This work was funded by a Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) Canada grant to MGM. JR is a NSERC-Vanier student fellow.

Not: memeli hücresi kültürü için gerekli olan, aşağıdaki adımların her biri, bir laminar akış başlığı içinde steril koşullar altında gerçekleştirilmelidir. Buna ek olarak, optimum steril hücre ekimi için genel kurallar uygulanır, örneğin., Ipuçları her zaman onlar, çapraz kontaminasyon neden zaman hücrelerinin miktarını azaltarak olabilir atarak düzgün, tüm medya değişiklikleri gerçekleştirme ama nazikçe tüm karıştırarak zaman havaya maruz kalan hücre süspansiyonları Ayrıca, ekler, özel işlem gerektiren plasticware bir tür vb onların homojen pipetleme sağlamak için. ekler manipüle edildiği anda Birincisi, kolayca gözyaşları ve bu nedenle deney tehlikeye atabilecek kırılgan membran, dokunmaktan kaçının. membran delme veya yapışık hücreler ayrışan bir riski olduğu için aynı zamanda, hücre kültür ortamı vakum aspirasyonun yapılması için uygun değildir. Daha sonra, uçlar ve böylece, dikkatli olduğunda mo kullanılması gerekir, çukurlu doku kültürü plakasına gevşek asmak veplasticware Ving veya yapışık hücrelere dissociating önlemek için pipetlerken zaman. büyük gözenek boyutları ile ekler kullanarak Buna ek olarak, hücre kültürü ortamı, bu nedenle, sıklıkla sıvı seviyesinin izlenmesi önemlidir, membrandan girer ve bu olasılığı vardır. Son olarak, aşağıdaki protokol yapışık hücreler için tasarlanmış ve süspansiyon hücreleri için uygun olmak için küçük değişiklikler gerektirir unutmayın. insert ko-kültür deneyler için 1. Genel kurallar <ol><li> ekler de tohumlama hücre tipi 1. <ol><li> kendi ambalajından ekler kakışıyor. </li><li> Uygun boyut boş çukurlu doku kültürü plakasına uçlar yerleştirin. cımbız kullanarak ucun üst kenarı, yani kavrama yapmak. </li><li> eki iyileştirmek ve yapışan hücrelerin yayılması tohumlanmasından önce hücre kültür ortamı ile uçlar koşulu. Bunu yapmak için, hücre kültürü Mediu&#39;nun zarın tüm yüzeyini kaplayanMikropipet kullanıyorum. NOT: Gerekli olduğu kadar çok uçlar için bunu yapın. </li><li> Plaka kapağını çıkarın ve aynı koşullar altında en az 1 saat ya da O / N inkübe (genellikle 37 ° C,% 5-10 CO2). </li><li> ekler klimalı zaman, bir mikropipet kullanarak hücre kültür ortamında bütün çıkarın. kullanılan orta atın. </li><li> çok oyuklu bir plaka ile aynı şekilde taze hücre kültür ortamı içinde tohum hücre tipi 1.. Bunu yapmak için, bir mikropipet ile hücre süspansiyonu uygun bir hacmi çizip ekine sıvısının dağıtılması. NOT: Gereken gibi birçok ekler hazırlayın. </li><li> Bütün ekler tohumlama sonra, yavaşça hücreler eşit dağıtmak için daha sonra ileri geri, sol ve sağ plaka sallayın. Bu hücreler ekler merkezinde birikmesine neden olacağından, dairesel hareketler yapmaktan kaçının. </li><li> plaka kapağı yerleştirin ve hücresel gereksinimleri (genellikle 37 ° C olarak başına,% 5-10 CO tarafından belirtildiği gibi kuluçkaya <sub&gt; 2). </li></ol></li><li> çukurlu doku kültür plakaları içinde Tohum hücre tipi 2. <ol><li> Bölüm 1 &#39;e göre olan yeni hücre kültürü ortamı içinde tohum hücre tipi 2.. </li><li> insertlerin sayısı için gerekli olduğu kadar çok sayıda çukur hazırlayın. Hücreler eşit kuyularda dağılmasını sağlamak için adım 1.1.7 gibi plakası) sallayın. </li><li> Plaka kapağı yerleştirin ve aynı koşullar altında inkübe (genellikle 37 ° C,% 5-10 CO2). </li></ol></li><li> ekler ferahlatıcı ortam <ol><li> Mikropipet kullanarak, hücre tipi 1. ihtiva eden ekler, kısmen ya da hücre kültür aracı kaldırmak. kullanılan orta atın. </li><li> Taze hücre kültür ortamında uygun bir hacmi çizin. Yavaşça insertin iç duvarı üzerinde ucu kalan yavaşça hücre kültür ortamı dağıtmak. </li><li> plaka kapağı yerleştirin ve adım 1.1.4 başına kuluçkaya yatmaktadır. </li></ol></li><li> çukurlu doku kültür plakaları içinde serinletici orta <ol><li> Bir micropi kullanılmasıPette, kısmen ya da hücre tipi 2. içeren oyuklara hücre kültür ortamının kaldırmak. kullanılan orta atın. </li><li> Taze hücre kültür ortamında uygun bir hacmi çizin. oyuk iç duvarı üzerinde ucu istirahat yavaşça hücre kültür ortamı dağıtmak. </li><li> plaka kapağı yerleştirin ve daha önce kurulmuş hücre kültürü protokollerine göre kuluçkaya yatmaktadır. </li></ol></li><li> Hücre tipi 2. içeren çukurlu doku kültürü plakalarına hücre tipi 1. içeren insert aktarılması. NOT: Her iki hücre tipleri uygun büyüme aşamasına ulaştığınızda bu adımı gerçekleştirin. <ol><li> Daha önce adımlar 1.3) ve 1.4 de tarif edildiği gibi oyuklara eklediği aktarılması önce), gerekli ortam değişiklik yapın. Not: Bu noktada, ekleme, üretici talimatlarına göre belirlenen, her iki bölme içinde uygun ortam hacimleri dağıtılması için önemlidir. </li><li> kavrama, hücre t içeren bir ekin üst kenarını cımbız kullanarak1. ype ve yavaşça 2 uygun iyi içeren hücre tipi # yerleştirin. </li><li> Tüm ekler aktardıktan sonra, insert zarının altında hava kabarcığı olup olmadığını kontrol edin. NOT: Hava kabarcıkları ucun zarından herhangi değiştirilmesini engelleyecek ve tüm deney tehlikeye atabilir. </li><li> Hava kabarcıkları varsa, çok nazikçe iyi kullanan cımbız gelen parçayı kaldırın ve geri hücre kültürü ortamında atılmak. kabarcıklar kaybolur. onlar hala varsa, bir açıda geri hücre kültür ortamına ekler daldırma yavaşça deneyin. NOT: vurmak ya da yapışık hücrelere dissociating önlemek için ekler karıştırın etmeyin. </li><li> tüm hava kabarcıklarını kaldırılması ve her iki bölümlerinde medya hacimleri, plaka kapağı yerleştirin ve inkübe olduğunu kontrol ettikten sonra. </li></ol></li><li> bir ko-kültür sisteminde serinletici ortam NOT: Membran kolayca ekleme arasında medya alışverişi izin verse ve iyi, orta serinletici yapılırTek başına difüzyon ile üst ve alt bölümlerinde dengeye ulaşmak için gerekli zamandan beri hem bölmeler oldukça uzun olabilir. <ol><li> Hücre tipi 1. ihtiva eden ekler de serinletici ortamı adım 1.3) de aynı şekilde yapılır. </li><li> Hücre tipi 2. içeren kuyularda orta yenilemek için hafifçe pipet karşılamak için yeterince geniş bir alan oluşturmak için yan ekleme kaydırın. ) Adım 1.4 olarak orta yenileyin. </li><li> ) Hava kabarcıklarının varlığı için kontrol edin ve 1.5.5 arasındaki adımları 1.5.3 başına hacim) doğrulayın. </li></ol></li></ol> 2. Örnek: nöronal PC12 hücreleri üzerindeki LPS aktive N9 mikroglia tarafından salgılanan sitokinlerin etkilerini ölçen Not: Aşağıdaki adımlar de belirli bir şişeye, ve çanak boyutları için tasarlanmıştır. Ancak, protokol herhangi plasticware boyutları için özelleştirilebilir. medya ve kompozisyon malzemeler Tablosuna bakınız. <ol><li> Tohumlama ve çoklu PC12 hücreleri ayırtoyuklu doku kültürü plakaları <ol><li> Sıcak rutin PC12 hücre kültür ortamı, 37 ° C su banyosu içinde PC12 farklılaşma orta ve tripsin-EDTA. </li><li> 75 cm 2 şişeden% 60-80 izdiham PC12 hücreleri kullanın. </li><li> 15 mm&#39;lik bir Pasteur pipeti ile bir şişe içinde, tüm hücre kültür ortamında vakum aspirasyonun yapılması. </li><li> Yavaşça steril fosfat tamponlu tuzlu su, 5 ml ile hücre mono tabakasının yıkayın ve Pasteur pipeti ile sıvıyı ayırın. Bu aşamada hücreleri ayırmak için dikkatli olun. </li><li> Tripsin-EDTA, 3 ml ile hücre mono tabakasının kapatın ve 37 ° C&#39;de 2-3 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> tüm hücreleri mikroskop altında müstakil emin olun. Çok az sayıda hücre yüzen ise, 5 dakikalık bir süre için daha uzun bir süre için inkübe edilir. </li><li> Tripsin-EDTA inaktive etmek üzere rutin PC12 hücre kültür ortamında 10 ml. </li><li> En hücreler o alttan ayrışmış emin yaparken bir 10 ml pipet ile hafifçe çiğnemekşişeye f. hücre süspansiyonu hava kabarcıkları oluşturmaktan kaçının. </li><li> Aynı 10 mi pipet ile 50 ml santrifüj tüpü içinde hücre süspansiyonu aktarın. </li><li> 3.200 x g&#39;de 1 dakika boyunca santrifüj </li><li> pelet rahatsız etmemek için özen gösterilirken Pasteur pipeti ile süpernatant atın. </li><li> 10 ml&#39;lik bir pipet ile rutin PC12 hücre kültür ortamında 10 ml. NOT: pelet normalden daha küçük ya da büyük olması durumunda bu hacim ayarlanabilir. </li><li> Pelet homojenize aynı 10 mi pipet ile toz haline getirin. PC12 hücreleri genellikle yukarı pipetle en az 20 yüzden bir araya gelme ve gerekli downare. NOT: dinç öğütülerek gerekli olmakla birlikte, hücre süspansiyonu hava kabarcıkları oluşturarak kaçının. </li><li> 1.5 ml tüp içinde, tripan mavisi hücre süspansiyonu uygun bir seyreltme hazırlar. Daha önce kurulmuş protokollere 74 göre bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. </li><li> Ayrı bir 50 ml tüp içinde, bir hücre süspansiyonu bölünmüşPC12 farklılaşma ortamı ile 24 oyuklu plaka (30,000 ¢ / cm2, de üreticinin protokolüne uygun olarak her 0.6 mi) kuyu tohumlama için seyreltilmiş hücre süspansiyonu uygun olan elde edildi. Not: Daha önceki çalışmalarda protokolleri 75 tarafından belirtildiği gibi, 24 oyuklu bir plaka, daha önce kollajen ile kaplanmalıdır. </li><li> iyi bir mikropipet kullanarak başına hücre süspansiyonu 0.6 ml dağıtın. </li><li> tüm kuyuları numaralı seribaşı olduğunda,) adım 1.1.7 deki gibi plaka sallayın. </li><li> PC12 hücrelerinin diferansiyasyon, ko-kültür deneyleri yapmadan önce PC12 farklılaşma ortamda 15,16 bir% 5 CO2 nemli bir atmosferde 37 ° C&#39;de 7-9 gün süre ile 24 oyuklu plakalar inkübe izin verilmesi. </li><li> Sıvının yarısının çıkarılması ve taze PY12 farklılaştırma ortamının eşit hacimde değiştirerek, her gün ortam değişiklikleri gerçekleştirme. </li></ol></li><li> ekler de N9 mikroglia tohumlama ve LPS ile tedavi <ol><li> Bir gün ko-kültür deneyleri yapmadan önce, 1.1.4 adımda 1.1.1) sonra, hücre yapışmasını optimize etmek için rutin N9 hücre kültür ortamı ile PTFE 0.4 um gözenekli ekler ön tedavi) </li><li> 37 ° C bir su banyosunda ılık rutin N9 hücre kültür ortamı ve tripsin-EDTA. </li><li> Bu sırada, daha sonra kullanılmak üzere, 1.5 ml bir tüp içinde LPS&#39;nin yaklaşık 10 mg ağırlığında. NOT: LPS güçlü bir pro-inflamatuar endotoksin ve özellikle güvenlik önlemleri, gözlük, eldiven gerektirir ve bir partikül maske şiddetle tavsiye edilir beri. </li><li> 75 cm 2 şişeden% 80-90 izdiham N9 hücreleri kullanın. </li><li> ) 2.1.14 adımları 2.1.3) izleyin. Her zaman rutin N9 hücre kültür ortamı yerine rutin PC12 hücre kültür ortamı kullanın. Ayrıca) N9 mikroglia kadar PC12 hücreleri gibi birlikte çok daha az pipetleme yukarı kümelenir yoktur ve aşağı adım 2.1.13 gerekli olabileceğini unutmayın. </li><li> Ayrı bir 50 ml tüp içinde, N9 hücre kültürü ortamı ile bir hücre süspansiyonu O split24 oyuklu plakalar içinde tutmak için tasarlanmış ekler (60,000 ¢ / cm2, üreticinin protokolüne uygun olarak uç başına 0.05 mi, zar yüzeyi alanı için üretici bilgileri) tohumlama için uygun bir seyreltilmiş hücre süspansiyonu btain. Not: Bu Eklemelerimin üretici tarafından kollajen ile kaplanır ve hücre yapışması için optimize edilmiştir. </li><li> bir mikropipet kullanarak uç başına hücre süspansiyonu 0.05 ml dağıtın. </li><li> Tüm ekler numaralı seribaşı olduğunda,) adım 1.1.7 deki gibi plaka sallayın. </li><li> 4 ug 2 ug / ml / ml, 1 ug / ml çalışma solüsyonlar elde etmek için N9 işleme ortamı kullanılarak LPS&#39;nin seri dilüsyonları gerçekleştirin. </li><li> Pipet 0.05 ila 2 mg / ml bir nihai seyreltme elde etmek üzere bir insertlerin grubu 4 ug / ml çalışma çözeltisi ilave edildi. </li><li> farklı set ekler diğer iki çalışma çözümleri için yineleyin 2.2.10), / ml ve 0.5 ug / ml 1 ug son dilüsyonları elde edilmiştir. </li><li> İçindeko-kültür deneyleri yapmadan önce LPS ile N9 Mikroglia aktivitesi sağlamak için% 5 CO2 nemli bir atmosferde 37 ° C&#39;de 24 saat boyunca ek içeren plakalar cubate. </li></ol></li><li> Co-yetiştirilmesi N9 mikroglia ile nöronal PC12 hücreleri <ol><li> PC12 hücrelerinin farklılaşma 7-9 gün sonra, 37 ° C bir su banyosunda ılık N9 muamele ortamı ve PC12 muamele ortamı ile LPS ile kuluçkalamadan 24 saat sonra N9 mikroglia aktive eder. </li><li> N9 muamele ortamı içinde 0.1 ml, tüm kullanılan ortam yerine adım 1.3) &#39;deki gibi N9 mikroglia için toplam Orta değişiklik yapın. Her insert.This için bunu yapın ekler sadece aktif N9 mikroglia bırakarak, LPS tüm izlerini kaldırmak için gereklidir. </li><li> ) Adım 1.4 olarak nöronal PC12 hücreleri için toplam orta değişikliği gerçekleştirin. % 5 CO2 nemli bir atmosferde 37 ° C&#39;de 24 saat veya 48 saat boyunca, N9-PY12 ko-kültürler) adım 1.5 olarak 24 oyuklu plakalara ekler transfer .Incubate. </li><li> 24 sonrasısaat veya 48 saat, süpernatan ve / veya sitotoksisite, enzime bağlı immünosorbent tahlil için hücreler (ELISA), Western blot ya da diğer tayinleri hasat edilir. </li></ol></li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Herhangi bir ekleme ko-kültür sistemi deney en kritik adım aslında kullanmak için uygun parçayı seçiminde yaşıyor. Gözenek büyüklüğü ve membran malzemesi ekilmiş olan hücre türü ve deney amacı dikkate unutulmadan, ayrıntılı göz önüne alınmalıdır. Örneğin, chemotaxic deneyler, hücre-hücre temas yokluğunda salgılanan çözünür faktörlerin neden olduğu hücre davranışı modülasyon analiz hücre birleşik kültürlerinden daha membran aynı tip kullanabilir. Hücre göçü ve hücr...

In vitro doku, organ veya sistemlerin çalışma çok hücreli organizmaları oluşturan çeşitli hücresel alt tipleri arasındaki mevcut çok karmaşık ilişkileri kolaylaştırmak için bir girişimdir. Nitekim, in vitro çalışmalar mümkün tek hücre popülasyonlarının ayrıntılı bir anlayış elde etmek için yapmak. 1) kolayca hücresel ortamı manipüle 2) yeteneği hücresel etkileşimleri azaltılmış ve: in vitro deneylerde iletken iki temel avantajı vardır. Bu nedenle, bu iki avantajı izin bilim adamları, tüm organizmalarda dış etkilerin sonuçları düzenleyen potensitesi, in vivo spesifik hücre tiplerinin davranışını tahmin etmek. Bu anlamda, in vitro hücre kültürü genellikle temel ve uygulamalı yaşam bilimleri bağlayan bir köprü görevi görür. Bununla birlikte, in vitro çalışma birkaç dezavantajları da vardır, en önemlisi belli bir rezervasyon fizyolojik yaşamak olabilir varlık olduğunugözlenen fenotipleri al alaka. Gerçekten de, tek bir hücre tipi, bir kap içinde büyütüldüğü zaman, kültür bir değişik ölçüde kaybeder, diğer hücre tipleri, doku ve menşe organizmanın ve çapa içinden hümoral ortam katkısı ile hücre-hücre bağlantıları bunu etkin doku hücre fonksiyonu için bazen çok önemli bir belirli üç boyutlu yapıyı korumak için. Hücre-hücre ilişkileri sorunu karışık kültür teknikleri geliştirilmesi yolu ile ele alınmıştır. Bu yöntemde, iki ya da daha fazla hücre popülasyonları aynı kültür kabı içinde bir araya büyütülür. Ancak, bu karışık kültürler önemli sakıncaları taşımaktadır. Bir yandan, bazı hücre alt tipi fiziksel kaynaklı doku birbiriyle etkileşmeyen ve salgılanan çözünür faktörlerin ve yakın reseptörleri tarafından sürekli parakrin iletişim itimat. Bu yakın sitokin sinyal bağımlı enflamatuvar süreçler için de geçerlidir. Karışık c&#39;deultures, fiziksel etkileşimleri kaçınılmaz ve imkansız değişmiş sonuçlar verebilir hücre-hücre temas yokluğunda parakrin iletişim çalışma yapmak. Öte yandan, karışık bir popülasyon içinden hücreye özel yorumlara elde sonuçları önemli ölçüde etkileyebilecek sert ayırma tekniklerinin kullanımı olmadan olanaksız hale gelir. Bu önemli sorunları çözmek için, şartlandırılmış medya kullanımı bölümlere kültür ve parakrin sinyalizasyon çalışması için izin veren bir teknik olarak geliştirilmiştir. Bu yöntem, hücrelerin bir popülasyonu içeren tüpler bir hücre tipi, bu şekilde durumunu adlandırılmış ortamının üstte yüzen transferini gerektirir. Bununla birlikte, önemli bir dezavantajı, kısa ömürlü moleküllerin hücre ikinci nüfusun oyuklarına transfer edilmesi şartına ortam içinde yeterince uzun süre hayatta kalmamasıdır. Hatta uzun ömürlü moleküller büyük ölçüde nedeniyle difüzyon zamanla seyreltilmiş edilecektir. Bundan başka, her iki hücrepopülasyonlar sadece tek yönlü parakrin iletişim ziyade aktif çift yönlü iletişim katılmak. Bu da in vivo var gibi doğru çok hücreli ilişkileri yeniden hayati önem taşımaktadır geribildirim sinyalizasyon olmaması yol açar. Bunun bir sonucu olarak ve daha iyi in vitro hücre ortamında in vivo koşullarında orijinal simüle etmek için ihtiyacı ile, hücre kültürü teknikleri çeşitli gelişmeler yılda elde edilmiştir. En önemli gelişmeler biri 1953 yılında Grobstein tarafından ilk defa kullanılan hücre kültürleri bölümlere yönelik mikro gözenekli membran ile geçirgen desteklerin kullanımı olmuştur 1. Böyle geçirgen destekler çok sayıda hücre tiplerini barındırmak için ve kullanılacak yılda uyarlanmış olan çeşitli uygulamalarda kullanılır. Günümüzde, bu desteklerin bir multiwell doku kültürü plaka veya Circu kuyulara dinlenmek için tasarlanmış gibi içi boş ekler varlar yemekler. Bir ko-kültür sisteminde, uç oyuk ise bir hücre türü içeren ya da tabak da vücut sıvısı ortamı (Şekil 1) iki farklı hücre popülasyonlarının katkı çalışma sağlayan diğer hücre popülasyonu içerir. Bunun bir sonucu olarak, (apikal salgılama ya da sinyal alımı vs bazolateral), hücre kutup ve böylece karışık kültürler ve koşullandırılmış ortam tekniklere kıyasla uç ko-kültür sistemleri önemli bir avantaj kazandıran, korunur. Membran malzemelerin çeşitli türleri mevcuttur en yaygın olanları olan polyester (PET), polikarbonat (PC) veya kollajen kaplı politetrafloroetilen (PTFE), bunlar 0.4 um ila 12.0 um arasında değişen farklı gözenek boyutları vardır ve. malzeme ve delik boyutlarının Bu çeşitler ile sınırlı değildir kullanan aşağıdaki için farklı seviyelerde elverişli olmaları optik özellikleri, membran kalınlığı ve hücre yapışmasına alakalı değişken özellik uygulayan insert tayfı sunar: -ders çalışıyorHücre farklılaşması, embriyonik gelişim, tümör metastazı ve geçirgen membran vasıtasıyla chemotaxic deneyleri ile yara iyileşmesi; epitel ya da endotel mono tabakaları yoluyla ulaşım değerlendirerek ilaç penetrasyonunu -evaluating geçirgen desteklerde kültüre ve; intikallerde hücresi ko-kültürler, hücre-hücre temas yokluğunda salgılanan çözünür faktörlerin neden olduğu hücre davranışı modülasyonlar analiz. Bu çalışmanın amacı, bir ekleme ko-kültür sistemi kullanılarak hücre-hücre temas yokluğunda salgılanan çözünür faktörler aracılık ettiği hücresel değişiklikleri değerlendirmek için yukarıda belirtilen üçüncü fonksiyon yerine getirmek için, genel yöntem yönergelere tanımlamaktır. Araştırmanın Birkaç farklı alanları hücre popülasyonları üzerinde salgılanan çözünür faktörlerin etkisiyle ilgili soruları cevaplamak için insert ko-kültür sistemlerinin kullanımını sağlamak. çeşitli düzeylerde hücresel davranışı modüle Nitekim, parakrin sinyal bütün dokularda uygun olupve insert ko-kültür sistemleri yapan sistemler, bu alanlarda gelişmeler sağlamak için vazgeçilmezdir. Bunun aksine, bu sinyal transdüksiyonunu onaylayabilir insertlerin kullanımı doğrudan hücre-hücre teması yoluyla olup salgılanan faktörler gereğidir. Insertlerin en önemli kullanım alanlarından biri salgılanan sitokinlerin etkileri bağışıklık çeşitli hücresel oyuncu değerlendirilir inflamasyon çalışmaları 2-14 bulunmaktadır. Özellikle, merkezi sinir sistemi (MSS) inflamasyon çalışma büyük ölçüde daha iyi nöro-inflamasyonu 15-21 sürüş nöronlar ve mikroglia farklı parakrin rollerini tanımlamaya izin insert ko-kültür çalışmaları, kazanç olmuştur. Bu sistemler de azaltmak ya da pro-enflamatuar faktörler 22-26 sekresyonunu inhibe etme kabiliyetleri dayanır moleküllerin, anti-inflamatuar potansiyelinin çalışma devreye sokuldu. Araştırma mekanizmaları, özellikle kanser 27-31 ilişkin anjiyogenez 32-34 ve inflammati altında yatantümörigenezinde 35-42, bu aynı zamanda insert ko-kültür sistemleri yararlanır. Ayrıca, çözünür faktörler farklılaşma ve çeşitli çalışmalar söz konusu alanda 43-50 sorulara cevap ekler kullandık sürücü süreçlerde birinci derecede öneme sahiptir. MSS nöral doku olarak görmeye çok sınırlı bir yenilenme potansiyeli, neurotrophism çalışma vardır ve nöro temel ve yaygın ko-kültür sistemleri 51-56 kök hücrelerin kullanımı ile sağlanmıştır. Buna ek olarak, ekler de nefroloji 57,58, endotel etkileşimleri ve anjiyogenez 59-62, apoptoz obezite ve metabolik sendrom 22,23,66-67 yılında 63-65, inflamasyonu sinyalizasyon, iç kulak saç hücre koruması gibi çok farklı alanlarda kullanılmaktadır 68,69 ve hatta mantar virulans 70,71 ve Parazitoloji 72,73 yılında. Bu makalede, bir experim kurmak için genel metodolojik kurallar sunmaktadırBir ekleme ko-kültür sistemi kullanılarak salgılanan çözünür faktörler tarafından aracılık hücresel değişikliklerin değerlendirilmesi açısından ent. Özellikle, sinir hücresi ko-kültür ve nöro sürecini inceleyerek kendi kullanımları hakkında dikkatimizi durulacak. pilota mümkün kılacak ekler deneyler çok geniş bir spektrum göz önüne alındığında, hücre kültürü tekniğinin her yönüyle kapsayacak şekilde dayanılmaz. Bir örnek olarak, belirli bir protokol uç ko-kültür yöntemi somut bir anlayışı sunan, detaylı olarak açıklanacaktır lipopolisakarit (LPS) tarafından salgılanan sitokinlerin etkileri nöronal PC 12 hücreleri üzerinde N9 mikroglia -etkinleştirilmiş ölçülmesi.

<table><tbody><tr><td>RPMI-1640 medium</td><td>Sigma</td><td>R8755</td><td>Warm in 37 &amp;deg;C water bath before use</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle&amp;rsquo;s Medium/Nutrient Mixture F-12 Ham</td><td>Sigma</td><td>D6421</td><td>Warm in 37 &amp;deg;C water bath before use, must be supplemented with 0.365 gm/L L-glutamine</td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>ATCC</td><td>30-2040</td><td>Warm in 37 &amp;deg;C water bath before use</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>MultiCell</td><td>80350</td><td>Warm in 37 &amp;deg;C water bath before use</td></tr><tr><td>Nerve Growth Factor-7S from murine submaxillary gland</td><td>Sigma</td><td>N0513</td><td>Reconstitute the lyophilized powder in a solution of buffered saline or tissue culture medium containing 0.1&amp;ndash;1.0% bovine serum albumin or 1-10% serum</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA solution</td><td>Sigma</td><td>T3924</td><td>Warm in 37 &amp;deg;C water bath before use</td></tr><tr><td>Lipopolysaccharides from&amp;nbsp;Escherichia coli&amp;nbsp;055:B5</td><td>Sigma</td><td>L2880</td><td>Toxic</td></tr><tr><td>Cell culture inserts for use with 24-well plates</td><td>BD Falcon</td><td>353095</td><td>0.4 &amp;mu;m pores</td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>TrueLine</td><td>TR5002</td><td>Coat with collagen before use</td></tr><tr><td>Routine PC12 cell culture medium</td><td></td><td></td><td>Routine N9 cell culture medium</td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 85% RPMI medium</td><td></td><td></td><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 90% DMEM-F12 medium</td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 10% heat-inactivated horse serum</td><td></td><td></td><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 10% heat-inactivated horse serum</td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 5% heat-inactivated fetal bovine serum</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC12 differentiation medium</td><td></td><td></td><td>N9 treatment medium</td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 99% RPMI medium</td><td></td><td></td><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 99% DMEM-F12 medium</td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 1% heat-inactivated fetal bovine serum</td><td></td><td></td><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 1% heat-inactivated fetal bovine serum</td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 50 ng/mL nerve growth factor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC12 treatment medium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 99% RPMI medium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>-&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; 1% heat-inactivated fetal bovine serum</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

development of an insert co-culture system of two cellular types in the absence of cell-cell contact

The role of secreted soluble factors in the modification of cellular responses is a recurrent theme in the study of all tissues and systems. In an attempt to make straightforward the very complex relationships between the several cellular subtypes that compose multicellular organisms, in vitro techniques have been developed to help researchers acquire a detailed understanding of single cell populations. One of these techniques uses inserts with a permeable membrane allowing secreted soluble factors to diffuse. Thus, a population of cells grown in inserts can be co-cultured in a well or dish containing a different cell type for evaluating cellular changes following paracrine signaling in the absence of cell-cell contact. Such insert co-culture systems offer various advantages over other co-culture techniques, namely bidirectional signaling, conserved cell polarity and population-specific detection of cellular changes. In addition to being utilized in the field of inflammation, cancer, angiogenesis and differentiation, these co-culture systems are of prime importance in the study of the intricate relationships that exist between the different cellular subtypes present in the central nervous system, particularly in the context of neuroinflammation. This article offers general methodological guidelines in order to set up an experiment in order to evaluating cellular changes mediated by secreted soluble factors using an insert co-culture system. Moreover, a specific protocol to measure the neuroinflammatory effects of cytokines secreted by lipopolysaccharide-activated N9 microglia on neuronal PC12 cells will be detailed, offering a concrete understanding of insert co-culture methodology.

insert ko-kültür sistemlerinin kullanılması MSS farklı hücresel oyuncular arasında parakrin ilişkileri vitrin nöro süreçlerin çalışmada özellikle uygun olduğunu. MSS Bağışıklık onların istirahat dallanmış devlet (Şekil 2A) çevreleri izlemek ve algılama bozuklukları yeteneğine sahip mikroglia denilen yerleşik hücreler tarafından çoğunlukla başarılı olduğunu olabilir sorun düzgün nöronal fonksiyon 76-78 için gerekli çok...

Watch this Scientific Journal Video about Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact at JoVE.com

Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact

In multicellular organisms, secreted soluble factors elicit responses from different cell types as a result of paracrine signaling. Insert co-culture systems offer a simple way to assess the changes mediated by secreted soluble factors in the absence of cell-cell contact.

Hücre-Hücre İletişim Yokluğunda iki Hücresel Türleri Ekleme Co-kültür Sisteminin Geliştirilmesi

The role of secreted soluble factors in the modification of cellular responses is a recurrent theme in the study of all tissues and systems. In an attempt ...

development-an-insert-co-culture-system-two-cellular-types-absence

Research

JoVE Journal

Biology

27.8K Görüntüleme.  University of Québec. In multicellular organisms, secreted soluble factors elicit responses from different cell types as a result of paracrine signaling. Insert co-culture systems offer a simple way to assess the changes mediated by secreted soluble factors in the absence of cell-cell contact.

Video: Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact

A Mimic of the Tumor Microenvironment: A Simple Method for Generating Enriched Cell Populations and Investigating Intercellular Communication

Understanding the early heterotypic interactions between cancer cells and the surrounding non-cancerous stroma is important in elucidating the events leading to stromal activation and establishment of the tumor microenvironment (TME). Several in vitro and in vivo models of the TME have been developed; however, in general these models do not readily permit isolation of individual cell populations, under non-perturbing conditions, for further study. To circumvent this difficulty, we have employed an in vitro TME model using a cell growth substrate consisting of a permeable microporous membrane insert that permits simple generation of highly enriched cell populations grown intimately, yet separately, on either side of the insert&#39;s membrane for extended co-culture times. Through use of this model, we are capable of generating greatly enriched cancer-associated fibroblast (CAF) populations from normal diploid human fibroblasts following co-culture (120 hr) with highly metastatic human breast carcinoma cells, without the use of fluorescent tagging and/or cell sorting. Additionally, by modulating the pore-size of the insert, we can control for the mode of intercellular communication (e.g., gap-junction communication, secreted factors) between the two heterotypic cell populations, which permits investigation of the mechanisms underlying the development of the TME, including the role of gap-junction permeability. This model serves as a valuable tool in enhancing our understanding of the initial events leading to cancer-stroma initiation, the early evolution of the TME, and the modulating effect of the stroma on the responses of cancer cells to therapeutic agents.

We adapted a permeable microporous membrane insert to mimic the tumor microenvironment (TME). The model consists of a mixed cell culture, allows simplified generation of highly enriched individual cell populations without using fluorescent tagging or cell sorting, and permits studying intercellular communication within the TME under normal or stress conditions.

Tümör mikroçevresinin A Mimik: Hücreler arası İletişim Zenginleştirilmiş hücre popülasyonları oluşturma ve incelenmesi için Basit Bir Yöntem

Understanding the early heterotypic interactions between cancer cells and the surrounding non-cancerous stroma is important in elucidating the events ...

Kanser Araştırmaları

Cell Co-culture Patterning Using Aqueous Two-phase Systems

Cell patterning technologies that are fast, easy to use and affordable will be required for the future development of high throughput cell assays, platforms for studying cell-cell interactions and tissue engineered systems. This detailed protocol describes a method for generating co-cultures of cells using biocompatible solutions of dextran (DEX) and polyethylene glycol (PEG) that phase-separate when combined above threshold concentrations. Cells can be patterned in a variety of configurations using this method. Cell exclusion patterning can be performed by printing droplets of DEX on a substrate and covering them with a solution of PEG containing cells. The interfacial tension formed between the two polymer solutions causes cells to fall around the outside of the DEX droplet and form a circular clearing that can be used for migration assays. Cell islands can be patterned by dispensing a cell-rich DEX phase into a PEG solution or by covering the DEX droplet with a solution of PEG. Co-cultures can be formed directly by combining cell exclusion with DEX island patterning. These methods are compatible with a variety of liquid handling approaches, including manual micropipetting, and can be used with virtually any adherent cell type.

Aqueous two-phase systems were used to simultaneously pattern multiple populations of cells. This fast and easy method for cell patterning takes advantage of the phase separation of aqueous solutions of dextran and polyethylene glycol and the interfacial tension that exists between the two polymer solutions.

Sulu İki fazlı sistemler kullanma Hücre Co-kültür desenlendirme

Cell patterning  technologies that are fast, easy to use and affordable will be required for the  future development of high throughput cell assays, ...

Biyomühendislik

Ultrathin Porated Elastic Hydrogels As a Biomimetic Basement Membrane for Dual Cell Culture

The basement membrane is a critical component of cellular bilayers that can vary in stiffness, composition, architecture, and porosity. In vitro studies of endothelial-epithelial bilayers have traditionally relied on permeable support models that enable bilayer culture, but permeable supports are limited in their ability to replicate the diversity of human basement membranes. In contrast, hydrogel models that require chemical synthesis are highly tunable and allow for modifications of both the material stiffness and the biochemical composition via incorporation of biomimetic peptides or proteins. However, traditional hydrogel models are limited in functionality because they lack pores for cell-cell contacts and functional in vitro migration studies. Additionally, due to the thickness of traditional hydrogels, incorporation of pores that span the entire thickness of hydrogels has been challenging. In the present study, we use poly-(ethylene-glycol) (PEG) hydrogels and a novel zinc oxide templating method to address the previous shortcomings of biomimetic hydrogels. As a result, we present an ultrathin, basement membrane-like hydrogel that permits the culture of confluent cellular bilayers on a customizable scaffold with variable pore architectures, mechanical properties, and biochemical composition.

Current bilayer culture models do not allow for functional in vitro studies that mimic in vivo microenvironments. Using polyethylene glycol and a zinc oxide templating method, this protocol describes the development of an ultrathin biomimetic basement membrane with tunable stiffness, porosity, and biochemical composition that closely mimics in vivo extracellular matrices.

Kültür Ultrathin Porated elastik Hydrogels bir Biomimetic membran için çift olarak hücre

The basement membrane is a critical component of cellular bilayers that can vary in stiffness, composition, architecture, and porosity. In vitro studies ...

A Co-culture Method to Investigate the Crosstalk Between X-ray Irradiated Caco-2 Cells and PBMC

The protocol adopted in this work aims at unraveling how X-rays perturb the functioning of the intestinal barrier, focusing on the interplay between colorectal tumor cells and the immune system. Colorectal carcinoma is among the most common type of cancer, typically treated by surgery, chemotherapy, and radiotherapy. Advantages of radiotherapy in targeting the tumor are well known. However, even limited exposures of healthy tissues are of great concern, particularly regarding the effects on the intestinal barrier and the immune system. The adopted setup allows to study the interplay between two cell populations in a condition more similar to the physiological one, when compared to normal cell cultures. For this purpose, we resort to different techniques and we used an in vitro co-culture model, based on Caco-2 cells differentiated as a monolayer and PBMC, sharing the same culture medium. This protocol has been developed to focus on both macroscopic effects, i.e. cell viability and Trans-Epithelial Electrical Resistance (TEER), and, through western blot, molecular alterations, i.e. the activation of inflammatory pathway in immune cells and the tight junction protein expression in Caco-2 cells. Initial evaluation of radiation effects on Caco-2 cell viability was assessed via the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and Trypan blue assays, while TEER was measured at fixed time intervals through an ohmmeter specifically designed for co-culture systems. In this way, the effects due to radiation, the presence of Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC), and eventually their synergistic effect, can be demonstrated. Through these complementary techniques, we observed a high radio-resistance of Caco-2 within the range of 2 - 10 Gy of X-rays and an increased Caco-2 monolayer permeability when PBMCs were added. In particular, PBMC presence was found to be associated with the variation in the tight junction scaffold proteins expression.

We present a protocol to investigate the crosstalk between X-ray-irradiated Caco-2 and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). The protocol starts with Caco-2 irradiation and set-up of the co-culture with PBMC; subsequently, trans-epithelial electrical resistance is measured regularly over 48 h and western blot performed in both Caco-2 and PBMC.

X-ışını arasında çapraz karışma araştırmak için bir ortak kültür yöntemi Caco-2 hücreleri ve PBMC radyasyona maruz

The protocol adopted in this work aims at unraveling how X-rays perturb the functioning of the intestinal barrier, focusing on the interplay between ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Establishing Single-Cell Based Co-Cultures in a Deterministic Manner with a Microfluidic Chip

Cell co-culture assays have been widely used for studying cell-cell interactions between different cell types to better understand the biology of diseases including cancer. However, it is challenging to clarify the complex mechanism of intercellular interactions in highly heterogeneous cell populations using conventional co-culture systems because the heterogeneity of the cell subpopulation is obscured by the average values; the conventional co-culture systems can only be used to describe the population signal, but are incapable of tracking individual cells behavior. Furthermore, conventional single-cell experimental methods have low efficiency in cell manipulation because of the Poisson distribution. Microfabricated devices are an emerging technology for single-cell studies because they can accurately manipulate single cells at high-throughput and can reduce sample and reagent consumption. Here, we describe the concept and application of a microfluidic chip for multiple single-cell co-cultures. The chip can efficiently capture multiple types of single cells in a culture chamber (~46%) and has a sufficient culture space useful to study the cells&#39; behavior (e.g., migration, proliferation, etc.) under cell-cell interaction at the single-cell level. Lymphatic endothelial cells and oral squamous cell carcinoma were used to perform a single-cell co-culture experiment on the microfluidic platform for live multiple single-cell interaction studies.

This report describes a microfluidic chip-based method to set up a single cell culture experiment in which high-efficiency pairing and microscopic analysis of multiple single cells can be achieved.

Mikroakışkan Çiple Deterministik Bir Şekilde Tek Hücreli Ortak Kültürlerin Oluşturulması

Cell co-culture assays have been widely used for studying cell-cell interactions between different cell types to better understand the biology of diseases ...

Migration, Chemo-Attraction, and Co-Culture Assays for Human Stem Cell-Derived Endothelial Cells and GABAergic Neurons

Role of brain vasculature in nervous system development and etiology of brain disorders is increasingly gaining attention. Our recent studies have identified a special population of vascular cells, the periventricular endothelial cells, that play a critical role in the migration and distribution of forebrain GABAergic interneurons during embryonic development. This, coupled with their cell-autonomous functions, alludes to novel roles of periventricular endothelial cells in the pathology of neuropsychiatric disorders like schizophrenia, epilepsy, and autism. Here, we have described three different in vitro assays that collectively evaluate the functions of periventricular endothelial cells and their interaction with GABAergic interneurons. Use of these assays, particularly in a human context, will allow us to identify the link between periventricular endothelial cells and brain disorders. These assays are simple, low cost, and reproducible, and can be easily adapted to any adherent cell type.

We present three simple in vitro assays-the long-distance migration assay, the co-culture migration assay, and chemo-attraction assay-that collectively evaluate the functions of human stem cell derived periventricular endothelial cells and their interaction with GABAergic interneurons.

Göç, Kemo-Attraction, ve Co-Kültür Tahliller İnsan Kök Hücre Kaynaklı Endotel Hücreleri ve GABAerjik Nöronlar için

Role of brain vasculature in nervous system development and etiology of brain disorders is increasingly gaining attention. Our recent studies have ...

Nörobilim

<meta charset="utf8"></head><body>Epitel ve Fibroblast hücreleri için gelişmiş iki katmanlı 3D ko-kültür sistemi

Establishing a Three-Dimensional Coculture Module of Epithelial Cells Using Nanofibrous Membranes

Technical hurdles in a culture of epithelial cells include dedifferentiation and loss of function. Biomimetic three-dimensional (3D) cell culture methods can enhance cell culture efficiency. This study introduces an advanced two-layered culture system intended to cultivate epithelial cells as tissue-like layers with the culture of fibroblasts within a 3D environment. Polyvinyl alcohol (PVA) and poly(&#949;-caprolactone) (PCL) nanofibrous membranes (NMs) were fabricated via electrospinning and utilized as a physiologically relevant extracellular matrix for the culture of epithelial cells and fibroblasts, respectively. In the upper insert wells, lung epithelial cells were cultivated on the PVA NM, and in the lower chambers, fibroblasts were cultured on the PCL NM. This configuration eliminates direct cell-cell contact and facilitates the examination of paracrine signaling mediated by soluble factors. Confocal microscopy was employed to analyze the distribution, growth pattern, and expression of intracellular proteins, including zona occludens in epithelial cells. Z-stacking techniques enabled detailed 3D reconstructions, providing precise insights into the integrity of tight junctions and spatial organization within the epithelial layer. Scanning electron microscopy (SEM) assessed the morphological characteristics of cell types on the nanofibrous membranes. SEM imaging revealed intricate cell surface structures and interactions with the nanofibers, offering a comprehensive perspective on cellular architecture and cell interaction with nanofibrous structure. The Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay is a simple method for measuring epithelial cell and fibroblast growth rates over time. It provides the proliferative behaviors and potential synergistic effects of coculturing these cells. These findings highlight the effectiveness of a simple insert co-culture system for simultaneous culture of fibroblasts and epithelial cells, which is crucial in various physiological and pharmacological contexts, including epithelial tissue regeneration, tumor microenvironment with endothelial, immune, and other stroma cells, toxicity assay, and drug activity test.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: PVA-PCL Nanolifli Membranlarla 3D Kokültür Sistemlerini Geliştirme

Here, we demonstrate how epithelial cells cultured with fibroblasts in the nanofibrous membrane-based two-layer system can stably adhere to and grow on the membrane.

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Technical hurdles in a culture of epithelial cells include dedifferentiation and loss of function. Biomimetic three-dimensional (3D) cell culture methods ...

An Innovative 3D-Printed Insert Designed to Enable Straightforward 2D and 3D Cell Cultures

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of conditioned media remains time-consuming and far from physiological and pathological conditions. Although a few models of co-culture are commercially available, they remain restricted to specific assays and are mostly for two types of cells. 
Here, 3D-printed inserts are used that are compatible with numerous functional assays. The insert allows the separation of one well of a 6-well plate into four compartments. A wide range of combinations can be set. Moreover, windows are designed in each wall of the compartments so that potential intercellular communication between every compartment is possible in the culture medium in a volume-dependent manner. For example, paracrine intercellular communication can be studied between four cell types in monolayer, in 3D (spheroids), or by combining both. In addition, a mix of different cell types can be seeded in the same compartment in 2D or 3D (organoids) format. The absence of a bottom in the 3D-printed inserts allows the usual culture conditions on the plate, possible coating on the plate containing the insert, and direct visualization by optical microscopy. The multiple compartments provide the possibility to collect different cell types independently or to use, in each compartment, different reagents for RNA or protein extraction. In this study, a detailed methodology is provided to use the new 3D-printed insert as a co-culture system. To demonstrate several capacities of this flexible and simple model, previously published functional assays of cell communication were performed in the new 3D-printed inserts and were demonstrated to be reproducible. The 3D-printed inserts and the conventional cell culture using conditioned media led to similar results. In conclusion, the 3D-printed insert is a simple device that can be adapted to numerous models of co-cultures with adherent cell types.

In this paper, a newly designed 3D-printed insert is presented as a model of co-culture and validated through the study of the paracrine intercellular communication between endothelial cells and keratinocytes.

Basit 2D ve 3D hücre kültürlerini mümkün kılmak için tasarlanmış yenilikçi bir 3D baskılı ek parça

The classical analyses of indirect communication between different cell types necessitate the use of conditioned media. Moreover, the production of ...

Hücre-Hücre İletişim Yokluğunda iki Hücresel Türleri Ekleme Co-kültür Sisteminin Geliştirilmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Tümör mikroçevresinin A Mimik: Hücreler arası İletişim Zenginleştirilmiş hücre popülasyonları oluşturma ve incelenmesi için Basit Bir Yöntem

Sulu İki fazlı sistemler kullanma Hücre Co-kültür desenlendirme

Kültür Ultrathin Porated elastik Hydrogels bir Biomimetic membran için çift olarak hücre

X-ışını arasında çapraz karışma araştırmak için bir ortak kültür yöntemi Caco-2 hücreleri ve PBMC radyasyona maruz

Mikroakışkan Çiple Deterministik Bir Şekilde Tek Hücreli Ortak Kültürlerin Oluşturulması

Göç, Kemo-Attraction, ve Co-Kültür Tahliller İnsan Kök Hücre Kaynaklı Endotel Hücreleri ve GABAerjik Nöronlar için

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Basit 2D ve 3D hücre kültürlerini mümkün kılmak için tasarlanmış yenilikçi bir 3D baskılı ek parça