This research was financially supported by the SIAM Gravitation Grant 024.002.002, the Netherlands Organization for Scientific Research and by the Dutch Technology Foundation (STW - Simon Stevin Meester 2013). The authors want to thank Mario Pronk for providing the granular sludge samples.

Not: AGS atık su arıtma tesisi Utrecht, Hollanda de Nereda pilot reaktör toplanmıştır. Reaktör belediye kanalizasyon ile beslendi. Taneli çamur ml / g VSS 59,5 bir çamur hacim indeksi (AHİ 5 dakika) vardı. çamur aerobik çevrimin sonunda Nisan ayında örnekleri alındı. Örnekleme sonra çamur hemen laboratuara nakledilir elenmiş ve kullanılana kadar -20 ° C&#39;de depolanmıştır. 1. EPS Ekstraksiyon Not: 4000 x g ve 20 dakika süre ile 4 ° C&#39;de santrifüje zerre çamur ve süpernatant süzün. ekstraksiyon için sonradan küçük top granüller toplanır. Granüllerin toplam katı (TS) ve uçucu katı maddeler (VS) standart yöntemlerle 23 ile belirlenmiştir. granül ıslak ağırlığı arasındaki dönüşüm faktörü - pelet doğrudan alınan granül ağırlığı - ve TS çıkarma öncesinde tespit edilmiştir. Tüm ekstraksiyon üç kez yapıldı. NOT: 3 g ıslak granules her ekstraksiyon yöntemi için kullanıldı. üç kez ölçülen TS ve VS değerleri (0.39 g, TS ve 0.34 g VS), ekstraksiyon verimini hesaplamak için kullanılmıştır. <ol><li> Santrifüj çıkarma 11 <ol><li> bir santrifüjleme tüp içine granüller devri 3 g (ıslak ağırlık) ve minerali alınmış su ile 50 ml santrifüj tüpü doldurmak. </li><li> Biraz elle santrifüj tüpü çalkalayın. </li><li> Santrifüj 4,000 x g&#39;de karışım 20 dakika boyunca 4 ° C içeren santrifüj tüpü. </li><li> Bir cam beher içinde supernatant toplamak pelet atılır ve Bölüm 1.7&#39;de tarif edildiği gibi süpernatant ile devam eder. </li></ol></li><li> Sonication çıkarma 10 <ol><li> bir santrifüjleme tüp içine granüller devri 3 g (ıslak ağırlık) ve minerali alınmış su ile 50 ml santrifüj tüpü doldurmak. </li><li> karışıma B 40 ° C&#39;de 2.5 dakika süreyle buz üzerinde darbeli sonikasyon uygulanır. </li><li> santrifüj santrifüj4,000 x g&#39;de karışım 20 dakika boyunca 4 ° C içeren boru. </li><li> Bir cam beher içinde supernatant toplamak pelet atılır ve Bölüm 1.7&#39;de tarif edildiği gibi süpernatant ile devam eder. </li></ol></li><li> Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ekstraksiyon 11 <ol><li> 100 ml&#39;lik bir cam şişeye granüller devri 3 g (ıslak ağırlık) ve% 2 (ağırlık / hacim) EDTA çözeltisi ile 50 ml şişe doldurun. </li><li> Biraz elle şişeyi çalkalayın ve 3 saat süreyle 4 ° C&#39;de buzdolabında saklayın. </li><li> 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpü içine karışımı aktarın. </li><li> Santrifüj 4,000 x g&#39;de karışım 20 dakika boyunca 4 ° C içeren santrifüj tüpü. </li><li> Bir cam beher içinde supernatant toplamak pelet atılır ve Bölüm 1.7&#39;de tarif edildiği gibi süpernatant ile devam eder. </li></ol></li><li> Formamide - sodyum hidroksit çıkarma (NaOH) 13 <ol><li> Bir 100 granüllerin devri 3 g (ıslak ağırlık)ml cam şişe demineralize su ile 50 ml şişe kadar doldurun ve. </li><li> 0.3 ml% 99 formamit ekleyin. </li><li> Biraz elle şişeyi çalkalayın ve 1 saat 4 ° C&#39;de buzdolabında saklayın. </li><li> Granül süspansiyonuna 20 mi, 1 M NaOH ekleyin. </li><li> Biraz elle şişeyi çalkalayın ve 3 saat süreyle 4 ° C&#39;de buzdolabında saklayın. </li><li> iki adet 50 ml&#39;lik santrifüj tüpüne eşit karışımı aktarın. </li><li> Santrifüj 4,000 x g&#39;de karışım 20 dakika boyunca 4 ° C içeren santrifüj tüpleri. </li><li> Bir cam beher içinde supernatant toplamak pelet atılır ve Bölüm 1.7&#39;de tarif edildiği gibi süpernatant ile devam eder. </li></ol></li><li> Formaldehit - NaOH çıkarma 11 <ol><li> 100 ml&#39;lik bir cam şişeye granüller devri 3 g (ıslak ağırlık) ve minerali alınmış su ile 50 ml şişe kadar doldurun. </li><li> 0.3 ml% 37 formaldehit ekleyin. </li><li> Biraz el ve mağaza tarafından şişe sallamak1 saat süre ile 4 ° C&#39;de buzdolabında. </li><li> Granül süspansiyonuna 20 mi, 1 M NaOH ekleyin. </li><li> Biraz elle şişeyi çalkalayın ve 3 saat süreyle 4 ° C&#39;de buzdolabında saklayın. </li><li> iki adet 50 ml&#39;lik santrifüj tüpüne eşit karışımı aktarın. </li><li> Santrifüj 4,000 x g&#39;de karışım 20 dakika boyunca 4 ° C içeren santrifüj tüpleri. </li><li> Bir cam beher içinde supernatant toplamak pelet atılır ve Bölüm 1.7&#39;de tarif edildiği gibi süpernatant ile devam eder. </li></ol></li><li> Yüksek sıcaklık - sodyum karbonat ekstraksiyonu (Na 2 CO 3) 9,22,24 <ol><li> Ön ısıtma 150, 80 ° C&#39;ye kadar bir manyetik karıştırıcı ile 1000 ml&#39;lik bir cam beher içinde musluk suyu ml. </li><li> şişesindeki ve minerali giderilmiş su ile 50 ml&#39;ye kadar şişeye doldurmak 250 ml lik bir granül devri 3 g (ıslak ağırlık). </li><li> 0.25 g Na 2 CO 3 susuz veya 0.67 g Na 2 CO 3 • 10H ekleme <sşişe içine UB&gt; 2 O% 0.5 elde etmek için (a / h) 2CO 3 konsantrasyonu, MD. </li><li> su banyosu içine karışımını içeren şişe yerleştirin. buharlaşmasını önlemek için alüminyum folyo ile ayrı ayrı şişeyi ve beher cam örtün. </li><li> 400 rpm&#39;de 35 dakika ve 80 ° C&#39;de karıştırın. </li><li> 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpü içine karışımı aktarın. </li><li> Santrifüj 4,000 x g&#39;de karışım 20 dakika boyunca 4 ° C içeren santrifüj tüpü. </li><li> Süpernatant toplayın ve pelet atın. </li></ol></li><li> Standart yöntemler 23&#39;e göre bütün ekstrelere TS ve VS ölçümü. <ol><li> ((Kesilmiş) MWCO 3,500 Da molekül ağırlığına sahip diyaliz torbası) 11,12 süpernatant atın ve 1.000 ml ultra saf suya karşı 24 saat için dialyze. diyaliz etkisini artırmak için 12 saat sonra diyaliz suyu değiştirin. </li><li> diyaliz süpernatant (1/3 civarında) makul bir kısmını aktarmakTS ve ölçüm 23 VS bir alüminyum çanak. Not: bir gece boyunca 105 ° C de bir örnek kurutun. Boş alüminyum çanak ve kurutulmuş numuneyi içeren alüminyum çanak ağırlık farkı TS içeriğidir. Daha sonra 2 saat 550 ° C de bir örnek ihtiva eden aynı alüminyum tabak yakmak. Boş alüminyum çanak ve yanmış örneği içeren alüminyum çanak arasındaki ağırlık farkı kül içeriğidir. TS ve kül içeriği arasındaki fark VS içeriğidir. </li><li> Her bir ekstre için, 10 ml&#39;lik bir cam bardak diyaliz yüzer kalan kısmını aktarmak. süpernatan içindeki polimer konsantrasyonunu arttırmak için 1-2 ml&#39;lik bir son hacme kadar, 60 ° C&#39;de 2 gün için supernatant koyulaştırılır. </li></ol></li></ol> 2. Aljinat gibi Ekstrasellüler Polimer (ALE) Ekstraksiyon <ol><li> Aşama 1.7.1 göre aşama 1.6.8 &#39;de elde edilen ekstrenin dialyze. </li><li> 250 ml&#39;lik bir cam kabın içine diyaliz edilen ekstre, aktarın. Yavaşly 100 rpm&#39;de ve oda sıcaklığında çıkarma karıştırın. asidik formda ALE elde etmek için 2.2 ± 0.05 bir son pH, 1 M hidroklorik asit (HCI) eklenirken, sürekli, bir pH elektrodu ile, pH değişiklikleri izlemek. </li><li> 2.2 pH ayarlandıktan sonra 4,000 x g&#39;de 50 mi santrifüj borusu ve santrifüj içine özü transferi ve 20 dakika boyunca 4 ° C. </li><li> Süpernatantı atın ve jel benzeri pelet toplamak. jel benzeri pelet asidik formda ALE olduğunu. </li><li> pH 8.5 elde edilene kadar el ile cam bir çubuk ile yavaş yavaş jel karıştırılarak yavaşça Aşama 2.4&#39;te elde edilen jel, 0.5 M NaOH (ya da 0.5 M potasyum hidroksit) ekleyin, sodyum (veya potasyum) ALE şeklini elde etmek için. </li></ol> 3. İyonik Hidrojel Formasyonu Testi NOT: çıkarılan EPS iyonik hidrojel oluşumu özelliklerini, 25 kullanılan Ca 2 + iyonları ile bir boncuk oluşum testi olsaydı amacıyla kontrol etmek. <ol><li> Adım 1.7.3 ekstrenin kalınlaşması sonra1-2 ml hacim, yavaş yavaş, bir cam çubuk ile iyice karıştırılır ve 0.5 M NaOH ile 8.5&#39;a pH&#39;ını ayarlamak. </li><li> Aşama 3.1 veya adım 2.5 sodyum ALE özü almak ve yavaş yavaş (CaCI2) çözeltisi, kalsiyum klorür (ağırlık / hacim)% 2.5 bir Pasteur pipeti ile özü damla. NOT: Çıkarılan EPS özelliklerini oluşturan iyonik hidrojel jel varsa, damla şekilli (küresel) boncuklar oluşturulacaktır. Ekstre EPS özelliklerini oluşturan herhangi bir iyonik hidrojel jel varsa, ekstre CaCI2 çözeltisi içinde dağılacaktır. </li></ol> İyonik Hidrojel 4. Stabilite Testi Not: daha AGS yapı oluşumu iyonik EPS hidrojel rolünü anlamak için, kararlılık testleri adım 3.2 toplanan Na 2 CO 3 ekstre iyonik hidrojel boncuklar, üzerinde gerçekleştirilmiştir. <ol><li> CaCI2 çözeltisi içinde 30 dakika için hidrojel boncuk tutun. </li><li> CaCl 2 hidrojel boncuk çıkarmak için bir kaşık kullanın </sub&gt; çözüm ve dört eşit kesirler boncuk ayrıldı. </li><li> 10 ml mağazası fraksiyon 1 4 ° C&#39;de 4 saat boyunca su minerali alınmış. 1.5 - ekstraksiyon yöntemleri 1.3 de tarif edildiği gibi, aşağıdaki stabilite testleri aynı şekilde gerçekleştirilmiştir. </li><li> 10 mi% 2 saklayın fraksiyon 2, 4 ° C&#39;de 3 saat (ağırlık / hacim) EDTA çözeltisi. </li><li> 7.15 ml mağazası fraksiyon 3, 4 ° C&#39;de 1 saat süre ile 60 ul% 99 formamid ile arıtılmış su. Daha sonra 4 ° C&#39;de 3 saat 2.85 mL, 1 M NaOH ve mağaza fraksiyonu 3 ekleyin. </li><li> 7.15 ml mağazası fraksiyon 4, 4 ° C&#39;de 1 saat süre ile 60 ul% 37 formaldehid ile arıtılmış su. Daha sonra 4 ° C&#39;de 3 saat 2.85 mL, 1 M NaOH ve mağaza fraksiyonu 4 ekleyin. </li><li> Boncuklar ekstraksiyon şartlarına dayanıklı olmadığını değerlendirmek için 4.6 - 4.3 anlatılan şartlar altında depolama sırasında boncukların görebilir ayrışma varsa izleyin. </li></ol>

<ol>
	<li>Pronk, M., de Kreuk, M. K., de Bruin, B., Kamminga, P., Kleerebezem, R., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+scale+performance+of+the+aerobic+granular+sludge+process+for+sewage+treatment.">Full scale performance of the aerobic granular sludge process for sewage treatment.</a> Water Res. 84, 207-217 (2015).</li><li>Kreuk, M. K., Kishida, N., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerobic+granular+sludge+-+state+of+the+art.">Aerobic granular sludge - state of the art.</a> Water Sci. Technol. 55 (8-9), 75 (2007).</li><li>Adav, S. S., Lee, D. J., Show, K. Y., Tay, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerobic+granular+sludge:+Recent+advances.">Aerobic granular sludge: Recent advances.</a> Biotechnol. Adv. 26, 411-423 (2008).</li><li>Seviour, T., Pijuan, M., Nicholson, T., Keller, J., Yuan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+properties+of+aerobic+sludge+granules+as+hydrogels.">Understanding the properties of aerobic sludge granules as hydrogels.</a> Biotechnol. Bioeng. 102 (5), 1483-1493 (2009).</li><li>Flemming, H. -. C., Wingender, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biofilm+matrix.">The biofilm matrix.</a> Nat. Rev. Microbiol. 8 (9), 623-633 (2010).</li><li>Seviour, T., Yuan, Z., van Loosdrecht, M. C. M., Lin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerobic+sludge+granulation:+A+tale+of+two+polysaccharides?.">Aerobic sludge granulation: A tale of two polysaccharides?.</a> Water Res. 46 (15), 4803-4813 (2012).</li><li>Wingender, J., Neu, T. R., Flemming, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+Bacterial+Extracellular+Polymeric+Substances.">What are Bacterial Extracellular Polymeric Substances.</a> Microb. Extracell. Polym. Subst. Charact. Struct. Funct. , 27-53 (1999).</li><li>Flemming, H. -. C., Neu, T. R., Wozniak, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EPS+Matrix:+The+&#34;House+of+Biofilm+Cells.&#34;.">The EPS Matrix: The &#34;House of Biofilm Cells.&#34;.</a> J. Bacteriol. 189 (22), 7945-7947 (2007).</li><li>Lin, Y. M., Sharma, P. K., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+and+mechanical+differences+between+alginate-like+exopolysaccharides+isolated+from+aerobic+flocculent+sludge+and+aerobic+granular+sludge.">The chemical and mechanical differences between alginate-like exopolysaccharides isolated from aerobic flocculent sludge and aerobic granular sludge.</a> Water Res. 47 (1), 57-65 (2013).</li><li>Fang, H. H. P., Jia, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymer+from+anaerobic+sludges.">Extraction of extracellular polymer from anaerobic sludges.</a> Biotechnol. Tech. 10 (11), 803-808 (1996).</li><li>Liu, H., Fang, H. H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+of+sludges.">Extraction of extracellular polymeric substances (EPS) of sludges.</a> J. Biotechnol. 95, 249-256 (2002).</li><li>Comte, S., Guibaud, G., Baudu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+extraction+method+on+EPS+from+activated+sludge:+An+HPSEC+investigation.">Effect of extraction method on EPS from activated sludge: An HPSEC investigation.</a> J. Hazard. Mater. 140 (1-2), 129-137 (2007).</li><li>Adav, S. S., Lee, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymeric+substances+from+aerobic+granule+with+compact+interior+structure.">Extraction of extracellular polymeric substances from aerobic granule with compact interior structure.</a> J. Hazard. Mater. 154, 1120-1126 (2008).</li><li>Pan, X., Liu, J., Zhang, D., Chen, X. I., Li, L., Song, W., Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+five+extraction+methods+for+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+from+biofilm+by+using+three-dimensional+excitation-emission+matrix+(3DEEM)+fluorescence+spectroscopy.">A comparison of five extraction methods for extracellular polymeric substances (EPS) from biofilm by using three-dimensional excitation-emission matrix (3DEEM) fluorescence spectroscopy.</a> Water SA. 36 (1), 111-116 (2010).</li><li>D'Abzac, P., Bordas, F., Van Hullebusch, E., Lens, P. N. L., Guibaud, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+from+anaerobic+granular+sludges:+Comparison+of+chemical+and+physical+extraction+protocols.">Extraction of extracellular polymeric substances (EPS) from anaerobic granular sludges: Comparison of chemical and physical extraction protocols.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 85 (5), 1589-1599 (2010).</li><li>Comte, S., Guibaud, G., Baudu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relations+between+extraction+protocols+for+activated+sludge+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+and+EPS+complexation+properties:+Part+I.+Comparison+of+the+efficiency+of+eight+EPS+extraction+methods.">Relations between extraction protocols for activated sludge extracellular polymeric substances (EPS) and EPS complexation properties: Part I. Comparison of the efficiency of eight EPS extraction methods.</a> Enzyme Microb. Technol. 38 (1-2), 237-245 (2006).</li><li>Adav, S. S., Lee, D. J., Tay, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+polymeric+substances+and+structural+stability+of+aerobic+granule.">Extracellular polymeric substances and structural stability of aerobic granule.</a> Water Res. 42, 1644-1650 (2008).</li><li>Caudan, C., Filali, A., Lefebvre, D., Sp&#233;randio, M., Girbal-Neuhauser, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+polymeric+substances+(EPS)+from+aerobic+granular+sludges:+Extraction,+fractionation,+and+anionic+properties.">Extracellular polymeric substances (EPS) from aerobic granular sludges: Extraction, fractionation, and anionic properties.</a> Appl. Biochem. Biotechnol. 166 (7), 1685-1702 (2012).</li><li>Fr&#248;lund, B., Palmgren, R., Keiding, K., Nielsen, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymers+from+activated+sludge+using+a+cation+exchange+resin.">Extraction of extracellular polymers from activated sludge using a cation exchange resin.</a> Water Res. 30 (8), 1749-1758 (1996).</li><li>Nielsen, P. H., Jahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+EPS.">Extraction of EPS.</a> Microb. Extracell. Polym. Subst. Charact. Struct. Funct. , 49-72 (1999).</li><li>Lin, Y. M., Nierop, K. G. J., Girbal-Neuhauser, E., Adriaanse, M., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustainable+polysaccharide-based+biomaterial+recovered+from+waste+aerobic+granular+sludge+as+a+surface+coating+material.">Sustainable polysaccharide-based biomaterial recovered from waste aerobic granular sludge as a surface coating material.</a> Sustain. Mater. Technol. 4, 24-29 (2015).</li><li>Lin, Y. M., Wang, L., Chi, Z. M., Liu, X. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+Alginate+Role+in+Aerobic+Granular+Bio-particles+Formation+and+Settleability+Improvement.">Bacterial Alginate Role in Aerobic Granular Bio-particles Formation and Settleability Improvement.</a> Sep. Sci. Technol. 43 (7), 1642-1652 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. , (1998).</li><li>Mchugh, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A guide to the seaweed industry. , (2003).</li><li>Lin, Y., de Kreuk, M., van Loosdrecht, M. C. M., Adin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+alginate-like+exopolysaccharides+isolated+from+aerobic+granular+sludge+in+pilot-plant.">Characterization of alginate-like exopolysaccharides isolated from aerobic granular sludge in pilot-plant.</a> Water Res. 44 (11), 3355-3364 (2010).</li><li>Zorel, J. A., Aquino, S. F., Sanson, a. L., Castro-Borges, W., Silva, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+EPS+extraction+protocols+from+anaerobic+sludge+for+gel-based+proteomic+studies.">Evaluation of EPS extraction protocols from anaerobic sludge for gel-based proteomic studies.</a> Water Sci. Technol. 72 (4), 535 (2015).</li><li>Ruiz-Hernando, M., Cabanillas, E., Labanda, J., Llorens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound,+thermal+and+alkali+treatments+affect+extracellular+polymeric+substances+(EPSs)+and+improve+waste+activated+sludge+dewatering.">Ultrasound, thermal and alkali treatments affect extracellular polymeric substances (EPSs) and improve waste activated sludge dewatering.</a> Process Biochem. 50 (3), 438-446 (2015).</li><li>Seviour, T., Pijuan, M., Nicholson, T., Keller, J., Yuan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel-forming+exopolysaccharides+explain+basic+differences+between+structures+of+aerobic+sludge+granules+and+floccular+sludges.">Gel-forming exopolysaccharides explain basic differences between structures of aerobic sludge granules and floccular sludges.</a> Water Res. 43, 4469-4478 (2009).</li><li>de Kerchove, A. J., Elimelech, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+polysaccharide+gel+layers+in+the+presenceof+Ca2++and+K++ions:+Measurements+and+mechanisms.">Formation of polysaccharide gel layers in the presenceof Ca2+ and K+ ions: Measurements and mechanisms.</a> Biomacromolecules. 8 (1), 113-121 (2007).</li><li>Jiang, H. L., Tay, J. H., Liu, Y., Tay, S. T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++augmentation+for+enhancement+of+aerobically+grown+microbial+granules+in+sludge+blanket+reactors.">Ca2+ augmentation for enhancement of aerobically grown microbial granules in sludge blanket reactors.</a> Biotechnol. Lett. 25 (2), 95-99 (2003).</li><li>Liang, Z., Li, W., Yang, S., Du, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+structural+characteristics+of+extracellular+polymeric+substances+(EPS),+pellets+in+autotrophic+nitrifying+biofilm+and+activated+sludge.">Extraction and structural characteristics of extracellular polymeric substances (EPS), pellets in autotrophic nitrifying biofilm and activated sludge.</a> Chemosphere. 81 (5), 626-632 (2010).</li><li>Guo, X., Liu, J., Xiao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+damage+of+cell+wall+and+cell+membrane+for+various+extracellular+polymeric+substance+extractions+of+activated+sludge.">Evaluation of the damage of cell wall and cell membrane for various extracellular polymeric substance extractions of activated sludge.</a> J. Biotechnol. 188, 130-135 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Protokol bölümüne Açıklamalar EPS / ALE ekstraksiyonu 50 ml hacimde ve granüller 3 g tarif edilmiştir. Bu değerler rehber olarak tasarlanmıştır. yüksek granül konsantrasyonları Ekstraksiyonları çıkarılan EPS verimini azaltabilir. ALE ekstre etme esnasında, sıcaklık 30 dakika boyunca 80 ° C &#39;de sabit tutulmalıdır. ısıtmak için karışım için gerekli olan süre (yaklaşık 5 dakika) protokolüne dahil edilir. Ayrıca, ekstraksiyon etkinliği şişe dibinin çapı ile aynı büyüklükte bir manyetik karıştırma çubuğu kullanılarak geliştirilmiştir. Bu EPS çıkarma teşvik iyi karıştırma özellikleri ve freze etkilere neden olur. Daha sonra protokol bölümüne, (adımlarda 1.1-1.6 toplanan süpernatant) tüm çekimi TS ve VS verimleri belirlenmiştir. Diyaliz ekstraksiyon için kullanılan kimyasal maddeler nedeniyle olası hataları azaltmak için önceden TS ve ölçüm VS yapılması gerekmektedir. bir3.500 Da MWCO diyaliz çanta içinde EPS makromolekülleri koruyarak bu kimyasalların kaldırmak için tavsiye edilir. Diyaliz poşeti özü hacminden daha büyük bir hacme sahip olmalıdır. Ekstresinin hacmi (% 40&#39;a varan oranda hacim artışına EDTA çıkarılması için, örneğin) diyaliz sırasında artacak çünkü bu gereklidir. Diyaliz kimyasal yok etme öncesinde ve diyalizden sonra numune pH ölçümü ile belirlenebilir. Alternatif olarak, diyaliz su iletkenlik ölçümleri iyon kaldırma ölçüde göstermektedir. Toplam çıkarılan EPS ALE elde (1.6 adımlar ve 2) diyaliz adım isteğe bağlıdır için. Bununla birlikte, diyaliz üç faydası vardır: o yağış için gerekli HCl miktarı, o özü asit kütle transferi geliştirir ve elde edilen ALE kül içeriğini azaltır azaltır. ALE çökeltilmesi için, Extrac çok daha büyük bir hacme sahip, bir cam beher kullanılması önerilirt. Na 2 CO 3 normalde çıkarma aşırı doz almaktadır. Örnek köpük olarak, önce, diyaliz değil, ilk Na2 CO3 ile reaksiyona girecek ilave HCI, karbon dioksit oluşumu ile sonuçlanarak, özü ve sol. HCI ilavesi sırasında, boşaltma kabın alt aynı boyutta bir manyetik karıştırıcı ile yavaş yavaş karıştırılır. Bu boyut ve yavaş karıştırma bir karıştırma çubuğu da çökelti yapısını bozmadan karıştırılması ile sonuçlanacaktır. Asidik jel kümeleri özü içinde oluşturulmuş ise, beher elle hafifçe döndürülmüştür gerekmektedir. Yağış de numunedeki asit homojen bir dağılım elde edilirken özü büyük bir hacim artışına bilmek 1 M kadar bir asit konsantrasyonu ile gerçekleştirilmiştir. Daha yüksek asit konsantrasyonları bölgesel pH düşüşü ve asidik jel kümeleri oluşumu ile sonuçlanabilir. 2.0&#39;den düşük bir pH değerine muhtemelen yapısal değişikliklere, elde edilebilir ALE miktarını azaltırdüşük bir pH değerinde polimer. 2.20 ± 0.05 nihai pH tutmak önemlidir. Sınırlamalar ALE ekstraksiyon yöntemi genel olarak AGS veya biyofilm gelen EPS yapısal hücre dışı polimerler ayıklamak amaçlayan ve mevcut tüm EPS ayıklamak için tasarlanmamıştır. Tüm EPS çıkarmak için birden fazla ekstraksiyon yöntemi bir kombinasyonu gereklidir. Bir çift ve dört çıkarma uygulayarak VS EPS verim artışı ile gösterildiği gibi üstelik, tek çıkarma tüm yapısal EPS ayıklamak olmaz. ALE çıkarma ısı ve alkalin koşulları ile sürekli karıştırma birleştirerek, sert bir EPS ekstraksiyon yöntemidir. Bu nedenle, bazı hücre içi madde EPS ile ekstre edilmiştir mümkündür. Hücre lizizi, fiziksel ve kimyasal ekstraksiyon teknikleri (sonikasyon 31,32 NaOH 31,32 EDTA 11,32 CER 32, ısı 32 ve yüksek kesme hızları m kaynaklanabilir, ancak) 19 ixing, geri EPS hücre içi malzemesinin varlığının hala teyit edilmesi gereklidir. kurtarıldı EPS hücre içi malzeme analiz değildi içerip içermediğini çıkarılan EPS iyonik jel oluşturucu özelliği, bu araştırmanın ana odak noktasıdır. Gelecekteki araştırmalar çıkarılan EPS hücre içi malzeme tanımlamaya odaklanacak. AGS hidrojel matrisi çözündürücü yapısal EPS ayıklamak için çok önemlidir EPS formlar AGS yoğun ve kompakt hidrojel matrisi. EPS gibi hepsi değil, polisakkaritler, proteinler, nükleik asitler, (fosfo) lipidler, humik maddeler ve bazı hücreler arası polimerler 7,5,8, organik makro moleküllerin çeşitli sınıfları içerir, ancak bir jel oluşturur. Yalnızca jel oluşturucu polimerler burada EPS yapısal polimer olarak kabul edilmektedir. EPS ekstraksiyon amacı ilk EPS çözmek ve daha sonra çözülmüş EPS toplamaktır. Yapısal EPS (yani, T iseO) bir hidrojel oluşturan EPS ekstre hedef, AGS jel matrisi birinci çözünür olmalıdır. Jel matris çözünür Yalnızca yöntemler yapısal EPS çıkarma yeteneğine sahiptirler. 15, Sonication 10,14,15, EDTA 10 - - 12,14,15, formaldehit + NaOH 10 - NaOH 13 verimli yapısal izole edemedi + 15 ve formamid Bu araştırmada, bazı sık bu tür santrifüj 10 olarak EPS ekstraksiyon yöntemleri kullanılır EPS. Bu, aerobik granüllerin hidrojel matrisi, bu yöntemler ile çözünür değildi kaynaklanmaktadır. Bu nedenle, 4. bölümde stabilite testleri sadece EDTA, formamid + NaOH mevcut koşullar ve formaldehit + NaOH ekstraksiyon ile yapıldı. Bu üç ekstraksiyon yapısal EPS izole yeteneğine sahip değildir, ama yine de Na 2 CO 3 ekstraksiyon yanı sıra yüksek VS EPS verimi elde edilmiştir. Koşullar of Na 2 CO 3 çıkarma açıkça AGS matris çözündürülmüş bu ekstraksiyon yöntemi olarak uygulanmadı. Bu nedenle stabilite testi sırasında uygulanan koşullar Örnek olarak kabul edildi. CER EPS ekstraksiyon önceki çalışmalarda burada kullanılan kimyasal çekimi daha iyi sonuçlar vermedi gibi katyon değişim reçinesi (CER), bir başka sık kullanılan EPS ekstraksiyon yöntemi ile ekstraksiyon, bu karşılaştırma için kabul edilmedi. AGS EPS jel Jel-oluşturucu EPS AGS hidrojel matris içerisindeki yapısal EPS olarak kabul edilir. Böyle iyonik jeller, sıcaklık kaynaklı jeller ve pH kaynaklı jelleri gibi hidrojellerin çeşitli olduğunu işaret değer. Bu çalışma sadece iyonik jelleri oluşturan EPS odaklanır. ekstre yapısal jel malzeme büyük kısmını ilgili olarak, bu, yapısal olarak EPS olması muhtemeldir. olasılık kesinlikle vardır ki EPS diğer türBu hidrojeller oluşturan farklı türde (örneğin, pH değeri neden jel 28) aerobik granüllerin, aynı ya da başka tür bulunmaktadır. Yine de, ne olursa olsun hidrojel ne tür EPS jel matris jel oluşturucu EPS ayıklamak için en önemli adımdır çözülmesi hedeflenmektedir. Şu anda, çok az araştırma granül çamur yapısal EPS üzerinde yapılmıştır. Bu protokol açıklanan ALE çıkarma AGS gelen jel oluşturan EPS çıkarma yeteneğine sahiptir ve yapısal EPS karakterize etmek gelecekteki çalışmalarda kullanılacaktır. Daha fazla araştırma daha iyi granülasyon ve EPS süreci ve işlevini anlamak için AGS, yapısal EPS ve yapısal olmayan EPS yapılması gerekmektedir. mikroorganizmalar EPS kesin kompozisyonu ve nasıl EPS bileşimi çevresel değişikliklere bağlı olarak modifiye ne EPS gibi büyük miktarda üretmek neden: Özellikle şu üç puan araştırılması gerekmektedir. Algılama ve ilgili tüm bileşikleri ve bunların etkileşimleri için analizons biyofilm ve nasıl bizim için avantaj bunları kullanmak için anlamanıza yardımcı olacaktır.

Son yıllarda aerobik granül çamur (AGS) süreci başarıyla birkaç tam ölçekli atıksu arıtma tesislerinin 1 uygulanan popüler bir biyolojik arıtma prosesi haline gelmiştir. Geleneksel aktif çamur işlemi tersine, AGS işleme mikroorganizmalar yerine yumakların 2 granüller oluşturmak. Bu granüller, daha iyi tortulaşabilirlik var yüksek organik yükleme oranlarını dayanacak ve aktif çamur flocs 3 den toksisite daha yüksek toleransa sahip edebiliyoruz. Biyofilmlerde aksine, AGS kendiliğinden herhangi bir taşıyıcı malzeme 4 katılımı olmadan oluşur. 6 - AGS, biyofilm gibi mikroorganizmalar, öz-hareketsizleştirilmiş 4 olduğu bir hidrojel matris oluşturmak için yüksek hidratlı hücre dışı polimerik maddelerden önemli bir miktarda (EPS) 5 üretir. EPS polisakkaritler, proteinler, nükleik asitler arasında oluşan, (fosfonat kompleks karışımıho) lipidler, humik maddeler ve bazı hücreler arası polimerler 5,7,8. Bu polimerik maddeler yoğun ve kompakt üçüncül ağ yapısı oluşturarak, vb 5 elektrostatik kuvvetler, hidrojen bağları, çekici iyonik kuvvetler ve / veya biyokimyasal reaksiyonların, üzerinden birbirleri ile etkileşim. Hidrojeller 4,9 formu ve üçüncül ağ yapısının oluşumuna katkıda edebiliyoruz EPS polimerler yapısal EPS, toplam EPS bir alt kümesi olarak kabul bu açıdan bulunmaktadır. EPS kimyasal yapısı ve granüller 5 fiziksel özellikler için sorumludur. Her EPS bileşiğin işlevini anlamak için çok önemlidir. 15 - Çeşitli yaklaşımlar EPS 10 ayıklamak için uygulanır. Ancak, onların aşırı karmaşıklığı, tek yöntemle bütün EPS bileşenleri çıkarmak için neredeyse imkansızdır. Bugüne kadar hiçbir EPS ekstraksiyon yöntemi &quot;tek beden herkese uyar&quot; var. 20 - Çıkartma metotunun seçimi toplam miktarı, aynı zamanda kazanılan polimer 13,16 bileşimi sadece etkiler. çamur tipi ve faiz farklı yöntemlerin EPS bağlı olarak gereklidir. , Jel oluşturucu polimerler ayıklanıyor özelliklerini karakterize ve birbirleri ile ve non-jel oluşturucu EPS ile etkileşimlerini inceleyen aerobik granül çamur oluşumunda EPS rolünü ortaya çıkarmak için yardımcı olacaktır. Bundan başka, jel oluşturucu polimerler, endüstriyel uygulamalarda yararlı olan biyopolimerler bulunmaktadır. Olası bir uygulama zaten kağıt 21 su direncini arttırmak için, bir kaplama malzemesi olarak AGS elde edilen jel-oluşturucu polimerleri kullanarak gösterilmiştir. Bu nedenle, jel-oluşturucu EPS için özel ekstraksiyon yöntemleri, ihtiyaç vardır. Bu çalışmanın amacı, AGS gelen jel oluşturucu EPS ayıklamak için bir metodoloji geliştirmektir. Altı ekstraksiyon yöntemleri 10-1Literatürde sıkça kullanılan 5,22, AGS adlı EPS ayıklamak için seçildi. toplam tutar ve çıkarılan EPS jel oluşturucu özelliği, her metodoloji açısından karşılaştırıldı.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="576">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">250 ml baffled flask</td>
			<td style="width:71px;">Kimble</td>
			<td style="width:119px;">25630-250</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">1000 ml glass beaker</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">213-1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:219px;">RCT basic, magnetic stirrer with thermometer</td>
			<td style="width:71px;">IKA</td>
			<td style="width:119px;">3810000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">sodium carbonate decahydrate</td>
			<td style="width:71px;">Merck KGaA</td>
			<td>1063911000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">50 ml centrifugation tubes</td>
			<td style="width:71px;">greiner bio-one</td>
			<td align="right" style="width:119px;">227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Multifuge 1 S-R, centrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Heraeus/Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">hydrochloric acid, 37 %</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">30721-1L-GL-D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">250 ml glass beaker</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">213-1124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">calcium chloride dihydrate</td>
			<td style="width:71px;">Merck KGaA</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1023821000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">1 ml Pasteur Pipette</td>
			<td style="width:71px;">Copan</td>
			<td style="width:119px;">201C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction of structural extracellular polymeric substances from aerobic granular sludge

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) was extracted using six different methods (centrifugation, sonication, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), formamide with sodium hydroxide (NaOH), formaldehyde with NaOH and sodium carbonate (Na2CO3) with heat and constant mixing). AGS was collected from a pilot wastewater treatment reactor. The ionic gel-forming property of the extracted EPS of the six different extraction methods was tested with calcium ions (Ca2+). From the six extraction methods used, only the Na2CO3 extraction could solubilize the hydrogel matrix of AGS. The alginate-like extracellular polymers (ALE) recovered with this method formed ionic gel beads with Ca2+. The Ca2+-ALE beads were stable in EDTA, formamide with NaOH and formaldehyde with NaOH, indicating that ALE are one part of the structural polymers in EPS. It is recommended to use an extraction method that combines physical and chemical treatment to solubilize AGS and extract structural EPS.

EPS çıkarma Farklı EPS çıkarma işlemleri uygulandıktan sonra granül görünümü, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Granüllerin şekli ve jel yapısı santrifüjleme (Şekil 1a) ve EDTA çıkarma (Şekil 1c) sonra sağlamdı. Granül sonikasyonla farklı boyutlarda parçalara kırılmıştır. Bulanıklık yüksek santrifüj sonra azaldıkça sıvı fazda bulanıklık nedeniyle küçük parçalara (Şekil 1b) askıya alınmasına olabilir. Formamid ve formaldehit tek başına granül şekli ve jel yapısını değiştirerek üzerinde herhangi bir etkisi yoktu (veriler gösterilmemiştir). NaOH ilave edildikten sonra, sıvı faz sarımsı döndü. Bazı tüylü malzemeyi granüllerin yüzeyinden ayrılır ve yerleşmiş granüller (Şekil 1d ve 1e) üstüne bir katman oluşturulmuştur. Yine de, şekligranüller değişmedi. NaOH eklenmesi görünüşte EPS çözünürlüğünü geliştirilmiş, ancak jel matris yapısına zarar olamazdı. Buna karşılık, granüller tamamen Na 2 CO 3 çıkarma (Şekil 1f) sonra kayboldu. Bunun yerine, sol-benzeri sıvı ve küçük jöle benzeri partiküllerin bir karışımı, gerçekten de çözündürülmüştür granül jel matrisini gösteren oluşturuldu. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54534/54534fig1.jpg" /> Şekil 1. Aerobik taneli çamur EPS çekimler. Granül her ekstraksiyon yönteminin etkisini daha iyi görselleştirme için, deneyler 25 ml cam şişelerde yapılmıştır. ekstraksiyon işleminden sonra, ekstreler asılı madde yerleşmeye izin verecek şekilde, oda sıcaklığında 1 saat süre ile tutuldu. (A) Santrifüj ekstraksiyon, (b) Sonikasyon ekstraksiyon, (c) EDTA ekstraksiyon, (d) formamid - NaOH ilavection, (e) Formaldehit - NaOH çıkarma, (f) Yüksek sıcaklık -. Na 2 CO 3 çıkarma <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54534/54534fig1large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Her bir yöntem için VS kesrine göre EPS verimi, Şekil 2&#39;de tasvir edilmiştir. Verim granül VS g baş harfi her EPS VS mg sunulmuştur. Formaldehid + NaOH ile elde edilen EPS miktarı, formamid + NaOH, Na +, karıştırma 2 CO 3 + Isı santrifüj, sonifikasyon ve EDTA çıkarma daha yüksek idi. Alkali koşullar EPS çözünürlüğü 26,27 geliştirmek olduğunu belirten 13,15 - Bu çıkarma teknikleri için benzer sonuçlar da önceki çalışmalarda 11 ile gösterilmiştir. Na 2 CO 3 ile kurtarılan EPS miktarı<html> Sadece santrifüjleme ile elde edilen daha fazla 20 kat, en yüksektir. Ayrıca, Na 2 CO 3 çıkarıldığı toplam EPS verimi daha da birden fazla ekstraksiyon tarafından geliştirilmiş olabilir. İlk çıkarma adımı 1.6.8 (protokol bölümünde) atılır pelet kullanılarak ikinci bir çıkarma dörtlü çıkarma bile% 46 toplam verim artışı,% 28 oranında toplam verim arttı. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54534/54534fig2.jpg" /> Şekil VS verim ve kül içeriği ile ilgili tüm ekstraksiyon yöntemleri 2. Sonuçlar. Her biri için ilk bar granül VS g baş harfi başına EPS VS mg VS verim temsil ekstraksiyon. İkinci çubuk çıkarılan TS kül ağırlık yüzdesini temsil eder. Hata çubukları, her ekstraksiyon tekniği için gerçekleştirilen üç ekstraksiyon standart sapmasını göstermektedir.&quot;_blank&quot;&gt; Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. Aljinat gibi hücre dışı polimer (ALE) çıkarma Na 2 CO 3 ekstre ekstre EPS&#39;nin pH 2.2 olacak şekilde ayarlandıktan sonra, toplam VS% 63 çöktürüldü. Çökelek asidik ALE 25&#39;tir. Kalan fraksiyon ekstraksiyon koşulları altında çözünür hale getirilebilir olasılıkla EPS, ancak pH 2.2 bir çökelti oluşturmaz. İyonik hidrojel oluşumu testi Aerobik granüller bir hidrojel benzer olarak tarif edilmiştir. Granülasyon işlemi jelleştirme maddesi 4,9,25,28 olarak glikozitler içeren bir jel oluşturucu bir fenomen olarak kabul edilmiştir. Normal olarak, Ca 2 + atık en yaygın katyon biridir. Buna ek olarak, kolayca asidik polisakkaridler ile bağlanır (örneğin,Muhtemelen bir karşı-iyon olarak alginatlar ve poli-galakturonik asit), jelleşme 29 aracılık etmek. Bu nedenle, bir iyonik olarak çapraz bağlanmış hidrojel sonuçlanır. Ca + 2 iyonları ilavesi aerobik çamurun granülasyonu 30 hızlandırabilir görülmüştür. Bu nedenle, Ca 2+ -EPS (iyonik hidrojel) aerobik granül çamur jel matris yapısını oluşturmada önemli bir rol oynayabilir. Bu bağlamda, ekstre EPS olup ekstre EPS aerobik zerre çamur 9 jel matrisinin oluşmasına katkıda bulunan yapısal bir polimer ise, kontrol etmek için bir test olarak kullanılabilir Ca2 + iyonları ile iyonik bir hidrojel oluşturmaktadır. Bu araştırmada, çeşitli yöntemler ile AGS (Şekil 3a) elde EPS, Na 2 CO 3 ile ekstre edilmiş EPS sabit iyon hidrojel boncuk (ağırlık / hacim) CaCl2 çözeltisi% 2.5 bir damlacık şeklinde düzenlenen ve oluşan .Ayrıca, bu elde edilen sodyum ALE ek adımları (ALE polimer çıkarma, Şekil 3b) yanı sıra aynı özellik görüntülenen tarafından EPS. Ca 2 + -ALE jel boncukları (Şekil 3c) renk ve morfoloji aerobik granül çamur (Şekil 3a) benzer. Görünüşe göre, Na 2 CO 3 yöntemi ile ekstre EPS aerobik zerre çamur jel matrisinin oluşmasına katkıda bulunur. Bu EPS bir ana bileşenidir ALE iyonik hidrojel oluşturabilen yapısal polimerlerdir. Iyonik hidrojel Stabilite testi Bu EPS ekstraksiyon sırasında, aerobik granüller EDTA, formaldehit + NaOH ve formamid + NaOH (Şekil 1) küresel şekillerini muhafaza gözlemlenmiştir. Ca, çıkarılan yapısal polimerler granül istikrar rol oynarsa anlamak için 2 + -ALE boncuklar vardıekstraksiyon sırasında aerobik granül aynı şekilde tam olarak tedavi edildi. Yani, Ca 2 + -ALE boncuk EDTA son derece stabil - İlginçtir, Ca 2 + -ALE boncuklar AGS olduğu gibi benzer kararlılıkları (3f Şekil 3d) görüntülenir. Ca yüzeyinden ayrılmaktadır ALE az miktarda oluştu 2 + -ALE boncuklar, üç saat süre ile (küçük kahverengi Şekil 3e, topak ve 3f), Ca 2 + -ALE boncuk formaldehit içine batırılmış olan + NaOH ve formamid + NaOH , sırasıyla. Ca2 + -ALE boncuk ve aerobik granüller arasındaki stabilitesi açısından Bu benzerlik ALE AGS jel matris oluşturan önemli yapısal polimerlerin bir bölümü olduğunu gösterir. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54534/54534fig3.jpg" /> Şekil 3. Aerobik granülleri ve çıkarılan ALE. (A) demineralize su pr granüllerior çıkarma. 4,000 x g&#39;de santrifüj edilir ve 20 dakika boyunca 4 ° C&#39;de ardından (paragraflar 1.6 ve 2 &#39;ye göre özütlendi), (b) Asit ALE. iyonik hidrojel stabilite testi sonuçları. (C) Ca 2 + -ALE boncuklar 4 ° C &#39;de 4 saat demineralize su içinde saklanır. (D) Ca2 + -ALE boncuklar 4 ° C &#39;de 3 saat boyunca,% 2 EDTA depolanır. (E) 4 ° C&#39;de 4 saat boyunca formamid + NaOH içinde saklanan Ca 2 + -ALE boncuklar. (F) Ca 4 ° C&#39;de 4 saat formaldehit + NaOH saklanan 2+ -ALE-boncuk. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54534/54534fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge at JoVE.com

Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

protokol aljinat gibi hücre dışı polimerler (ALE) elde etmek için aerobik granül çamur çözünür bir metodoloji sağlar.

Aerobik Granül Çamur dan Yapısal Ekstrasellüler polimerik maddelerin çıkarımı

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) ...

extraction-structural-extracellular-polymeric-substances-from-aerobic

Research

JoVE Journal

Environment

22.4K Görüntüleme.  Delft University of Technology.  protokol aljinat gibi hücre dışı polimerler (ALE) elde etmek için aerobik granül çamur çözünür bir metodoloji sağlar. 

Video: Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

Development of Sulfidogenic Sludge from Marine Sediments and Trichloroethylene Reduction in an Upflow Anaerobic Sludge Blanket Reactor

The importance of microbial sulfate reduction relies on the various applications that it offers in environmental biotechnology. Engineered sulfate reduction is used in industrial wastewater treatment to remove large concentrations of sulfate along with the chemical oxygen demand (COD) and heavy metals. The most common approach to the process is with anaerobic bioreactors in which sulfidogenic sludge is obtained through adaptation of predominantly methanogenic granular sludge to sulfidogenesis. This process may take a long time and does not always eliminate the competition for substrate due to the presence of methanogens in the sludge. In this work, we propose a novel approach to obtain sulfidogenic sludge in which hydrothermal vents sediments are the original source of microorganisms. The microbial community developed in the presence of sulfate and volatile fatty acids is wide enough to sustain sulfate reduction over a long period of time without exhibiting inhibition due to sulfide. 
This protocol describes the procedure to generate the sludge from the sediments in an upflow anaerobic sludge blanket (UASB) type of reactor. Furthermore, the protocol presents the procedure to demonstrate the capability of the sludge to remove by reductive dechlorination a model of a highly toxic organic pollutant such as trichloroethylene (TCE). The protocol is divided in three stages: (1) the formation of the sludge and the determination of its sulfate reducing activity in the UASB, (2) the experiment to remove the TCE by the sludge, and (3) the identification of microorganisms in the sludge after the TCE reduction. Although in this case the sediments were taken from a site located in Mexico, the generation of a sulfidogenic sludge by using this procedure may work if a different source of sediments is taken since marine sediments are a natural pool of microorganisms that may be enriched in sulfate reducing bacteria.

Microbial sulfate reduction is a process of great importance in environmental biotechnology. The success of the sulfidogenic reactors depends among other factors on the microbial composition of the sludge. Here, we present a protocol to develop sulfidogenic sludge from hydrothermal vents sediments in a UASB reactor for reductive dechlorination purposes.

Bir Yukarı Akış Anaerobik Çamur Battaniyesi Reaktörde Deniz tortulları ve Trikloretilen Azaltma gelen Sulfidogenic Çamur Gelişimi

The importance of microbial sulfate reduction relies on the various applications that it offers in environmental biotechnology. Engineered sulfate ...

Çevre

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of taxonomic and functional groups in environmental samples. Used in combination with a reverse transcriptase reaction (RT-q-PCR), it can also be employed to quantify gene transcripts. q-PCR makes use of highly sensitive fluorescent detection chemistries that allow quantification of PCR amplicons during the exponential phase of the reaction. Therefore, the biases associated with &#39;end-point&#39; PCR detected in the plateau phase of the PCR reaction are avoided. A protocol to quantify bacterial 16S rRNA genes and transcripts from coastal sediments via real-time PCR is provided. First, a method for the co-extraction of DNA and RNA from coastal sediments, including the additional steps required for the preparation of DNA-free RNA, is outlined. Second, a step-by-step guide for the quantification of 16S rRNA genes and transcripts from the extracted nucleic acids via q-PCR and RT-q-PCR is outlined. This includes details for the construction of DNA and RNA standard curves. Key considerations for the use of RT-q-PCR assays in microbial ecology are included.

A protocol to quantify bacterial 16S rRNA genes and transcripts from coastal sediments via real-time PCR is provided. The methodology includes the co-extraction of DNA and RNA; preparation of DNA-free RNA; and 16S rRNA gene and transcript quantification via RT-q-PCR, including standard curve construction.

Gerçek zamanlı PCR ile Kıyı tortulları ve Niceleme 16S rRNA Genler ve Transkriptler eşzamanlı DNA-RNA Ekstraksiyon

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Extraction of Organochlorine Pesticides from Plastic Pellets and Plastic Type Analysis

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment during manufacturing and transport. Because of their environmental persistence, they are widely distributed in the oceans and on beaches all over the world. They can act as a vector of potentially toxic organic compounds (e.g., polychlorinated biphenyls) and might consequently negatively affect marine organisms. Their possible impacts along the food chain are not yet well understood. In order to assess the hazards associated with the occurrence of plastic pellets in the marine environment, it is necessary to develop methodologies that allow for rapid determination of associated organic contaminant levels. The present protocol describes the different steps required for sampling resin pellets, analyzing adsorbed organochlorine pesticides (OCPs) and identifying the plastic type. The focus is on the extraction of OCPs from plastic pellets by means of a pressurized fluid extractor (PFE) and on the polymer chemical analysis applying Fourier Transform-InfraRed (FT-IR) spectroscopy. The developed methodology focuses on 11 OCPs and related compounds, including dichlorodiphenyltrichloroethane (DDT) and its two main metabolites, lindane and two production isomers, as well as the two biologically active isomers of technical endosulfan. This protocol constitutes a simple and rapid alternative to existing methodology for evaluating the concentration of organic contaminants adsorbed on plastic pieces.

Microplastics act as vector of potentially toxic organic contaminants with unpredictable effects. This protocol describes an alternative methodology for assessing the levels of organochlorine pesticides adsorbed on plastic pellets and identifying the polymer chemical structure. The focus is on pressurized fluid extraction and attenuated total reflectance Fourier transform infrared spectroscopy.

Plastik Peletlerden Organochlorine Pestisitlerin Çıkarılması ve Plastik Tipi Analizi

Plastic resin pellets, categorized as microplastics (&#8804;5 mm in diameter), are small granules that can be unintentionally released to the environment ...

Extraction and Characterization of Surfactants from Atmospheric Aerosols

Surface-active compounds, or surfactants, present in atmospheric aerosols are expected to play important roles in the formation of liquid water clouds in the Earth&#39;s atmosphere, a central process in meteorology, hydrology, and for the climate system. But because specific extraction and characterization of these compounds have been lacking for decades, very little is known on their identity, properties, mode of action and origins, thus preventing the full understanding of cloud formation and its potential links with the Earth&#39;s ecosystems.
In this paper we present recently developed methods for 1) the targeted extraction of all the surfactants from atmospheric aerosol samples and for the determination of 2) their absolute concentrations in the aerosol phase and 3) their static surface tension curves in water, including their Critical Micelle Concentration (CMC). These methods have been validated with 9 references surfactants, including anionic, cationic and non-ionic ones. Examples of results are presented for surfactants found in fine aerosol particles (diameter &#60;1 &#956;m) collected at a coastal site in Croatia and suggestions for future improvements and other characterizations than those presented are discussed.

Methods are presented for the targeted extraction of surfactants present in atmospheric aerosols and the determination of their absolute concentrations and surface tension curves in water, including their Critical Micelle Concentration (CMC).

Atmosferik Aerosoller ekstraksiyonu ve Yüzey Aktif Karakterizasyonu

Surface-active compounds, or surfactants, present in atmospheric aerosols are expected to play important roles in the formation of liquid water clouds in ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric hydroxide (GFH), with little effort and high reliability. The phosphonate, e.g., nitrilotrimethylphosphonic acid (NTMP), is brought into contact with the GFH in a rotator in a solution buffered by an organic acid (e.g., acetic acid) or Good buffer (e.g., 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid) [MES] and N-cyclohexyl-2-hydroxyl-3-aminopropanesulfonic acid [CAPSO]) in a concentration of 10 mM for a specific time in 50 mL centrifuge tubes. Subsequently, after membrane filtration (0.45 &#181;m pore size), the total phosphorus (total P) concentration is measured using a specifically developed determination method (ISOmini). This method is a modification and simplification of the ISO 6878 method: a 4 mL sample is mixed with H2SO4 and K2S2O8 in a screw cap vial, heated to 148-150 &#176;C for 1 h and then mixed with NaOH, ascorbic acid and acidified molybdate with antimony(III) (final volume of 10 mL) to produce a blue complex. The color intensity, which is linearly proportional to the phosphorus concentration, is measured spectrophotometrically (880 nm). It is demonstrated that the buffer concentration used has no significant effect on the adsorption of phosphonate between pH 4 and 12. The buffers, therefore, do not compete with the phosphonate for adsorption sites. Furthermore, the relatively high concentration of the buffer requires a higher dosage concentration of oxidizing agent (K2S2O8) for digestion than that specified in ISO 6878, which, together with the NaOH dosage, is matched to each buffer. Despite the simplification, the ISOmini method does not lose any of its accuracy compared to the standardized method.

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric hydroxide, with little effort and high reliability. In a buffered solution, the phosphonate is brought into contact with the adsorbent using a rotator and then analyzed via a miniaturized phosphorus determination method.

Fosfonat adsorpsiyon taneli ferrik minyatürize fosfor belirleme yöntemini kullanarak hidroksit üzerine belirlemek için en iyi duruma getirilmiş yordamı

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

Fabrication of Anisotropic Polymeric Artificial Antigen Presenting Cells for CD8+ T Cell Activation

Artificial antigen presenting cells (aAPC) are a promising platform for immune modulation due to their potent ability to stimulate T cells. Acellular substrates offer key advantages over cell-based aAPC, including precise control of signal presentation parameters and physical properties of the aAPC surface to modulate its interactions with T cells. aAPC constructed from anisotropic particles, particularly ellipsoidal particles, have been shown to be more effective than their spherical counterparts at stimulating T cells due to increased binding and larger surface area available for T cell contact, as well as reduced nonspecific uptake and enhanced pharmacokinetic properties. Despite increased interest in anisotropic particles, even widely accepted methods of generating anisotropic particles such as thin-film stretching can be challenging to implement and use reproducibly.
To this end, we describe a protocol for the rapid, standardized fabrication of biodegradable anisotropic particle-based aAPC with tunable size, shape, and signal presentation for T cell expansion ex vivo or in vivo, along with methods to characterize their size, morphology, and surface protein content, and to assess their functionality. This approach to fabricating anisotropic aAPC is scalable and reproducible, making it ideal for generating aAPC for &#34;off-the-shelf&#34; immunotherapies.

Here, we present a protocol to quickly and reproducibly generate biologically inspired, biodegradable articifical antigen presenting cells (aAPC) with tunable size, shape, and surface protein presentation for T cell expansion ex vivo or in vivo.

Yönbağımlı polimer yapay antijen hücreleri CD8 + T Hücre aktivasyonu için sunma imalatı

Artificial antigen presenting cells (aAPC) are a promising platform for immune modulation due to their potent ability to stimulate T cells. Acellular ...

Measuring the Shape and Size of Activated Sludge Particles Immobilized in Agar with an Open Source Software Pipeline

Experimental bioreactors, such as those treating wastewater, contain particles whose size and shape are important parameters. For example, the size and shape of activated sludge flocs can indicate the conditions at the microscale, and also directly affect how well the sludge settles in a clarifier.
Particle size and shape are both misleadingly &#39;simple&#39; measurements. Many subtle issues, often unaddressed in informal protocols, can arise when sampling, imaging, and analyzing particles. Sampling methods may be biased or not provide enough statistical power. The samples themselves may be poorly preserved or undergo alteration during immobilization. Images may not be of sufficient quality; overlapping particles, depth of field, magnification level, and various noise can all produce poor results. Poorly specified analysis can introduce bias, such as that produced by manual image thresholding and segmentation.
Affordability and throughput are desirable alongside reproducibility. An affordable, high throughput method can enable more frequent particle measurement, producing many images containing thousands of particles. A method that uses inexpensive reagents, a common dissecting microscope, and freely-available open source analysis software allows repeatable, accessible, reproducible, and partially-automated experimental results. Further, the product of such a method can be well-formatted, well-defined, and easily understood by data analysis software, easing both within-lab analyses and data sharing between labs.
We present a protocol that details the steps needed to produce such a product, including: sampling, sample preparation and immobilization in agar, digital image acquisition, digital image analysis, and examples of experiment-specific figure generation from the analysis results. We have also included an open-source data analysis pipeline to support this protocol.

The size and shape of particles in activated sludge are important parameters that are measured using varying methods. Inaccuracies arise from non-representative sampling, suboptimal images, and subjective analysis parameters. To minimize these errors and ease measurement, we present a protocol specifying every step, including an open source software pipeline.

Nesnenin şeklini ve boyutunu Agar bir açık kaynak yazılım boru hattı ile immobilize aktif çamur parçacıkların ölçme

Experimental bioreactors, such as those treating wastewater, contain particles whose size and shape are important parameters. For example, the size and ...

A Uniaxial Compression Experiment with CO2-Bearing Coal Using a Visualized and Constant-Volume Gas-Solid Coupling Test System

Injecting carbon dioxide (CO2) into a deep coal seam is of great significance for reducing the concentration of greenhouse gases in the atmosphere and increasing the recovery of coalbed methane. A visualized and constant-volume gas-solid coupling system is introduced here to investigate the influence of CO2 sorption on the physical and mechanical properties of coal. Being able to keep a constant volume and monitor the sample using a camera, this system offers the potential to improve instrument accuracy and analyze fracture evolution with a fractal geometry method. This paper provides all steps to perform a uniaxial compression experiment with a briquette sample in different CO2 pressures with the gas-solid coupling test system. A briquette, cold-pressed by raw coal and sodium humate cement, is loaded in high-pressure CO2, and its surface is monitored in real-time using a camera. However, the similarity between the briquette and the raw coal still needs improvement, and a flammable gas such as methane (CH4) cannot be injected for the test. The results show that CO2 sorption leads to peak strength and elastic modulus reduction of the briquette, and the fracture evolution of the briquette in a failure state indicates fractal characteristics. The strength, elastic modulus, and fractal dimension are all correlated with CO2 pressure but not with a linear correlation. The visualized and constant-volume gas-solid coupling test system can serve as a platform for experimental research about rock mechanics considering the multifield coupling effect.

A Uniaxial Compression Experiment with CO2-Bearing Coal Using a Visualized and Constant-Volume Gas-Solid Coupling Test System

This protocol demonstrates how to prepare a briquette sample and conduct a uniaxial compression experiment with a briquette in different CO2 pressures using a visualized and constant-volume gas-solid coupling test system. It also aims to investigate changes in terms of coal&#8217;s physical and mechanical properties induced by CO2 adsorption.

A tek eksenli sıkıştırma deney ile CO2-rulman kömür kullanarak bir Visualized ve Constant-hacim gaz-katı kavrama test sistemi

Injecting carbon dioxide (CO2) into a deep coal seam is of great significance for reducing the concentration of greenhouse gases in the atmosphere and ...

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) and quantify any differences in fin cortisol levels among three main sturgeon species. Fins were harvested from 19 sacrificed sturgeons including seven beluga (Huso huso), seven Siberian (Acipenser baerii), and five sevruga (A. stellatus). The sturgeons were raised in Iranian farms for 2 years (2017-2018), and cortisol extraction analysis was conducted in South Korea (January-February 2019). Jawbones from five H. huso were also used for cortisol extraction. Data were analyzed using the general linear model (GLM) procedure in the SAS environment. The intra- and inter-assay coefficients of variation were 14.15 and 7.70, respectively. Briefly, the cortisol extraction technique involved washing the samples (300 &#177; 10 mg) with 3 mL of solvent (ultrapure water and isopropanol) twice, rotation at 80&#160;rpm for 2.5 min, air-drying the washed samples at room temperature (22-28 &#176;C) for 7 days, further drying the samples using a bead beater at 50 Hz for 32 min and grinding them into powder, applying 1.5 mL methanol to the dried powder (75 &#177; 5 mg), and slow rotation (40 rpm) for 18 h at room temperature with continuous mixing. Following extraction, samples were centrifuged (9,500 x g for 10 min), and 1 mL supernatant was transferred into a new microcentrifuge tube (1.5 mL), incubated at 38 &#176;C to evaporate the methanol, and analyzed via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). No differences were observed in fin cortisol levels among species or in fin and jawbone cortisol levels between washing solvents. The results of this study demonstrate that the sturgeon jawbone matrix is a promising alternative stress indicator to solid matrices.

In this study, we present a protocol for cortisol extraction from the fin and jawbone of sturgeon species. Fin and jawbone cortisol levels were further examined by comparing two washing solvents followed by ELISA assays. This study piloted the feasibility of jawbone cortisol as a novel stress indicator.

Mersin Balığı Fin ve Çene Kemiği Matrislerinden Kortizol Ekstraksiyonu

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

Extracellular Multi-Unit Recording from the Olfactory Nerve of Teleosts

Recent studies have shown that ocean acidification affects olfactory-driven behavior in fish. This may be due in part to a reduction in olfactory sensitivity in high PCO2/low pH water. To assess the effects of ocean acidification, or olfactory sensitivity in marine fish in general, we propose that extracellular multi-unit recording from the olfactory nerve is the method of choice. Although invasive, it is sensitive, robust, reproducible and independent of external salinity (unlike the electro-olfactogram [EOG], for example). Furthermore, it records a primary sensory input into the CNS, prior to any central processing. We show that this method can show a reduction in olfactory sensitivity that is both temporary and odorant-dependent, using a range of amino acids to construct concentration-response curves and calculate the thresholds of detection.

Extracellular multi-unit recording from the olfactory nerve is a sensitive, robust and reproducible method for assessing olfactory sensitivity in marine fish. It records primary sensory input and is independent of external salinity.