This study was supported by the Netherlands Cardiovascular Research Initiative, the Dutch Heart Foundation, the Dutch Federation of University Medical Centers, the Netherlands Organization for Health Research and Development, and the Royal Netherlands Academy of Sciences (CVON nr. 2012-08, PHAEDRA, The Sebald fund, Stichting Hartekind).

Hayvan denekleri Prosedürleri Hayvan Deneyleri için Hollanda Merkez Komitesi ve Üniversite Tıp Merkezi Groningen Hayvan Bakım Komitesi (NL) tarafından onaylanmıştır. 180 ve 300 g arasında ağırlıkları iki Wistar ve Lewis sıçanları kullanılmıştır. 1. Konut ve Aklimatizasyon <ol><li> kafes başına 5 gruplar halinde merkez hayvan tesis, ev sıçan geldikten sonra. 7 günlük bir iklimlendirme döneminde, insan kullanımdan sıçan alıştırmak, ancak herhangi bir deneysel prosedürler gerçekleştirmeyin. </li></ol> 2. Hazırlık Steril Monocrotalin enjeksiyonu <ol><li> 60 mg / ml monocrotalin (MCT) solüsyonu 1 mL için, 2 ml bir tüp içinde monocrotalin 60 mg ağırlığında. % 0.9 NaCl 700 uL ekleyin. 1 M HCI, 200 uL ekleyin. Sıcak çalışan musluk suyu ve vorteks o altında tüp içinde çözüm ısıtın. 7.0 doğru pH&#39;ı getirmek için 6 N NaOH kullanın. kemirgenler içine enjeksiyon için MCT hazırlanması için steril tekniği kullanın. </li&gt; <li> (300 g bir fare için 60 mg / ml MCT 0.3 mL) boyun kg deri altından her steril 60 mg / ml MCT çözeltisi 1 ml enjekte edilir. NOT: Bu yazıda enjekte doz uygun olmayacağını büyük şans daha küçük hacimli kullanmak için değil tercih ederim. </li></ol> 3. Aort-kaval Şant Cerrahisi <ol><li> Anestezi. <ol><li> (Akış: / dak 1 L)% 5 izofluran /% 100 O 2 ile indüksiyon odasına doldurun ve odasında sıçan yerleştirin. Bir arka ayak tutam yaparak anestezi yeterli derinlikte olup olmadığını kontrol edin. sıçan tartılır. </li><li> Tıraş ve yaklaşık 8 cm uzunluğunda ve 3 cm genişliğinde bir alana karın temizleyin. steril bir mat kaplı bir ısı mat (37 ° C) sırtında sıçan yerleştirin. </li><li> % 3 izofluran /% 100 O 2 (: / dk 1 L akışı) - 2 ile solunum maskesi / kaputu burun yerleştirin. Bir arka ayak tutam yaparak anestezi derinliğini kontrol edin. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için göz merhemi sürün. </li></ol></li><li> şant Surgery. <ol><li> dezenfeksiyon için klorür-heksidinli cilt fırçalayın. kg buprenorfin subkutan post-operatif analjezi için 0.01 mg / enjekte edilir. </li><li> Ameliyat için steril aletler kullanın. Bir sadece genital üstünde aşağı uzanan diyafram altında 1 cm başlayarak, orta hat karın bir 10. neşter bıçağı ile bir kesi yapmak. </li><li> steril, ıslak gazlı bez (% 0.9 NaCl) içinde bağırsakları kapak, bir pamuklu çubukla bağırsak yukarı kaldırın ve hayvanın sol tarafına koyun. </li><li> abdominal aorta ve çevre dokulara inferior vena kava takmak membranlar ayırmak için pamuklu çubuklarla kullanın. NOT: aort ve vena kava arasındaki membranlar incelemek etmeyin. </li><li> splinter forseps kullanarak, sadece aort sağ tarafında ve tek iğne eklenecek sitede, sadece çatallanma üstünde perivasküler aort yağ çıkarmak. </li><li> 2 mm supe gelen aort ve vena kava ayırmak için pamuklu çubuklarla kullanınİğne bir Biemer kelepçesi için alan yaratmak amacıyla eklenir siteye Rior. </li><li> Bu alanda, ilk aort etrafında gevşek bir bitişik harfleri (5-0 dikiş) yerleştirin. Kesi (Şekil 1A) için Kocher üstün koyun sonra üzerine bir Kocher kelepçe koyarak dikilen gerginlik oluşturun ve. Biemer ligature (Figür e 1A) sadece üstün kelepçe yerleştirin. </li><li> Bir pamuklu çubuk kullanarak, akış (Şekil 1A) engel olarak distale mümkün olduğunca vena kava sıkıştırmak. Bend dışında (Şekil 1A) doğru menfez işaret ile 45 derecelik bir açı içine iğne (Bu protokol 18 G). </li><li> 90 derecelik bir açı ile, sol (Şekil 1A) iğne işaret deliği ile sadece çatallanma üzerinde aorta iğneyi. sola iğne ucu işleyin ve vena kava takın. NOT: İğne ucu şimdi olmalıdır visivena kava (Şekil 1B) ble. </li><li> trombozu önlemek için ekleme siteden aort kalan kan itmek için ikinci bir pamuklu çubuk kullanın. tutkal yeterince sopa için sırayla bir steril gazlı bez ile şant çevresini kurutun. </li><li> Aort dışarı tüm iğne çekin ve hemen aorta ponksiyon üzerine doku yapıştırıcısı bir damla uygulayın. dokuya pamuklu çubukla tutkal değil emin olun. aorta çözülme. </li><li> çekerek ve şantın aort proksimalinde bitişik harfleri serbest elle şant doğrulayın. Gevşeme parlak kırmızı şant vena kava distalinden renk ve şönt yerinde türbülans oluşturmanız gerekir. NOT: Sıkma geri koyu kırmızı vena kava kan dönecek. </li><li> geri hayvanda bağırsak yerleştirin. emilebilir 4-0 sütür ile kas tabakası ve cilt kapatın. Anestezi kurtarmak için% 100 O 2 ile hayvan havalandırınız. NOT: Bir ani bırakmayınsternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar mal katılımsız. </li></ol></li><li> Sham Cerrahi. <ol><li> Aort içine iğne sokulması haricinde yukarıdaki işlemlerin tümünü gerçekleştirebilir. </li></ol></li><li> Ameliyat sonrası bakım. <ol><li> Tek bir kafes ve ertesi sabaha kadar 37 ° C&#39;deki bir kuluçka makinesi içine sıçan yerleştirin. </li><li> Ameliyat sonrası 6 saat civarında, post-operatif analjezi için kg buprenorfin subkutan / 0.01 mg enjekte edilir. Sıçan rahatsızlık belirtileri gösterir, eğer ertesi sabah tekrarlayın. Not: Ameliyattan sonraki ilk 3 gün sonra, sıçanlar (yemi ya da içme suyu ilaçlar ile karıştırılmaktadır, bu özellikle önemlidir) ve yemek az içki eğilimindedir. Çoğu sıçanlar 3 gün ameliyattan sonra normal davranışı göstermektedir. Değilse, yakından izleyin. 1 hafta içinde% 15 aşan Zayıflama, anormal olarak kabul edilir ve bu fareler anestezi altında iken kan hacminin ekstre ötenazi edilmelidir. </li></ol></li></ol> NOT: Bu protokol, hayvan anestezi altında iken dolaşan kan hacminin çıkarılması ile ötenazi. <ol><li> Pulmoner kan akımının artırılması erken hücresel ve fonksiyonel yanıtları (örneğin, gen up-regülasyonu veya erken transkripsiyon faktörleri) için cerrahi (MF8) 1 gün sonra Kurban. </li><li> Bir erken evre PAH vasküler fenotip (neointimal lezyonlar olmadan medial hipertrofi) için cerrahi (MF14) 1 hafta sonra Kurban. </li><li> RVP ve mPAP hafif yükselti ile bir ileri evre PAH vasküler fenotip için cerrahi (MF21) (işaretli medial hipertrofi ve neointimal oluşumu) 2 hafta sonra Kurban. </li><li> RVP ve mPAP bir son dönem PAH vasküler fenotip için cerrahi (MF28) (işaretli neointimal tıkanıklığı) ve güçlü yükseklik 3 hafta sonra Kurban. sağ ventrikül yetmezliği klinik belirtileri, bu aşamada yaygındır. </li><li> gün 28 (MF-SVY&#39;nin sonra Kurban) Klinik nefes darlığı, şiddetli uyuşukluk ve kilo kaybı (&lt;1 hafta içinde% 10) olarak tanımlanan PAH ilişkili sağ ventrikül yetmezliği (RVF), için. Bu işaretlerden biri varken sıçan sonlandırın. Sık sık, fareler gün 28 ve 35 arasında bu belirtiler geliştirmek, korumasız bırakılırsa, bu zaman aralığında kendiliğinden ölür. </li></ol> 5. Sağ Kalp kateterizasyonu <ol><li> Anestezi. <ol><li> (Akış: / dak 1 L)% 5 izofluran /% 100 O 2 ile indüksiyon odasına doldurun ve kutuya sıçan yerleştirin. Bir arka ayak tutam yaparak anestezi yeterli derinlikte olup olmadığını kontrol edin. sıçan tartılır. </li><li> ekokardiyografi protokolü, toraks ve üst batın, Tıraş ve sıçan sağ ventral tarafında boyun temizlemek ve. </li><li> Bir ısı mat (37 ° C) sırtında sıçan yerleştirin ve 2 ile bir solunum maskesi / kaputu burun yerleştirin -% 3 izofluran /% 100 O 2 (akış: / dak 1 L). burun araştırmacı doğru karşıya edilmelidir. </li><li&gt; Anestezi derinliğini kontrol edin. Şiddetli PH bulunan fareler ile dikkatli olun. Kalp hızı azalırsa, anestezi derinliğini azaltmak. Tercih, 20 dakika içinde tüm ölçümler yapmak. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için göz merhemi sürün. </li></ol></li><li> Ekokardiyografi protokolü. <ol><li> Brittain ve arkadaşları tarafından tarif edilen protokole göre ekokardiyografi gerçekleştirin. Jüpiter 13. </li></ol></li><li> Kateterizasyon protokolü. NOT: Bu protokol önceden ucu ile sert bir kanül ucu bir top 2 mm 15 cm silikon kateter rehberlik 20 derece bükülmüş kullanır. Içine hafifçe bükülmüş olan deliği ile 20-G iğne sağ juguler damara kanül eklemek için kullanılır (malzeme listesine bakınız). PAH ilerlemesi ve kontrol herhangi bir aşamasında Sıçanlar Bu protokolde kullanılabilir. <ol><li> klorür-heksidinli boyun dezenfekte edin. Sağ-ventral tarafta bir 10. neşter bıçağı ile 1.5 cm kesi yapmakBoyun, sağ köprücük kemiği üzerinde mandibular kemik. </li><li> makas kullanılarak doku yayıldı. boyun damarı görünene kadar cımbız kullanarak, yavaşça birbirinden doku çekin. kıymık forseps kullanarak damar şahdamarına etrafındaki zarların parçalara ayır. </li><li> Geminin etrafında gevşek bitişik harfleri (5-0 dikiş) koyarak juguler ven üzerindeki gerilimi koyun. Gerginliği artırmak ve havalandırma maskesi (Şekil 2A) üzerine bitişik harfleri bantlayın. </li><li> Ekleme bölgesinden akım-aşağı kanül sızıntı ve basınç kaybını önlemek için, yerinde sonra sıkıştırmak için teknenin etrafına gevşek bitişik harfleri yerleştirin. </li><li> Bir forseps kolları kullanarak, hafifçe kateter ile kanül yapmak için iç deliği ile 20 G iğne ucu bükün. </li><li> damara 20-G iğne ucu tanıtmak ve hızlı bir şekilde geminin içindeki kateter içeren kanül yerleştirin. iğne çekin ve ardından bitişik harfleri kapatınBu aşama 5.3.4 hazırlandı. </li><li> şah damara kateter içeren kanül yürütün. kanül ucu 20 derecelik eğri olan (adım 5.3.5 bakınız). Köprücük kemiği altında kanül Manevra ve sağ atrium (Şekil 2C) girmek için biraz ilerlemek. </li><li> Sağ ventrikül girmek için, kalp (Şekil 2B) doğru sola kanül ucu, işaret. Başucu monitöründe, bir rv basınç eğrisi Şekil 2D eşleşen görünmelidir. </li><li> RV basınç eğrisi sabit olduğunda, sistolik ve diyastolik sağ ventrikül basıncı 1 yazınız (sRVP1 / dRVP1). </li><li> sol ve yukarı kanül ucu işleyin. Kanül (Şekil 2E) içinde kateteri ilerletin. </li><li> Ana pulmoner arter (PA) içine kateteri ilerletin. Pulmoner vana geçerken hiçbir direnç hissettim edilmelidir. NOT: Kateter ana pulmoner arter girdiğinde, diastolic basınç artacak. Başucu monitörde, bir PA basınç eğrisi Şekil 2E eşleşen görünmelidir. </li><li> PA basınç eğrisi sabit olduğunda, sistolik, diyastolik yazmak ve PA basıncı 1 (sPAP1, dPAP1, mPAP1) anlamına gelir. </li><li> kateterin ucundaki topu pulmoner arter sıkışmış alır kadar daha fazla kanül içinde kateteri ilerlemek. Başucu monitör damla basınç eğrisi gözlemlemek ve Şekil 2F kama basıncı eğrisini maç. </li><li> wedge basıncı eğrisi sabit olduğunda, sistolik, diyastolik yazmak ve kama basıncı anlamına gelir. </li><li> Yavaş yavaş ve daha sonra kateter geri çekin ölçmek ve başucu monitörünüzde görüntülenen, sPAP2, dPAP2, mPAP2, sRVP2 ve dRVP2 değerlerini yazınız. </li><li> RV, biraz ölçmek için kanül ve kateter geri çekin sağ atriyal basıncı (RAP) anlamına gelir. Eğri Şekil 2A RAP eğrisini eşleşmesi gerekir. YOK HAYIRTE: Bu protokol, sıçanlar anestezi altında iken dolaşan kan hacminin çıkarılması ile kateterizasyon protokolünden sonra ötenazi. </li></ol></li></ol> 6. Morfoloji Değerlendirme ve Morfometri NOT: Bu protokol, hayvan anestezi altında iken dolaşan kan hacminin çıkarılması ile ötenazi. PAH ilerlemesi ve kontrol herhangi bir aşamasında Sıçanlar Bu protokolde kullanılabilir. <ol><li> Ölümden sonra 5 bronş çatallanma yukarıdaki mm ve kalp akciğerler bağlamak gemiler hakkında trakea keserek akciğerleri çıkar. soğuk tuzlu su içinde akciğerlere koyun. Sol akciğer parçalara ayır. çatallanma sol ana bronş kesin. </li><li> ,% 4 paraformaldehid ile 50 ml şırınga doldurun şırıngaya bir kanül ile bir tüp takın ve çalışma tablosu üzerinde bir metre şırınga asmak. pasif paraformaldehid ile akciğer doldurmak için sol ana bronş içinde kanül takın.dikkatli paraformaldehid anlaştım. </li><li> 48 saat paraformaldehid sol akciğer inkübe edin. </li><li> (% 70 etanol (1 H),% 80 etanol (1 H),% 90 etanol (1 H),% 100 etanol (3H), ksilol (2 saat) ve parafin ardışık olarak inkübe edilerek kalan akciğer kurutmak 2H). </li><li> Kaseti bakan akciğer hilus ile, parafin sol akciğer gömün. </li><li> Üreticinin talimatlarına 29 uyarınca, bir Verhoeff veya Elastica-van Gieson boyama kullanılarak parafine gömülü, 4 mikron akciğer bölümleri Leke. Emin olun elastik lamina iyi (Şekil 3 gibi) ayrılır. 40X büyütmede lekeli bölümleri tarayın. </li><li> 4 parçaya bölünür akciğer bölün. Her bir çeyrek daire olarak, &lt;dış çapı 50 um (içi asinar) ve 10 damarları&gt; bir dış çapa sahip 10 gemi 50 um (ön asinar) bulabilirsiniz. Bir resim (akciğer başına 2 x 40 resim) atın. rastgele her geminin 20x büyütme ve fotoğraf kadar büyütBu görüş sahası; seçim verevi en aza indirmek için. </li><li> &gt; 2 en uzun / kısa çap oranı, tam olmayan dairesel bir şekli, ya da kap duvarının fazla dörtte biri bir çöküş sahip damarları hariç. NOT: dışlanan geminin bir örneği aynı büyütme (40X) her resim yapın ve bir ölçek çubuğu dahil 3b Şekil gösterilmiştir. </li><li> Açık ImageJ ve ilk resim. &quot;Analyse&quot; yoluyla ölçek ayarlamak için resimdeki ölçek çubuğunda düz bir çizgi çizmek ve &quot;ölçek olarak ayarlayın.&quot; Için &quot;Bilinen mesafe,&quot; resmin ölçek çubuğunda değeri kullanın. uzunluk birimi olarak mikrometre (um) kullanın. Küresel için ölçek olarak ayarlayın. </li><li> &quot;Serbest seçimleri&quot; kullanma lümen alanı (Şekil 3) iç sınırında bir çizgi çizin, ve &quot;ölçmek&quot; kullanın (Ctrl m) bu alanı ölçmek için. Ardından, dış elast etrafında bir çizgi çizinic lamina (Şekil 3) toplam damar alanı ölçmek için. </li><li> (Luminal ve dış çapı hesaplamak <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq1.jpg" /> ) kullanılarak <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq2.jpg" /> . </li><li> kullanarak duvar kalınlığını hesaplamak <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq3.jpg" /> . </li><li> kullanarak duvar / lümen oranını hesaplamak <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq4.jpg" /> . </li><li> kullanarak tıkanıklığı puanı hesaplamak <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq5.jpg" /> . </li><li> Muskularizasyon gemiyi Puan (hayır, kısmi veya toplam muskularizasyon) (Şekil 3B). NOT: Tamamen muskularize olarak yarısından fazlasının çevresi için bir çift elastik lamina gemiler tanımlanır. Kısmen muskularize gibi bir çift elastik lamina yarısından daha az çevre gemiler tanımlanır. </li><li> Bir Neoi varlığına gemi Skoruntima (evet veya hayır) (Şekil 3C). NOT: (genellikle eksantrik) lümen tıkanıklığı ile birlikte açıkça tanımlanmış internal elastik lamina olmadan gemiler neointimal lezyonlar olarak tanımlanır. </li></ol>

<ol>
	<li>Hoeper, M. M., Bogaard, H. J., Condliffe, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definitions+and+diagnosis+of+pulmonary+hypertension.">Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension.</a> J Am Coll Cardiol. 62, D42-D50 (2013).</li><li>Stacher, E., Graham, B. B., Hunt, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+age+pathology+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Modern age pathology of pulmonary arterial hypertension.</a> Am J Respir Crit Care Med. 186 (3), 261-272 (2012).</li><li>Levy, M., Maurey, C., Celermajer, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+apoptosis+of+pulmonary+endothelial+cells+is+associated+with+intimal+proliferation+and+irreversibility+of+pulmonary+hypertension+in+congenital+heart+disease.">Impaired apoptosis of pulmonary endothelial cells is associated with intimal proliferation and irreversibility of pulmonary hypertension in congenital heart disease.</a> J Am Coll Cardiol. 49 (7), 803-810 (2007).</li><li>Sakao, S., Tatsumi, K., Voelkel, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+or+irreversible+remodeling+in+pulmonary+arterial+hypertension.">Reversible or irreversible remodeling in pulmonary arterial hypertension.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 43 (6), 629-634 (2010).</li><li>Gomez-Arroyo, J. G., Farkas, L., Alhussaini, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+monocrotaline+model+of+pulmonary+hypertension+in+perspective.">The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302 (4), L363-L369 (2012).</li><li>Jones, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+noninvasive+assessment+of+progressive+pulmonary+hypertension+in+a+rat+model.">Serial noninvasive assessment of progressive pulmonary hypertension in a rat model.</a> Am J Physiol - Heart Circ Physiol. 283 (1), 364-371 (2002).</li><li>Hoffman, J. I., Rudolph, A. M., Heymann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+vascular+disease+with+congenital+heart+lesions:+Pathologic+features+and+causes.">Pulmonary vascular disease with congenital heart lesions: Pathologic features and causes.</a> Circulation. 64 (5), 873-877 (1981).</li><li>van Albada, M. E., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+arterial+hypertension+in+congenital+cardiac+disease--the+need+for+refinement+of+the+evian-venice+classification.">Pulmonary arterial hypertension in congenital cardiac disease--the need for refinement of the evian-venice classification.</a> Cardiol Young. 18 (1), 10-17 (2008).</li><li>Dickinson, M. G., Bartelds, B., Borgdorff, M. A., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+disturbed+blood+flow+in+the+development+of+pulmonary+arterial+hypertension:+Lessons+from+preclinical+animal+models.">The role of disturbed blood flow in the development of pulmonary arterial hypertension: Lessons from preclinical animal models.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305 (1), L1-L14 (2013).</li><li>Garcia, R., Diebold, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple,+rapid,+and+effective+method+of+producing+aortocaval+shunts+in+the+rat.">Simple, rapid, and effective method of producing aortocaval shunts in the rat.</a> Cardiovasc Res. 24 (5), 430-432 (1990).</li><li>Okada, K., Tanaka, Y., Bernstein, M., Zhang, W., Patterson, G. A., Botney, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+hemodynamics+modify+the+rat+pulmonary+artery+response+to+injury.+A+neointimal+model+of+pulmonary+hypertension.">Pulmonary hemodynamics modify the rat pulmonary artery response to injury. A neointimal model of pulmonary hypertension.</a> Am J Pathol. 151 (4), 1019-1025 (1997).</li><li>van Albada, M. E., Schoemaker, R. G., Kemna, M. S., Cromme-Dijkhuis, A. H., van Veghel, R., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+increased+pulmonary+blood+flow+in+pulmonary+arterial+hypertension.">The role of increased pulmonary blood flow in pulmonary arterial hypertension.</a> Eur Respir J. 26 (3), 487-493 (2005).</li><li>Brittain, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+assessment+of+the+right+heart+in+mice.">Echocardiographic assessment of the right heart in mice.</a> JVis Exp. (e81), (2013).</li><li>Dickinson, M. G., Bartelds, B., Molema, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Egr-1+expression+during+neointimal+development+in+flow-associated+pulmonary+hypertension.">Egr-1 expression during neointimal development in flow-associated pulmonary hypertension.</a> Am J Pathol. 179 (5), 2199-2209 (2011).</li><li>Borgdorff, M. A., Bartelds, B., Dickinson, M. G., Steendijk, P., de Vroomen, M., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+loading+conditions+reveal+various+patterns+of+right+ventricular+adaptation.">Distinct loading conditions reveal various patterns of right ventricular adaptation.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 305 (3), H354-H364 (2013).</li><li>Ruiter, G., de Man, F. S., Schalij, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversibility+of+the+monocrotaline+pulmonary+hypertension+rat+model.">Reversibility of the monocrotaline pulmonary hypertension rat model.</a> Eur Respir J. 42 (2), 553-556 (2013).</li><li>van Albada, M. E., Bartelds, B., Wijnberg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profile+in+flow-associated+pulmonary+arterial+hypertension+with+neointimal+lesions.">Gene expression profile in flow-associated pulmonary arterial hypertension with neointimal lesions.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 298 (4), L483-L491 (2010).</li><li>Dickinson, M. G., Kowalski, P. S., Bartelds, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+egr-1+during+vascular+remodelling+in+pulmonary+arterial+hypertension.">A critical role for egr-1 during vascular remodelling in pulmonary arterial hypertension.</a> Cardiovasc Res. 103 (4), 573-584 (2014).</li><li>van der Feen, D. E., Dickinson, M. G., Bartelds, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Egr-1+identifies+neointimal+remodeling+and+relates+to+progression+in+human+pulmonary+arterial+hypertension.">Egr-1 identifies neointimal remodeling and relates to progression in human pulmonary arterial hypertension.</a> Jheart lung transplant. 35 (4), 481-490 (2016).</li><li>Rungatscher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+overcirculation-induced+pulmonary+arterial+hypertension+in+aorto-caval+shunt.">Chronic overcirculation-induced pulmonary arterial hypertension in aorto-caval shunt.</a> Microvasc Res. 94, 73-79 (2014).</li><li>O'Blenes, S. B., Fischer, S., McIntyre, B., Keshavjee, S., Rabinovitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+unloading+leads+to+regression+of+pulmonary+vascular+disease+in+rats.">Hemodynamic unloading leads to regression of pulmonary vascular disease in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 121 (2), 279-289 (2001).</li><li>Sakao, S., Taraseviciene-Stewart, L., Lee, J. D., Wood, K., Cool, C. D., Voelkel, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+apoptosis+is+followed+by+increased+proliferation+of+apoptosis-resistant+endothelial+cells.">Initial apoptosis is followed by increased proliferation of apoptosis-resistant endothelial cells.</a> FASEB J. 19 (9), 1178-1180 (2005).</li><li>Spiekerkoetter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FK506+activates+BMPR2,+rescues+endothelial+dysfunction,+and+reverses+pulmonary+hypertension.">FK506 activates BMPR2, rescues endothelial dysfunction, and reverses pulmonary hypertension.</a> J Clin Invest. 123 (8), 3600-3613 (2013).</li><li>Nickel, N. P., Spiekerkoetter, E., Gu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elafin+reverses+pulmonary+hypertension+via+caveolin-1-dependent+bone+morphogenetic+protein+signaling.">Elafin reverses pulmonary hypertension via caveolin-1-dependent bone morphogenetic protein signaling.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (11), 1273-1286 (2015).</li><li>Meloche, J., Potus, F., Vaillancourt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bromodomain-containing+protein+4:+The+epigenetic+origin+of+pulmonary+arterial+hypertension.">Bromodomain-containing protein 4: The epigenetic origin of pulmonary arterial hypertension.</a> Circ Res. 117 (6), 525-535 (2015).</li><li>Happ&#233;, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumonectomy+combined+with+SU5416+induces+severe+pulmonary+hypertension+in+rats.">Pneumonectomy combined with SU5416 induces severe pulmonary hypertension in rats.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 310 (11), L1088-L1097 (2016).</li><li>Ranchoux, B., Antigny, F., Rucker-Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-to-mesenchymal+transition+in+pulmonary+hypertension.">Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension.</a> Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).</li><li>de Raaf, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SuHx+rat+model:+Partly+reversible+pulmonary+hypertension+and+progressive+intima+obstruction.">SuHx rat model: Partly reversible pulmonary hypertension and progressive intima obstruction.</a> Eur Respy J. 44 (1), 160-168 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu yöntem sıçanlarda prensip hemodinamik ve PAH ve bu modeli karakterize histopatolojik uç noktalarını değerlendirmek için akış kaynaklı PAH ve teknikleri oluşturmak için MCT ile ön işleme tabi bir aorto-kaval şant cerrahi prosedürü tanımlamaktadır. Protokolün ve Sorun Giderme içinde kritik adımlar Cerrahi ve ameliyat sonrası. aorta-kaval şant ameliyatı sırasında en kritik adım aort ve vena kava diseksiyonudur. aort ve vena kava yeterinc...

Bu yöntemin amacı, farelerde şiddetli akım kaynaklı pulmoner arteriyel hipertansiyon için tekrarlanabilir bir model oluşturmak için ve prensip hemodinamik ve histopatolojik bitiş noktalarını ölçmektir. Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH), sağ ventrikül yetmezliği ve ölüme yol açan pulmoner vasküler dirençte ilerleyici artış kapsayan bir klinik sendromdur. Pulmoner hipertansif hastalıklar (PH) superordinate hastalık spektrumu içinde, PAH tam iyileşme 1 olmadan kalır en ağır formu ve biridir. PAH altta yatan arteriopatidir damar lümeni tıkar vasküler yeniden tipik bir formu ile karakterizedir. Normal olmayan muskularize damarlar ve medial damar tabakasının hipertrofisi Muskularizasyon PAH erken hastalık fenomen olarak kabul edilmektedir, aynı zamanda PH 2 diğer şekillerde görülür ve 3 geri dönüşümlü olduğu düşünülmektedir. PAH a olarakdvances, intimal tabaka sonunda karakteristik neointimal lezyonlar 2 şekillendirme, pişmanlık başlar. Neointimal tipi pulmoner vasküler yeniden şekillenme PAH özeldir ve şu anda 4 geri dönüşümsüz olarak kabul edilir. PAH nadir bir hastalık olduğu için, onun biyopatolojik anlama gelişmeler ve yeni tedavilerin geliştirilmesi hayvan modellerinde dayanmıştır var. Sıçanlarda monocrotalin (MCT) model olmuştur basit bir tek vuruş modeli ve hala sık kullanılır. MCT pulmoner arteriol ve bölgesel inflamasyon 5 yaralanmasına neden olan bir zehirdir. / Kg MCT 60 mg ortalama pulmoner arter basıncında (mPAP), pulmoner vasküler rezistans (PVR) bir artışa yol açar ve 3 sonrası sağ ventrikül hipertrofisi (SVH) - 4 hafta 6. Histomorphology neointimal lezyonlar 5 olmadan izole medial hipertrofi ile karakterize edilir. MCTyaygın ikinci olarak sunulan rağmen sıçan modeli böylece ılımlı bir PH şeklini değil, PAH temsil eder. Konjenital sol-sağ şant (PAH-KKH) ile bağlantılı PAH çocuklarda pulmoner kan akımı neointimal lezyonlar 7, 8, 9 gelişmesi için gerekli tetikleyicisi olarak kabul edilir arttı. Sıçanlarda, artan pulmoner kan akışı abdominal aorta ve vena kava, ilk olarak 1990 10&#39;da tarif edilen bir teknik arasında bir şönt oluşturulması ile indüklenebilir. Artmış pulmoner akım oluşturmak için Alternatifler tek taraflı pnömonektomi veya pulmoner arter anastomoz 11 subklavyan tarafından uygulanır. Bu modellerin kavramsal dezavantajları nedeniyle ya da pulmoner vasküler iyatrojenik yaralanma pnömonektomi tarafından uyarılan kalan akciğer ve adaptif yolu aktivasyonu potansiyel telafi büyümesi oluşurpulmoner arter anastomoz, hem artmış pulmoner kan akımının etkilerini karıştırıcı. Bir aorta-kaval şant oluşturulur ve MCT ile tedavi edilen sıçanlarda ikinci vuruşu olarak uyarılan pulmoner kan akımını artar, karakteristik neointimal lezyonlar ortaya çıkar, ve artan sonra PAH ağır formu ve ilgili sağ ventrikül yetmezliği (RVF) 3 hafta geliştirmek 12 akar. Bu modelde PAH hemodinamik ilerlemesi ekokardiyografi ve sağ kalp kateterizasyonu in vivo değerlendirilebilir. Sağ kalp yetmezliği için damar histomorphology, damar duvar kalınlığı, arterioler tıkanıklığının derecesi ve parametreler PAH ex vivo karakterizasyonu ayağı oluşturur. Bu yöntem aorta-kaval şant (AC-şant) ameliyatı için ayrıntılı protokoller, sağ kalp kateterizasyonu ve damar histomorphology nitel ve nicel değerlendirmesini açıklar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="835">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:307px;">
			Shunt Surgery
			</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:196px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sterile surgical gloves</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Duratears Eye ointment</td>
			<td style="width:151px;">Alcon</td>
			<td style="width:183px;">10380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Chloride-Hexidine</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Histoacryllic tissue glue</td>
			<td style="width:151px;">B. Braun Medical</td>
			<td>1050052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Silkam 5-0 sutures black non-resorbable</td>
			<td style="width:151px;">B. Braun Medical</td>
			<td>F1134027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Safil 4-0 sutures violet resorbable</td>
			<td style="width:151px;">B. Braun Medical</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">18 G needle&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Luer</td>
			<td>NN1838R BD</td>
			<td>tip bent in 45 degrees orifice to the outside</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Gauzes 10x10 cm</td>
			<td>Paul Hartmann</td>
			<td>407825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Temgesic Buprenorphine</td>
			<td style="width:151px;">RB Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:183px;">5429</td>
			<td>subcutaneous injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Chloride 0.9 %</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ventilation mask Rat</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Scalple blade</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Biemer clamp 18 mm, 5 mm opening&#160;</td>
			<td><a href="https://www.google.nl/url?sa=i&amp;rct=j&amp;q=&amp;esrc=s&amp;source=images&amp;cd=&amp;cad=rja&amp;uact=8&amp;ved=0ahUKEwitqICpkITNAhWiL8AKHe6iCC8QjhwIBQ&amp;url=http%3A%2F%2Fwww.agnthos.se%2Fquote%2Fquote%2Fcaturl%2Fid%2F242%2FBiemer&amp;psig=AFQjCNEnfRXuMQ6Doi4_-2KMYu3qeRovMA&amp;ust=1464777707579746">AgnTho</a></td>
			<td>64-562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Heat mat</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Kocher Clamp</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Shaving machine</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Microscope</td>
			<td style="width:151px;">Leica</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:307px;">
			Right Heart Catheterization
			</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Name</td>
			<td style="width:151px;">Company</td>
			<td style="width:183px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sterile surgical gloves</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Eye ointment</td>
			<td style="width:151px;">Duratears</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Chloride-Hexidine</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Gauzes 10x10 cm</td>
			<td>Paul Hartmann</td>
			<td>407825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Silkam 5-0 sutures black non-resorbable</td>
			<td style="width:151px;">B. Braun Medical</td>
			<td>F1134027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Needle 20 G</td>
			<td style="width:151px;">Luer</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>Tip slightly bent to the inside</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Cannula 20 G</td>
			<td style="width:151px;">Luer</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>to introduce catheter, tip pre-formed in 20 degrees</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Silastic Catheter 15 cm long</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>0.5 mm ball 2 mm from tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Pressure transducer</td>
			<td style="width:151px;">Ailtech</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Bedside monitor Cardiocap/5</td>
			<td style="width:151px;">Datex-Ohmeda</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Shaving machine</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10mL Syringe</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Chloride 0.9 %</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>for flushing</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:307px;">
			Vascular Morphology
			</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Name</td>
			<td style="width:151px;">Company</td>
			<td style="width:183px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50ml Syringe</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">4 % Formaldehyde</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">18 G cannula with tube</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Verhoef staining kit</td>
			<td style="width:151px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&amp;region=NL">HT254</a></td>
			<td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&#38;region=US</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Digital slide scanner</td>
			<td style="width:151px;">Hamamatsu</td>
			<td style="width:183px;">C9600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Image-J</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Elastic (Connective Tissue Stain)&#160;</td>
			<td style="width:151px;">Abcam</td>
			<td style="width:183px;">ab150667</td>
			<td>http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

shunt surgery, right heart catheterization, and vascular morphometry in a rat model for flow-induced pulmonary arterial hypertension

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt (MCT+Flow). The shunt is created by inserting an 18-G needle from the abdominal aorta into the adjacent caval vein. Increased pulmonary flow has been demonstrated as an essential trigger for a severe form of PAH with distinct phases of disease progression, characterized by early medial hypertrophy followed by neointimal lesions and the progressive occlusion of the small pulmonary vessels. To measure the right heart and pulmonary hemodynamics in this model, right heart catheterization is performed by inserting a rigid cannula containing a flexible ball-tip catheter via the right jugular vein into the right ventricle. The catheter is then advanced into the main and the more distal pulmonary arteries. The histopathology of the pulmonary vasculature is assessed qualitatively, by scoring the pre- and intra-acinar vessels on the degree of muscularization and the presence of a neointima, and quantitatively, by measuring the wall thickness, the wall-lumen ratios, and the occlusion score.

Örnek sonuçlar Şekil 4&#39;te sunulmaktadır. Kontrol grubu (n = 3), MF8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5), ve MF-RVF (: sunulan sonuçlar MCT + aşağıdaki grupları Lewis sıçanlarında akış özellikleri gösterir n = 10). İstatistiksel analizler Bonferroni düzeltmesi ile tek-yönlü ANOVA ile yapılmıştır. 60 / kg MCT mg ve sistolik sağ ventrikül basıncında ortalama artış (SRVP) (23 ± 6...

Watch this Scientific Journal Video about Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension at JoVE.com

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

This protocol describes a surgical procedure to create a model for flow-induced pulmonary arterial hypertension (PAH) in rats and the procedures to analyze the principle hemodynamic and histological end-points in this model.

Akış kaynaklı pulmoner hipertansiyon için bir Sıçan Modelinde Şant Cerrahisi, Sağ Kalp kateterizasyonu ve Damar Morfometri

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

shunt-surgery-right-heart-catheterization-vascular-morphometry-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

16.7K Görüntüleme.  University Medical Center Groningen, University of Groningen. This protocol describes a surgical procedure to create a model for flow-induced pulmonary arterial hypertension (PAH) in rats and the procedures to analyze the principle hemodynamic and histological end-points in this model.

Video: Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

Guide Wire Assisted Catheterization and Colored Dye Injection for Vascular Mapping of Monochorionic Twin Placentas

Monochorionic (MC) twin pregnancies are associated with significantly higher morbidity and mortality rates than dichorionic twins. Approximately 50% of MC twin pregnancies develop complications arising from the shared placenta and associated vascular connections1. Severe twin-to-twin syndrome (TTTS) is reported to account for approximately 20% of these complications2,3. Inter-twin vascular connections occur in almost all MC placentas and are related to the prognosis and outcome of these high-risk twin pregnancies. The number, size and type of connections have been implicated in the development of TTTS and other MC twin conditions. Three types of inter-twin vascular connections occur: 1) artery to vein connections (AVs) in which a branch artery carrying deoxygenated blood from one twin courses along the fetal surface of the placenta and dives into a placental cotyledon. Blood flows via a deep intraparenchymal capillary network into a draining vein that emerges at the fetal surface of the placenta and brings oxygenated blood toward the other twin. There is unidirectional flow from the twin supplying the afferent artery toward the twin receiving the efferent vein; 2) artery to artery connections (AAs) in which a branch artery from each twin meets directly on the superficial placental surface resulting in a vessel with pulsatile bidirectional flow, and 3) vein to vein connections (VVs) in which a branch vein from each twin meets directly on the superficial placental surface allowing low pressure bidirectional flow. In utero obstetric sonography with targeted Doppler interrogation has been used to identify the presence of AV and AA connections4. Prenatally detected AAs that have been confirmed by postnatal placental injection studies have been shown to be associated with an improved prognosis for both twins5. Furthermore, fetoscopic laser ablation of inter-twin vascular connections on the fetal surface of the shared placenta is now the preferred treatment for early, severe TTTS. 
Postnatal placental injection studies provide a valuable method to confirm the accuracy of prenatal Doppler ultrasound findings and the efficacy of fetal laser therapy6. Using colored dyes separately hand-injected into the arterial and venous circulations of each twin, the technique highlights and delineates AVs, AAs, and VVs. This definitive demonstration of MC placental vascular anatomy may then be correlated with Doppler ultrasound findings and neonatal outcome to enhance our understanding of the pathophysiology of MC twinning and its sequelae. Here we demonstrate our placental injection technique.

Vascular mapping of monochorionic (MC) twin placentas after birth provides a means for detailed demonstration of vascular connections between the twins&#x2019; circulations. 
Imbalance of these connections is thought to play a pivotal role in the development of complications of MC twinning including twin-to-twin transfusion syndrome.

Monokoryonik ikiz plasenta Damar Haritalama Kılavuz Tel Destekli Kateterizasyon ve Renkli Boya Enjeksiyon

Monochorionic (MC) twin pregnancies are associated with significantly higher morbidity and mortality rates than dichorionic twins. Approximately 50% of MC ...

Tıp

Femoral Arterial and Venous Catheterization for Blood Sampling, Drug Administration and Conscious Blood Pressure and Heart Rate Measurements

In multiple fields of study, access to the circulatory system in laboratory studies is necessary. Pharmacological studies in rats using chronically implanted catheters permit a researcher to effectively and humanely administer substances, perform repeated blood sampling and assists in conscious direct measurements of blood pressure and heart rate. Once the catheter is implanted long-term sampling is possible. Patency and catheter life depends on multiple factors including the lock solution used, flushing regimen and catheter material. This video will demonstrate the methodology of femoral artery and venous catheterization of the rat. In addition the video will demonstrate the use of the femoral venous and arterial catheters for blood sampling, drug administration and use of the arterial catheter in taking measurements of blood pressure and heart rate in a conscious freely-moving rat. A tether and harness attached to a swivel system will allow the animal to be housed and have samples taken by the researcher with minimal disruption to the animal. To maintain patency of the catheter, careful daily maintenance of the catheter is required using lock solution (100 U/ml heparinized saline), machine-ground blunt tip syringe needles and the use of syringe filters to minimize potential contamination. With careful aseptic surgical techniques, proper catheter materials and careful catheter maintenance techniques, it is possible to sustain patent catheters and healthy animals for long periods of time (several weeks).

Chronic catheterization of blood vessels in the rat is often required for administration of substances, obtain blood sample over a period of time or for direct conscious blood pressure measurements. Femoral arterial catheterization of the rat and corresponding measurements of blood pressure in the conscious animal will be demonstrated.

Kan Örnekleme, İlaç İdaresi ve Bilinçli Kan Basıncı ve Nabız ölçümleri Femoral Arter ve Venöz Kateterizasyon

In multiple fields of study, access to the circulatory system in laboratory studies is necessary. Pharmacological studies in rats using chronically ...

Echocardiographic Assessment of the Right Heart in Mice

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential therapies. Given the expense and time involved in creating animal models of disease, it is critical that researchers have tools to accurately assess phenotypic expression of disease. Right ventricular dysfunction is the major manifestation of pulmonary hypertension. Echocardiography is the mainstay of the noninvasive assessment of right ventricular function in rodent models and has the advantage of clear translation to humans in whom the same tool is used. Published echocardiography protocols in murine models of PAH are lacking.
In this article, we describe a protocol for assessing RV and pulmonary vascular function in a mouse model of PAH with a dominant negative BMPRII mutation; however, this protocol is applicable to any diseases affecting the pulmonary vasculature or right heart. We provide a detailed description of animal preparation, image acquisition and hemodynamic calculation of stroke volume, cardiac output and an estimate of pulmonary artery pressure.

This article provides a protocol for the echocardiographic assessment of right ventricular size and pulmonary hypertension in mice. Applications include phenotype determination and serial assessment in transgenic and toxin-induced mouse models of cardiomyopathy and pulmonary vascular disease.

Farelerde Sağ Kalp Ekokardiyografik Değerlendirilmesi

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential ...

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension and Assessment of Right Ventricular Function in the Piglet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. Pulmonary Hypertension (PH) was induced in 3-week-old piglets by a progressive obstruction of the pulmonary vascular bed. A ligation of the left Pulmonary Artery (PA) was performed first through a mini-thoracotomy. Second, weekly embolizations of the right lower pulmonary lobe were done under fluoroscopic guidance with n-butyl-2-cyanoacrylate during 5 weeks. Mean Pulmonary Arterial Pressure (mPAP) measured by ritght heart catheterism, increased progressively, as well as Right Atrial pressure and Pulmonary Vascular Resistances (PVR) after 5 weeks compared to sham animals. Right Ventricular (RV) structural and functional remodeling were assessed by transthoracic echocardiography (RV diameters, RV wall thickness, RV systolic function). RV elastance and RV-pulmonary coupling were assessed by Pressure-Volume Loops (PVL) analysis with conductance method. Histologic study of the lung and the right ventricle were also performed. Molecular analyses on RV fresh tissues could be performed through repeated transcutaneous endomyocardial biopsies. Pulmonary microvascular disease in obstructed and unobstructed territories was studied from lung biopsies using molecular analyses and pathology. Furthermore, the reliability and the reproducibility was associated with a range of PH severity in animals. Most aspects of the human CTEPH disease were reproduced in this model, which allows new perspectives for the understanding of the underlying mechanisms (mitochondria, inflammation) and new therapeutic approaches (targeted, cellular or gene therapies) of the overloaded right ventricle but also pulmonary microvascular disease.

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) and Right Ventricular (RV) dysfunction were induced in piglets by progressive obstruction of the pulmonary arteries. Consequences were remarkably similar to those observed in CTEPH patients. This animal model would be a very useful tool for pathophysiology and therapeutic experiments on CTEPH and RV failure.

Kronik tromboembolik pulmoner hipertansiyon ve Piglet Sağ Ventrikül Fonksiyonu Değerlendirilmesi

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. ...

Hemodynamic Characterization of Rodent Models of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a rare disease of the pulmonary vasculature characterized by endothelial cell apoptosis, smooth muscle proliferation and obliteration of pulmonary arterioles. This in turn results in right ventricular (RV) failure, with significant morbidity and mortality. Rodent models of PAH, in the mouse and the rat, are important for understanding the pathophysiology underlying this rare disease. Notably, different models of PAH may be associated with different degrees of pulmonary hypertension, RV hypertrophy and RV failure. Therefore, a complete hemodynamic characterization of mice and rats with PAH is critical in determining the effects of drugs or genetic modifications on the disease. 
Here we demonstrate standard procedures for assessment of right ventricular function and hemodynamics in both rat and mouse PAH models. Echocardiography is useful in determining RV function in rats, although obtaining standard views of the right ventricle is challenging in the awake mouse. Access for right heart catheterization is obtained by the internal jugular vein in closed-chest mice and rats. Pressures can be measured using polyethylene tubing with a fluid pressure transducer or a miniature micromanometer pressure catheter. Pressure-volume loop analysis can be performed in the open chest. After obtaining hemodynamics, the rodent is euthanized. The heart can be dissected to separate the RV free wall from the left ventricle (LV) and septum, allowing an assessment of RV hypertrophy using the Fulton index (RV/(LV+S)). Then samples can be harvested from the heart, lungs and other tissues as needed.

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease of pulmonary arterioles that leads to their obliteration and the development of right ventricular failure. Rodent models of PAH are critical in understanding the pathophysiology of PAH. Here we demonstrate hemodynamic characterization, with right heart catheterization and echocardiography, in the mouse and rat.

Pulmoner Hipertansiyon Kemirgen Modeller Hemodinamik Karakterizasyonu

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a rare disease of the pulmonary vasculature characterized by endothelial cell apoptosis, smooth muscle ...

Induction and Phenotyping of Acute Right Heart Failure in a Large Animal Model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension

The development of acute right heart failure (ARHF) in the context of chronic pulmonary hypertension (PH) is associated with poor short-term outcomes. The morphological and functional phenotyping of the right ventricle is of particular importance in the context of hemodynamic compromise in patients with ARHF. Here, we describe a method to induce ARHF in a previously described large animal model of chronic PH, and to phenotype, dynamically, right ventricular function using the gold standard method (i.e., pressure-volume PV loops) and with a non-invasive clinically available method (i.e., echocardiography). Chronic PH is first induced in pigs by left pulmonary artery ligation and right lower lobe embolism with biological glue once a week for 5 weeks. After 16 weeks, ARHF is induced by successive volume loading using saline followed by iterative pulmonary embolism until the ratio of the systolic pulmonary pressure over systemic pressure reaches 0.9 or until the systolic systemic pressure decreases below 90 mmHg. Hemodynamics are restored with dobutamine infusion (from 2.5 &#181;g/kg/min to 7.5 &#181;g/kg/min). PV-loops and echocardiography are performed during each condition. Each condition requires around 40 minutes for induction, hemodynamic stabilization and data acquisition. Out of 9 animals, 2 died immediately after pulmonary embolism and 7 completed the protocol, which illustrates the learning curve of the model. The model induced a 3-fold increase in mean pulmonary artery pressure. The PV-loop analysis showed that ventriculo-arterial coupling was preserved after volume loading, decreased after acute pulmonary embolism and was restored with dobutamine. Echocardiographic acquisitions allowed to quantify right ventricular parameters of morphology and function with good quality. We identified right ventricular ischemic lesions in the model. The model can be used to compare different treatments or to validate non-invasive parameters of right ventricular morphology and function in the context of ARHF.

We present a protocol to induce and phenotype an acute right heart failure in a large animal model with chronic pulmonary hypertension. This model can be used to test therapeutic interventions, to develop right heart metrics&#160;or to improve the understanding of acute right heart failure pathophysiology.

Kronik Tromboembolik Pulmoner Hipertansiyonun Büyük Bir Hayvan Modelinde Akut Sağ Kalp Yetmezliğinin İndüksiyonu ve Fenotiplemesi

The development of acute right heart failure (ARHF) in the context of chronic pulmonary hypertension (PH) is associated with poor short-term outcomes. The ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of group 2 PH, due to mitral stenosis (MS), to facilitate the investigation of disease mechanisms and potential therapeutic strategies. We present a novel rat model of pulmonary venous congestion-induced pulmonary venous arterialization and group 2 PH caused by left atrial stenosis (LAS). LAS is achieved by constricting the left atrium using a half-closed titanium clip. After the LAS surgery, a rat model with a transmitral inflow velocity greater than or equal to 2.0 m/s on echocardiography gradually develops pulmonary venous arterialization and group 2 PH over an 8- to 10-week period. In this protocol, we provide the step-by-step procedure of how to perform the LAS surgery. The presented LAS rat model mimics MS in humans and is useful for studying the underlying molecular mechanism of pulmonary venous arterialization and for the preclinical evaluation of therapies for group 2 PH.

Left atrial stenosis (LAS) is a novel surgical technique used for studying group 2 pulmonary hypertension (PH) and mechanisms underlying pulmonary venous arterialization. Here, we present a protocol to constrict the left atrium using a titanium clip to cause pulmonary venous arterialization and moderate PH in a rat.

Sol atriyal stenoz indüklenen pulmoner venöz Arterialization ve Grup 2 sıçan pulmoner hipertansiyon

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. However, the evaluation of right ventricular pressure (RVP) and pulmonary artery pressure (PAP) remains technically challenging in mice. RVP and PAP are more difficult to measure than left ventricular pressure because of the anatomical differences between the left and right heart systems. In this paper, we describe a stable right heart hemodynamic measurement method and its validation using healthy and PAH mice. This method is based on open-chest surgery and mechanical ventilation support. It is a complicated procedure compared to closed chest procedures. While a well-trained surgeon is required for this surgery, the advantage of this procedure is that it can generate both RVP and PAP parameters at the same time, so it is a preferable procedure for the evaluation of PAH models.

Here, we present a protocol to perform an invasive hemodynamic assessment of the right ventricle and pulmonary artery in mice using an open-chest surgery approach.

Farelerde Sağ Ventrikül Sistemi ve Hipoksiye Bağlı Pulmoner Arteriyel Hipertansiyon için İnvaziv Hemodinamik Değerlendirme

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...

Morphological and Functional Assessment of the Right Ventricle Using 3D Echocardiography

Traditionally, it was believed that the right side of the heart has a minor role in circulation; however, more and more data suggest that right ventricular (RV) function has strong diagnostic and prognostic power in various cardiovascular disorders. Due to its complex morphology and function, assessment of the RV by conventional two-dimensional echocardiography is limited: the everyday clinical practice usually relies on simple linear dimensions and functional measures. Three-dimensional (3D) echocardiography overcame these limitations by providing volumetric quantification of the RV free of geometrical assumptions. Here, we offer a step-by-step guide to obtain and analyze 3D echocardiographic data of the RV using the leading commercially available software. We will quantify 3D RV volumes and ejection fraction. Several technical aspects may help to improve the quality of RV acquisition and analysis as well, which we present in a practical manner. We review the current opportunities and the limiting factors of this method and also highlight the potential applications of 3D RV assessment in current clinical practice.

Here, we provide a step-by-step acquisition and analysis protocol for the 3D volumetric assessment of the right ventricle, mainly focusing on the practical aspects that maximize the feasibility of this technique.

3D Ekokardiyografi ile Sağ Ventrikülün Morfolojik ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Traditionally, it was believed that the right side of the heart has a minor role in circulation; however, more and more data suggest that right ...

A Rodent Model of The Ross Operation: Syngeneic Pulmonary Artery Graft Implantation in A Systemic Position

The Ross operation for aortic valve disease has regained new interest due to its outstanding long-term results. Nonetheless, when employed as freestanding root replacement, the possible dilation of the pulmonary autograft and subsequent aortic regurgitation is described. Several animal models have been proposed. However, these are usually limited to ex-vivo models or in-vivo experiments with relatively expensive large animal models. In this study, we sought to establish a rodent model of pulmonary artery graft (PAG) implantation in a systemic position. A total of 39 adult Lewis rats were included. Immediately after euthanasia, the pulmonary root was harvested from a donor animal (n=17). Syngeneic recipient (n=17) and sham-operated (n=5) rats were sedated and ventilated. In the recipient group, the PAG was implanted with an end-to-end anastomosis in infra-renal abdominal aortic position. Sham-operated rats underwent only transection and re-anastomosis of the aorta. Animals were followed with serial ultrasound studies for two months and post-mortem histological analysis. The median PAG diameter in the native position was 3.20 mm (IQR=3.18-3.23). At follow-up, the median diameter of the PAG was 4.03 mm (IQR=3.74-4.13) at 1 week, 4.07 mm (IQR=3.80-4.28) at 1 month, and 4.27 mm (IQR=3.90-4.35) at 2 months (p&lt;0.01). Peak systolic velocity was 220.07 mm/s (IQR=210.43-246.41) at 1 week, 430.88 mm/s (IQR=375.28-495.56) at 1 month, and 373.68 mm/s (IQR=305.78-429.81) at 2 months (p=0.02) and did not differ from the sham-operated group at the end of the experiment (p=0.5). Histological analysis did not show any sign of endothelial thrombosis. This study showed that rodent models may allow for the evaluation of the long-term adaptation of the pulmonary root to a high-pressure system. A systemically placed syngeneic PAG implantation represents a simple and feasible platform for the development and evaluation of novel surgical techniques and drug therapies to further improve the outcomes of the Ross operation.

We demonstrate how to establish a murine model of pulmonary root implantation into the descending aorta to simulate the Ross procedure. This model enables the medium/long-term evaluation of pulmonary autograft remodeling in a systemic position, representing the basis of developing therapeutic strategies to promote its adaptation.

Ross Operasyonunun Kemirgen Modeli: Sistemik Pozisyonda Singeneik Pulmoner Arter Greft İmplantasyonu

The Ross operation for aortic valve disease has regained new interest due to its outstanding long-term results. Nonetheless, when employed as freestanding ...