Yazarların onayları yok.

Bu yayında ayrıntılandırılan yöntemler, Hilltop Laboratuar Hayvanları&#39;ndaki kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi (IACUC) tarafından hayvanların uygun federal, eyalet ve yerel yasalara ve yönetmeliklere uygun olarak uygun bakım, kullanım ve insancıl muamele edilmesini sağlamak için gözden geçirilmiştir Federal Hayvan Refah Yönetmeliği ya da AWR&#39;ler (CFR 1985) ve Hayvan Bakımı ve Laboratuar Hayvanlarının Kullanımı ile İlgili Halk Sağlığı Hizmet Politikası ya da PHS Politikası (PHS 1996) olarak. 1. Davranışsal Değerlendirme için Genel Kurallar <ol><li> Hayvanları elleçlemeden önce, mevcut kafes kartlarını sadece benzersiz, körleştirilmiş hayvan tanımlayıcıyı gösteren yeni bir kafes kartuyla örtün. NOT: Rutin bileşik / plasebo dozları sırasında fareleri tutan araştırmacıların davranış değerlendirme için fareleri kullanmasına izin verilmez. </li><li> Tepegöz ışıklarını kapatın veya aydınlatın ve arena veya labirentin zeminindeki aydınlatma 30-35 lux olacak şekilde ışığı ayarlayın. </li><li> FVeya birkaç hafta boyunca devam eden çalışmalar, haftalık genel sağlık kayıtlarının dolaylı bir ölçümü olarak vücut ağırlıklarını kaydeder. NOT: Daha sağlam sağlık kontrolleri gerekliyse, ceket kalitesi, duruş, yürüme ve kendiliğinden hareket için ilave kafes kontrolleri dahil edilebilir. </li></ol> 2. Araştırmacıların Fareyi Alışkan Haklarında Kullanmaya Hazırlanması <ol><li> Herhangi bir davranış testinden iki gün önce, fareleri elle tutulur hale getirin. Kabini, kafes rafından çıkarın ve düz bir zemin üzerine koyun. </li><li> Kapağı kafesden çıkarın. Fare, yaklaşmakta olan davranış testinin performansı boyunca tam olarak ele alınacak şekilde kullanın. Fareyi, kafesin üstündeki kupalı ​​bir elin içine yerleştirin. </li><li> Araştırmacının elinden tekrar ev kafesine atlamak için gecikmeyi ölçün. Fareleri en çok 5 saniye tutun. NOT: ≥2 s gecikme süresi olan fareler &quot;alışkanlık&quot; olarak kabul edilir. İlk deneme süresince gecikme süresi &lt;2 s olan fareler, 2 ilave alışkanlık edinirlerO gün seans yok. </li><li> Farelerin 2 gün üst üste konut alışkanlığından geçmesini sağlayın. 2. günün sonuna kadar alışkanlık duymayan herhangi bir fare unutmayın. </li></ol> 3. Y-labirentinde Spontan Değişimi Ölçerek Mekansal Çalışma Belleğinin Değerlendirilmesi 8 <ol><li> İlk kullanımdan önce, Y-labirentini kokusuz bir ağartıcı mikrop öldürücü silme sıvısı,% 70 EtOH, ardından dH209 ile iyice temizleyin. Labirentin kollarını &#39;A&#39;, &#39;B&#39; ve &#39;C&#39; veya benzeri diğer benzersiz tanımlayıcılar olarak açıkça belirtin. </li><li> Bir test oturumuna başlamadan önce veri toplama sistemi veya video kameraları ayarlayın ve labirentteki farelerin uygun şekilde izlenmesini ayarlayın. Bir cetvelin veya bilinen uzunluğun diğer bir nesnesinin çekilen video görüntülerini kullanarak labirentteki mesafeyi kalibre edin. NOT: Bu prosedürdeki davranış metotları, çeşitli veri toplama sistemleri ile çalışacaktır ve yazarlar, herhangi birBu prosedürün uygulanması, seçtikleri veri toplama sisteminin kullanılmasında oldukça ustadır. Güç analizleri, bir grup için 10-15 farenin bir numunenin bir β ≤0.2 için gerekli olduğunu göstermektedir. </li><li> Kabini raftan çıkarın ve yavaşça Y-labirentine yakın bir masanın üzerine yerleştirin. Fareyi evdeki kafesinden çıkarın ve merkeze bakacak şekilde Y-labirentinin bir koluna hafifçe yerleştirin. Araştırmacı labirentten yeterince uzaklaşın böylece farenin araştırmacıyı göremezsiniz. </li><li> Fareyi labirente yerleştirdikten hemen sonra veri / video edinme sistemini etkinleştirin. </li><li> Oynat tuşuna basın ve her fare için 10 dakikalık bir süre için spontan davranışı kaydedin. Bir oturum tamamlandıktan sonra, fareyi yavaşça ev kafesine yerleştirin ve kafesi rafa geri koyun. </li><li> Labirenti, her seansta kokusuz bir ağartıcı mikrop öldürücü silme,% 70 EtOH, ardından dH2O ile iyice temizleyin. Tüm mikrofonu değerlendirmek için adım 3.4&#39;den itibaren tekrarlayıne. </li><li> Tüm fareler Y-labirentin araştırmasını tamamladıktan sonra, satın alma sistemindeki verileri analiz edin veya oturumların videolarını manuel olarak puanlayın. Farenin 4 basamağının tümünün orta bölgenin eşiğini geçip kola girmesi ve hayvanın burnunun kolun ucuna doğru yönlendirilmesi kol girişi gerçekleşir. NOT: Analiz edilecek son noktalar şunlardır: labaratuvarda toplam mesafe, her kol (merkez bölge dahil) içinde dolaşan toplam mesafe, her kolda (merkezi bölge dahil olmak üzere) harcanan toplam süre, toplam kol girişi sayısı, sayı Her bir kola yapılan girdiler ve sıralı bir silah listesi girilerek yapılan değişikliklerin sayısını değerlendirdik. </li><li> Bir fare labirentin farklı bir koluna 3 ardışık kol girişinin her birine girdiğinde spontan bir değişim meydana gelir. Daha sonra, aşağıdaki formül ile spontan değişim% hesaplanır. <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/55523/55523eq1.jpg" /> NOT: Örneğin, iKol girişi sırası: ABCCBABCABC, araştırmacı toplam 6 spontan değişim (sırayla: ABC, CBA, ABC, BCA, CAB, ABC) puan alacaktı. Toplam 11 kol girişi ile spontan değişim% 67 olacaktır. </li><li> Verilerin spontan değişimin tarafsız bir değerlendirmesini temsil ettiğinden emin olmak için aşağıdaki kalite kontrolü kontrollerini yapın. <ol><li> Pearson&#39;un kendiliğinden değişime ilişkin% &#39;si, hem toplam seyahat mesafesi hem de yapılan kol girişi sayısı için korelasyon yapın. NOT: Her iki parametreden% spontan değişimin anlamlı bir korelasyona sahip olması halinde, hiperdinamik hareketin görünür kognitif son nokta üzerindeki olası etkisinden dolayı, veriler daha ayrıntılı bir şekilde incelenmelidir 10 . </li><li> Her bir kola yapılan girişlerin sayısını bir 1-yönlü ANOVA testiyle analiz edin. NOT: Eğer bu analiz önemli ise, bu durum, farelerde belirli bir bölgeye çekiş ip uçları bulunduğunu gösterecektirLabirentin üzerine. </li></ol></li></ol> 4. Orta Boyda Tanınma Belleğinin Roman Objesinin Tanımını Ölçerek Değerlendirilmesi 11 , 12 , 13 <ol><li> Bu testin her fazı için, ilk kullanımdan önce açık alan arenasını kokusuz bir ağartıcı mikrop öldürücü silme bezi,% 70 EtOH ve ardından dH20 ile iyice temizleyin. </li><li> Nesneye maruz kalmadan bir gün önce, fareleri açık saha tarlasına yatıştırın. <ol><li> Alışkanlık oturumunun başlangıcından önce, veri toplama sistemi veya video kameraları kurun ve farelerin labirentte doğru şekilde izlenip onaylanmadığını teyit edin. Bir cetvelin veya bilinen uzunluğun diğer bir nesnesinin çekilmiş video görüntülerini kullanarak arenadaki mesafeyi kalibre edin. Konumsal önyargıların puanlanmasına izin vermek için yazılımın arenasının köşelerini işaretleyin. NOT: Bu prosedürdeki davranış metodları çeşitli veri toplama sistemleri ile çalışacaktır.Yazarlar, bu prosedürü uygulayan herhangi birinin seçtiği veri toplama sisteminin kullanılmasında yeterli olduğunu düşünüyor. Güç analizleri, grup başına 15-20 farenin bir numune boyutunun bir β ≤0.2 için gerekli olduğunu göstermektedir. </li><li> Kabini raftan çıkarın ve arenaya yakın bir masanın üzerine yavaşça yerleştirin. </li><li> Fareyi ev kafesinden çıkarın ve hafifçe arena ortasına fareyi yerleştirin. Fareyi arenaya koyduktan hemen sonra izleme yazılımı ve / veya video kayıt sistemini açın. </li><li> Farelerin 30 dakika boyunca arena keşfedilmesine izin verin. NOT: Bu süre zarfında araştırmacılar fareleri rahatsız etmeyecektir. </li><li> Alışkanlık oturumundan sonra, fareleri ev kafeslerine yerleştirin ve arena&#39;yı kokusuz bir ağartıcı mikrop öldürücü silme bezi,% 70 EtOH ve bunu takiben dH20 ile iyice temizleyin. </li><li> Adım 4.2.2&#39;den itibaren tüm fareler arenaya yatıncaya kadar tekrarlayın. </li><li> Bütün fareler alışkanlık haline geldikten sonraArena yapıldı, videoyu analiz edin. NOT: Analiz için bitiş noktaları arenada toplam mesafeyi ve her köşenin yanında harcanan zamanı içerir. Fare modeli ile alakalı olması durumunda, stereotipik davranışlar bu analizlere dahil edilir ( yani , miyoklonik köşe atlama, daire çizme, vb. ). Arenanın belirli bölgelerinde harcanan zamana karşı önyargılar sergileyen fareler, nesne araştırmalarını etkileyeceğinden ileri denemelerden çıkarılır. NOT: Yeni nesne tanımanın ilk aşaması, fareleri bir nesneye tanıtır. Burada, yeni nesne tanıma prosedürünün bu kısmı Örnekleme safhası olarak geçecektir. </li><li> Örnek bir faz oturumunun başlangıcından önce, nesneleri arenaya yerleştirin ve hayvanlar nesneleri hareket ettiremeyecek şekilde onları bir montaj macunu ile zemine sabitleyin. Duvarlar ve nesneler arasında yeterli mesafeyle belirli bir duvara iki aynı nesneyi hizalayın, böylece fareler tüm açılardan nesneleri özgürce keşfedebilirles. </li><li> Veri toplama sistemi veya video kameraları kurun ve labirentteki farelerin ve nesnelerin doğru şekilde izlenmesini onaylayın. Bir cetvelin veya bilinen uzunluğun diğer bir nesnesinin çekilmiş video görüntülerini kullanarak arenadaki mesafeleri kalibre edin. </li><li> Konumsal önyargıların puanlanmasına izin vermek için yazılımın arenasının köşelerini işaretleyin. Nesneleri yazılımda işaretleyin ve keşif davranışlarını her nesne için ayrı ayrı izleyin ( ör . &quot;Nesne A&quot; ve &quot;Nesne B&quot;). </li><li> Kabini raftan çıkarın ve hafifçe arenaya yakın bir masanın üzerine koyun. </li><li> Fareyi evdeki kafesden çıkarın ve nesnelerin bulunduğu alanın ortasına hafifçe yerleştirin. </li><li> Farenin 15 dakika boyunca nesneleri özgürce keşfetmesine izin verin. Bu süre zarfında fareleri rahatsız etmeyin. </li><li> Oturumun sonunda, fareyi yavaşça ev kafesine yerleştirin. Arenayı ve nesneleri% 70 EtOH ve dH 2 O ile temizleyin. Bu nesneleri tekrarArenada. </li><li> Tüm fareler bir nesneye aşina oluncaya kadar adım 4.2.11&#39;i tekrarlayın. </li><li> Tüm fareler bir nesneye aşina olduktan sonra, videoları analiz edin. NOT: Nesne araştırmaları aşağıdaki kriterler yerine getirildiğinde sayılır: fare nesneyle yönlendirilir, burun kısmı nesnenin 2 cm&#39;inde, hayvanın gövdesinin orta noktası nesneden 2 cm&#39;nin üstündedir ve önceki ölçütler En az 1 s süreyle yerine getirildi. Buna ek olarak, bir hayvan keşif kriterlerinden memnun ise ancak&gt; 10 saniye süreyle hareketsizlik sergilerse, keşif sonu tamamlanmış sayılacaktır. </li><li> Her fare için nesne yanlılık skorunu aşağıdaki gibi hesaplayın. <img alt="Denklem 2" src="/files/ftp_upload/55523/55523eq2.jpg" /> NOT: Nesne önyargı puanı% 20&#39;nin altında veya% 80&#39;in üstünde olan fareler, daha ileri denemelerden çıkarılır. </li></ol></li><li> Yeni nesne tanımanın son aşaması, keşif davranışının değerlendirilmesini içerirOrtamda hem yeni hem de tanıdık bir nesneye yöneltilmiş ve burada Test aşamasında değinilmiştir. Bu evre, örnek evrenin tamamlanmasından 2-3 saat sonra yapılır. <ol><li> Bir test evresi seansının başlangıcından önce, nesneleri arenaya yerleştirin ve hayvanların nesneleri hareket ettirememesi için zemine sabitleyin. <ol><li> Nesneleri, örnek safhaya 13 göre arenada aynı konuma yerleştirin. </li><li> Genotipler ve tedavi grupları arasındaki yeni ve tanıdık nesnelerin göreli konumunu dengeleyin. </li><li> Duvarlar ve nesneler arasında farelerin nesneleri her açıdan rahatça keşfedebilmesi için yeterli mesafe olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> Veri toplama sistemi ve / veya video kameraları kurun. Labirentte farelerin ve nesnelerin doğru şekilde izlenmesini onaylayın. Bir cetvelin veya bilinen uzunluğun diğer bir nesnesinin çekilmiş video görüntülerini kullanarak arenadaki mesafeleri kalibre edin. </li><li> Arenanın köşelerini yazılımda işaretleyinKonumsal önyargıların puanlanmasına izin vermektir. Nesneleri yazılımda işaretleyin ve her nesneye yönelik keşif davranışını tek tek izleyin ( yani , &quot;Roman&quot; ve &quot;Tanıdık&quot;). </li><li> Kabini raftan çıkarın ve hafifçe arenaya yakın bir masanın üzerine koyun. </li><li> Nazikçe nesneleri hayvanat bahçelerine bakacak şekilde arenanın merkezine yerleştirin. Fareleri 10 dakika boyunca nesneleri özgürce keşfetmek için kaydedin. </li><li> Test oturumunun sonunda, arenadaki fareleri çıkarın ve fareleri evdeki kafese geri yerleştirin. Arenayı ve nesneleri, her oturumdan sonra kokusuz bir ağartıcı mikrop öldürücü silme,% 70 EtOH ve dH20 ile iyice temizleyin. </li><li> Adım 4.4.3&#39;te tüm hayvanlar değerlendirilene kadar tekrarlayın. </li><li> Nesne araştırması tüm fareler için ölçülünce videolar analiz edilir. NOT: Nesne araştırmaları aşağıdaki kriterler yerine getirildiğinde sayılır: fare nesneye doğru yönlendirilir, burun nesnenin 2 cm&#39;inde, orta noktadaHayvanın cismi cisimden 2 cm&#39;nin üstünde ve önceki kriterler en az 1 sn boyunca yerine getirildi. Buna ek olarak, bir hayvan keşif kriterlerinden memnun ise ancak&gt; 10 saniye süreyle hareketsizlik sergilerse, keşif sonu tamamlanmış sayılacaktır. </li><li> Yeni nesnel tanımayı, romanı tanıdık nesnelere keşfetmek için harcanan zamanı kıyaslayarak değerlendirin. Literatürde yaygın olarak üç yöntem bildirilmiştir. <ol><li> Tekrarlanan bir ölçüm testi kullanarak yeni ve tanıdık nesneleri keşfetmek için harcanan zamanı analiz edin. Bu yöntem, genotip ve / veya tedavi, toplam arama süresini etkilemediğinde en iyi şekilde kullanılır. </li><li> Yenilik tercihini aşağıdaki denklemi kullanarak hesaplayın: <img alt="Denklem 3" src="/files/ftp_upload/55523/55523eq3.jpg" /> NOT: Bu, nesneleri keşfetmek için toplam zamana göre yeni nesne keşfetmek için harcanan zamanın yüzdesini sağlar. Değerler% 0&#39;dan (yeni nesne keşfi yok)% 100&#39;e değişir (yalnızca roman obJect),% 50 değeri, yeni ve tanıdık nesneleri keşfetmek için harcanan süreyi gösterir. </li><li> Aşağıdaki denklemi kullanarak ayırma endeksini 11 hesaplayın: <img alt="Denklem 4" src="/files/ftp_upload/55523/55523eq4.jpg" /> NOT: Bu, nesneleri keşfetmek için harcanan toplam süreye kıyasla yeni ve tanıdık nesneleri keşfetmek için harcanan zaman farkını ortaya çıkarmaktadır. Değerler -1 (yalnızca tanıdık nesnenin araştırılması) ile +1 arasında değişir (yalnızca yeni nesnenin araştırılması, 0 değeri, yeni ve tanıdık nesneleri keşfetmek için harcanan zamana eşit olduğunu gösterir. </li></ol></li><li> Hiperdinamik hareket ya da diğer stereotipler nedeniyle test oturumuna katılmayan hayvanlardan dikkatle çıkın 11 . NOT: Çıkarma için kullanılan kriterler objektif olmalı ve fare modeli için önceden belirlenmelidir ( yani , toplam arama süresi için &lt;5 . yüzdelik ve&gt; 100 ortalamaTest döngüsü sırasında dönüş açısı veya miyoklonik köşe atlaması sergileyen&gt; 50. yüzdelik süre). </li></ol></li></ol> 5. Limb Clapping&#39;li Farelerde Kortikospinal Fonksiyonun Değerlendirilmesi 14 <ol><li> Video, tüm oturumu belgeliyor. Videoyu taşınabilir bir el tipi cihazla ( ör . Akıllı telefon veya eşdeğeri) kaydedin. NOT: Güç analizleri, grup başına 10-15 farenin bir numunenin bir β ≤0.2 için gerekli olduğunu göstermektedir. </li><li> Ev kafesini raftan çıkarın ve masanın üzerine yerleştirin. Bir sonraki adımdan önce videoda hayvanın kimliğini belgeleyin. </li><li> Fareyi kafesinden hafifçe çıkarın ve 5-10 saniye kuyrukta bekletin. Video askıya alınırken hayvanın arka ve önlerini kaydetmelidir. </li><li> En az 5 saniyelik videoyu çektikten sonra fareyi evdeki kafese geri yerleştirin ve kafesi rafa geri getirin. </li><li> Masayı temizle. Adım 5.2&#39;den tüm fareler recorde oluncaya kadar tekrarlayın<html> d. </li><li> 0-4 arası bir skala ile kuyrukları ile askıya alınmış farelerin videolarından tutunarak puanlama ekseni (skor tarifi için Tablo 1&#39;e bakınız). Askıya alınan farelerin videolarını inceleyin ve ardından aşağıdaki ölçütlere dayalı olarak bir puan atayın. <ol><li> Bağlamayan bacak yok. Normal kaçış uzantısı. Bir arka ekstremite eksik gösterim ve mobilite kaybı sergiler. Parmak uçları normal sergilemektedir. </li><li> Her iki arka ekstremitede eksik görüntü ve mobilite kaybı vardır. Parmak uçları normal sergilemektedir. </li><li> Her iki arka bacaklar kıvrımlı ayak parmakları ve hareketsizlikle örtüşür. </li><li> Ayak başları ve arka ekstremiteler birbirine tutunur ve çaprazlanmış, kıvrımlı ayak parmakları ve hareketsizlik gösterir. </li></ol></li><li> Bütün fareler 2 bağımsız araştırmacı tarafından skorlanmıştır. 2 puanın 1 puandan fazla fark ettiği herhangi bir fare yeniden canlandırılır. <ol><li> Farklı olan puanlar ortalamalı. </li></ol></li></ol>P_upload / 55523 / 55523table1.jpg &quot;/&gt; Tablo 1: Koltukaltı Kelepçe Puanlarının Tanımı.

<ol>
	<li>Elder, G. A., Gama Sosa, M. A., De Gasperi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mouse+models+of+Alzheimer's+disease.">Transgenic mouse models of Alzheimer's disease.</a> Mt Sinai J Med. 77 (1), 69-81 (2010).</li><li>Onos, K. D., Sukoff Rizzo, S. J., Howell, G. R., Sasner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+more+predictive+genetic+mouse+models+of+Alzheimer's+disease.">Toward more predictive genetic mouse models of Alzheimer's disease.</a> Brain Res Bull. 122, 1-11 (2016).</li><li>Webster, S. J., Bachstetter, A. D., Nelson, P. T., Schmitt, F. A., Van Eldik, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mice+to+model+Alzheimer's+dementia:+an+overview+of+the+clinical+disease+and+the+preclinical+behavioral+changes+in+10+mouse+models.">Using mice to model Alzheimer's dementia: an overview of the clinical disease and the preclinical behavioral changes in 10 mouse models.</a> Front Genet. 5, 88 (2014).</li><li>Rodgers, S. P., Born, H. A., Das, P., Jankowsky, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+APP+expression+during+postnatal+development+causes+persistent+locomotor+hyperactivity+in+the+adult.">Transgenic APP expression during postnatal development causes persistent locomotor hyperactivity in the adult.</a> Mol Neurodegener. 7, 28 (2012).</li><li>Hsiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlative+memory+deficits,+Abeta+elevation,+and+amyloid+plaques+in+transgenic+mice.">Correlative memory deficits, Abeta elevation, and amyloid plaques in transgenic mice.</a> Science. 274 (5284), 99-102 (1996).</li><li>Santacruz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tau+suppression+in+a+neurodegenerative+mouse+model+improves+memory+function.">Tau suppression in a neurodegenerative mouse model improves memory function.</a> Science. 309 (5733), 476-481 (2005).</li><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's wrong with my mouse? : behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice. 2nd edn. , (2007).</li><li>Hughes, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+spontaneous+alternation+behavior+(SAB)+as+a+test+of+retention+in+pharmacological+investigations+of+memory.">The value of spontaneous alternation behavior (SAB) as a test of retention in pharmacological investigations of memory.</a> Neurosci Biobehav Rev. 28 (5), 497-505 (2004).</li><li>Rutala, W. A., Weber, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guideline+for+disinfection+and+sterilization+in+healthcare+facilities.">Guideline for disinfection and sterilization in healthcare facilities.</a> Centers for Disease Control. , (2008).</li><li>Wes, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tau+overexpression+impacts+a+neuroinflammation+gene+expression+network+perturbed+in+Alzheimer's+disease.">Tau overexpression impacts a neuroinflammation gene expression network perturbed in Alzheimer's disease.</a> PLoS One. 9 (8), 106050 (2014).</li><li>Ennaceur, A., Delacour, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats.+1:+Behavioral+data.">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data.</a> Behav Brain Res. 31 (1), 47-59 (1988).</li><li>Taglialatela, G., Hogan, D., Zhang, W. R., Dineley, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermediate-+and+long-term+recognition+memory+deficits+in+Tg2576+mice+are+reversed+with+acute+calcineurin+inhibition.">Intermediate- and long-term recognition memory deficits in Tg2576 mice are reversed with acute calcineurin inhibition.</a> Behav Brain Res. 200 (1), 95-99 (2009).</li><li>DeVito, L. M., Eichenbaum, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+contributions+of+the+hippocampus+and+medial+prefrontal+cortex+to+the+"what-where-when"+components+of+episodic-like+memory+in+mice.">Distinct contributions of the hippocampus and medial prefrontal cortex to the "what-where-when" components of episodic-like memory in mice.</a> Behav Brain Res. 215 (2), 318-325 (2010).</li><li>Lalonde, R., Strazielle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+regions+and+genes+affecting+limb-clasping+responses.">Brain regions and genes affecting limb-clasping responses.</a> Brain Res Rev. 67 (1-2), 252-259 (2011).</li><li>King, D. L., Arendash, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+characterization+of+the+Tg2576+transgenic+model+of+Alzheimer's+disease+through+19+months.">Behavioral characterization of the Tg2576 transgenic model of Alzheimer's disease through 19 months.</a> Physiol Behav. 75 (5), 627-642 (2002).</li><li>Lalonde, R., Lewis, T. L., Strazielle, C., Kim, H., Fukuchi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+the+betaAPP695SWE+mutation:+effects+on+exploratory+activity,+anxiety,+and+motor+coordination.">Transgenic mice expressing the betaAPP695SWE mutation: effects on exploratory activity, anxiety, and motor coordination.</a> Brain Res. 977 (1), 38-45 (2003).</li><li>Lewis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibrillary+tangles,+amyotrophy+and+progressive+motor+disturbance+in+mice+expressing+mutant+(P301L)+tau+protein.">Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant (P301L) tau protein.</a> Nat Genet. 25 (4), 402-405 (2000).</li><li>Spittaels, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prominent+axonopathy+in+the+brain+and+spinal+cord+of+transgenic+mice+overexpressing+four-repeat+human+tau+protein.">Prominent axonopathy in the brain and spinal cord of transgenic mice overexpressing four-repeat human tau protein.</a> Am J Pathol. 155 (6), 2153-2165 (1999).</li><li>Terwel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changed+conformation+of+mutant+Tau-P301L+underlies+the+moribund+tauopathy,+absent+in+progressive,+nonlethal+axonopathy+of+Tau-4R/2N+transgenic+mice.">Changed conformation of mutant Tau-P301L underlies the moribund tauopathy, absent in progressive, nonlethal axonopathy of Tau-4R/2N transgenic mice.</a> J Biol Chem. 280 (5), 3963-3973 (2005).</li><li>Merrow, M., Spoelstra, K., Roenneberg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+cycle:+daily+rhythms+from+behaviour+to+genes.">The circadian cycle: daily rhythms from behaviour to genes.</a> EMBO Rep. 6 (10), 930-935 (2005).</li><li>Smarr, B. L., Jennings, K. J., Driscoll, J. R., Kriegsfeld, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+time+to+remember:+the+role+of+circadian+clocks+in+learning+and+memory.">A time to remember: the role of circadian clocks in learning and memory.</a> Behav Neurosci. 128 (3), 283-303 (2014).</li><li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+biology+of+memory+storage:+a+dialogue+between+genes+and+synapses.">The molecular biology of memory storage: a dialogue between genes and synapses.</a> Science. 294 (5544), 1030-1038 (2001).</li><li>Stough, S., Shobe, J. L., Carew, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermediate-term+processes+in+memory+formation.">Intermediate-term processes in memory formation.</a> Curr Opin Neurobiol. 16 (6), 672-678 (2006).</li><li>Stevens, L. M., Brown, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reference+and+working+memory+deficits+in+the+3xTg-AD+mouse+between+2+and+15-months+of+age:+a+cross-sectional+study.">Reference and working memory deficits in the 3xTg-AD mouse between 2 and 15-months of age: a cross-sectional study.</a> Behav Brain Res. 278, 496-505 (2015).</li><li>Yue, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+estrogen+deficiency+accelerates+Abeta+plaque+formation+in+an+Alzheimer's+disease+animal+model.">Brain estrogen deficiency accelerates Abeta plaque formation in an Alzheimer's disease animal model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (52), 19198-19203 (2005).</li><li>McAllister, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+targeting+aromatase+in+male+amyloid+precursor+protein+transgenic+mice+down-regulates+beta-secretase+(BACE1)+and+prevents+Alzheimer-like+pathology+and+cognitive+impairment.">Genetic targeting aromatase in male amyloid precursor protein transgenic mice down-regulates beta-secretase (BACE1) and prevents Alzheimer-like pathology and cognitive impairment.</a> J Neurosci. 30 (21), 7326-7334 (2010).</li><li>Blaney, C. E., Gunn, R. K., Stover, K. R., Brown, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+genotype+influences+behavioral+development+of+3xTg-AD+mouse+pups.">Maternal genotype influences behavioral development of 3xTg-AD mouse pups.</a> Behav Brain Res. , 40-48 (2013).</li></ol>

JM Levenson, Proclara Biosciences, Inc. tarafından istihdam edilmektedir. C. Miedel, J. Patton, A. Miedel ve E. Miedel, Hilltop Laboratuar Hayvanları tarafından istihdam edilmektedir.

Tekniğin Mevcut Metotlar Üzerindeki Önemi Bu prosedür, β-amiloidoz ve tauopatinin transgenik fare modellerinde bileşiklerin in vivo aktivitesi için tarama yapmak üzere tasarlanmıştır. Burada kullanılan kademeli yaklaşım, AD 3&#39;le alakalı bilişsel alanlardaki etkili bileşiklerin saptanmasını sağlar. Ayrıca, burada ayrıntılı olarak açıklanan yaklaşım, açıkça tanımlanmış bitiş noktalarına, kolayca uygulanabilir kalite kontrol kontrollerine, daha ılımlı bir çıktı formatında yürütülebilecek ve araştırmacının az müdahalesine ihtiyaç duyan davranış testlerini kullanmaktadır. Bu özellikler, bir ilaç keşfi ortamında davranışsal profillemeyi destekleyecek kadar sağlam olan (2 ≤ f ≤6) düşük intra-ve inter-assay varyansı ve etki boyutları ile sonuçlanan, hayvanlarda ve kohortlar arasında iyi tekrarlanabilirlik sergileyen testlerle sonuçlanır. Pr içinde Kritik Adımlarotocol AD ilaç keşfi için kullanılan birçok fare modeli, artmış kaygı ve saldırganlıkla tutarlı davranış sergilemektedir. Bu, burada açıklanan davranış testlerinden herhangi birini yerine getirmek için taşıma alışkanlığını zorunlu kılar. Bu testler, hareketsiz davranışlara dayandığından, hiperaktivite ve endişe verici veya saldırgan bir fareden dolayı araştırmacı tarafından kaba bir şekilde kullanılması, performansı önemli ölçüde etkileyebilir. Yüksek endişe, görevin başarısız olmasına ve testin genel gücünün düşmesine neden olabilir. Dahası, arenadaki ışık seviyeleri, her test için gereken spontan hareketliliğin kolaylaştırılması için gereklidir. Parlak ışık kemirgenlerdeki endişeyi artırmaya ve lokomotif hareketleri bastırmaya eğilimli olduğundan, ortam ışığı seviyelerini arena&#39;da 30-35 lux&#39;e ayarlamaya özen gösterilmelidir. Prosedürün bir diğer kritik yönü de, bir hayvanın görevleri yerine getirebilme yeteneğini etkileyecek güçlü çevresel ipuçlarını en aza indirgemektir. TemizlenmesiArena ve nesneler arasındaki nesneler, fareler çevreye özgü yeni kokulara çekildiğinden dolayı önemlidir. Arenayı ve nesneleri iyice temizlemekteki başarısızlık, farenin kendiliğinden hareket etmesini ve gerçek kognitif performansı maskeleyerek sonuçlanmasına neden olabilir. Araştırmacılar, bu prosedürleri gerçekleştirirken kişisel hijyen ürünlerini ve kolonyaları / parfümleri en aza indirgemelidir. Son olarak, kemiriciler, öğrenme ve hafıza da dahil olmak üzere birçok belirgin davranışlarda, günışığı ve sirkadiyen değişiklikler sergilemektedir21. Bu nedenle, bazal davranışlarda ve bilişsel performansta günlük ritimleri nedeniyle varyansı en aza indirgemek için tüm testler kohortlar ve çalışmalar boyunca günün aynı saatinde yapılmalıdır. Ayrıca, özellikle yeni nesne tanıma ile ilgili olarak, numune ile test aşaması arasındaki gecikme aralığı ve nesnelerin çevreye yerleştirilmesi ve yerleştirilmesi kritik parametrelerdir. Bellek 3 farklı biçimde bulunur: kısa süreli memOry (STM), ara terim belleği (ITM) ve uzun süreli bellek (LTM) 22 , 23 . Örnek ve test aşamaları arasındaki süreyi dakikalar (STM) ila saat (ITM) veya günler (LTM) arasında değiştirmek, prosedür 12 tarafından test edilen bellek türünü değiştirecektir. Ayrıca, yeni nesne tanıma testini çalıştırmadan önce, birçok nesne, keşifte potansiyel önyargılar için farelerin bir test kohortunda taranmalıdır. Test kohortuna aşırı çekici veya itici olan bir nesne, yeni nesne tanımayı değerlendirirken kullanılamaz. İdeal olarak, testte kullanılacak tüm nesneler, bir arenaya yerleştirildiğinde, naif bir fareden çıkarılma zamanlarını ortaya çıkaracaktır. Nesnelerin yetersiz testi ve optimizasyonu yeni nesne tanıma gücünü önemli ölçüde azaltabilir. Değişiklikler ve Sorun Giderme Artırabilir çeşitli faktörler vardır.Burada açıklanan bilişsel testlerde görünür değişkenlik. Birçok fare AD modelinde, hiperdinamik lokomotif 3 , bilişsel son nokta olarak ölçülen davranışları maskeleyebilir veya değiştirebilir. Dahası, cinsiyet 24 , 25 , 26 ve hatta maternal genotip 27&#39;nin AD fare modellerinde nöropatoloji ve bilişsel fenotiplerin gelişimini ve ilerlemesini etkileyebileceğine dair artan kanıtlar vardır. Beklenmedik değişkenlik veya davranışsal bir görevi yerine getirmede başarısızlık, bu etkenlerden herhangi birine bağlı olabilir. Belirli bir davranış testini ilk uygularken, sonuçlar daima cinsiyet, yaş ve varsa annenin genotipine göre tabakalandırılmalıdır. Ayrıca, hiperaktivitenin veya diğer kalıplaşmış davranışların bilişsel son noktaların nicelenmesine müdahale etmemesini sağlamak için bu prosedürde belirtilen kalite kontrolleri daima yapılmalıdır. envDemirbaş ayrıca kemirgenlerin kendiliğinden keşfedici davranışını da etkileyebilir. Araştırmacılar tarafından saptanamayan kokular veya sesler, spontan davranışlara dayanan kognitif testlerin sonuçlarını çarpıtarak fareleri çekebilir veya itebilir. Başlangıçta Y-labirentini veya yeni nesne tanımayı kurarken, nesne ve / veya çevreyi araştırmada herhangi bir konumsal önyargı bulunmadığından emin olmak için kontrol tedbirlerinin uygulanması şarttır. Konumsal önyargılar gözlemlenirse, araştırmacılar çevreyi iyice incelemek ve aydınlatma, arenada yerleştirme, test odasının tesis içindeki diğer odalara ( yani , yüksek trafik alanı veya ağır teçhizata yakın değil) göre arena temizleme prosedürlerini ayarlamaları potansiyel olarak ayarlamalıdır. Test ortamına alışmak, yeni nesne tanıma testinde en iyi performansa ulaşmanın anahtarıdır. Örneğin, toplam arama sürelerinin düşük olması yetersiz alışkanlığa bağlı olabilir. Proc için bir alternatif olarakTaşıma (Bölüm 2) ve arena (Bölüm 4.2) alışkanlığı, kullanıma alışkanlık ve test ortamı için burada ana hatlarıyla belirtilen etütler, ard arda iki gün boyunca günde 3, 5 dakikalık seanslar halinde yapılabilir. Teknik Sınırlamalar Herhangi bir prosedürde olduğu gibi, bu davranış testlerinin de sınırlamaları vardır. Bu işlemler, çeşitli korteks bölgelerinin ve hipokampüsün fonksiyonlarını test ettikleri için uygulanmıştır. Fare modeli bu testlerle araştırılan beyin bölgelerinde işlevsel açıklar göstermezse, bu teknikler kullanışlı olmayacaktır. Dahası, kısa süreli belleği araştıran bilişsel testleri seçtik. Klinik öncesi değerlendirme altındaki bileşiğin etki mekanizmasının kısa süreli hafızayı etkilemesi beklenmiyorsa, bu prosedürler buna göre modifiye edilmelidir ( yani , uzun süreli hafızayı test etmek için numune test aşaması aralığını arttırmak). Son olarak, bu testler motivasyonsuz davranışlar kullanır. Bu nedenle, eğer bir fare modeli atılmışsaAşırı hiperaktif veya çevrenin araştırılmasını engelleyen kalıplaşmış davranışlar sergiliyorsa, bu işlemler en uygun olmayabilir. Alternatif olarak, Tg2576 veya diğer β-amiloidoz fare modelleri için korku koşullandırma, veya rTg4510 için uzaysal su labirenti veya tauopati 3&#39;ün diğer fare modelleri için kullanılabilir. Gelecekteki Uygulamalar Bu prosedürler laboratuarda başarıyla benimsedikten sonra, ilave bilişsel ve fonksiyonel motor önlemleri değerlendirmek için çeşitli değişiklikler veya uzatmalar yapılabilir. Örneğin, bir fare nesnenin yerleştirilmesinde bir değişikliği tanıyıp tanımayacağını belirlemek için yeni nesne tanıma görevini değiştirme 13 . Alternatif olarak, nesneler kullanmak yerine, başka fareler kullanabilir ve sosyal tanıma testi uygulayabilir. Ekstremite kavrama ve motor fonksiyonu ile ilgili olarak, bu testi tel asması ve / veya kavrama gücü testleriyle tamamlayabilir. TestlerBu yöntemde ayrıntılı olarak AD için translasyonel fare modellerinde in vivo etkinliğe sahip olan bileşiklerin taranması için sağlam bir baz oluşturur ve belirli bir fare modelini en iyi araştırmak veya benzersiz bir ilaç keşfi programının ihtiyaçlarını karşılamak için pek çok yönde uyarlanabilir veya modifiye edilebilir .

Alzheimer hastalığı (AD), dünya çapında yaklaşık 44 milyon kişiyi etkileyen zayıflatıcı bilişsel gerileme ile sonuçlanan progressif nörodejeneratif bir hastalıktır. Şu anda hastalık düzeltici olan bu hastalık için yeni terapötik stratejilerin klinik öncesi keşfi için acil ihtiyaç olduğunu vurgulayan AD için mevcut herhangi bir tedavi mevcut değildir. Bilişsel alanlarda hastalarda bozulma açıkları da dahil olmak üzere, AD 1 , 2&#39;nin çeşitli yönlerini tekrarlayan bir dizi farklı transgenik fare modeli oluşturulmuştur. Bu fare modelleri , in vivo etkin taramayı kolaylaştırmak için yararlı bir araçtır. Bir bileşiğin potansiyel in vivo etkinlik açısından değerlendirilmesi sırasında, uygun bilişsel alanlarda etkinliklerin tarandığı ve ayrıca, uygun bilişsel alanlarda etkinliklerin gösterildiği aşamalardan oluşan bir yaklaşım uygulanmalıdır;Ssess biliş. Birçok transjenik fare AD modeli hiperaktivite ve belirli bir bilişsel testi etkileyebilecek ve uyuşturucu taramasında kullanımını yasaklayan diğer davranışları sergilemektedir4. Üstelik, bir uyuşturucu tarama ortamında uygulanacak bir yaklaşım için, kullanılan belirli testler, en azından ılımlı bir verim sağlamalı, açıkça tanımlanmış son noktaları olmalıdır ve araştırmacılar tarafından en az müdahale gerektiren bir prosedür olmalıdır. Bu kriterleri kullanarak, tekrarlanabilirlik, düşük intra-ve inter-assay varyansı ve bileşik tarama için gerekli efekt boyutlarını gösteren davranışsal ekranlar uygulanabilir. Ayrıntılı burada, β-amiloidoz ve tauopati 5,6&#39;nın transjenik fare modellerinde mevcut kognitif ve motor fenotipleri azaltmada etkili bileşiklerin taranması için kullandığımız yöntemlerdir. Tanımlanan yöntemler, l&#39;de bildirilen yaygın olarak kullanılan davranışsal paradigmadan uyarlanmaktadır.Iterasyon 7 , AD için alakalı transgenik fare modellerinde kullanılabilmesi için belirli optimizasyonlar ve kalite kontrol kontrolleri ile. Bu protokol, çeşitli veri toplama ve analiz sistemleri ile kullanılabilir ve araştırmacının ilgili yazılımla ilgili bir çalışma bilgisine sahip olduğunu varsayar.

<table><tbody><tr><td>Topscan Lite-High Throughput</td><td>Cleversys</td><td></td><td>Automated behavioral analysis. Includes cameras and video acquisition system, laptop.</td></tr><tr><td>ObjectScan</td><td>Cleversys</td><td></td><td>Software module for accurate object exploration quantification</td></tr><tr><td>Open field for mouse</td><td>Cleversys</td><td>CSI-OF-M</td><td>Arena for novel object recognition</td></tr><tr><td>Y-maze for mouse</td><td>Custom</td><td></td><td>Arms: 30 cm long, 10 cm wide, 20 cm high walls, placed 120 deg apart.</td></tr><tr><td>Camera mount for open field</td><td>Custom</td><td>Custom</td><td>76 cm tall, 115 cm wide, cameras mounted @ 30 cm in from either side.&amp;nbsp; Two mounts, each covers two boxes.</td></tr><tr><td>Camera mount for Y-maze</td><td>Custom</td><td>Custom</td><td>76 cm tall, 115 cm wide, cameras mounted @ 30cm in from either side.&amp;nbsp; One mount covers two mazes.</td></tr><tr><td>Marbles</td><td>Inperial Toy</td><td>8565</td><td>Standard (15.5 mm Dia) glass marbles.</td></tr><tr><td>Dice</td><td>Cardinal Industries</td><td>770</td><td>Standard (0.650 inch) white dice with black dots.</td></tr><tr><td>LOCTITE Fun-Tak</td><td>Henkel</td><td>B018A3AG0W</td><td>Standard blue sticky tak</td></tr><tr><td>EtOH</td><td>Nexeo Solutions</td><td>82452</td><td>100% Ethanol Diluted to 70% using distilled Water</td></tr><tr><td>dH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Tulpenhocken Spring Water Co.</td><td>-</td><td>PA D.E.P. #31, NJ D.O.H. #0049, NYSHD Cert. #320</td></tr><tr><td>Paper towels</td><td>Procter &amp;amp; Gamble</td><td>B019DM86LA</td><td>Bounty, White</td></tr><tr><td>Handheld video camera</td><td>Apple, Inc.</td><td>MKV92LL/A</td><td>Acquisition of Limb clasping video, Iphone 6S Plus (or functional equivalent).</td></tr><tr><td>Gloves</td><td>SafePOINT, L.L.C.</td><td>GL640-2</td><td>Standard, Powder free Latex Gloves, Medium</td></tr><tr><td>Light meter</td><td>Dr. Meter</td><td>LX1330B</td><td>Lighting @ the bottom of Open Field= 35 LUX, Lighting @ bottom of Y-Maze= 32 LUX</td></tr><tr><td>Bleach germicidal wipes</td><td>Clorox</td><td></td><td>Sterilization of equipment during &amp;amp; after use</td></tr></tbody></table>

assessment of spontaneous alternation, novel object recognition and limb clasping in transgenic mouse models of amyloid-&#946; and tau neuropathology

Burada β-amiloidoz ve tauopatinin transgenik fare modellerinde bilişsel ve fonksiyonel motor davranışlarda in vivo etkinlik gösteren bileşiklerin taranması için kullanılabilecek aşamalı, davranışsal test yaklaşımı anlatılmaktadır. Paradigma, bir Y-labirentindeki spontan değişim, yeni nesne tanıma ve kol uzantısı için testler içerir. Bu testler seçildi: 1) bilişsel veya motor alanların işlevini ve insan hastalık durumu ile ilgili korelasyon sinirsel devresini sorgularlar, 2) belirgin son noktaları vardır, 3) kolayca uygulanabilir kalite kontrol kontrollerine sahiptirler, 4) Ilımlı bir çıktı biçimi ve 5) araştırmacı tarafından küçük müdahale gerektirir. Bu yöntemler, bileşikleri kısa süreli ve çalışma belleği görevlerinde etkinlik açısından taramak isteyen araştırmacılar veya Alzheimer hastalığı fare modelleriyle ilişkili işlevsel motor davranışları için tasarlanmıştır. Burada açıklanan yöntemler, engHipokampus ve çeşitli korteks alanları içeren bir dizi farklı beyin bölgesi yaşı. Tek bir beyin bölgesi tarafından aracılık edilen biliş özel olarak değerlendiren kognitif testleri arayan araştırmacılar, diğer davranış testlerini tamamlamak için bu teknikleri kullanabilir.

Yaşlı Tg2576 fareler, burada ayrıntılı olarak anlatılan yöntemler kullanılarak çoğaltılabilen bir Y-labirenti 15 , 16&#39;da yapılan spontan değişimlerde sağlam açıklar sergilemektedir ( Şekil 1A ). Bu farelerde artmış kol girişi eğilimi gözlenirken ( Şekil 1B ), bu farede gözlemlenen hiperaktivite spontan değişim oranını etkilemedi ( Şekil 1C ). Buna karşılık, yaşlı rTg4510 fareleri, bir Y-labirente yerleştirildiğinde artmış spontan değişim sergilemektedir ( Şekil 1D ). Bu aşırı aşırı hareketlilik ( Şekil 1E ) ve stereotipi 10&#39;dur , bu da spontan değişimin ölçülmesine büyük ölçüde müdahale eder ( Şekil 1F ). Başlangıçta bu görevdeki fareleri değerlendirirken, kol girişlerinin ve / veya seyahat edilen mesafeninSpontan değişme oranı ile anlamlı korelasyon göstermektedir. Yeni nesne tanımanın değerlendirilmesinden önce fareler, testin yapılacağı arenaya alışır. Alışkanlık sırasında, hiperaktivite ( Şekil 2A ) ve fare modeliyle alakalı diğer kalıplaşmış davranışlar değerlendirilebilir. Örneklem aşamasında, keşif davranışlarında önemli yanlılıklar gösteren farelerin daha sonraki değerlendirmeden çıkarılabilmesi için her bir nesnenin araştırılmasının ayrı ayrı ölçülmesi önemlidir ( Şekil 2B , açık daireler). Roman nesne tanıma, tanıdık ve yeni bir nesnenin araştırılmasıyla değerlendirilir ve genellikle üç farklı şekilde analiz edilir. Toplam keşif süresi genotipler ve / veya tedavi grupları arasında kıyaslanabilirse, o zaman, her cismi araştıran ham zaman ve uygun tekrarlanan ölçüm testleri yeni nesne r&#39;de farklılıklar olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir( Şekil 2C ). Belirli bir fare suşu toplam keşif süresinde farklılıklar gösteriyorsa, yeni nesne tanıma yenilik tercihi ( Şekil 2D ) veya ayrımcılık indeksi ( Şekil 2E ) kullanılarak değerlendirilebilir. Koltuk altı kelepçesi, kortikospinal fonksiyondaki eksiklikleri ölçen, fonksiyonel bir motor testidir. Bilişsel bir önlem değildir, Limb kavraması, birkaç transjenik tau fare modelinde 6 , 17 , 18 , 19 gözlenir ve geç AD AD hastalarında gözlemlenen işlevsel motor eksikliklerin bir kısmını tekrarlar. Farelerin kuyruk süspansiyonu bir kaçış tepkisi ortaya çıkarır ( Şekil 3A , &quot;0&quot;). Arka ekstremiteleri oynatma ve ayak parmaklarını uzatma yeteneklerindeki açıklar, şiddetine göre 0-4 arası bir skorla puanlanır ( Şekil 3A). Burada özetlenen prosedürü kullanarak, rTg4510 farelerinde önemli ekstremite klapajı gözlemleyebilir ( Şekil 3B ). <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55523/55523fig1.jpg" /> Şekil 1: Y-labirentindeki Spontan Değişim. ( A ) Bir Y-labirente yerleştirildiğinde, fareler her kolun her 3 kol girişi için yalnızca bir kez araştırıldığı bir keşif deseniyle sonuçlanan bir kayma vardiya arama stratejisi benimserler. Yaşlı Tg2576 fareler spontan değişimde önemli bir eksiklik sergilerler. Bu metoda özetlenen prosedürleri kullanarak tescilli bir bileşik ile muamele ettikten sonra spontan değişimin önemli bir restorasyonu gözlemlendi. Veriler 1-yönlü ANOVA kullanılarak analiz edildi ve Dunnett testi kullanılarak Tg-PBS&#39;ye post-hoc karşılaştırmaları yapıldı. ** p &lt;0.01. Hata çubukları SEM&#39;i işaret eder. ( B ) Kol girişlerinin sayısı herhangi birinde önemli ölçüde farklı değildiBu deneyde izlenen grupların% Veriler 1-yönlü ANOVA testi kullanılarak analiz edilmiştir. Hata çubukları SEM&#39;i işaret eder. ( C ) Spontan değişim ile yapılan kol girişi sayısı arasında herhangi bir korelasyon bulunmamakta olup, spontan lokomotor aktivitedeki farklılıkların spontan değişimin kantifikasyonunu etkilemediğini göstermektedir. Korelasyon testi, Pearson korelasyon analizi kullanılarak yapıldı. ( D ) Y-labirente yerleştirildiğinde, rTg4510 farelerinin (6 ay), littermat WT farelerine göre belirgin şekilde daha fazla spontan alternasyon sergilediği görülür. Veriler 1-yönlü ANOVA ile analiz edildi ve Dunnett testi kullanılarak Tg-PBS&#39;ye post-hoc karşılaştırmaları yapıldı. ** p &lt;0.01. Hata çubukları SEM&#39;i işaret eder. ( E ) rTg4510 fareleri, aşırı hiperdinamik hareketlerinden dolayı önemli derecede daha fazla kol girişi yapmıştır. Veriler 1-yönlü ANOVA ile analiz edildi ve Dunnett testi kullanılarak Tg-PBS&#39;ye post-hoc karşılaştırmaları yapıldı. *** p &lt;0.001. Hata çubukları SE&#39;yi gösterirM. ( F ) Spontan değişim davranışı, kol girişi ile anlamlı korelasyon gösterdi; bu, hiperdinamik lokomotor fenotipi gerçek spontan değişimi gizlediğini gösterdi. Korelasyon testi, Pearson korelasyon analizi (r = 0.7, p &lt;0.0001) kullanılarak yapıldı. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55523/55523fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55523/55523fig2.jpg" /> Şekil 2: Yeni Nesne Tanıma. ( A ) Arena alışkanlığı, belirli bir fare modeli ile ilgili spontan hareket ve diğer kalıplaşmış davranışların ölçülmesine izin verir. Burada, yaşlı Tg2576 fareler (22 ay), littermate WT farelerine göre çok daha spontan hareket gösterirler. Veriler 1-yönlü ANOVA ile analiz edildi ve Tg-Veh&#39;a post-hoc karşılaştırmaları Dunnett &#39;S testi. ** p &lt;0.01. Hata çubukları SEM&#39;i işaret eder. ( B ) Örnek aşamasında, iki özdeş nesnenin araştırılması ayrı olarak izlenmiştir. İki nesneden birinin (açık daireler) araştırılması yönünde büyük önyargılar sergileyen fareler test aşamasından çıkarılmıştır. ( C - E ) Roman nesne tanıma, yeni ve tanıdık bir nesnenin araştırılmasının ölçülmesiyle değerlendirildi. Roman nesne tanıma, ( C ) ham keşif zamanı, ( D ) yenilik tercihi veya ( E ) ayrımcılık indeksi kullanılarak değerlendirildi. Panel C&#39;deki veriler iki yönlü bir ANOVA kullanılarak tekrarlanan ölçümlerle analiz edildi ve Sidak testi kullanılarak çift karşılaştırmaları yapıldı. Paneller DE&#39;deki veriler bir 1-yönlü ANOVA ile analiz edildi ve Dunnett testi kullanılarak Tg-Veh&#39;a post-hoc karşılaştırmaları yapıldı. * P &lt;0.05, ** p &lt;0.01. Hata çubukları SEM&#39;i işaret eder. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55523/55523fig2large.jpg" target="_blank">lütfen tıklayın</a>Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayın. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/55523/55523fig3.jpg" /> Şekil 3: Koltuk altı kelepçeleri. ( A ) Tablo 1&#39;de anlatıldığı gibi çeşitli derecelerde uzuv kırpma gösteren farelerin temsili görüntüleri. ( B ) rTg4510 fareleri (6 ay), littermat WT farelerine kıyasla, bu yöntemleri kullanarak skorlamada önemli kol uzantısı sergilemektedir. Veriler bir 1-yönlü ANOVA kullanılarak analiz edildi ve Dunnett testi kullanılarak Tg-PBS&#39;ye post-hoc karşılaştırmaları yapıldı. *** p &lt;0.001, **** p &lt;0.0001. Hata çubukları SEM&#39;i işaret eder. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55523/55523fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-Î² and Tau Neuropathology at JoVE.co

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&#946; and Tau Neuropathology

Burada, β-amiloidoz ve tauopatinin transgenik fare modellerinde bilişsel ve fonksiyonel motor davranışlarda in vivo etkinlik gösteren bileşiklerin taranması için kullanılabilen aşamalı, davranışsal tarama yaklaşımı anlatılmaktadır. Bu yöntemler, bileşikleri kısa süreli ve hafızadaki işlerde etkinlik açısından taramak için optimize edilmiştir.

Amiloid-β ve Tau Nöropatolojisinin Transgenik Fare Modellerinde Spontan Dalgalanmanın Değerlendirilmesi, Yeni Nesne Tanıma ve Limb Klapması

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional ...

assessment-spontaneous-alternation-novel-object-recognition-limb

Research

JoVE Journal

Medicine

26.5K Görüntüleme.  Hilltop Laboratory Animals.  Burada, β-amiloidoz ve tauopatinin transgenik fare modellerinde bilişsel ve fonksiyonel motor davranışlarda in vivo etkinlik gösteren bileşiklerin taranması için kullanılabilen aşamalı, davranışsal tarama yaklaşımı anlatılmaktadır. Bu yöntemler, bileşikleri kısa süreli ve hafızadaki işlerde etkinlik açısından taramak için optimize edilmiştir. 

Video: Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-β and Tau Neuropathology

Morris Water Maze Test: Optimization for Mouse Strain and Testing Environment

The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, including neurocognitive disorders such as Alzheimer&#8217;s disease. However, the background strain of the mouse model used can have a substantial effect on the observed behavioral phenotype, with some strains exhibiting superior learning ability relative to others. To ensure differences between transgene negative and transgene positive mice can be detected, identification of a training procedure sensitive to the background strain is essential. Failure to tailor the MWM protocol to the background strain of the mouse model may lead to under- or over- training, thereby masking group differences in probe trials. Here, a MWM protocol tailored for use with the F1 FVB/N x 129S6 background is described. This is a frequently used background strain to study the age-dependent effects of mutant P301L tau (rTg(TauP301L)4510 mice) on the memory deficits associated with Alzheimer&#8217;s disease. Also described is a strategy to re-optimize, as dictated by the particular testing environment utilized.

This manuscript describes a Morris water maze (MWM) protocol tailored for use with a commonly used mouse model of Alzheimer's disease. The MWM is widely used in transgenic mouse models. Implementation of a procedure sensitive to the background strain of the mouse model is essential for detecting group differences.

Morris Water Maze Testi: Fare Gerilme ve Test Ortamı için Optimizasyon

 The Morris water maze (MWM) is a commonly used task to assess hippocampal-dependent spatial learning and memory in transgenic mouse models of disease, ...

Davranış

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks of Alzheimer's disease. The central component of neuritic plaques is a small filamentous protein called amyloid &beta; protein (A&beta;)1, which is derived from sequential proteolytic cleavage of the beta-amyloid precursor protein (APP) by &beta;-secretase and &gamma;-secretase. The amyloid hypothesis entails that A&gamma;-containing plaques as the underlying toxic mechanism in AD pathology2. The postmortem analysis of the presence of neuritic plaque confirms the diagnosis of AD. To further our understanding of A&gamma; neurobiology in AD pathogenesis, various mouse strains expressing AD-related mutations in the human APP genes were generated. Depending on the severity of the disease, these mice will develop neuritic plaques at different ages. These mice serve as invaluable tools for studying the pathogenesis and drug development that could affect the APP processing pathway and neuritic plaque formation. In this protocol, we employ an immunohistochemical method for specific detection of neuritic plaques in AD model mice. We will specifically discuss the preparation from extracting the half brain, paraformaldehyde fixation, cryosectioning, and two methods to detect neurotic plaques in AD transgenic mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thiofalvin S staining method.

One of the pathological characteristics of AD is the formation of Amyloid &#x03B2; protein positive neuritic plaques. In this protocol we describe two methods to detect neuritic plaques in transgenic AD model mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thioflavin S staining method.

Nöritik plaklar Alzheimer Hastalığı Fare Modeli Algılama

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks ...

Nörobilim

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse 

Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease that is pathologically characterized by extracellular deposition of &#946;-amyloid peptide (A&#946;) and intraneuronal accumulation of hyperphosphorylated tau protein. Because cerebrospinal fluid (CSF) is in direct contact with the extracellular space of the brain, it provides a reflection of the biochemical changes in the brain in response to pathological processes. CSF from AD patients shows a decrease in the 42 amino-acid form of A&#946; (A&#946;42), and increases in total tau and hyperphosphorylated tau, though the mechanisms responsible for these changes are still not fully understood. Transgenic (Tg) mouse models of AD provide an excellent opportunity to investigate how and why A&#946; or tau levels in CSF change as the disease progresses. Here, we demonstrate a refined cisterna magna puncture technique for CSF sampling from the mouse. This extremely gentle sampling technique allows serial CSF samples to be obtained from the same mouse at 2-3 month intervals which greatly minimizes the confounding effect of between-mouse variability in A&#946; or tau levels, making it possible to detect subtle alterations over time. In combination with A&#946; and tau ELISA, this technique will be useful for studies designed to investigate the relationship between the levels of CSF A&#946;42 and tau, and their metabolism in the brain in AD mouse models. Studies in Tg mice could provide important validation as to the potential of CSF A&#946; or tau levels to be used as biological markers for monitoring disease progression, and to monitor the effect of therapeutic interventions. As the mice can be sacrificed and the brains can be examined for biochemical or histological changes, the mechanisms underlying the CSF changes can be better assessed. These data are likely to be informative for interpretation of human AD CSF changes.

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse

Transgenic (Tg) mouse models of AD provide an excellent opportunity to investigate how and why A&#946; or tau levels in CSF change as the disease progresses in human patients. Here, we demonstrate a refined cisterna magna puncture technique for serial CSF sampling from the mouse.

Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease that is pathologically characterized by extracellular deposition of &#946;-amyloid ...

Biyoloji

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process and may be a useful behavioral marker for early detection. Earlier detection in neurodegenerative disease is a major goal in the field because this is when neuroprotective therapies have the best potential to be effective. Therefore, in preclinical studies testing novel neuroprotective strategies in rodent models of neurodegenerative disease, olfactory assessment could be highly useful in determining therapeutic potential of compounds and translation to the clinic. In the present study we describe a battery of olfactory assays that are useful in measuring olfactory function in mice. The tests presented in this study were chosen because they measure olfaction abilities in mice related to food odors, social odors, and non-social odors. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of Parkinson&#8217;s disease as well as in testing potential disease-modifying therapies.

Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Nörodejeneratif Hastalığının fare modelleri için koku alma Tahliller

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, progressive accumulation of A&#946; oligomers and plaques is observed. Such A&#946; abnormalities are believed to block long-term potentiation, impair synaptic function, and induce cognitive deficits. Clinical and experimental evidences have revealed that the acute increase of A&#946; levels in the brain allows development of Alzheimer-like phenotypes. Hence, a detailed protocol describing how to acutely generate an AD mouse model via the intracerebroventricular (ICV) injection of A&#946; is necessary in many cases. In this protocol, the steps of the experiment with an A&#946;-injected mouse are included, from the preparation of peptides to the testing of behavioral abnormalities. The process of preparing the tools and animal subjects before the injection, of injecting the A&#946; into the mouse brain via ICV injection, and of assessing the degree of cognitive impairment are easily explained throughout the protocol, with an emphasis on tips for effective ICV injection of A&#946;. By mimicking certain aspects of AD with a designated injection of A&#946;, researchers can bypass the aging process and focus on the downstream pathology of A&#946; abnormalities.

The amyloid-&#946; (A&#946;)-injected animal model enables the administration of a defined quantity and species of A&#946; fragments and reduces individual differences within each study group. This protocol describes the intracerebroventricular (ICV) injection of A&#946; without stereotactic instruments, enabling the production of Alzheimer-like behavioral abnormalities in normal mice.

Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Motor and Hippocampal Dependent Spatial Learning and Reference Memory Assessment in a Transgenic Rat Model of Alzheimer's Disease with Stroke

Alzheimer&#39;s disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease that results in neurodegeneration and memory loss. While age is a major risk factor for AD, stroke has also been implicated as a risk factor and an exacerbating factor. The co-morbidity of stroke and AD results in worsened stroke-related motor control and AD-related cognitive deficits when compared to each condition alone. To model the combined condition of stroke and AD, a novel transgenic rat model of AD, with a mutated form of amyloid precursor protein (a key protein involved in the development of AD) incorporated into its DNA, is given a small unilateral striatal stroke.
For a model with the combination of both stroke and AD, behavioral tests that assess stroke-related motor control, locomotion and AD-related cognitive function must be implemented. The cylinder task involves a cost-efficient, multipurpose apparatus that assesses spontaneous forelimb motor use. In this task, a rat is placed in a cylindrical apparatus, where the rat will spontaneously rear and contact the wall of the cylinder with its forelimbs. These contacts are considered forelimb motor use and quantified during video analysis after testing. Another cost-efficient motor task implemented is the beam-walk task, which assesses forelimb control, hindlimb control and locomotion. This task involves a rat walking across a wooden beam allowing for the assessment of limb motor control through analysis of forelimb slips, hindlimb slips and falls. Assessment of learning and memory is completed with Morris water maze for this behavioral paradigm. The protocol starts with spatial learning, whereby the rat locates a stationary hidden platform. After spatial learning, the platform is removed and both short-term and long-term spatial reference memory is assessed. All three of these tasks are sensitive to behavioral differences and completed within 28 days for this model, making this paradigm time-efficient and cost-efficient.

To investigate the co-morbid Alzheimer&#39;s disease (AD) and stroke condition in a novel model, three behavior tasks are described that assess both motor control and cognitive behaviors. These tasks include the beam-walk task, cylinder task and Morris water maze.

İnme ile Alzheimer Hastalığının bir Transgenik Fare Modelinde Motor ve Hipokampal Bağımlı Mekansal Öğrenme ve Referans Hafıza Değerlendirme

Alzheimer&#39;s disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease that results in neurodegeneration and memory loss. While age is a major risk ...

Tıp

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying Alzheimer's disease, Parkinson's disease, depression, and anxiety. Traditionally, microdialysis has been the most common (lauded) technique to examine neurotransmitter changes that occur in these disorders. But because microdialysis has the ability to measure slow 1-20 minute changes across large areas of tissue, it has the disadvantage of invasiveness, potentially destroying intrinsic connections within the brain and a slow sampling capability. A relatively newer technique, the microelectrode array (MEA), has numerous advantages for measuring specific neurotransmitter changes within discrete brain regions as they occur, making for a spatially and temporally precise approach. In addition, using MEAs is minimally invasive, allowing for measurement of neurotransmitter alterations in vivo. In our laboratory, we have been specifically interested in changes in the neurotransmitter, glutamate, related to Alzheimer's disease pathology. As such, the method described here has been used to assess potential hippocampal disruptions in glutamate in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease. Briefly, the method used involves coating a multi-site microelectrode with an enzyme very selective for the neurotransmitter of interest and using self-referencing sites to subtract out background noise and interferents. After plating and calibration, the MEA can be constructed with a micropipette and lowered into the brain region of interest using a stereotaxic device. Here, the method described involves anesthetizing rTg(TauP301L)4510 mice and using a stereotaxic device to precisely target sub-regions (DG, CA1, and CA3) of the hippocampus.

Here, we describe the setup, software navigation, and data analysis for a spatially and temporally precise method of measuring tonic and phasic extracellular glutamate changes in vivo using enzyme-linked microelectrode arrays (MEA).

Enzim bazlı biyosensörlerin kullanılması Alzheimer Fare Modellerinde Tonik ve Fazik glutamat Ölçmek için

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, a multitude of novel clearing methodologies including CUBIC (clear, unobstructed brain imaging cocktails and computational analysis), SWITCH (system-wide control of interaction time and kinetics of chemicals), MAP (magnified analysis of the proteome), and PACT (passive clarity technique), have been established to further expand the existing toolkit for the microscopic analysis of biological tissues. The present study aims to improve upon and optimize the original PACT procedure for an array of intact rodent tissues, including the whole central nervous system (CNS), kidneys, spleen, and whole mouse embryos. Termed psPACT (process-separate PACT) and mPACT (modified PACT), these novel techniques provide highly efficacious means of mapping cell circuitry and visualizing subcellular structures in intact normal and pathological tissues. In the following protocol, we provide a detailed, step-by-step outline on how to achieve maximal tissue clearance with minimal invasion of their structural integrity via psPACT and mPACT.

Here, we present two novel methodologies, psPACT and mPACT, for achieving maximal optical transparency and subsequent microscopic analysis of tissue vasculature in the intact rodent whole CNS.

Roman pasif optik şeffaflık bütün sinir dokusunda hızlı üretim için yöntemleri Temizleme

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other neurodegenerative disorders, this independence might be compromised due to insufficient glutamate clearance and the resulting spill-in and spill-out effects. Altered astrocytic coverage of the presynaptic terminals and/or dendritic spines as well as a reduced size of glutamate transporter clusters at glutamate release sites have been implicated in the pathogenesis of diseases resulting in symptoms of dys-/hyperkinesia. However, the mechanisms leading to the dysfunction of glutamatergic synapses in HD are not well understood. Improving and applying synapse imaging we have obtained data shedding new light on the mechanisms impeding the initiation of movements. Here, we describe the principle elements of a relatively inexpensive approach to achieve single synapse resolution by using the new genetically encoded ultrafast glutamate sensor iGluu, wide-field optics, a scientific CMOS (sCMOS) camera, a 473 nm laser and a laser positioning system to evaluate the state of corticostriatal synapses in acute slices from age appropriate healthy or diseased mice. Glutamate transients were constructed from single or multiple pixels to obtain estimates of i) glutamate release based on the maximal elevation of the glutamate concentration [Glu] next to the active zone and ii) glutamate uptake as reflected in the time constant of decay (TauD) of the perisynaptic [Glu]. Differences in the resting bouton size and contrasting patterns of short-term plasticity served as criteria for the identification of corticostriatal terminals as belonging to the intratelencephalic (IT) or the pyramidal tract (PT) pathway. Using these methods, we discovered that in symptomatic HD mice ~40% of PT-type corticostriatal synapses exhibited insufficient glutamate clearance, suggesting that these synapses might be at risk to excitotoxic damage. The results underline the usefulness of TauD as a biomarker of dysfunctional synapses in Huntington mice with a hypokinetic phenotype.

We present a protocol to evaluate the balance between glutamate release and clearance at single corticostriatal glutamatergic synapses in acute slices from adult mice. This protocol uses the fluorescent sensor iGluu for glutamate detection, a sCMOS camera for signal acquisition and a device for focal laser illumination.

Normal ve Huntington Farelerden Akut Beyin Dilimlerinde Glutamat Salınımı ve Alımının Tek Sinaps Göstergeleri

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Detecting Amyloid-&#946; Accumulation via Immunofluorescent Staining in a Mouse Model of Alzheimer's Disease

Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disease that contributes to 60-70% dementia around the world. One of the hallmarks of AD undoubtedly lies on accumulation of amyloid-&#946; (A&#946;) in the brain. A&#946; is produced from the proteolytic cleavage of the beta-amyloid precursor protein (APP) by &#946;-secretase and &#947;-secretase. In pathological circumstances, the increased &#946;-cleavage of APP leads to overproduction of A&#946;, which aggregates into A&#946; plaques. Since A&#946; plaques are a characteristic of AD pathology, detecting the amount of A&#946; is very important in AD research. In this protocol, we introduce the immunofluorescent staining method to visualize A&#946; deposition. The mouse model used in our experiments is 5&#215;FAD, which carries five mutations found in human familial AD. The neuropathological and behavioral deficits of 5xFAD mice are well-documented, which makes it a good animal model to study A&#946; pathology. We will introduce the procedure including transcardial perfusion, cryosectioning, immunofluorescent staining and quantification to detect A&#946; accumulation in 5&#215;FAD mice. With this protocol, researchers can investigate A&#946; pathology in an AD mouse model.

In the neuropathology of Alzheimer's disease, one of the most crucial characteristics is the deposition of amyloid-&#946;. In this protocol, we describe the method of immunofluorescent staining in 5&#215;FAD transgenic mouse to detect amyloid-&#946; accumulation in plaques. The process of perfusion, cryosectioning, staining and quantification will be described in detail.

Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disease that contributes to 60-70% dementia around the world. One of the hallmarks of AD undoubtedly lies ...