Bu çalışma NIH P30 O&#39;Brien merkezi (DK 079.337) çekirdek kaynak tarafından finanse edildi.

1. Preoperatif Hazırlık <ol><li> Cerrahi yöntemler, dikkatli yapılması ne olursa olsun, önemli bir stres sonucu. Bu tür stresin etkilerini en aza indirmek için ve rezerv maksimize etmek, hayvanların kullanımı 10,11 önce en az 72 saat süreyle vivaryum tutulmalıdır. </li><li> Cerrahi aletler, gazlı bez ve bezlerden steril olmalıdır. Bu araçlar temas dikiş veya ameliyat alanının yalnızca kriteri sağlayan steril eldiven kullanmak için gerekli değildir. </li><li> Hemostaz için, sıkma basınçları gerekli asgari şarttır. Aşırı basınç veya kaba kullanımdan dolayı geminin hasar 24 saat içinde arka-bacak felci, barsak iskemisi ve ölümle sonuçlanan, tromboz neden olacaktır. Bu en fazla 2 gm / cm 2 lik bir basınç ile kelepçeler kullanılarak sorunu ortadan kaldırır olduğunu bulduk. Bu kelepçeler Tablo 1&#39;de belirtilmiştir. Kelepçe basınçları yüksek kaliteli cerrahi instrumen tarafından yapılan kelepçeleri şartnamesinde belirtilirt üreticileri. Biz ucuz kelepçeler veya atılabilir kelepçeleri evrensel çok fazla baskı uygulamayın bulduk. </li><li> Kollateral damarların yanı sıra abdominal aorta göreli konumları ve inferior vena kava (İVC) yeri zorlanma bağlıdır. Ayrıca özellikle kollateral damarların konumu, bireysel fareler arasında küçük farklılıklar bulunuyor. </li></ol> 2. Donör Operasyonu <ol><li> Fareler isofluran (1.5-2.5% indüksiyon, hava içinde% 1.0 bakım) ya da (55-65 mg / kg) pentobarbital ile anestezi olabilir. Pentobarbital bir zaman sınırı (1,5 saat) dayatır, fakat istenirse, en iyi erişim için hayvan dönen seçeneği ile cerrah sağlar. Anestezi süresi ameliyat sırasında bağırsak veya karaciğer üzerine gerektiğinde anestezik 2-3 damla koyarak 2 kadar saat kadar uzatılabilir. Ketamin / ksilazin (Ketamin ve Ksilazin, ip için 7 mg / kg 100 mg / kg vücut ağırlığı), aynı zamanda iyi eğitimli cerrahlar ca tarafından kullanılabilirn, 1 ila 1.5 saat içinde bitirmek prosedür, ancak daha dar bir kasa doz aralığına sahiptir. ABD&#39;de, pentobarbital kullanılması nedeniyle kısa kaynaklarının son yıllarda daha problemli hale gelmiştir. Bu anestezi derinliğinin yeterli olduğundan emin olmak için kontrol edilmesi şarttır. Toe-tutam refleks yeterli derinlikte en iyi göstergesi ama birisi de solunum hızı ve diğer hareketleri dikkat etmelisiniz. </li><li> Anestezi indüksiyonundan sonra, ventral karın saç kaldırmak için tüy dökücü jel veya bir tıraş makinesi kullanın. </li><li> Spread-eagled konumda tutun laboratuvar bant kullanarak işletim gemide hayvan monte edin. Metalik bir çalışma masası ameliyat sırasında sıcaklık destek sağlamak için bunun altında bir ısıtma yastığı kullanılmasına izin verir. Biz elle ev kullanımı için tüketici sınıf birim ısıtma yastığı, ve sıcaklığı kontrol eder. Isı 35-38 ° arasında tutulur. Metalik çalışma masası da prosedürleri arasındaki sterilize etmek kolaydır. </li><li>Klorheksidin gibi bir dezenfektan kullanılarak alan dezenfekte, bir etanol ile yıkama takip etti. Yeterli dezenfeksiyon sağlamak için, bu prosedürü üç kez tekrarlayın. Varsa Bu aynı zamanda, saç kalan kesim parçalarını kaldırmak olacaktır. </li><li> Kullanma makas abdominal organları açığa beden duvarından geçerek bir kesi yapmak. </li><li> Karın büyük damarların maruz yan organlar defol, pamuklu bir bez kullanın. Viscera nemli tutmak için ılık serum fizyolojik ile ıslatılmış bir gazlı bez parçasının üzerine yerleştirilir. </li><li> Künt diseksiyon kullanarak, çok dikkatli uzaklıkta çevreleyen dokudan abdominal aort teşrih. Inferior vena kava uzak damar Diseksiyon çok dikkatli olun. Dikkatlice kaldırılır ve dağlanmış gereken bu gibi bel arter olarak bir ya da daha fazla dal, olacaktır. Diseke aort bölümünde böbrek damarlarının altında ve femoral arterler içine aort çatallanma üzerinde olmalıdır. Bu bölüm, birçok için verici madde olarak hizmet edebilirgemiler var dallanma ve donör hayvanların boyutunu kaç bağlı s iki alıcıya. </li><li> Sadece sadece çatallanma Yukarıdaki renal arterler ve başka aşağıda bir sütür bağla. Kullanma makas aort bölün, tam 200 U / ml heparin içeren serum fizyolojik ile greft durulayın. Çok dikkatli bir şekilde kabın bir ucundan tutmak ve yerçekimi ile damar içinden geçen, böylece tuz çözeltisi damla. Hava kabarcıkları damar yoluyla çalışmasına izin vermeyin. Aksi intima daha sonra tromboz ile sonuçlanan zarar görebilir mümkün olduğu kadar az damar ucu tutun. Alanından kaldırın ve hemen buz gibi tuzlu bir kaba koyun. Donör hayvanların exsanguinate izin verin. </li></ol> 3. Alıcı Operasyonu <ol><li> Yukarıda hayvan anestezisi ve tüy dökücü jel uygulamak veya karın üzerinde saç kaldırmak için bir tıraş makinesi kullanın. Sadece biz 0,1 mg / analjezi kurmak kg subkütan buprenorfin bir dozunu kesi öncesinde. </li><li> Mlaboratuvar bant kullanarak işletim alanında ount hayvan. Hayvan operasyon sırasında vücut ısısını korumaya yardımcı olacak sıcak bir işletme aşamasında monte edilmelidir. </li><li> Onları kurumasını önlemek için gözleri gentamisin oftalmik merhem uygulayın. </li><li> Bir etanol yıkama ardından karın, dezenfekte edin. Yeterli dezenfeksiyon sağlamak için, bu prosedürü üç kez tekrarlayın. </li><li> Bir sonraki adıma geçmeden önce tekrar anestezi yeterliliği kontrol edin. </li><li> Altındaki dokulara çarpacak için dikkatli olmak, iki aşamada cilt ve vücut duvarı ile orta hat kesi olun. </li><li> Abdominal kesi açık tutmak için bir dağıtıcı yerleştirin. Yol kelepçenin toplu tutmak için arka sonuna doğru vida montaj yöneltin. </li><li> Serum fizyolojik ile steril gazlı bez bir kare ıslatın ve bağırsakların üzerine yerleştirin. Gazlı bez üzerine hafifçe parmağınızla, bağırsak altında bir pamuklu çubukla yerleştirin ve yavaşça s bağırsak üzerinde yansıtmakide yüzden gazlı bez üstüne oturuyor. Gazlı başka bir parça al, bağırsak üzerine yerleştirin ve salin ile ıslatın. </li><li> Aorta ve inferior vena kava (İVC) kapsayan herhangi bir yağ dokusu çıkarın. Nazik olun. İVK çok kırılgandır. </li><li> Yavaşça IVC gelen infrarenal aorta diseksiyonu forseps kullanın. Bunlar arasında yeterli bir kap ile iki kelepçe için oda sağlamak için yeterince büyük bir alan bu tür ayrılınca, greft dikilebilir için yeterli damar olacaktır, ki. Temizleme Diseksiyon yaparken, damar dalları arayın. Eğer gerekirse, bir düşük sıcaklık cauterizer ile yakmak. </li><li> Sadece sadece çatallanma Yukarıdaki renal arter ve diğeri aşağıda bir vasküler klemp takın. </li><li> Aorta kesin. Aort uçları genellikle yaklaşık 5 mm&#39;lik bir boşluk bırakarak, geri çekilecektir. Hemostaz için kontrol edin. Kelepçeler düzgün çalıştığından, kanın sadece küçük bir miktar kesim sonrası öncelemelidir. Kanama devam ederse, emin bir şey olmak için kelepçelerini kontrol parazite olduğunuOnlarla ing. Aort hiçbiri kaldırılır unutmayın. Bu sadece bölünmesiyle elde edilir. </li><li> Heparinize salin ile kesme ucu (200 U / ml) durulayın ve sonra bir bez ile ekstra çözüm çıkarın. </li><li> Her ucunda üç süreksiz sütürler kullanılarak yerine Tack greft. Sadece iki ucundan da anastomoz bir tarafında dikiş, ve daha sonra bir sürekli çalışan dikiş ya da daha çok aralıklı dikişlerle kalan doldurun. Yedi sekiz süreksiz sütürler yeterlidir. Eğer çalışan bir dikiş kullanırsanız, damar duvarları rahat kalır ve anastomoz hattında darlık neden olmaz emin olun. </li><li> Dikkatle kranial sonunda kelepçe çıkarın ve dikiş hatlarında sızıntı olup olmadığına bakın. Sızma küçük bir miktar Tamam bu konuda bir dakika içinde durur sağlamaktadır. Bundan daha fazla varsa, o kanamayı durdurma ile bir tek dikiş kullanmak mümkündür. </li><li> Hafifçe ıslatılmış pamuk aplikatör ile anastomoz yukarıda aort basın ve ardından ikinci kelepçe çıkarın. Yavaşça basın vebirkaç kez bırakın ve aort Patent göründüğünü kontrol edin. Greft hemen perfüze olacak ve bir darbe görünür olmalıdır. </li><li> Bağırsak kapsayan gazlı bez çıkarın ve yerine onları geri hareket ettirin. Bağırsak büküm kaçının ve normal anatomik yönünü korumak. </li><li> 5-0 Vicryl kullanarak kas tabakası kapatın. </li><li> 5-0 veya 6-0 prolen kullanarak cilt kapatın. </li><li> 5 mg / anestezi sonlandırmadan önce analjezi artırmak için kg carprophen ile subkutan fare davranın. </li><li> Fare 0.5-0.8 ml serum fizyolojik subkutan ver. </li><li> Kurtarmak için ısıtılmış bir kafes içinde fare yerleştirin. Normal iyileşme olduğundan emin olmak için kurtarma sırasında dikkatle izleyin. Ameliyattan sonra 2-3 saat, fare nispeten normal olarak davranmak olmalıdır. 12 saat post-operatif olarak, analjezi için 2 mg / kg deri altından buprenorfin ile hayvan tedavi. Herhangi bir zamanda, hayvan yaslanmış, varsa, gürültü yapmak veya hareket sınırlı bir dizi sergileyen, sorunu araştırmak. Eğerkesin nedeni tespit ve tamir edilemez, hayvan kurumsal protokolleri başına ötenazi edilmelidir. 24 saat az hayvan 5 mg / kg &#39;da subkütan carprophen bir doz almak gerekir. Hind bacak felci başarısız anastomoz veya trombüs gösterir. Bu durumda, hayvan ötenazi olmalıdır. </li></ol>

<ol>
	<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice:+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis.">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J. Heart Lung Transpl. 18, 946-951 (1999).</li><li>Calise, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+rodents+by+the+sleeve+technique:+a+model+system+for+the+study+of+graft+vascular+disease.">Orthotopic aortic transplantation in rodents by the sleeve technique: a model system for the study of graft vascular disease.</a> Transpl. Proc. 33, 2369-2370 (2001).</li><li>Thomsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+aortic+graft+mouse+model+to+study+the+immunopathology+of+chronic+vascular+rejection.">An orthotopic aortic graft mouse model to study the immunopathology of chronic vascular rejection.</a> Transpl. Proc. 34, 2833-2835 (2002).</li><li>Benza, R. L., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+graft+transplantation+in+mice.">Aortic graft transplantation in mice.</a> J. Heart Lung Transpl. 21, 1319-1321 (2002).</li><li>Chereshnev, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+heterotopic+aortic+arch+transplantation.">Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation.</a> The Journal of surgical research. 111, 171-176 (2003).</li><li>Cho, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+heterotopic+aortic+transplantation+in+mice.">Improved surgical technique for heterotopic aortic transplantation in mice.</a> J. Korean Med. Sci. 22, 12-15 (2007).</li><li>Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+in+mice:+current+status+and+future+prospects.">Organ transplantation in mice: current status and future prospects.</a> Microsurgery. 19, 52-55 (1999).</li><li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transpl. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Gorska, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+in+laboratory+animal+research+for+experimental+purposes.">Principles in laboratory animal research for experimental purposes.</a> Med Sci Monit. 6, 171-180 (2000).</li><li>Landi, M. S., Kreider, J. W., Lang, C. M., Bullock, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shipping+on+the+immune+function+in+mice.">Effects of shipping on the immune function in mice.</a> Am. J. Vet. Res. 43, 1654-1657 (1982).</li><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+monoxide+rescues+heme+oxygenase-1-deficient+mice+from+arterial+thrombosis+in+allogeneic+aortic+transplantation.">Carbon monoxide rescues heme oxygenase-1-deficient mice from arterial thrombosis in allogeneic aortic transplantation.</a> Am. J. Pathol. 175, 422-429 (2009).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.+Transpl.">Heart transplantation in congenic strains of mice. Transpl.</a> Proc. 5, 733-735 (1973).</li><li>Chang, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+anastomosis+using+controlled+phase+transitions+in+poloxamer+gels.">Vascular anastomosis using controlled phase transitions in poloxamer gels.</a> Nature medicine. 17, 1147-1152 (2011).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Fareler çok iyi immunogenetically 9,12,13 tanımlanmış olup, istenirse kolayca, belirli genlerin kendi ifadesini değiştirmek için manipüle edilebilir, çünkü aort nakli Fare modellerinde bir çok avantaj sağlamaktadır. Girişte belirtildiği gibi, fare, vasküler cerrahi, çünkü gemilerin büyüklüğü en modelleri daha zordur. Böyle aorta gibi bile büyük arter, genellikle iç çapı 100-200 mikron fazla vardır; böylece bu gemilerin manipüle beceri ve maharet 8,14 önemli miktar...

<table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Şirket </td><td> Katalog No </td></tr><tr><td> Vasküler Kelepçeleri </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 00396-01 (Boyut B-1) </td></tr><tr><td> Dumont Forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11293-00 </td></tr><tr><td> 10-0 microsuture İbreli </td><td> AROSurgical </td><td> TK-107038 </td></tr><tr><td> Düz makas </td><td> Roboz Cerrahi Instrument Co </td><td> SC-5620 </td></tr><tr><td> Düşük sıcaklık cauterizer </td><td> Beaver-Visitec Uluslararası </td><td> 8441000 </td></tr><tr><td> Kendinden istinat retraktör </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> 14240 </td></tr></tbody></table>

orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease

Fare anastomozlar içeren vasküler prosedürleri genellikle zordur ve cerrahın beceri bağımlı olduğu düşünülmektedir. Bu büyük ölçüde doğrudur, ancak bu işlemlerin zorluğu azaltmak ve tekrarlanabilirliği artırabilirsiniz önemli ilkeleri bir dizi vardır. Ortotopik aort nakli sadece iki uç-uca anastomoz içerir çünkü bu ilkeleri öğrenmek için hangi mükemmel bir yöntemdir, ancak tutarlı başarı için iyi bir dikiş tekniği ve gemilerin taşıma gerektirir. Bu işlem alıcının içinde yerli aorta bölümü tarafından izlenen bir donör hayvan abdominal aort uzunluğu, alımı ile başlar. Tedarik aorta sonra alıcının aort bölünmüş uçları arasına yerleştirilen ve uç uca anastomoz kullanarak yerine sütüre edilir. Bu hedefe başarıyla konsantrasyon yüksek derecede, iyi araçlar, sarsılmaz bir el ve bir takdir gerektirir gerçekleştirmek için ne kadar kolayBir fare damarlarda tromboz sonuçlanan, hasar görebilir. Bu önemli ilkeleri Öğrenme küçük kemirgenler mikrocerrahi öğrenme zaman en acemi zaman kaplar budur. Bu protokol boyunca, bu önemli noktaları bakın. Bu model, farklı deneysel sistemlerde 1-8, çeşitli damar hastalığı araştırmak için kullanılabilir. Burada gösterilen bağlamda, en sık transplant sonrası damar hastalığı, allograft intimal hiperplazi içinde meydana geldiği, organ naklinde bir ortak uzun süreli komplikasyon incelenmesi için kullanılmıştır. Modelin birincil avantajı kantitatif morfometrik analizler kolaylaştırır ve nakledilen damar ek bir denetim 9 olarak hizmet verebilir endojen gemi, bitişik yatıyor olmasıdır. Burada gösterilen teknik, genellikle 18-25 gram ağırlığındaki fareler için kullanılır. Biz C57BL/6J, BALB / CJ ve C3H/HeJ suşları kullanılarak tecrübemizi en birikmiştir.

Şekil 1 bir aort greft gösterir. Beyaz oklar dikiş hatları göstermektedir. Bir patent greft görünür bir darbe gösterecektir. Şekil 2. Alıcının sağkalım 56 gün süreyle takip edildiği tipik bir deney gösterir. Bir grup BALB / c aort ile nakledilen (C57BL / 6 x FVB) wild-tip alıcı fareler oluşuyordu. &quot;KO&quot; belirlenen diğer grup, 24 saat içinde greft trombozu sonuçlanan heme oksijenaz-1, ifade eksik alıcıları (C57BL / 6 x FVB) oluşmaktadır. Özellikle,...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease at JoVE.com

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Bir fare abdominal aort bir bölüm sadece bir allojenik veya sinjenik alıcı olarak renal arterler aşağıda orthotopically transplante edildiği bir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik, birörnek büyük arter nakli avantajlı olarak kabul edilir olan çalışmalarda yararlı olabilir.

Damar Hastalığı Çalışmaları Farelerde Ortotopik Aort Nakli

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

orthotopic-aortic-transplantation-mice-for-study-vascular

Research

JoVE Journal

Medicine

10.8K Görüntüleme.  The University of Alabama at Birmingham. Bir fare abdominal aort bir bölüm sadece bir allojenik veya sinjenik alıcı olarak renal arterler aşağıda orthotopically transplante edildiği bir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik, birörnek büyük arter nakli avantajlı olarak kabul edilir olan çalışmalarda yararlı olabilir.

Video: Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Ortotopik Aort Nakli: Rat Modeli Kronik Vaskülopati Geliştirme Çalışması

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Tıp

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

Sıçanlarda Ortotopik Küçük Bağırsak Nakli

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

Sıçanlarda Ortotopik Karaciğer Nakli

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart failure. Here, we describe a detailed surgical procedure for creating pressure overload and cardiac hypertrophy in rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. After anesthesia, the trachea is intubated by inserting a cannula through a half way incision made between two cartilage rings of trachea. Then a skin incision is made at the level of the second intercostal space on the left chest wall and muscle layers are cleared to locate the ascending portion of aorta. The ascending aorta is constricted to 50&#8211;60% of its original diameter by application of a small sized titanium clip. Following aortic constriction, the second and third ribs are approximated with prolene sutures. The tracheal cannula is removed once spontaneous breathing was re-established. The animal is allowed to recover on the heating pad by gradually lowering anesthesia. The intensity of pressure overload created by constriction of the ascending aorta is determined by recording the pressure gradient using trans-thoracic two dimensional Doppler-echocardiography. Overall this protocol is useful to study the remodeling events and contractile properties of the heart during the gradual onset and progression from compensated cardiac hypertrophy to heart failure stage.

We describe a stepwise procedure for creating pressure overload and left ventricular hypertrophy in Wistar rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. This model is extensively used for studying remodeling changes during cardiac hypertrophy and for identifying and evaluating strategies for regression of such changes.

Basınç Aşırı Kardiyak hipertrofi Modeli Oluşturma Ratlarda Aort daralma, Artan

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

Aort Kalsifikasyon ve Enflamasyon Vasküler düz kas hücrelerinin ve Görüntüleme Kalsifikasyon

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

Kol tekniği aort transplantasyonu - eğitici bir Video bir fare Model kullanma

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

Farelerde Minimal İnvaziv Enine Aort Konstrüksiyon

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due to sodium retention and hyperlipidemia. To study the pathophysiology of this syndrome, rodent models have been developed based on the injection of toxic substances such as doxorubicin causing podocyte damage. In mice, only few strains are susceptible to this model. In wildtype 129S1/SvImJ mice, the administration of doxorubicin by rapid intravenous injection to the retrobulbar sinus induces experimental nephrotic syndrome that features all the symptoms of human disease including sodium retention and edema. After the onset of proteinuria, mice exhibit increased urinary serine protease activity that leads to the activation of the epithelial sodium channel (ENaC) and sodium retention. Pharmacological inhibition of urinary serine proteases by the treatment with sustained release aprotinin abrogates ENaC activation and prevents sodium retention. This model is ideal to study the pathophysiology of proteasuria, i.e., the excretion of active serine proteases that cause ENaC activation by the proteolysis of its &#947;-subunit. This can be regarded as the primary mechanism of ENaC activation and sodium retention in proteinuric kidney disease.

Here, we describe the induction of experimental nephrotic syndrome in 129S1/SvImJ mice by rapid retrobulbar injection of doxorubicin. We also treat nephrotic mice with sustained release pellets containing aprotinin to inhibit urinary serine protease activity and prevent sodium retention.

Doksorubisin Retrobulbar enjeksiyon ve Önleme Birimi kalıcılık tarafından sürekli yayın Aprotinin farelerde Nefrotik sendromda indüksiyon

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...

A Model of Reverse Vascular Remodeling in Pulmonary Hypertension Due to Left Heart Disease by Aortic Debanding in Rats

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary arterial hypertension (PAH). As a result, approved therapeutic interventions for the treatment or prevention of PH-LHD are missing. Medications used to treat PH in PAH patients are not recommended for treatment of PH-LHD, as reduced pulmonary vascular resistance (PVR) and increased pulmonary blood flow in the presence of increased left-sided filling pressures may cause left heart decompensation and pulmonary edema. New strategies need to be developed to reverse PH in LHD patients. In contrast to PAH, PH-LHD develops due to increased mechanical load caused by congestion of blood into the lung circulation during left heart failure. Clinically, mechanical unloading of the left ventricle (LV) by aortic valve replacement in aortic stenosis patients or by implantation of LV assist devices in end-stage heart failure patients normalizes not only pulmonary arterial and right ventricular (RV) pressures but also PVR, thus providing indirect evidence for reverse remodeling in the pulmonary vasculature. Using an established rat model of PH-LHD due to left heart failure triggered by pressure overload with subsequent development of PH, a model is developed to study the molecular and cellular mechanisms of this physiological reverse remodeling process. Specifically, an aortic debanding surgery was performed, which resulted in reverse remodeling of the LV myocardium and its unloading. In parallel, complete normalization of RV systolic pressure and significant but incomplete reversal of RV hypertrophy was detectable. This model may present a valuable tool to study the mechanisms of physiological reverse remodeling in the pulmonary circulation and the RV, aiming to develop therapeutic strategies for treating PH-LHD and other forms of PH.

The present protocol describes a surgical procedure to remove ascending-aortic banding in a rat model of pulmonary hypertension due to left heart disease. This technique studies endogenous mechanisms of reverse remodeling in the pulmonary circulation and the right heart, thus informing strategies to reverse pulmonary hypertension and/or right ventricular dysfunction.

Sıçanlarda Aort Debandingi ile Sol Kalp Hastalığına Bağlı Pulmoner Hipertansiyonda Ters Vasküler Yeniden Şekillenme Modeli

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary ...