd tarafından ayrıntılı olarak anlatılan 4. kan dolaşımını daha büyük bir kısmını bu ikinci yordam2olumsuz etkilerini telafi edebilirsiniz çünkü Banding transvers aort abdominal aort daralma ile karşılaştırıldığında daha uygun.
Transvers aort bantlama artan aort ve brachiocephalic arter arter basıncının artması yol açar ama yeterli perfüzyon organlara distal damarlar (Yani sol ortak Karotid arter sol subklavyan bırakır arter ve azalan aort). Bu artan bir kardiyak afterload ve bir yükseltilmiş kalp duvar stres yol açar. Duvar stres daha sonra lif kalınlaşma5nedeniyle azalır. Maladaptation ve sol ventrikül dilatasyonu kardiyak hemodinami sonucu kronik değiştir. Bu şekilde TAC kalp hipertrofisi sonunda kalp yetmezliği için önde gelen bir tekrarlanabilir model oluşturur.
DeAlmeide ve ark. tarafından açıklandığı gibi TAC için Standart prosedür 4 aort diseksiyon ve kaburga veya göğüs kemiği plevral boşluğu yanı sıra mediasten işlenmesi ile kısmi üst Torakotomi ile yaklaşıyor. Bu aort ve yan dalları iyi görebilmek için sağlar. Ne yazık ki, disseke kaburga, hangi onları serbestçe yüzen ve böylece nefes dynamics değiştirmeden bırakır reattached değil.
Biz, bu nedenle, aort yanal bir cerrahi yaklaşım 2nd interkostal boşluk kullanarak bir minimal invazif kapalı-göğüs yaklaşım kurdu. Bu modelin en büyük avantajı kaburga ile bile kesme olmadan TAC gerçekleştirmek için yeteneğidir. Cerrahi travma cilt kesi ve interkostal kaslara diseksiyon ile sınırlıdır. Bu yordam travma kendisini en aza indirir ve yeterli göğüs çalışma düzenini sağlamak için yardımcı olur.
Burada ayrıntılı adım adım bir yordam veya tahmin edilen toplam üst Torakotomi yapılmadan farelerde TAC ameliyatı gerçekleştirmek için açıklar. Yüksek frekans Doppler TAC başarısı daha önce 6,7açıklandığı gibi emin olmak için kullanılmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1303">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:312px;">Pressure-volume catheter</td>
			<td style="width:243px;">Millar Instruments, USA</td>
			<td style="width:591px;">SPR-839</td>
			<td style="width:159px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus GmbH, Germany</td>
			<td>Minivent - TYPE 845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus GmbH, Germany</td>
			<td>Y-connection with intubation cannula OD 1.2mm 73-2844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vaporizer</td>
			<td>Dr&#228;ger Medical AG&#38;CO.KG, Germany</td>
			<td>19.3 Isofluran-Vaporizer (a newer version is available under catalog number&#160; D-877-2010)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microscope&#160;</td>
			<td>Leica Microsystems, Germany</td>
			<td>MZ 7.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Light source&#160;</td>
			<td>Schott AG, Germany</td>
			<td>KL 1500 LCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">6-0 Prolene</td>
			<td>Ethicon, USA</td>
			<td>Polypropylene suture BV-1 9.3 mm 3/8c</td>
			<td>suture for surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Seraflex</td>
			<td>Serag Wiessner, Germany</td>
			<td>USP 5/0 schwarz;&#160; IC108000&#160;</td>
			<td>suture for constriction</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Homoeothermic Controlled Operating Tables</td>
			<td>Harvard Apparatus GmbH, Germany</td>
			<td>Typ 872/3 HT with tripod stand and homoeothermic controller Type 874; 73-4233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Flexible Rectal Probe</td>
			<td>Harvard Apparatus GmbH, Germany</td>
			<td>1.6 mm OD; 55-7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Doppler Signal Visualisation Instrument</td>
			<td>Indus Instruments, USA</td>
			<td>Doppler Signal Processing Workstation (DSWP) with 20MHz Pulsed Doppler Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Doppler Probe</td>
			<td>Indus Instruments, USA</td>
			<td>20MHz Tubing-mounted Probe</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a closed-chest model to induce transverse aortic constriction in mice

Araştırma kalp hipertrofisi ve kalp yetmezliği sık TAC tarafından indüklenen basınç aşırı fare modelleri dayanır. Transvers aort görselleştirmek için kısmi Torakotomi gerçekleştirmek için standart bir yöntemdir. Ancak, kaburga disseke ve göğüs kapatma sonra ekli olmayan sol Torakotomi açık-göğüs modelleri nedeniyle cerrahi travma solunum fizyolojisi değiştirir. Bunu önlemek için minimal invaziv, kapalı göğüs yaklaşım lateral Torakotomi ile kurduk. Burada aort 2nd interkostal boşluk göğüs boşluklar, girmeden fareyi kurtarmak için daha az travmatik bir yaralanma ile terk yaklaşırız. Açık göğüs TAC yordamlar ile eşit sağkalım oranları için standart laboratuvar ayarları kullanarak bu işlemi gerçekleştirin. Fizyolojik nefes desenleri kapalı göğüs yaklaşımı nedeniyle Bakımı dışında fareler hızlı bir iyileşme süreci kolaylaştırmak için ve travmadan sonra bağışıklık tepkisini azaltmak için daha az invaziv tekniği göründüğü gibi hızlı iyileşme göstererek yarar gibi görünüyor.

Başarılı bir TAC basınç aşırı yük ve sol ventrikül hipertrofisi indüksiyon güvence altına alır. Basınç yükünün bir geçici doğrulama Doppler akım hızı ölçüm Şekil 2' de gösterildiği gibi kullanarak elde edilebilir. Ameliyat öncesi kan akım hızı her iki Karotid arterler eşit olsa da, TAC bir artar kan hızı şu Karotid arter sol ventrikül ve aort yüksek basıncı nedeniyle sonrası stenotic zayıflatılmış kan akım hızı neden neden olur Karotid arter yaptı.
TAC ve onun elde edilen hipertrofisi kalp ağırlık/beden ağırlık oranları (HW/BW; mg/g), gün 3, 6 ve 21 gün ameliyat sonrası C57BL/6J erkek farelerin hesaplanması tarafından doğrulandı. HW/BW oranları önemli ölçüde arttı sigara çizgili fareler için ameliyat sonrası 6 gün karşılaştırıldığında TAC farelerde (4,78 ± 0.18 vs7.66±1,43 mg/g, p < 0.0001). Bu oran 21 gün sonra hemen hemen sürekli (4,8 ± 0,11 vs7.81 ± 0.65 mg/g, p < 0.0001) (bkz. şekil 3). Sağkalım oranı esas olarak intraoperatif kanama üzerinde bağlıdır: altında %5 düzenli uygulaması yoluyla azaltılabilir. 21 gün sonra hayatta kalma oranı esas olarak genotip üzerinde bağlıdır. Hayatta kalma oranı miktarları ile fonksiyonel kalp hastalıklardan acı değil fareler için > % 85. 21 gün sonra sunulan C57BL/6J farelerde sağkalım oranı % 88 olarak gerçekleşti.
Sistolik kan basıncı ve kardiyak fonksiyon entübasyon anestezi ölçülen ve başkaları tarafından açıklandığı gibi bir 1.4 Fransız basınç gürültülerinden kateter8 ile gerçekleştirilen. 9 kalp hızı (HR) sol ventrikül (LV) contractility üzerinde önemli bir etkisi vardır. Aort şeritli ve aort şeritli farelerin kalp oranları (HR) farkı yok edildi (p = 0.1456) (bkz: şekil 4A) 21 gün sonra. Aort sabit bir bant oluşturma (p = < 0.0001) artan bir sistolik kan basıncı (bkz. şekil 4B) 21 gün sonra ölçülen tarafından kanıtlanmış oldu.
Literatürde tartışılan, C57BL/6J fareler ile sistolik disfonksiyon10 eksantrik hipertrofisi TAC sonra geliştirmek için yaygın olarak bilinir. Ayrıca basınç birimi ölçümlerde önemli göründüğü bir artış sol ventrikül çapının bulundu. Son sistolik hacmi 16.25 µL (± 1.935 µL) 23.31 µL (± 1.617µL) yükseldi. Bu değişiklik önemli (p 0.0131 =) (bkz. şekil 4 c). Sonunda diyastolik hacmi 25.81 µl (± 1.852 µL) 31.24 µl ± (1.093 µL) yükseldi. Bu değişiklik önemli (p 0.0268 =) (bkz. şekil 4 d).
Tek yönlü ANOVA Bonferroni'nın posthoc test ederek takip TAC karşılaştırmak ve gruplar sham gerçekleştirildi. Basınç hacim ölçümleri durumunda bir unpaired t-testi ile Welch düzeltme kullanarak grupları karşılaştırıldı. Tüm veriler sunulmuş ± SEM (hata çubukları) demek gibi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57397/57397fig1.jpg"> Şekil 1: 2nd interkostal boşluk % 200 büyütmede üzerinden cerrahi yaklaşım. Bu resim cerrahi mikroskop ile çekilmiş ve aort brachiocephalic arter ile sol ortak Karotid arter arasındaki bir iplik ile görüntüler. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57397/57397fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57397/57397fig2.jpg"> Şekil 2: her iki Karotid arter (sham TAC fareler vs.) gelen temsilcisi Geniş puls-wave Doppler görüntüleme. A) Pulsed-dalga TAC önce sol Karotid arter Doppler görüntüleme. B) Pulsed-dalga TAC önce şu Karotid arter Doppler görüntüleme. C) resim ofPulsed-dalga TAC sonra sol Karotid arter Doppler. Kan akım hızı 2A anlamaya göre azalır. D) Pulsed wave Doppler TAC sonra şu Karotid arter. Şekil 2B ile karşılaştırıldığında kan akım hızı artar. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57397/57397fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57397/57397fig3.jpg"> Şekil 3: kalp ağırlık / vücut ağırlık oranı. Kalp hipertrofisi nedeniyle TAC indüklenen. Bu kalp ağırlık/beden ağırlık oranı önemli bir artış gösterilmiştir. Aort bantlama olmadan fare (i.e. sahte fareler; beyaz çubukları) işletilen TAC fareler (siyah çubuklar) için 3, 6 ve 21 gün sonra karşılaştırıldı. 6 gün sonra TAC kalp ağırlık bedenler ağırlık oranı önemli ölçüde TAC farelerde arttı. Bu etkiyi sadece biraz 21 gün sonra telaffuz edilir. Önemi p için kuruldu = < 0,05. NS = değil önemli; p < 0,0001. Veri ± SEM (hata çubukları) demek gibi sunulmaktadır. n = 6-9 grup başına. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57397/57397fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57397/57397fig4.jpg"> Şekil 4: hemodinamik parametreler ölçülen (C57BL/6J) farelerde basınç-hacim kateter yolu ile ve TAC olmadan ameliyat sonrası 21 gün: A) nabız (HR) vuruş / dakika (bpm). İK hiçbir fark karşılaştırılabilir narkoz sırasında invaziv ölçüleri gösteren her iki gruplar halinde yapıldı. B) sistolik kan basıncı şu ortak Karotid arter (sBP). SBP önemli artış 21 gün sonra aort sabit bir daralma gösterir. C) son sistolik birimleri (ESV) önemli ölçüde arttı (p 0.0131 =) 21 gün ve gösteri sonra TAC nedeniyle artan bir afterload ventrikül dilatasyonu indüklenen. D) End-diastolik hacim (ESV) artırılır (p = 0.0268 gerektiğini Önemi p için kuruldu = < 0,05. NS = değil önemli; * p < 0,05; p < 0,0001. Veri ± SEM (hata çubukları); demek olarak sunulan n = 8-13 grup başına. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57397/57397fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice at JoVE.com

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Burada, transvers aort daralma (TAC) lateral Torakotomi ile bir protokol mevcut. Bu teknik basınç aşırı yük ve kalp yetmezliği standart TAC laboratuvar ayarları kullanan farelerde benzetimini yapmak için amaçlayan bir minimal invaziv, kapalı göğüs cerrahi işlemdir.

Transvers aort daralma farelerde ikna etmek için kapalı-göğüs manken

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

a-closed-chest-model-to-induce-transverse-aortic-constriction-in-mice

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

18.8K Görüntüleme.  University Hospital Bonn. Burada, transvers aort daralma (TAC) lateral Torakotomi ile bir protokol mevcut. Bu teknik basınç aşırı yük ve kalp yetmezliği standart TAC laboratuvar ayarları kullanan farelerde benzetimini yapmak için amaçlayan bir minimal invaziv, kapalı göğüs cerrahi işlemdir.

Video: A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

CYP2D6 Hayvan Modeli:, Fare Otoimmün Hepatit indükleyin nasıl

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

Tıp

In vitro Measurements of Tracheal Constriction Using Mice

Transgenic and knockout mice have been powerful tools for the investigation of the physiology and pathophysiology of airways1,2. In vitro tensometry of isolated tracheal preparations has proven to be a useful assay of airway smooth muscle (ASM) contractile response in genetically modified mice. These in vitro tracheal preparations are relatively simple, provide a robust response, and retain both functional cholinergic nerve endings and muscle responses, even after long incubations.
Tracheal tensometry also provides a functional assay to study a variety of second messenger signaling pathways that affect contraction of smooth muscle. Contraction in trachea is primarily mediated by parasympathetic, cholinergic nerves that release acetylcholine onto ASM (Figure 1). The major ASM acetylcholine receptors are muscarinic M2 and M3 which are Gi/o and Gq coupled receptors, respectively3,4,5. M3 receptors evoke contraction by coupling to Gq to activate phospholipase C, increase IP3 production and IP3-mediated calcium release from the sarcoplasmic reticulum3,6,7. M2/Gi/o signaling is believed to enhance contractions by inhibition of adenylate cyclase leading to a decrease in cAMP levels5,8,9,10. These pathways constitute the so called "pharmaco-contraction coupling" of airway smooth muscle11. In addition, cholinergic signaling through M2 receptors (and modulated by M3 signaling) involves pathways that depolarize the ASM which in turn activate L-type, voltage-dependent calcium channels (Figure 1) and calcium influx (so called "excitation-contraction coupling")4,7. More detailed reviews on signaling pathways controlling airway constriction can be found4,12. The above pathways appear to be conserved between mice and other species. However, mouse tracheas differ from other species in some signaling pathways. Most prominent is their lack of contractile response to histamine and adenosine13,14, both well-known ASM modulators in humans and other species5,15.
Here we present protocols for the isolation of murine tracheal rings and the in vitro measurement of their contractile output. Included are descriptions of the equipment configuration, trachea ring isolation and contractile measurements. Examples are given for evoking contractions indirectly using high potassium stimulation of nerves and directly by depolarization of ASM muscle to activate voltage-dependent calcium influx (1. high K+, Figure 1). In addition, methods are presented for stimulations of nerves alone using electric field stimulation (2. EFS, Figure 1), or for direct stimulation of ASM muscle using exogenous neurotransmitter applied to the bath (3. exogenous ACH, Figure 1). This flexibility and ease of preparation renders the isolated trachea ring model a robust and functional assay for a number of signaling cascades involved in airway smooth muscle contraction.

In vitro Measurements of Tracheal Constriction Using Mice

Transgenic mice have been extremely useful in ascribing physiological function to genes. As such, research in general, and functional studies of airway, in particular, have undergone a remarkable shift toward murine models. Here we provide protocols for in vitro trachea constriction studies to evaluate smooth muscle function in murine airway.

Fare kullanarak Trakeal Konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise

Transgenic and knockout mice have been powerful tools for the investigation of the physiology and pathophysiology of airways1,2. In vitro tensometry of ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ischemia and reperfusion. Immune response includes cytokine expression and release or secretion of endogenous ligands of innate immune receptors. Activation of innate immunity can potentially modulate infarct size. We have modified an existing murine closed-chest model using hanging weights which could be useful for studying myocardial pre- and postconditioning and the role of innate immunity in myocardial ischemia and reperfusion. This model allows animals to recover from surgical trauma before onset of myocardial ischemia.
Volatile anesthetics have been intensely studied and their preconditioning effect for the ischemic heart is well known. However, this protective effect precludes its use in open chest models of coronary artery ligation. Thus, another advantage could be the use of the well controllable volatile anesthetics for instrumentation in a chronic closed-chest model, since their preconditioning effect lasts up to 72 hours. Chronic heart diseases with intermittent ischemia and multiple hit models are other possible applications of this model.
For the chronic closed-chest model, intubated and ventilated mice undergo a lateral blunt thoracotomy via the 4th intercostal space. Following identification of the left anterior descending a ligature is passed underneath the vessel and both suture ends are threaded through an occluder. Then, both suture ends are passed through the chest wall, knotted to form a loop and left in the subcutaneous tissue. After chest closure and recovery for 5 days, mice are anesthetized again, chest skin is reopened and hanging weights are hooked up to the loop under ECG control.
At the end of the ischemia/reperfusion protocol, hearts can be stained with TTC for infarct size assessment or undergo perfusion fixation to allow morphometric studies in addition to histology and immunohistochemistry.

Surgical trauma induces an inflammatory response. Cytokines and endogenous ligands are known to modulate myocardial infarct size following ischemia and reperfusion. We present a modified closed-chest model of murine ischemia and reperfusion using hanging weights to minimize effects of thoracotomy.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart failure. Here, we describe a detailed surgical procedure for creating pressure overload and cardiac hypertrophy in rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. After anesthesia, the trachea is intubated by inserting a cannula through a half way incision made between two cartilage rings of trachea. Then a skin incision is made at the level of the second intercostal space on the left chest wall and muscle layers are cleared to locate the ascending portion of aorta. The ascending aorta is constricted to 50&#8211;60% of its original diameter by application of a small sized titanium clip. Following aortic constriction, the second and third ribs are approximated with prolene sutures. The tracheal cannula is removed once spontaneous breathing was re-established. The animal is allowed to recover on the heating pad by gradually lowering anesthesia. The intensity of pressure overload created by constriction of the ascending aorta is determined by recording the pressure gradient using trans-thoracic two dimensional Doppler-echocardiography. Overall this protocol is useful to study the remodeling events and contractile properties of the heart during the gradual onset and progression from compensated cardiac hypertrophy to heart failure stage.

We describe a stepwise procedure for creating pressure overload and left ventricular hypertrophy in Wistar rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. This model is extensively used for studying remodeling changes during cardiac hypertrophy and for identifying and evaluating strategies for regression of such changes.

Basınç Aşırı Kardiyak hipertrofi Modeli Oluşturma Ratlarda Aort daralma, Artan

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

A Rat Model of Ventricular Fibrillation and Resuscitation by Conventional Closed-chest Technique

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic components of cardiopulmonary resuscitation in humans is herein described. The model was developed in 1988 and has been used in approximately 70 peer-reviewed publications examining a myriad of resuscitation aspects including its physiology and pathophysiology, determinants of resuscitability, pharmacologic interventions, and even the effects of cell therapies. The model featured in this presentation includes: (1) vascular catheterization to measure aortic and right atrial pressures, to measure cardiac output by thermodilution, and to electrically induce ventricular fibrillation; and (2) tracheal intubation for positive pressure ventilation with oxygen enriched gas and assessment of the end-tidal CO2. A typical sequence of intervention entails: (1) electrical induction of ventricular fibrillation, (2) chest compression using a mechanical piston device concomitantly with positive pressure ventilation delivering oxygen-enriched gas, (3) electrical shocks to terminate ventricular fibrillation and reestablish cardiac activity, (4) assessment of post-resuscitation hemodynamic and metabolic function, and (5) assessment of survival and recovery of organ function. A robust inventory of measurements is available that includes &#8211; but is not limited to &#8211; hemodynamic, metabolic, and tissue measurements. The model has been highly effective in developing new resuscitation concepts and examining novel therapeutic interventions before their testing in larger and translationally more relevant animal models of cardiac arrest and resuscitation.

This article describes a rat model of electrically-induced ventricular fibrillation and resuscitation by chest compression, ventilation, and delivery of electrical shocks that simulates an episode of sudden cardiac arrest and conventional cardiopulmonary resuscitation. The model enables gathering insights on the pathophysiology of cardiac arrest and exploration of new resuscitation strategies.

Konvansiyonel Kapalı göğüs Tekniği ile Rat Ventriküler Fibrilasyon Modeli ve Resüsitasyon

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic ...

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial neurodegenerative disease. With the advent of numerous transgenic mouse lines, there is increasing interest in inducible murine models of ocular hypertension. Here, we present an occlusion model of glaucoma based on the injection of magnetic microbeads into the anterior chamber of the eye using a modified microneedle with a facetted bevel. The magnetic microbeads are attracted to the iridocorneal angle using a handheld magnet to block the drainage of aqueous humour from the anterior chamber. This disruption in aqueous dynamics results in a steady elevation of intraocular pressure, which subsequently leads to the loss of retinal ganglion cells, as observed in human glaucoma patients. The microbead occlusion model presented in this manuscript is simple compared to other inducible models of glaucoma and also highly effective and reproducible. Importantly, the modifications presented here minimize common issues that often arise in occlusion models. First, the use of a bevelled glass microneedle prevents backflow of microbeads and ensures that minimal damage occurs to the cornea during the injection, thus reducing injury-related effects. Second, the use of magnetic microbeads ensures the ability to attract most beads to the iridocorneal angle, effectively reducing the number of beads floating in the anterior chamber avoiding contact with other structures (e.g., iris, lens). Lastly, the use of a handheld magnet allows flexibility when handling the small mouse eye to efficiently direct the magnetic microbeads and ensure that there is little reflux of the microbeads from the eye when the microneedle is withdrawn. In summary, the microbead occlusion mouse model presented here is a powerful investigative tool to study neurodegenerative changes that occur during the onset and progression of glaucoma.

Here, we present a protocol to induce ocular hypertension in the murine eye that results in the loss of retinal ganglion cells as observed in glaucoma. Magnetic microbeads are injected into the anterior chamber and attracted to the iridocorneal angle using a magnet to block the outflow of aqueous humour.

Bir Manyetik microbead Oklüzyon Modeli Farelerde Glokom Oküler Hipertansiyon Bağımlı tetikleyebilecek

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

Assessment of Cardiac Morphological and Functional Changes in Mouse Model of Transverse Aortic Constriction by Echocardiographic Imaging

Transverse aortic constriction (TAC) in mice has been used as a valuable model to study mechanisms of cardiac hypertrophy and heart failure1. A reliable noninvasive method is essential to assess real-time cardiac morphological and functional changes in animal models of heart disease. Transthoracic echocardiography represents an important tool for noninvasive assessment of cardiac structure and function2. Here we used a high-resolution ultrasound imaging system to monitor myocardial remodeling and heart failure progression over time in a mouse model of TAC. B-mode, M-mode, and Doppler imaging were used to precisely assess cardiac hypertrophy, ventricular dilatation, and functional deterioration in mice following TAC. Color and pulse wave (PW) Doppler imaging was used to noninvasively measure pressure gradient across the aortic constriction created by TAC and to assess transmitral blood flow in mice. Thus transthoracic echocardiographic imaging provides comprehensive noninvasive measurements of cardiac dimensions and function in mouse models of heart disease.

The goal of this protocol is to noninvasively assess cardiac structural and functional changes in a mouse model of heart disease created by transverse aortic constriction, using B- and M-mode echocardiography and color/pulse wave Doppler imaging.

Ekokardiyografik Imaging tarafından Enine Aort Konstrüksiyon Mouse Modeli Kardiyak Morfolojik Değerlendirilmesi ve Fonksiyonel Değişiklikler

Transverse aortic constriction (TAC) in mice has been used as a valuable model to study mechanisms of cardiac hypertrophy and heart failure1. A reliable ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

Farelerde Minimal İnvaziv Enine Aort Konstrüksiyon

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure overload-induced left ventricular hypertrophy (LVH) and its progression to heart failure. In the majority of the reported investigations, this procedure is performed with intubation and ventilation of the animal which renders it demanding and time-consuming and adds to the surgical burden to the animal. The aim of this protocol is to describe a simplified technique of minimally invasive TAC without intubation and ventilation of mice. Critical steps of the technique are emphasized in order to achieve low mortality and high efficiency in inducing LVH.
Male C57BL/6 mice (10-week-old, 25-30 g, n=60) were anesthetized with a single intraperitoneal injection of a mixture of ketamine and xylazine. In a spontaneously breathing animal following a 3-4 mm upper partial sternotomy, a segment of 6/0 silk suture threaded through the eye of a ligation aid was passed under the aortic arch and tied over a blunted 27-gauge needle. Sham-operated animals underwent the same surgical preparation but without aortic constriction. The efficacy of the procedure in inducing LVH is attested by a significant increase in the heart/body weight ratio. This ratio is obtained at days 3, 7, 14 and 28 after surgery (n = 6 - 10 in each group and each time point). Using our technique, LVH is observed in TAC compared to sham animals from day 7 through day 28. Operative and late (over 28 days) mortalities are both very low at 1.7%.
In conclusion, our cost-effective technique of minimally invasive TAC in mice carries very low operative and post-operative mortalities and is highly efficient in inducing LVH. It simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal. It can be easily performed by following the critical steps described in this protocol.

The aim of this protocol is to describe step-by-step the technique of minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) in mice. By elimination of intubation and ventilation which are mandatory for the commonly used standard procedure, minimally invasive TAC simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal.

Minimal invaziv transvers aort daralma farelerde sol ventrikül hipertrofisi indüksiyon için tekniği

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved drug to prevent or reduce myocardial I/R injury. The study and understanding of the pathophysiological mechanisms of myocardial I/R injury is essential to develop successful treatments. Large animal experiments are an important step in translational methods. The porcine model of acute myocardial infarction has been established and described by ourselves and others. We aimed to further improve the value of the model by focusing in detail on the sampling techniques for use in future experiments. Furthermore, we emphasize small but important steps that can affect the quality of the final results. To mimic the clinical situation of myocardial I/R injury, a percutaneous coronary intervention (PCI) catheter was inserted into the left anterior descending coronary artery (LAD) of an anesthetized pig. &#176;&#176;&#176;This model mimics acute myocardial infarction and PCI treatment in humans with the possibility of accurately determining the area at risk as well as the necrotic- and viable ischemic tissue. Here the model was used to investigate the effect of a bicyclic peptide inhibitor of FXIIa. The model can also be modified to allow longer reperfusion times to study later effects of myocardial infarction.

Here we demonstrate a protocol to standardize sampling procedures of an established porcine model of acute myocardial infarction in order to increase its translational value in the understanding of the pathophysiology of myocardial ischemia/reperfusion injury and to test novel drug candidates.

Kapalı göğüs domuz miyokard infarktüsü manken standardizasyon doku ve kan örnekleme prosedürleri tarafından geliştirilmesi

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved ...