This protocol follows any and all animal care and use guidelines and regulations set by IACUC at the University of Cincinnati. This work is funded by NIH/NINDS NS07722 and the Gardner Family Center for Parkinson&#8217;s Disease and Movement Disorders.

Protokolünün tüm adımları hayvan bakım takip ve Cincinnati Üniversitesi IACUC tarafından belirlenen kurallar ve düzenlemeler kullanın. 1. Genel Hususlar <ol><li> Mümkünse, karanlık döngüsünde aktif aşaması sırasında fareler test edin. Tipik olarak, karanlık döngüsüne yetersiz ışık ve en az 1 saat altında test gerçekleştirir. Karanlık döngüsünde test mümkün değildir, ancak, ışık çevriminin sırasında üç testleri. Farenin onların uyku döngüsü sırasında test edildiğinde defa koklama azalabilir aklınızda bulundurun. NOT: testler uyku döngüsü sırasında yapılabilir iken farenin gömülü pelet, bloklar, ya da kokulu kartuşun az ilgi gösterebilir. </li><li> Dışında koku alma ipuçları herhangi bir etkisini azaltmak her test boyunca her zaman eldiven bir baz çifti giymek ve sonra her fare ve her deneme için baz çifti üzerinde eldiven temiz bir çift yerleştirmek için. Şüphe, eldiven temiz bir set koymak genel bir kural olarak,. Eldiven bir kutu okudumsık sık değişmiş olacak beri ily mevcuttur. NOT: Hepimiz hayvan taşıma için nitril eldiven kullanın. </li><li> Test materyalleri ve dezenfektan ile konular arasında kafesleri Temizleme / sterilizasyon maddesi de hastalık yaymak için potansiyelini azaltmak yanı sıra istenmeyen koku ipuçlarını kaldırmak için bu test pil önemli bir adımdır. </li></ol> 2. Gömülü Pelet Testi <ol><li> En az iki gün test edilmeden önce, her bir fare ağırlığı kaydedilir ve daha sonra gıda vücut ağırlığının% 90 sınırlamaktadır. Testten önce ve yiyecek kısıtlaması sırasında, her bir fareye, test sırasında kullanılacak olan topakların 1-2 parçaları elde edilmek üzere (örneğin, şekerli tahıl bir adet). Farenin gıda ile neophobic ve daha önce pelet yemedim, test sırasında pelet aramak olmayabilir çünkü bu adımı atlamayın. </li><li> Tüm test günlerinde, su şişesi veya besleyici b test odasında kendi kafes yerleştirerek testten önce 1 saat boyunca fareler alıştırmakde. Sadece bir filtre üst kapaklı evlerine kafeste onları House&#39;a. </li><li> Alışma sırasında, ~ temiz yatak yatak eşit kafesin genelinde dağıtılan bazı yapım yüksek 3 cm temiz bir fare kafes doldurun. 5 dakika için bir zamanlayıcı ayarlayın. </li><li> Görünmüyorsa, böylece Alışma 1 saat sonra, yatak altında 1 şekerli tahıl pelet 0.5 cm gömmek. </li><li> , Kendi kafes evlerinde ikinci deney fare çıkarın testi kafesinin merkezine yerleştirin, kafes üzerine filtre üst kapak yer ve zaman ölçeri başlat. </li><li> Fare pelet ortaya çıkarır ve onu yeme başlar Sayacı durdurmak. Gömülü pelet ortaya çıkarmak için zaman unutmayın. </li><li> Fare, 5 dakika içinde pelet bulamazsa, deneme sona ve bir fare için 300 saniyelik bir skor not edin. Farenin erişimi vardır bu yüzden yatak üstüne pelet taşıyın ve fare pelet yemek için izin. </li><li> Deneme ardından, evde kafes fare dönün. </li><li> Test kafesinden yatak boşaltın ve c temizleyinhayvan oda temizleme solüsyonu ile yaş. </li><li> Tekrarlayın, her fare için 2,4-2,9 adımları ve önce ve her fare sonra eldivenleri değiştirin. </li><li> Tüm farenin test edildikten sonra, onları% 90 vücut ağırlığı onları korumak için yeterli yiyecek vermek. </li><li> Bir istisna dışında test gününde 1 gün gibi 2-5 aynı şekilde test gerçekleştirin; Her deneme için kafes içinde farklı bir noktaya pelet gömmek. </li><li> Test 6. günde, yüzey pelet bir çalışma gerçekleştirdik. </li><li> Yüzey pelet deneme için, ama yerine yatak üstüne yatak yerine onu altında pelet gömme test gününde 1 için aynı prosedürü uygulayın. Fare bulmak ve pelet yeme başlamak için zamanı kaydedin. </li></ol> 3. Blok Testi <ol><li> Bireysel temiz kafeslerde fareleri ev ve her kafesi kurmadan önce eldiven değiştirilmesi, (AE etiketli) kafese 5 blok yerleştirin. </li><li> Daha sonra testi 24 saat gerçekleştirin. , Test alanına testi fareler taşı su şişesi ve besleyici depo kaldırmak ve al yerleştirinl hayvanın tanımlama ile etiketlenmiş bir plastik torba içine yatak bir avuç ile birlikte kafese 5 blok. Mouse ana kafesinin üzerinde kapalı bir plastik torba yerleştirin. </li><li> Testten önce 1 saat boyunca su şişesi, besleme kutusu olmadan kendi kafes evlerinde hayvanlar, ve bloklar boyunca ortama alışmalarına. </li><li> Kokular hayvanlar / bloklar arasında değiş tokuş değil böylece her kafesi arasında eldiven değiştirmek. </li><li> Her kafesi arasında en az 10 cm olan bir masanın üzerine birbirlerinin yanında fare kafesleri sıraya. Kafesin (değil kafesin uzun tarafı) ön görünümde açıkça böylece bir video kamera yerleştirin. </li><li> 30 saniye için zamanlayıcı ayarlamak ve önemli deney ayrıntıları (tarih, fare kimliği, deneme, vb) ile bir kart etiket. Kaset 2-3 sn etiket. </li><li> O Farenin tanımlama ile plastik torba blok AD çıkarın ve onlar açıkça video kamera üzerinde görünür şekilde kafesin ortasında koyun. Emin olduğunu ~ 1 cm o olunBlokların her biri arasındaki boşluk f. Kafesindeki filtre top geri yerleştirin. 30 saniye için zamanlayıcı ve kaseti başlayın. </li><li> 30 saniye sonra, kayıt durdurmak ve kafes blokları kaldırmak ve geri plastik torbaya koyun. </li><li> Eldiven değiştirmek ve ardından ilk deneme için kullanılan aynı prosedürü tekrarlayarak, sonraki fare geçmek. Her fare ~ 5 dakika arası bir deneme aralığını olduğundan emin yapmak için 6 denemenin toplamı için bunu yapın. </li><li> 7. duruşma günü yerine fare A, B, ve C blokları maruz böylece başka bir mouse kafesinden blok D eklemek mouse kendi kafesinden blok D yerleştirerek hariç çalışmalarda 1-6 için aynı prosedürü takip onun Başka bir mouse kafesinden kendi ev kafes ve blok e. Olan bloğu E her bir fare bloğu E her fare kafesine (örneğin, ABCE veya AEBC) yerleştirilir ve alternatif maruz laboratuar kitabında edin. Orijinal cagemate aynı cinsten değil bir fare blok E atın. Vi30 saniye için deotape. </li><li> 7 denemelerinden sonra, kendi orijinal cagemates ile yeni temiz bir kafes hayvanları dönmek. Temiz blokları yumuşak deterjan ve su ile testte kullanılan ve daha sonra testlerinde kullanılmak üzere kurumaya bırakın. </li></ol> 4. Alışma / Dishabituation <ol><li> Blok deneye benzer bir şekilde, alışkanlık / dishabituation testi gerçekleştirmek için değil, bunun yerine bir fare kokuya sahip blokları kullanan, Farklı ekstre çiftleri ile kokulu pamuk tutma doku kartuşları kullanın. </li><li> Yerine blok tek bir kokusuz doku kartuşu kullanarak adımları 3.1-3.4 izleyin. </li><li> Test odasında fareler alıştırmak. </li><li> Ayrı bir odada kokulu doku kartuşları hazırlayın. Temiz bir kartuş içine küçük bir pamuk yerleştirin ve pamuğa ekstraktı 5 ul (örneğin, badem ekstresi) ekleyin. Bu koku ile etiketlenmiş bir özel kutusunda veya torbasında pamuk ve biryere kartuş üst oturtun. </li><li> Aynı prosedür yapmak, fveya ikinci bir koku (örneğin, anason özü). Farklı kokular taşıma arasındaki eldiven değiştirmek. Pamuk tamamen doku kartuşun kaplı olduğundan emin olun. NOT: pamuk topu Exposed lifleri hayvan yuvalama amaçlar ziyade kokusu kendisi için pamuk ilgi var neden olabilir. </li><li> Sonra, bir ilk altı denemeleri için kokulu doku kartuşu ve yedinci deneme için ikinci kokulu doku kartuşu kullanarak adımları 3,6-3,10 izleyin. </li></ol> Video teyp 5. Analizi <ol><li> Blok ve alışma / dishabituation testleri için deneysel duruma bir hakem kör olduğunu bloğu ile burun teması olarak tanımlanan sniff, her blok koklama harcanan zamanı ölçmek var. İstenirse, Deneme 7, toplam aktivitesi her deneme esnasında (uzunluk ve evde kafes genişliği boyunca yapılan hareketlerin sayısı) sırasında, yeni blok (E) yaklaşmak zamanı gibi diğer davranışları ölçer. Bir koklama harcanan zaman skord süresi kronometre kullanarak video banttan yaklaşım. </li><li> Benzer şekilde, alışkanlık / dishabituation testi için, deneysel duruma bir hakem kör kartuşu ve lokomotor aktivite yaklaşım kartuş, zaman koklama geçirdiği zamanı ölçmek var. </li></ol> 6. İstatistik <ol><li> Gecikme puanları varyansın heterojen yapıda olduğunu göstermektedir eğilimindedir pelet bulmak için çünkü nonparametrik istatistikleri kullanılarak gömülü pelet testi analiz edin. Mann-Whitney U-testi kullanılarak farelerin gruplar arasında karşılaştırma sonra gün 3-5 arasında pelet bulmak ve gecikme ortalama. Benzer şekilde, test yüzey pelet kısmı, genotipleri karşılaştırmak için bir Mann-Whitney U-testi kullanılarak pelet bulmak için gecikme analiz eder. </li><li> Blok testi için, Deneme 7 (roman-kokulu blok giriş) gelen verileri analiz. Tipik olarak, varyans heterojenite için hesap parametrik olmayan analizler kullanır. Zaman içinde farklılıkları analiz etmek için th koklama geçirdiE yepyeni blok, aynı zamanda, farklı deney grupları için blok yaklaşım süresi, Mann-Whitney U-testi kullanılır. Tanıdık blokları koklama harcanan zaman yeni blok koklama harcanan zamanı karşılaştırmak için Wilcoxon Rank testi kullanın. </li><li> Alışkanlık / dishabituation test için, davranış parametre Trials önceki çalışmalara 20 benzer bir 1, 6 ve 7 üzerinde analiz eder. Fareler hiçbir koklama küçük sergi ise, parametrik olmayan analizler kullanın. </li></ol>

<ol>
	<li>Hawkes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+in+neurodegenerative+disorder.">Olfaction in neurodegenerative disorder.</a> Adv. Otorhinolaryngol. 63, 133-151 (2006).</li><li>Ward, C., Hess, W., Calne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+impairment+in+Parkinson's+disease.">Olfactory impairment in Parkinson's disease.</a> Neurology. 33, 943-946 (1983).</li><li>Doty, R., Stern, M., Pfeiffer, C., Gollomp, S., Hurtig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilateral+olfactory+dysfunction+in+early+stage+treated+and+untreated+idiopathic+Parkinson's+disease.">Bilateral olfactory dysfunction in early stage treated and untreated idiopathic Parkinson's disease.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 55, 138-142 (1992).</li><li>Doty, R., Deems, D., Stellar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+in+parkinsonism:+a+general+deficit+unrelated+to+neurologic+signs,+disease+stage,+or+disease+duration.">Olfactory dysfunction in parkinsonism: a general deficit unrelated to neurologic signs, disease stage, or disease duration.</a> Neurology. 38, 1237-1244 (1988).</li><li>Tissingh, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+olfaction+in+de+novo+and+treated+Parkinson's+disease:+possible+implications+for+early+diagnosis.">Loss of olfaction in de novo and treated Parkinson's disease: possible implications for early diagnosis.</a> Movement Disorders. 16 (1), 41-46 (2001).</li><li>Montgomery, E., Baker, K., Lyons, K., Koller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+performance+on+the+PD+test+battery+by+asymptomatic+first-degree+relatives.">Abnormal performance on the PD test battery by asymptomatic first-degree relatives.</a> Neurology. 52, 757-762 (1999).</li><li>Berendse, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclinical+dopaminergic+dysfunction+in+asymptomatic+Parkinson's+disease+patients'+relatives+with+a+decreased+sense+of+smell.">Subclinical dopaminergic dysfunction in asymptomatic Parkinson's disease patients' relatives with a decreased sense of smell.</a> Ann. Neurol. 50 (1), 34-41 (2001).</li><li>Ponsen, M., Stoffers, D., Booij, J., van Eck-Smit, B., Wolters, E., Berendse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+hyposmia+as+a+preclinical+sign+of+Parkinson's+disease.">Idiopathic hyposmia as a preclinical sign of Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 56, 173-181 (2004).</li><li>Langston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Parkinson's+complex:+parkinsonism+is+just+the+tip+of+the+iceberg.">The Parkinson's complex: parkinsonism is just the tip of the iceberg.</a> Ann. Neurol. 59 (4), 591-596 (2006).</li><li>Ross, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+olfactory+dysfunction+with+risk+for+future+Parkinson's+disease.">Association of olfactory dysfunction with risk for future Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 63, 167-173 (2008).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+alpha-synuclein.">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human alpha-synuclein.</a> J. Neurosci. 24, 9434-9440 (2004).</li><li>Fleming, S., Ekhator, O., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson's+disease.">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> J. Vis. Exp. , e50303 (2013).</li><li>Schallert, T., Tillerson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervention+strategies+for+degeneration+of+DA+neurons+in+parkinsonism:+Optimizing+behavioral+assessment+of+outcome.">Intervention strategies for degeneration of DA neurons in parkinsonism: Optimizing behavioral assessment of outcome.</a> Central Nervous System Diseases. , 131-151 (2000).</li><li>Whishaw, I., O'Connor, W., Dunnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contributions+of+motor+cortex,+nigrostriatal+dopamine+and+caudate-putamen+to+skilled+forelimb+use+in+the+rat.">The contributions of motor cortex, nigrostriatal dopamine and caudate-putamen to skilled forelimb use in the rat.</a> Brain. 109 (5), 805-843 (1986).</li><li>Schwarting, R., Huston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unilateral+6-hydroxydopamine+lesion+model+in+behavioral+brain+research.+Analysis+of+functional+deficits,+recovery+and+treatments.">The unilateral 6-hydroxydopamine lesion model in behavioral brain research. Analysis of functional deficits, recovery and treatments.</a> Prog Neurobiol. 49 (3), 215-266 (1996).</li><li>Glasl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pink1-deficiency+in+mice+impairs+gait,+olfaction+and+serotonergic+innervation+of+the+olfactory+bulb.">Pink1-deficiency in mice impairs gait, olfaction and serotonergic innervation of the olfactory bulb.</a> Experimental Neurology. 235, 214-227 (2012).</li><li>Kim, Y., Lussier, S., Rane, A., Choi, S., Andersen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+dopaminergic+glutathione+depletion+in+an+&#945;-synuclein+transgenic+mouse+model+results+in+age-related+olfactory+dysfunction.">Inducible dopaminergic glutathione depletion in an &#945;-synuclein transgenic mouse model results in age-related olfactory dysfunction.</a> Neuroscience. 172, 379-386 (2011).</li><li>Fleming, S., Tetreault, N., Mulligan, C., Huston, C., Masliah, E., Chesselet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+deficits+in+mice+overexpressing+human+wildtype+alpha-synuclein.">Olfactory deficits in mice overexpressing human wildtype alpha-synuclein.</a> The European Journal of Neuroscience. 28 (2), 247-256 (2008).</li><li>Nuber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+progressive+dopaminergic+phenotype+associated+with+neurotoxic+conversion+of+&#945;-synuclein+in+BAC-transgenic+rats.">A progressive dopaminergic phenotype associated with neurotoxic conversion of &#945;-synuclein in BAC-transgenic rats.</a> Brain. 136 (2), 412-432 (2013).</li><li>Macknin, J., Higuchi, M., Lee, V., Trojanowski, J., Doty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+occurs+in+transgenic+mice+overexpressing+human+tau+protein.">Olfactory dysfunction occurs in transgenic mice overexpressing human tau protein.</a> Brain Res. 1000, 174-178 (2004).</li><li>Lazic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+abnormalities+in+Huntington's+disease:+decreased+plasticity+in+the+primary+olfactory+cortex+of+R6/1+transgenic+mice+and+reduced+olfactory+discrimination+in+patients.">Olfactory abnormalities in Huntington's disease: decreased plasticity in the primary olfactory cortex of R6/1 transgenic mice and reduced olfactory discrimination in patients.</a> Brain Res. 1151, 219-226 (2007).</li><li>Wesson, D., Wilson, D., Nixon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Should+olfactory+dysfunction+be+used+as+a+biomarker+of+Alzheimer's+disease?.">Should olfactory dysfunction be used as a biomarker of Alzheimer's disease?.</a> Expert Review of Neurotherapeutics. 10 (5), 633-635 (2010).</li><li>Taylor, T., Caudle, W., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VMAT2-deficient+mice+display+nigral+and+extranigral+pathology+and+motor+and+nonmotor+symptoms+of+Parkinson's+disease.">VMAT2-deficient mice display nigral and extranigral pathology and motor and nonmotor symptoms of Parkinson's disease.</a> Parkinsons Dis. 2011, 124-165 (2011).</li><li>Tillerson, J., Caudle, W., Parent, J., Gong, C., Schallert, T., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+discrimination+deficits+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter+or+the+D2+dopamine+receptor.">Olfactory discrimination deficits in mice lacking the dopamine transporter or the D2 dopamine receptor.</a> Behav. Brain Res. 172, 97-105 (2006).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+trial+of+the+microtubule-interacting+peptide+(NAP)+in+mice+overexpressing+alpha-synuclein+shows+improvement+in+motor+function+and+reduction+of+alpha-synuclein+inclusions.">A pilot trial of the microtubule-interacting peptide (NAP) in mice overexpressing alpha-synuclein shows improvement in motor function and reduction of alpha-synuclein inclusions.</a> Mol. Cell. Neurosci. 4, 597-606 (2011).</li><li>Crawley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong with My Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice. , (2000).</li><li>Nathan, B., Yost, J., Litherland, M., Struble, R., Switzer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+function+in+apoE+knockout+mice.">Olfactory function in apoE knockout mice.</a> Behav. Brain Res. 150, 1-7 (2004).</li><li>Spinetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol-induced+retrograde+memory+impairment+in+rats:+prevention+by+caffeine.">Alcohol-induced retrograde memory impairment in rats: prevention by caffeine.</a> Psychopharmacology. 201 (3), 361-371 (2008).</li><li>Bielsky, I., Hu, S., Szegda, K., Westphal, H., Young, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+impairment+in+social+recognition+and+reduction+in+anxiety-like+behavior+in+vasopressin+V1a+receptor+knockout+mice.">Profound impairment in social recognition and reduction in anxiety-like behavior in vasopressin V1a receptor knockout mice.</a> Neuropsychopharmacology. 29, 483-493 (2004).</li></ol>

We have no conflicts of interest.

Bu çalışmada tanımlanan testlerin her farelerde koku fonksiyonunun farklı yönlerini ölçmek. Gömülü pelet testi yatak altında gömülü şekerli tahıl lezzetli parça algılamak için (sınırlı gıda değil, gıda yoksun) aç yeteneğini farenin test, koku duyusunun gıda motivasyon yönünü ölçer. Blok test için kendi kokusu ve conspecific bu arasında ayrım yapmak için fareler yeteneği test koku fonksiyonunun sosyal açıdan daha ölçer. Alışma / dishabituation testi, tanıdık ve yeni zararsız kokular arasında ayrım fare yeteneğini değerlendirir. Gıda motivasyon ya da korkuya anomaliler kontrollere göre mutant farelerde gözlemlenen farklılıkların katkıda çünkü yeni bir model karakterize ederken birden testler kullanılarak önemlidir. Sadece blok testi yapılır ve başka bir fare koku gözlenmektedir olan bloğun koklama azalmıştır Örneğin, bir olfact olup olmadığı açık değildirORY azalması veya bu bloğun kaçınma yol açabilir conspecific gelişmiş bir korku yanıt. Çoklu testler yapılır ve açıkları tüm testlerde bakıldığında, kuvvetle koku bozukluğunun bir yorumunu destekler. Farklılıklar değil diğerleri sadece bir test görülmektedir Ancak, o zaman daha incelikli bir koku bozukluğu olabilir ama diğer açıklamaları ekarte etmek gerekli olacaktır (yani, gelişmiş korku veya azaltılmış gıda motivasyon). Koku fonksiyonu fareler test ederken aklınızda tutmak için ek önemli faktörler farelerin arka gerginlik ve seks içerir. Farklı genetik arka plan suşları (yani, C57BL / 6, DBA, vs) tüm deney yapmadan önce, aynı arka wild tip farelerde her protokolü adapte tavsiye edilir, bu nedenle fare davranışı üzerinde derin etkileri olabilir. Ayrıca, erkek koku alma sistemi, yüksek olduğu için, erkek ve dişi farenin birbirinden ayrı ayrı test edilmesi önerilmektedirKızışma bir kadın estroz ve koku algılama kadınlarda duyarlı ly her üç testlerde performansı olumsuz etkileyebilir. Bazı adımlar farelerde koku alma duyusunu test ederken takip etmek kesinlikle önemlidir. Bu deneyci hayvanlara tanıtan kokuların farkında olmak önemlidir. Prosedürler için eldiven giyen hayvanlar arasındaki eldiven temel ve sık değişen yeterlidir. Her zaman koku alma testi günlerde kolonya veya parfüm giymek değil deneyci için iyi bir uygulamadır. Işlemin bazı bölümleri esnek olsa da, testin doğruluğunu veya hassasiyetini azaltmadan değiştirilebilir ve uyarlanabilir başka parçalar vardır. Örneğin, alışkanlık deneme sayısı artabilir ya da farelerin gerginlik bağlı olarak test edilen azalmış ve ne kadar hızlı onlar uyaranlara alışmakta. Bu testlerin önemli kısıtlılığı hepsi bazı motivasyon formu ile tahrik olmasıdır, o yiyecek ya da sosyal, yapım olacakdeğişmiş bir tepki gözlenen zor tamamen bir açıklama olarak motivasyon anormallikleri ekarte etmek. Bu test ve uyaranlara yaklaşım süre içinde böyle bir faaliyet olarak ek parametreleri analiz ederek minimize edilebilir. Hakim sonra, testler kolayca nörodejeneratif hastalığın yeni fare modelleri fenotipini incelenmesinde kullanılabilir. Buna ek olarak, yüksek güç testleri muhtemel terapötik test klinik çalışmalarda dahil edilebilir (örnek için bakınız Ref. 25).

Koku fonksiyon bozukluğu, Parkinson hastalığı (PD), Alzheimer hastalığı ve Huntington hastalığı dahil olmak üzere nörodejeneratif hastalıkların 1 bir dizi ile bağlantılıdır. PD yılında, koku bozuklukları koku tanımlama, algılama ve ayrımcılık açıkları yer almaktadır ve hastaların 2-5 70-95% kadar bulunur. Bu açıkları koku bozukluğu PH 6-10 erken evrelerini belirleyebilir belirten kadar 4 yıl PH kardinal motor semptomları öncüsü olabilir. PH&#39;nda koku açıklarının erken oluşumu koku disfonksiyonu bir ilgiyle ve yer altında yatan mekanizmaların yol açmıştır. Kemirgenlerde preklinik çalışmalarda, koku disfonksiyon yeni tedavi stratejilerinin terapötik potansiyelini tahmin etmek duyarlı bir sonuç ölçüsü olabilir. Çoğu testler yaygın olarak tasarlanmış ve PD kemirgen modellerinde ve TES için sensorimotor bozuklukları karakterize etmek için kullanılmaktadıryeni tedavilerin 11-15 terapötik potansiyelini t. Koku açıkları iyi PH belgelenen olsa, koku fonksiyonu rutin birçok model ölçülen olmamıştır. Bu görüş PD genetik formları keşif ve PD sadece duyu ve motor fonksiyonda daha etkileyen sistemik bir hastalık olduğunu daha kabul kavramı ile olsa değişiyor. Şu anda, şimdi karakterizasyonu 16-24 içinde olfaksiyon analizini içerir PD ve diğer nörodejeneratif hastalıkların genetik fare modellerinde çok sayıda çalışma vardır. Nörodejeneratif bozukluklarda koku disfonksiyon artan ilgi ile birlikte, klinik çalışmalarda nörodejenerasyon yeni modellerin yanı sıra testi, özellikle potansiyle immunomodülatörlerin karakterize etmek için kullanılabilir koku testlerin bir pil monte çalıştı. Bu çalışmada anlatılan deneyler karakterizasyonu ve klinik öncesi çalışmalarda 18,25 hem de kullanılmıştır. Testler highliBu çalışmada ağirlikli Parkinson hastalığının 18 bir sık kullanılan alfa-sinüklein Aşırı miktarda fare modelinde koku işlev bozukluğunu belirlemek hassas olduğu gösterilmiştir. Onlar gömülü pelet testi 26,27, blok testi 23,24,28,29 uyarlanmış versiyonu, ve alışkanlık / dishabituation testini 30 içermektedir. Bu farelerde koku fonksiyonu hassas tedbirler vardır, bu çalışmada tanımlanan testlerin çeşitli uyarlamalar olduğunu not etmek önemlidir, bu çalışmada vurgulanan olanlar testler laboratuar ile en deneyime sahiptir ve rutin kullanımı vardır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="352">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Cap&#39;n Crunch</td>
			<td style="width:88px;">Quaker Oats</td>
			<td align="right" style="width:88px;">3E+10</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Wooden Blocks</td>
			<td style="width:88px;">Lara&#8217;s Crafts</td>
			<td align="right" style="width:88px;">10144</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="379" rowspan="6" style="height:379px;width:88px;">Flavor Extracts</td>
			<td rowspan="6" style="width:88px;">Kroger</td>
			<td style="width:88px;">Almond: 011110664716</td>
			<td rowspan="6" style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Anise: 011110615619</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Banana: 011110669919</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Coconut: 011110669889</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Lemon: 011110669957</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:88px;">Orange: 0011110669964</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="59" rowspan="2" style="height:59px;width:88px;">Tissue Cartridges</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Z672122-500EA</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Manufactured by Simport no: M490-2</td>
		</tr>
		<tr height="18">
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Cotton Balls</td>
			<td style="width:88px;">Kroger</td>
			<td align="right" style="width:88px;">1.1111E+10</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Mouse Cages</td>
			<td style="width:88px;">Ancare</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:88px;">19 x 29 x 12.7 cm</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Camcorder</td>
			<td style="width:88px;">Sony</td>
			<td style="width:88px;">&#160;HDR-HC9</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">MiniDV Tapes</td>
			<td style="width:88px;">Sony DVC premium</td>
			<td align="right" style="width:88px;">2.7243E+10</td>
			<td style="width:88px;">60 minute long play&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process and may be a useful behavioral marker for early detection. Earlier detection in neurodegenerative disease is a major goal in the field because this is when neuroprotective therapies have the best potential to be effective. Therefore, in preclinical studies testing novel neuroprotective strategies in rodent models of neurodegenerative disease, olfactory assessment could be highly useful in determining therapeutic potential of compounds and translation to the clinic. In the present study we describe a battery of olfactory assays that are useful in measuring olfactory function in mice. The tests presented in this study were chosen because they measure olfaction abilities in mice related to food odors, social odors, and non-social odors. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of Parkinson&#8217;s disease as well as in testing potential disease-modifying therapies.

Gömülü pelet, blok ve alışkanlık / dishabituation testleri farelerde koku duyusunun çok avantajlı değerlendirmelerdir. Bu testler kullanılarak, alfa-sinüklein aşın sunum (Thy1-ASYN) 18 ve Atp13a2 nakavt fareler de dahil olmak üzere Parkinson hastalığı çoklu genetik fare modellerinde hem koku duyusunun önemli değişiklikler bulduk. Hem Thy1-ASYN ve Atp13a2 nakavt fareler. Kontrollere 18 daha gömülü pelet bulmak için daha uzun sürer Yabanitip ve Atp13a2 nakavt fareler toplanan 1-3 gösteri verileri Rakamlar. Gömülü pelet testte, Atp13a2 nakavt fareler vahşi tipli kontrol fareleri (Şekil 1) ile karşılaştırıldığında, gömülü pelet bulmak için gecikme artış göstermektedir. Blok test Yabanitip ve Atp13a2 nakavt farenin hem kendi ev kafes (Şekil 2) blokları ile karşılaştırıldığında başka bir mouse kafesinden yeni blok kokladım. Alışma / dishabituation testi Yabanitip farelerde bir koku alışma göstermek ve<html> Daha sonra yeni bir koku (Şekil 3) içeri getirildiği zaman, koklama artmıştır. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig1highres.jpg" width="500" /> Pelet testi. Gecikme gömüldü Şekil 1. yabantipte (n = 10) ve Atp13a2 KO (n = 14) yaş, 20-27 m pelet bulmak için. * P &lt;0.05, Mann-Whitney U. <img alt="Şekil 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig2highres.jpg" width="500" /> Şekil 2. Blok Test Zaman vahşi tip için blok testinde yeni blok (E) koklama (n = 10) ve Atp13a2 KO (n = 12), 20 dişi farenin -. Yaş 27m. ΔΔ aynı genotip blokları A, B ve C ile karşılaştırıldığında p &lt;0.01 temsil eder. Mann-Whitney U. &quot;Src =&quot; / files / ftp_upload / 51804 / 51804fig3highres.jpg &quot;width =&quot; 500 &quot;/&gt; Şekil 3. Alışma / dishabituation testi. (= 7 n yaş 9 m) arasında 6 denemeleri ve deneme 7 yeni kokusu ile bir kartuşun giriş saati wild tip farelerde kokulu kartuşu koklama idi.

Watch this Scientific Journal Video about Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease at JoVE.com

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Nörodejeneratif Hastalığının fare modelleri için koku alma Tahliller

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

olfactory-assays-for-mouse-models-of-neurodegenerative-disease

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Special Senses

SCIENTISTS IN ACTION

21.9K Görüntüleme.  University of Cincinnati. Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Video: Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Mouse Models of Periventricular Leukomalacia

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature infants and the most common antecedent of cerebral palsy. PVL is characterized by periventricular white matter damage with prominent oligodendroglial injury. Hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation are the primary causes of PVL. We use P6 mice to create models of neonatal brain injury by the induction of hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation with unilateral carotid ligation followed by exposure to hypoxia with or without injection of the endotoxin lipopolysaccharide (LPS). Immunohistochemistry of myelin basic protein (MBP) or O1 and electron microscopic examination show prominent myelin loss in cerebral white matter with additional damage to the hippocampus and thalamus. Establishment of mouse models of PVL will greatly facilitate the study of disease pathogenesis using available transgenic mouse strains, conduction of drug trials in a relatively high throughput manner to identify candidate therapeutic agents, and testing of stem cell transplantation using immunodeficiency mouse strains.

We established mouse models of periventricular leukomalacia (PVL), the predominant brain injury in premature infants characterized by periventricular white matter lesions. Hypoxia/ischemia with/without systemic infection are the primary causes of PVL. Unilateral carotid ligation and hypoxia exposure with/without lipopolysaccharide injection creates PVL-like lesions in P6 mice.

Periventriküler lökomalazi Fare Modelleri

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature ...

Nörobilim

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. Here we present a visualized experimental and methodological protocol to directly visualize microregional tissue hypoxia and to infer perivascular oxygen gradients in the mouse cortex. It is based on the non-linear relationship between nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) endogenous fluorescence intensity and oxygen partial pressure in the tissue, where observed tissue NADH fluorescence abruptly increases at tissue oxygen levels below 10 mmHg1. We use two-photon excitation at 740 nm which allows for concurrent excitation of intrinsic NADH tissue fluorescence and blood plasma contrasted with Texas-Red dextran. The advantages of this method over existing approaches include the following: it takes advantage of an intrinsic tissue signal and can be performed using standard two-photon in vivo imaging equipment; it permits continuous monitoring in the whole field of view with a depth resolution of ~50 &mu;m. We demonstrate that brain tissue areas furthest from cerebral blood vessels correspond to vulnerable watershed areas which are the first to become functionally hypoxic following a decline in vascular oxygen supply. This method allows one to image microregional cortical oxygenation and is therefore useful for examining the role of inadequate or restricted tissue oxygen supply in neurovascular diseases and stroke.

Here we describe a method to directly visualize microregional tissue hypoxia in the mouse cortex in vivo. It is based on concurrent two-photon imaging of nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and the cortical microcirculation. This method is useful for high resolution analysis of tissue oxygen supply.

Endojen NADH Floresans iki-foton Imaging tarafından Fare Serebral Korteks olarak Microregional Hipoksi Algılama

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the fly as an experimental system include its genetic tractability, short life span and the possibility to observe and quantitatively analyze complex behaviors. The expression of disease-linked genes in specific neuronal populations of the Drosophila brain, can be used to model human neurodegenerative diseases such as Parkinson's and Alzheimer's 5.
Dopaminergic (DA) neurons are among the most vulnerable neuronal populations in the aging human brain. In Parkinson's disease (PD), the most common neurodegenerative movement disorder, the accelerated loss of DA neurons leads to a progressive and irreversible decline in locomotor function. In addition to age and exposure to environmental toxins, loss of DA neurons is exacerbated by specific mutations in the coding or promoter regions of several genes. The identification of such PD-associated alleles provides the experimental basis for the use of Drosophila as a model to study neurodegeneration of DA neurons in vivo. For example, the expression of the PD-linked human &alpha;-synuclein gene in Drosophila DA neurons recapitulates some features of the human disease, e.g. progressive loss of DA neurons and declining locomotor function 2. Accordingly, this model has been successfully used to identify potential therapeutic targets in PD 8.
Here we describe two assays that have commonly been used to study age-dependent neurodegeneration of DA neurons in Drosophila: a climbing assay based on the startle-induced negative geotaxis response and tyrosine hydroxylase immunostaining of whole adult brain mounts to monitor the number of DA neurons at different ages. In both cases, in vivo expression of UAS transgenes specifically in DA neurons can be achieved by using a tyrosine hydroxylase (TH) promoter-Gal4 driver line 3, 10.

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Here we describe two assays that have been established to study age-dependent neurodegeneration of dopaminergic (DA) neurons in Drosophila: the climbing/startle-induced negative geotaxis assay which allows to study the functional effects of DA neurons degeneration and the tyrosine hydroxylase immunostaining which is used to identify and count DA neurons in whole brain mounts.

Içinde Nörodejeneratif fenotipleri değerlendirilmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Tırmanma Tahliller tarafından Dopaminerjik nöronlar ve Tüm Beyin immün

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult neural stem cells in vitro. These assays can be used to compare the precursor potential of cells isolated from genetically different or differentially treated animals&#160;to determine the effects of exogenous factors on neural precursor cell proliferation and differentiation and to generate neural precursor cell lines that can be assayed over continuous passages. The neurosphere assay is traditionally used for the post-hoc identification of stem cells, primarily due to the lack of definitive markers with which they can be isolated from primary tissue&#160;and has the major advantage of giving a quick estimate of precursor cell numbers in brain tissue derived from individual animals. Adherent monolayer cultures, in contrast, are not traditionally used to compare proliferation between individual animals, as each culture is generally initiated from the combined tissue of between 5-8 animals. However, they have the major advantage that, unlike neurospheres, they consist of a mostly homogeneous population of precursor cells and are useful for following the differentiation process in single cells. Here, we describe, in detail, the generation of neurosphere cultures and, for the first time, adherent cultures from individual animals. This has many important implications including paired analysis of proliferation and/or differentiation potential in both the subventricular zone (SVZ) and dentate gyrus (DG) of treated or genetically different mouse lines, as well as a significant reduction in animal usage.

Here we describe a detailed protocol for the simultaneous generation of neural precursor cell cultures, as either adherent monolayers or neurospheres, from the subventricular zone and dentate gyrus of individual adult mice.

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler&#39;den Kök Hücre

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

In Koku Reseptör Nöronlar Tüm Dağı ile immün<em&gt; Drosophila</em&gt; Anten

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene expression in the mouse brain. Here we describe a technique first introduced by Passini and Wolfe for direct intracranial delivery of virally-encoded transgenes into the neonatal mouse brain. In its most basic form, the procedure requires only an ice bucket and a microliter syringe. However, the protocol can also be adapted for use with stereotaxic frames to improve consistency for researchers new to the technique. The method relies on the ability of adeno-associated virus (AAV) to move freely from the cerebral ventricles into the brain parenchyma while the ependymal lining is still immature during the first 12-24 hr after birth. Intraventricular injection of AAV at this age results in widespread transduction of neurons throughout the brain. Expression begins within days of injection and persists for the lifetime of the animal. Viral titer can be adjusted to control the density of transduced neurons, while co-expression of a fluorescent protein provides a vital label of transduced cells. With the rising availability of viral core facilities to provide both off-the-shelf, pre-packaged reagents and custom viral preparation, this approach offers a timely method for manipulating gene expression in the mouse brain that is fast, easy, and far less expensive than traditional germline engineering.

Here we demonstrate a technique for widespread neuronal transduction by intraventricular injection of adeno-associated virus into the neonatal mouse brain. This method provides a rapid and easy way to attain lifelong expression of virally-delivered transgenes.

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at the synaptic level. The Active Zone (AZ) is the region at the presynaptic membrane that mediates neurotransmitter release and is composed of a dense collection of scaffold proteins. AZs of Drosophila melanogaster (Drosophila) photoreceptors undergo molecular remodeling after prolonged exposure to natural ambient light. Thus the level of neuronal activity can rearrange the molecular composition of the AZ and contribute to the regulation of the functional output.
Starting from the light exposure set-up preparation to the immunohistochemistry, this protocol details how to quantify the number, the spatial distribution, and the delocalization level of synaptic molecules at AZs in Drosophila photoreceptors. Using image analysis software, clusters of the GFP-fused AZ component Bruchpilot were identified for each R8 photoreceptor (R8) axon terminal. Detected Bruchpilot spots were automatically assigned to individual R8 axons. To calculate the distribution of spot frequency along the axon, we implemented a customized software plugin. Each axon&#39;s start-point and end-point were manually defined and the position of each Bruchpilot spot was projected onto the connecting line between start and end-point. Besides the number of Bruchpilot clusters, we also quantified the delocalization level of Bruchpilot-GFP within the clusters. These measurements reflect in detail the spatially resolved synaptic dynamics in a single neuron under different environmental conditions to stimuli.

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Here we show how to quantify the number and spatial distribution of synaptic active zones in Drosophila melanogaster&#160;photoreceptors, highlighted with a genetically encoded molecular marker, and their modulation after prolonged exposure to light.

Synaptic Modülasyon Analizi<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Uzun süreli ışığa maruz kaldıktan sonra Fotoreseptörler

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

Quadruple Immunostaining of the Olfactory Bulb for Visualization of Olfactory Sensory Axon Molecular Identity Codes

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory Sensory Neuron (OSN) is a bipolar cell with a single dendrite and a single unbranched axon. An OSN expresses only one Olfactory Receptor (OR) gene, OSNs expressing a given type of OR converge their axons to a few sets of invariant glomeruli in the Olfactory Bulb (OB). A remarkable feature of OSN projection is that the expressed ORs play instructive roles in axonal projection. ORs regulate the expression of multiple axon-sorting molecules and generate the combinatorial molecular code of axon-sorting molecules at the OSN axon termini. Thus, to understand the molecular mechanisms of OR-specific axon guidance mechanisms, it is vital to characterize their expression profiles at the OSN axon termini within the same glomerulus. The aim of this article was to introduce methods for collecting as many glomeruli as possible on a single OB section and for performing immunostaining using multiple antibodies. This would allow the comparison and analysis of the expression patterns of axon-sorting molecules without staining variation between OB sections.

Olfactory sensory neurons express a wide variety of axon-sorting molecules to establish proper neural circuitry. This protocol describes an immunohistochemical staining method to visualize combinatorial expressions of axon-sorting molecules at the axon termini of olfactory sensory neurons.

Koku Meşfatının Olfaktör Duyusal Akson Moleküler Kimlik Kodlarının Görselleştirilmesi İçin Dörtlü İmmün Sulanması

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory ...

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay between perturbed BBB homeostasis and the pathogenesis of brain disorders needs further investigation, the development and validation of a reliable procedure to accurately detect BBB alterations may be crucial and represent a useful tool for potentially predicting disease progression and developing targeted therapeutic strategies.
Here, we present an easy and efficient procedure for evaluating BBB leakage in a neurodegenerative condition like that occurring in a preclinical mouse model of Huntington disease, in which defects in the permeability of BBB are clearly detectable precociously in the disease. Specifically, the high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin, which is able to cross the BBB only when the latter is impaired, is acutely infused into a mouse jugular vein and its distribution in the vascular or parenchymal districts is then determined by fluorescence microscopy.
Accumulation of green fluorescent-albumin in the brain parenchyma functions as an index of aberrant BBB permeability and, when quantitated by using Image J processing software, is reported as Green Fluorescence Intensity.

In this study, we present an easy and efficient procedure for evaluating the disruption of the blood-brain barrier under neurodegenerative conditions. To achieve our objective, we infused high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin into mouse jugular vein and evaluated its leakage into the brain parenchyma by fluorescence microscopy.

Kan - beyin bariyerini geçirgenliği FITC etiketli albümin nörodejeneratif hastalık, bir fare modeli intravenöz infüzyonu tarafından değerlendirilmesi

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. Single-molecule imaging is gaining momentum as it provides exceptional access to the visualization of individual molecules in living cells. Here, we describe a technique that we developed to perform single-particle tracking photo-activated localization microscopy (sptPALM) in Drosophila larvae. Synaptic communication relies on key presynaptic proteins that act by docking, priming, and promoting the fusion of neurotransmitter-containing vesicles with the plasma membrane. A range of protein-protein and protein-lipid interactions tightly regulates these processes and the presynaptic proteins therefore exhibit changes in mobility associated with each of these key events. Investigating how mobility of these proteins correlates with their physiological function in an intact live animal is essential to understanding their precise mechanism of action. Extracting protein mobility with high resolution in vivo requires overcoming limitations such as optical transparency, accessibility, and penetration depth. We describe how photoconvertible fluorescent proteins tagged to the presynaptic protein Syntaxin-1A can be visualized via slight oblique illumination and tracked at the motor nerve terminal or along the motor neuron axon of the third instar Drosophila larva.

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

Here we illustrate how single molecule photo-activated localization microscopy can be carried out on the motor nerve terminal of a live Drosophila melanogaster third instar larva.