Çalışma "Yatırımlar gelecek için" LABEX SIGNALIFE program sayesinde (başvuru ANR-11-LABX-0028-01) (Ulusal araştırma ajansı, ANR) Fransız hükümeti tarafından desteklenen ve K. hibe tarafından Derneği'nden D. W. pour la Recherche sur le kanser, Fondation de France ve kanser INSERM planı. D. B. ve A. V. Arkadaş grupları sırasıyla Fondation pour la Recherche Médicale ve Nice şehir aldı. Philips tarafından sağlanan echocardiograph ve dönüştürücü nazik idi. A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar-Karatepe, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini ve S. M. Wagner onların yetenekli teknik yardım için teşekkür ederiz.

ilgili Kurumsal ve Fransız hayvan refah yasaları, kuralları ve ilkeleri ile uyumlu burada açıklanan deneyler yapılmıştır. Fransız Etik Komitesi tarafından onaylanmış olan (Comité Institutionnel d &#39; ki Pour l &#39; hayvan de Laboratoire; sayı NCE/2012-106).
 1. Ekokardiyografi <ol><li>kullanarak uygun konumlandırma emin olmak için bir standart laboratuvar denge hafifçe kuyruğundan tutarak farenin vücut ağırlığını belirlemek.</li>
	<li>50 mg/kg Fentobarbital 25 , 26 mayi (IP) enjeksiyonu ile hayvan anestezi. 
	Not: aynı iletişim kuralını çalışma kullanılırsa, anestezi başka türlü kullanılabilir. Avantajları ve dezavantajları aşağıda tartışılacaktır.</li>
	<li>Fare geri kendi kafes ve bekleyin kadar tepkisiz yerine, sürekli nefes gösterir ve arka ayak refleks yok. Bu test etmek için bir ayak hafifçe sıkmak ve bacak hala geri çeker olup olmadığını gözlemlemek.</li>
	<li>Sol tarafındaki Toraks ve ticari bir kemirgen tıraş makinesi kullanarak sol koltuk altı tıraş. 
	Not: Ekokardiyografik ölçümdeki girişimi engellemek için iyi fare saç tamamen kaldırılması için adanmış bir kemirgen tıraş makinesi kullanımına izin verir. Onlar genellikle, o uyanır sonra hangi hayvan rahatsız kokulu gibi ticari saç kaldırma krem veya çözümleri, kaçınılmalıdır. Isı kaybı arttıkça önlemek aşırı tıraş.</li>
	<li>40-42 ° C-12 kafa ile bir sığ sol taraflı pozisyonda ayarla bir sıcak yastık üzerinde uyku hayvan koymak o &#39; saat ve 6 kuyruk o &#39; saat. Sol kol, sol ayak ve kuyruk bant ile düzeltmek.</li>
	<li>Uygula önceden Ekokardiyografi jel traş göğüs ve dönüştürücü başkanı üzerine ısındı.</li>
	<li>Dönüştürücü parasternal sağdan sola, Papiller kas düzeyde bir iki boyutlu (2D) parasternal uzun eksen görünümü elde etmek için boynun sağ tarafında yönlendiren yerleştirin. Dönüştürücü 90 ° papilary kas düzeyinde bir kısa-eksen görünümü elde etmek için saat yönünde çevir. Görüntü kalitesi veya kare hızını en üst düzeye çıkarmak için en az derinlik ayarı ve zoom kullanın. Tarama hızını maksimuma ayarlayın.
	Bu ayar, farklı yakınlaştırma ve derinlik ayar seçenekleri elde etmek için <ol><li>, makine ve yazılıma bağlı olarak kullanılabilir. Kayıt 2D güdümlü M-modu kısa-eksenindeki 27 görüntüleri. şekil 1A ve B 27 için başvurun. 
		Not: göğüs için aşırı basınç uygulamaktan kaçının bu bradikardiyi neden dikkatli ol.</li>
	</ol></li> <li>Kayıt en az 3 Serisi 3 kalp beat cine döngüler her hayvan için. 
	Not: Bu çalışmada kullanılan echocardiograph yazılım için basın &#34; edinme/Kaydet &#34; yalnızca bir kez düğme. Bu metodoloji echocardiograph bu yazılım ile özeldir. Diğer yazılım paketleri ile farklı makineleri kullanılabilir.</li>
	Başarılı kayıtları, silme Ekokardiyografi kapalı fare Toraks, Isıtma yastığını ve dönüştürücü jel sonra <li>. Bacaklarda ve kuyruk bandı çıkarın.</li>
	<li>Fare yukarı uyanır kadar gereksiz ışık pozlama ve ısı kaybına yol açmamak için doku ile kaplı Isıtma yastığını gözlem altında</li>
	<li>Hayvan geri onun kafes içinde yerine.</li>
	<li>Analiz parasternal kısa eksen görünümü sol ventrikül (LV) boyutu ve işlevi belirlemek için M-modu görüntüleri kaydetti. Sistol ve diastole (LVAWs ve LVAWd), LV iç son sistolik ve diyastolik uç çapı (LVIDs ve LVIDd) ve Sistol ve diastole (LVPWs ve LVPWd) kullanarak LV posterior duvar kalınlığı (LVPW) LV ön duvar kalınlığını ölçmek stok imge doku-kan arabirimde tanımlaması.</li>
	<li>Belirgin maksimal LV diyastolik boyutları anda diyastolik boyutlarını ölçün ve son sistolik boyutları en ön sistolik gezi LV posterior duvar saatinde LV. Dokunmatik ekran dokunun &#34; analiz &#34; simgesini ve sonra &#34; LVAWd &#34; simgesi. Sağ ventrikül boşluğuna ve diastole LV anterior duvarda arasında arayüz elektronik Kaliper çubuğuyla.</li>
	<li>LV ön duvar ve LV diyastolik ön duvar kalınlığı elde etmek için LV boşluğu arasında arayüz elektronik Kaliper çubuğuyla; yazılım doğrudan LV iç end-diastolik ölçüm için geçiş.</li>
	<li>LV kavite ve LV LV iç son diyastolik çap elde etmek için posterior duvar arasında arayüz Kaliper çubuğuyla; yazılım LV posterior duvar kalınlığı ölçümü için geçiş.</li>
	<li>LV posterior duvar ve LV diyastolik posterior duvar kalınlığı elde etmek için kalp zarını arasında arayüz Kaliper getirin. Dokunmatik ekran dokunun LV sistolik boyutları için &#34; LVAWs &#34; simgesi ve Sistol pozisyonda sağ ventrikül boşluğuna ve LV ön duvar arasında arayüz üzerinde elektronik Kaliper.</li>
	<li>Elektronik Kaliper LV ön duvar ve LV sistolik ön duvar kalınlığı elde etmek için LV boşluğu arasında arayüz üzerinde konumlandırın. LV iç son sistolik çapı ve LV sistolik posterior duvar kalınlığı için yukarıda açıklandığı gibi tekrarlayın. Ekokardiyografi Amerikan toplum tarafından kabul edilen öncü Kongre endocardial ve epicardial sınırları 13 , 27 izlemek için kullanın. 
	Not: Önceki ölçümleri kullanarak LV contractile işlev parametreleri otomatik olarak hesaplanır. LV (FS) kısaltılması kesirli FS (%) tanımlanan [(LVIDd-LVIDs)/LVIDd =] x 100. LV ejeksiyon fraksiyonu (EF) değiştirilmiş Teicholz formülüyle hesaplanır nerede EF (%) = [(LVIDd3-LVIDs3)/LVIDd 3] x 100 12. şekil 1A ve B başvurun.</li>
	<li>CD'ler veya USB bellek sopa verileri depolamak ve yedek kopyalarını.</li>
	<li>Alma, analiz ve uygun yazılımı kullanarak veri ihracat. 
	Not: Bu temel ölçü birimlerinin sonra deneme duraklatılmış. Nakavt hayvanlar ve vahşi-türü littermates arasında doğrudan bir karşılaştırma yapmak, histolojik analizler 6 ile devam edin. CRE-ERT2 için; füme balığı/füme balığı fare hatları, açıklanan 5 , 24 olarak ı.p. enjeksiyonla tamoxifen indüksiyon ile ertesi gün devam. Deneysel akut miyokard infarktüsü sol koroner arter 5 , 28 ligasyonu tarafından inducing takdirde doğrudan Ekokardiyografi ölçümleri sonra ameliyat yapılır zaman fareler anestezi altında bulunmaktadır. Aksi takdirde, anestezi iki tur arasında bir haftanın en az bir gecikme ameliyat sonrası ölümcül hızını sınırlamak için saklanması gerekebilir.</li>
</ol> 2. Histolojik değerlendirme için kalp örnekleri hazırlanması <ol><li>kurban hayvanlar tarafından servikal çıkığı. Onların beden ağırlık ölçmek. Göğüs ve karın bir % 70 alkol bez kullanarak dezenfekte.</li>
	<li>Enine bir kesi Cilt 1 cm distal göğüs kemiği için yapmak. Künt forseps kullanarak, baş yönde hareket Toraks cilt kaldırın. Göğüs kemiği hafifçe iyi Forseps ile tutun ve iyi makas künt sonuna ekleyerek diyafram açın.</li>
	<li>Göğüs kafesi her iki tarafta göğüs kemiği paralel kesti. Göğüs kemiği kafa yönünde taşır. Kalp göğüs bulun. İyi Forseps ile kalp damar gövde tutun ve iyi makas kullanarak aşağıda kesti.</li>
	<li>Sandığı aç ve toraks dışında tüm kalp tüketim, kalp ağırlık ölçmek ve bir kalp vücut ağırlığı oranı 4 , 5 , 6 , kurmak 23 , 29 , 30 .</li>
	<li>Düzeltme 2 mL % 10 tarafsız tampon formalin çözeltisi 15 mL tüpler kalbinde gecede, 4 ° C. 
	Dikkat: tehlike! Formalin çözümleri ile iş bir kimyasal duman mahallede yapılmalıdır; eldiven ve koruyucu gözlük. 
	Not: arabellek oluşturma formalin çözümler için farklı tedarikçiler ile değişir gibi çalışma boyunca aynı tedarikçi kullanın.</li>
	<li>Ertesi gün, kalpleri transvers düzlemde ortasında, kesilmiş ve parafin yerleştirme, kaset içine aktarmak otomatik bir gömme cihazı kullanarak patoloji laboratuarında yapıldığı.</li>
	<li>Gerçekleştirmek kesit.
	<ol><li>Bölüm parafin blok bir microtome ve onları 40 ° C suda banyo içeren distile su kayan nokta kullanarak 3 µm kalınlığında.</li>
		<li>Bölümleri slaytlar üzerine aktarın. Kuru gecede slaytlara 37 ° C kuluçka makinesine izin ve kullanım için hazır kadar 4 ° C'de depolayabilirsiniz. 
		Not: kullanıcı (Adım 3) boyama için hazır olması ne kadar protokol burada duraklatılmış.</li>
	</ol></li> <li>Deparaffinize ve suyla temasa doku slaytlar.
	<ol><li>Kavanoz cam ekler parafin eritmek 10 dk 55 ° C fırında ile boyama slaytları yerleştirin.</li>
		<li>Deparaffinize 200 ml Ksilen veya Ksilen yerine 5 min için iki değişiklik slaytları. 
		Dikkat: Son derece yanıcı ve zehirli! Kimyasal duman mahallede iş; eldiven ve koruyucu gözlük.</li>
		<li>200 mL % 100 alkol slaytları aktarın. 3 min için iki değişiklik yapmak ve bir kez 200 mL % 95 alkol 3 dakika süreyle aracılığıyla transfer 
		Dikkat: Son derece yanıcı! Ateşleme kaynaklarından uzak tutun; sigara içmek yasak.</li>
		<li>200 mL fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) 5 min için içinde iki defa durulayın ve adım 3, 4 veya 5'e geçin.</li>
	</ol></li></ol> 3. Hematoksilen ve Eozin boyama <ol><li>Slaytlar onların bölümlerde distile su ile durulama.</li>
	<li>8 dakika süreyle Hematoksilen Çözümle çekirdeklerin leke</li>
	<li>Musluk suyu 10 dakika süreyle çalışan durulama</li>
	<li>2 min. Eozin çözüm ile leke</li>
	<li>Dehydrate % 100 etanol (alkol) 2 min için üç kez. Ksilen veya Ksilen yerine 2 min için üç kez temizleyin. Montaj montaj Ksilen tabanlı ortamda.</li>
	<li>Fotoğraf slaytlar ve boyuna interventricular septum bölümlerini çekirdeğinde düzeyde cardiomyocyte çapı ölçmek. Bölüm ve kalp başına üç bölüm başına en az 100 hücre ölçmek.</li>
</ol> 4. WGA boyama <ol><li>Adım 2.7 tetramethylrhodamine (ya da diğer floresan boyalar) ile elde edilen slaytlar kuluçkaya-nemli bir oda oda sıcaklığında 60 dk için WGA (1: 100 PBS içinde) Birleşik.</li>
	<li>Yıkama üç kez PBS ile 5 dk her.</li>
	<li>Dağı ile floresan DAPI içeren ortam takma. Stok Analiz önce karanlıkta 4 ° C'de. 
	Dikkat: Göz koruması ve uyumlu kimyasal dayanıklı eldiven giymek.</li>
	<li>Fotoğraf slaytları.
	<ol><li>Kullanım Floresans epi-aydınlatma ve filtre ile donatılmış bir mikroskop DAPI ve tetramethylrhodamine (Tablo malzemeler için başvurmak) için ayarlar. Maksimum diyafram otomatik poz için parlaklığı ayarlayın.</li>
		<li>Edinme resimleri, mavi ve kırmızı kanalları için 400 x büyütme ayrı. Görüntüleri ImageJ içinde açın. Parlaklığı ayarlayın ve gerekirse kontrast (görüntü &#62; ayarla &#62; Parlaklık/Kontrast).</li>
		<li>Ayarla her görüntüyü 8 bitlik (görüntü &#62; türü &#62; 8-bit). DAPI ve WGA görüntüleri yerleşimi. Mavi kanal DAPI ve kırmızı kanalı için WGA için yeşil ve gri kanalları yok olarak ayarlayın (görüntü &#62; renk &#62; birleştirme kanalları) 31.</li>
	</ol></li> <li>Cardiomyocyte çapları interventricular septum enine bölümlerini çekirdeğinde düzeyde belirlemek.
	<ol><li>Tanımla ImageJ Albümdeki ölçeğini. Bu amaçla, (Örneğin, bir hemasitometre odası kalp bölümler aynı büyütmede; adım 4.4) bilinen boyutlardaki fotoğraf.</li>
		<li>Başından sonuna kadar bir çizgi çizmek için normal amortisman aracı kullanmak bilinen yapısı (Analyze &#62; ayarla ölçek). 
		Not: Olan uzaklığını piksel otomatik olarak görüntülenir; bilinen uzaklık ve uzunluk birimi girilmesi gerekir. Cardiomyocyte ölçümler çekirdek düzeyde devam.</li>
		<li>WGA-pozitif zar DAPI pozitif çekirdeği ile WGA-pozitif hücre zarının ters siteye düz bir çizgi çizmek (Analyze &#62; ölçü birimi). Sonuçları penceresinde uzunluğu değerleri anlamlı sayıda ondalık basamak bulunduğundan emin olun (Analyze &#62; ayarla ölçümleri &#62; ondalık basamak).</li>
		<li>Bölüm ve kalp başına üç bölüm başına en az 100 hücre ölçmek. Sonuçları Excel'e ver (tıklatın sonuçlarına &#62; dosyayı &#62; olarak kaydedin &#62; .csv) 6 , 31.</li>
	</ol></li></ol> 5. Pecam-1 Immunostaining <ol><li>antijen maskesini gerçekleştirmek.
	Bir düdüklü tencere <ol><li>ekleyin 1 600 mL sodyum sitrat arabelleğe (10 mM sodyum sitrat, %0.05 ara 20, pH 6.0). Ocağın üzerinde düdüklü tencere yerleştirin ve tam güç açın. Bu noktada düdüklü tencere kapağı güvenli olmayana; Sadece üst üzerinde bekletin. 
		Dikkat: Sıcak!</li>
		Sodyum sitrat arabellek kaynar bir kez <li>düdüklü tencere 2.5 adımından slaytları aktarın. Düdüklü tencere kapağı güvenli. En kısa zamanda tam basınç Ocak ulaşmıştır için 7 dakika bekleyin. 7 dk. geçen zaman, ocağın açmak ve boş bir lavaboda düdüklü tencere yerleştirin. Basınç yayın Vana etkinleştirmek ve soğuk su Ocak üzerinde çalıştırın. Bir kez de-basınçlı, kapağı açın ve soğuk su içine Ocak 5 dk. yer için slaytları 200 mL PBS çalıştırın. 
		Not: her ne kadar aşırı ısınma riski artar alternatif olarak, mikrodalga antijen maskesini, kullanılabilir gibi.</li>
	</ol></li> <li>Kullanımı % 0,3 hidrojen peroksit blok endojen peroksidaz aktivitesi 5 dakika süreyle metanol içinde durulama slaytlar için üç kez 2 min için PBS içinde her 200 mL. 
	Dikkat: Yanıcı ve toksik!</li>
	<li>15dk Serumda bir avidin bloğu (4 damla 1 ml) da içeren seyreltilmiş normal engelleme (% 5 normal keçi serum içinde PBS) slaytlarını kuluçkaya.</li>
	<li>Dikkatle sıvı bölümlerden dokunun ve onları kuluçkaya Pecam-1 antikor tavşan üzerinden, seyreltilmiş 1:50 % 2.5 normal keçi serum ve biotin blok mL başına 4 damla içeren PBS ile. Slaytları gecede nemli bir Odası 4'te kuluçkaya ° C.</li>
	<li>200 mL PBS slaytlar 5 min için üç kez yıkayın. Biotinylated keçi Anti-tavşan IgG antikor seyreltilmiş 1: 200, oda sıcaklığında 1 h için % 2.5 normal keçi serum içeren PBS içinde bölümlerle kuluçkaya. 200 mL PBS slaytlar 5 min için üç kez yıkayın.</li>
	<li>t kuluçkayao bölümleri için 20 dk (Reaktif A ve Reaktif B kombine 30 dakika önceki gerek kullanmak için) bir peroksidaz avidin/biotin tabanlı sistemi ile. 200 mL PBS slaytlar 5 min için üç kez yıkayın.</li>
	<li>Erimesi 1 3.3 &#39;-diaminobenzidine (DAB) ve 1 üre hidrojen peroksit tablet 5 mL çift distile su. Yaklaşık 3 dk., renk geliştirme dikkatle izlenmesi için DAB çözüm bölümlerle kuluçkaya. Yavaşça 200 mL PBS slaytları yıkayarak renk reaksiyonu durdurmak. 
	Dikkat: Kanserojen; kimyasal dayanıklı eldiven giymek!</li>
	<li>Çekirdeği Hematoksilen ile 6 min için counterstain. 2 dk. Dehydrate 2 min için üç kez musluk suyu 200 mL % 100 alkol durulama. Üç kez 2 min için Ksilen veya Ksilen yerine içinde her 200 mL temizleyin. Montaj montaj Ksilen tabanlı ortamda.</li>
	<li>Slaytlar (en az on alanları, her kalp interventricular septum üzerinden 40 x büyütme) Fotoğraf ve serbestçe kullanılabilir ImageJ yazılım 31 kullanarak Pecam-1 alan yoğunluğunu ölçmek. Renk deconvolution 32 eklenti DAB ve Hematoksilen ve görüntü kontrastı ile aynı düzeye ayarlayın. 
	Not: kahverengi ve mor/mavi renk var zorluklar ile renk deconvolution neden olabilir, önemli spektral çakışma durumunda bir Hematoksilen çözüm açık, açık mavi nükleer boyama elde etmek için farklı markalar deneyebilirsiniz. Alternatif olarak, ayirt veya el ile kılcal damarlar sayma yerine olabilir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+engineering+of+animals:+ethical+issues,+including+welfare+concerns.">Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns.</a> Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).</li><li>Karl, T., Pabst, R., von H&#246;rsten, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+phenotyping+of+mice+in+pharmacological+and+toxicological+research.">Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological research.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (1), 69-83 (2003).</li><li>Phoon, C. K., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+Imaging+in+Mice.">Cardiovascular Imaging in Mice.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 6 (1), 15-38 (2016).</li><li>Wagner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+beta+stimulation+induces+rapid+cardiac+growth+and+angiogenesis+via+direct+activation+of+calcineurin.">Peroxisome proliferator-activated receptor beta stimulation induces rapid cardiac growth and angiogenesis via direct activation of calcineurin.</a> Cardiovasc Res. 83 (1), 61-71 (2009).</li><li>Wagner, K. D., Vukolic, A., Baudouy, D., Michiels, J. F., Wagner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+Conditional+Vascular-Specific+Overexpression+of+Peroxisome+Proliferator-Activated+Receptor+Beta/Delta+Leads+to+Rapid+Cardiac+Hypertrophy.">Inducible Conditional Vascular-Specific Overexpression of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Beta/Delta Leads to Rapid Cardiac Hypertrophy.</a> PPAR Res. 2016, 7631085 (2016).</li><li>Ghanbarian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dnmt2/Trdmt1+as+Mediator+of+RNA+Polymerase+II+Transcriptional+Activity+in+Cardiac+Growth.">Dnmt2/Trdmt1 as Mediator of RNA Polymerase II Transcriptional Activity in Cardiac Growth.</a> PLoS One. 11 (6), e0156953 (2016).</li><li>Meguro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporine+attenuates+pressure-overload+hypertrophy+in+mice+while+enhancing+susceptibility+to+decompensation+and+heart+failure.">Cyclosporine attenuates pressure-overload hypertrophy in mice while enhancing susceptibility to decompensation and heart failure.</a> Circ Res. 84 (6), 735-740 (1999).</li><li>de Ara&#250;jo, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+and+moderate+aerobic+training+before+allergic+asthma+induction+reduces+lung+inflammation+and+remodeling.">Regular and moderate aerobic training before allergic asthma induction reduces lung inflammation and remodeling.</a> Scand J Med Sci Sports. 26 (11), 1360-1372 (2016).</li><li>Benavides-Vallve, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+strategies+for+echocardiographic+evaluation+of+left+ventricular+function+in+a+mouse+model+of+long-term+myocardial+infarction.">New strategies for echocardiographic evaluation of left ventricular function in a mouse model of long-term myocardial infarction.</a> PLoS One. 7 (7), e41691 (2012).</li><li>Colazzo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+left+atrium+and+left+atrial+appendage+structure+and+function:+echocardiographic+and+morphologic+evaluation.">Murine left atrium and left atrial appendage structure and function: echocardiographic and morphologic evaluation.</a> PLoS One. 10 (4), e0125541 (2015).</li><li>Pachon, R. E., Scharf, B. A., Vatner, D. E., Vatner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+anesthetics+for+assessing+left+ventricular+systolic+function+by+echocardiography+in+mice.">Best anesthetics for assessing left ventricular systolic function by echocardiography in mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308 (12), H1525-H1529 (2015).</li><li>Gao, S., Ho, D., Vatner, D. E., Vatner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiography+in+Mice.">Echocardiography in Mice.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 1, 71-83 (2011).</li><li>Mor-Avi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+evolving+echocardiographic+techniques+for+the+quantitative+evaluation+of+cardiac+mechanics:+ASE/EAE+consensus+statement+on+methodology+and+indications+endorsed+by+the+Japanese+Society+of+Echocardiography.">Current and evolving echocardiographic techniques for the quantitative evaluation of cardiac mechanics: ASE/EAE consensus statement on methodology and indications endorsed by the Japanese Society of Echocardiography.</a> J Am Soc Echocardiogr. 24 (3), 277-313 (2011).</li><li>Collins, K. A., Korcarz, C. E., Lang, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+echocardiography+for+the+phenotypic+assessment+of+genetically+altered+mice.">Use of echocardiography for the phenotypic assessment of genetically altered mice.</a> Physiol Genomics. 13 (3), 227-239 (2003).</li><li>Rottman, J. N., Ni, G., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+evaluation+of+ventricular+function+in+mice.">Echocardiographic evaluation of ventricular function in mice.</a> Echocardiography. 24 (1), 83-89 (2007).</li><li>Hart, C. Y., Burnett, J. C., Redfield, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+avertin+versus+xylazine-ketamine+anesthesia+on+cardiac+function+in+normal+mice.">Effects of avertin versus xylazine-ketamine anesthesia on cardiac function in normal mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 281 (5), H1938-H1945 (2001).</li><li>Moran, C. M., Thomson, A. J., Rog-Zielinska, E., Gray, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+echocardiography+in+the+assessment+of+cardiac+physiology+and+disease+in+preclinical+models.">High-resolution echocardiography in the assessment of cardiac physiology and disease in preclinical models.</a> Exp Physiol. 98 (3), 629-644 (2013).</li><li>Fayssoil, A., Tournoux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+left+ventricular+function+in+mice+with+Doppler+echocardiography.">Analyzing left ventricular function in mice with Doppler echocardiography.</a> Heart Fail Rev. 18 (4), 511-516 (2013).</li><li>Schoensiegel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+echocardiography+in+conscious+mice:+training+and+primary+screens.">High throughput echocardiography in conscious mice: training and primary screens.</a> Ultraschall Med. 32, S124-S129 (2011).</li><li>Yariswamy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac-restricted+Overexpression+of+TRAF3+Interacting+Protein+2+(TRAF3IP2)+Results+in+Spontaneous+Development+of+Myocardial+Hypertrophy,+Fibrosis,+and+Dysfunction.">Cardiac-restricted Overexpression of TRAF3 Interacting Protein 2 (TRAF3IP2) Results in Spontaneous Development of Myocardial Hypertrophy, Fibrosis, and Dysfunction.</a> J Biol Chem. 291 (37), 19425-19436 (2016).</li><li>Jara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac-Specific+Disruption+of+GH+Receptor+Alters+Glucose+Homeostasis+While+Maintaining+Normal+Cardiac+Performance+in+Adult+Male+Mice.">Cardiac-Specific Disruption of GH Receptor Alters Glucose Homeostasis While Maintaining Normal Cardiac Performance in Adult Male Mice.</a> Endocrinology. 157 (5), 1929-1941 (2016).</li><li>Kerr, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+function+of+adult+vasculature+is+sustained+by+Akt/Jagged1+signalling+axis+in+endothelium.">Stability and function of adult vasculature is sustained by Akt/Jagged1 signalling axis in endothelium.</a> Nat Commun. 7, 10960 (2016).</li><li>Wagner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+vessel+development+requires+activation+of+the+TrkB+neurotrophin+receptor+by+the+Wilms'+tumor+transcription+factor+Wt1.">Coronary vessel development requires activation of the TrkB neurotrophin receptor by the Wilms' tumor transcription factor Wt1.</a> Genes Dev. 19 (21), 2631-2642 (2005).</li><li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Wilms'+tumour+suppressor+Wt1+is+a+major+regulator+of+tumour+angiogenesis+and+progression.">The Wilms' tumour suppressor Wt1 is a major regulator of tumour angiogenesis and progression.</a> Nat Commun. 5, 5852 (2014).</li><li>Yang, X. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+assessment+of+cardiac+function+in+conscious+and+anesthetized+mice.">Echocardiographic assessment of cardiac function in conscious and anesthetized mice.</a> Am J Physiol. 277 (5 Pt 2), H1967-H1974 (1999).</li><li>Rottman, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+changes+in+ventricular+function+assessed+echocardiographically+in+conscious+and+anesthetized+mice.">Temporal changes in ventricular function assessed echocardiographically in conscious and anesthetized mice.</a> J Am Soc Echocardiogr. 16 (11), 1150-1157 (2003).</li><li>Qui&#241;ones, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+quantification+of+Doppler+echocardiography:+a+report+from+the+Doppler+Quantification+Task+Force+of+the+Nomenclature+and+Standards+Committee+of+the+American+Society+of+Echocardiography.">Recommendations for quantification of Doppler echocardiography: a report from the Doppler Quantification Task Force of the Nomenclature and Standards Committee of the American Society of Echocardiography.</a> J Am Soc Echocardiogr. 15 (2), 167-184 (2002).</li><li>van Laake, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+cell+therapy+and+assessment+of+cardiac+function+using+magnetic+resonance+imaging+in+a+mouse+model+of+myocardial+infarction.">Monitoring of cell therapy and assessment of cardiac function using magnetic resonance imaging in a mouse model of myocardial infarction.</a> Nat Protoc. 2 (10), 2551-2567 (2007).</li><li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Wilms'+tumor+suppressor+Wt1+is+expressed+in+the+coronary+vasculature+after+myocardial+infarction.">The Wilms' tumor suppressor Wt1 is expressed in the coronary vasculature after myocardial infarction.</a> FASEB J. 16 (9), 1117-1119 (2002).</li><li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+induction+and+inheritance+of+epigenetic+cardiac+hypertrophy+in+the+mouse.">RNA induction and inheritance of epigenetic cardiac hypertrophy in the mouse.</a> Dev Cell. 14 (6), 962-969 (2008).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li><li>Ruifrok, A. C., Johnston, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+histochemical+staining+by+color+deconvolution.">Quantification of histochemical staining by color deconvolution.</a> Anal Quant Cytol Histol. 23 (4), 291-299 (2001).</li><li>Lazzeroni, D., Rimoldi, O., Camici, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Left+Ventricular+Hypertrophy+to+Dysfunction+and+Failure.">From Left Ventricular Hypertrophy to Dysfunction and Failure.</a> Circ J. 80 (3), 555-564 (2016).</li><li>Ismail, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistologic+labeling+of+murine+endothelium.">Immunohistologic labeling of murine endothelium.</a> Cardiovasc Pathol. 12 (2), 82-90 (2003).</li><li>Benton, R. L., Maddie, M. A., Minnillo, D. R., Hagg, T., Whittemore, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Griffonia+simplicifolia+isolectin+B4+identifies+a+specific+subpopulation+of+angiogenic+blood+vessels+following+contusive+spinal+cord+injury+in+the+adult+mouse.">Griffonia simplicifolia isolectin B4 identifies a specific subpopulation of angiogenic blood vessels following contusive spinal cord injury in the adult mouse.</a> J Comp Neurol. 507 (1), 1031-1052 (2008).</li><li>Ayoub, A. E., Salm, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+morphological+diversity+of+microglia+in+the+activated+hypothalamic+supraoptic+nucleus.">Increased morphological diversity of microglia in the activated hypothalamic supraoptic nucleus.</a> J Neurosci. 23 (21), 7759-7766 (2003).</li><li>Maddox, D. E., Shibata, S., Goldstein, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulated+macrophages+express+a+new+glycoprotein+receptor+reactive+with+Griffonia+simplicifolia+I-B4+isolectin.">Stimulated macrophages express a new glycoprotein receptor reactive with Griffonia simplicifolia I-B4 isolectin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 79 (1), 166-170 (1982).</li><li>dela Paz, N. G., D'Amore, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+versus+venous+endothelial+cells.">Arterial versus venous endothelial cells.</a> Cell Tissue Res. 335 (1), 5-16 (2009).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kardiyak yapısı ve fonksiyonu farelerde, Ekokardiyografi, kontrast-artırılmış MRI, CT mikro ve PET taraması gibi değerlendirmek için farklı yöntemler geliştirilmiştir. Maliyet-etkililik ve kolaylık nedeniyle Ekokardiyografi fareler11fonksiyonel analiz için en çok kullanılan tekniktir. Genel olarak, kalp ve nabız farelerde, dönüştürücü bir frekans ile yüksek frekans küçük boyutu nedeniyle &#62; 10 MHz kullanılmalıdır, her ne kadar başarılı ölçümleri 8 ya da 9 MH...

Genetiği değiştirilmiş fare modelleri, büyük bir çeşitlilik vardır ve farmakolojik çalışmalar farelerde yüksek1,2sayısıdır. Ekokardiyografi ve MRI kardiyak fonksiyon ve Morfoloji bu fare modelleri3fenotipik karakterizasyonu için yaygın olarak kullanılan yaklaşımlar vardır. Amacı sunulan protokolü, kardiyak fonksiyon ve Morfoloji yetişkin farelerde analiz etmektir. Ekokardiyografi, histolojik, birleştirir ve immunohistokimyasal ölçümleri. Ekokardiyografik inceleme fareler4,5,6,7,8,9,10,11'yaygın olarak kullanılır, 12. Pachon vd. 205 çalışmalar kan dolaşımı, Kan dolaşımı araştırma, Amerikan Journal Fizyoloji - kalp ve dolaşım fizyolojisive Kardiyovasküler araştırma 2.012 ve 2015 ki arasında yayınlanan 11 tespit Ekokardiyografik inceleme hayvanlarda kullanılan.
Ekokardiyografi kalp fenotipleri genetiği değiştirilmiş fare5,6,13,14,15,16, tanımlamak için kullanılır 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , kronik aşırı kaynaklı hipertrofisi, miyokardiyal iskemi ve kardiyomiyopati modelleri (12incelendi) farelerde kardiyak fonksiyon analiz olarak 22, de. Geliştirilmiş Ekokardiyografi cihazları bırakmak için standart ölçü birimi (LV) sol ventrikül sistolik ve diyastolik boyutların, doku Doppler görüntüleme, miyokardiyal kontrast echography ve LV bölgesel fonksiyon ve koroner rezerv değerlendirilmesi 12. ideal olarak, Ekokardiyografik inceleme bilinçli farelerde contractile işlev, otonomik refleks kontrolü, anestezi olumsuz etkilerini önlemek için gerçekleştirilmesi ve kalp hızı11. Bununla birlikte, bu yaklaşım hayvanları eğitmek için gereksinimin tarafından sınırlıdır; vücut ısısı istikrarlı tutmak zorlukları; hareket eserler; stres; çok yüksek kardiyak Frekanslar; ve özellikle çok sayıda hayvan soruşturma altında iseniz deneme, gerçekleştirmek en az iki müfettişler gereksinimi. İlginçtir, bir çalışmada eğitimli ve eğitimsiz hayvanlar19Ekokardiyografik parametreler yok farklılıkları bildirdi. Ekokardiyografik ölçümlere imzalat farelerde gerçekleştiriyoruz. Farklı anestezi protokoller aşağıda ele alınacaktır.
Her ne kadar standart çözünürlük Ekokardiyografi (&#62; 10 MHz) olduğunu ölçü LV sistolik ve diyastolik boyutlar ve kardiyak fonksiyon yetişkin farelerde yeterli, belgili tanımlık yöntem açıklamasını temel yapısal olayları sınırlıdır. Böylece, biz vivo ölçümleri ile histolojik birleştirmek ve immunohistological analizler, örneğin, cardiomyocyte çap ve gemi yoğunluğunu ölçmek için. Nükleer silahların yayılmasına karşı belirlenmesi, sınav apoptosis, enfarktüsü boyut ölçüleri, fibrozis ve belirli işaret ifade, belirlenmesi gibi diğer histolojik ve immunohistological araştırmalar da aynı tür üzerinde gerçekleştirilebilir doku işlenen ama bu protokol konusu değildir. Vivo Ekokardiyografik inceleme histolojik analizler ile kombinasyonu temel yapısal değişiklikler ilgili ek bilgiler sağlar. Ek bir adım olarak, bu ölçümler moleküler ve ultra yapısal İncelemeler ile tamamlayabilirsiniz. Histolojik analizler sadece Ekokardiyografik inceleme tamamlamak ama Ekokardiyografi çözünürlük yeterli olmadığında da vazgeçilmez olmak. Bu özellikle modelleri genetiği değiştirilmiş farelerin embriyonik öldürücü23,24olan durumdur.

<table><tbody><tr><td>Wheat germ agglutinin (WGA) conjugated tetramethylrhodamine</td><td>Life Technologies, Molecular Probes</td><td>W849</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody</td><td>Vectorlabs</td><td>BA-1000</td><td></td></tr><tr><td>Avidin/Biotin Blocking Kit</td><td>Vectorlabs</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Standard)</td><td>Vectorlabs</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI</td><td>Vectorlabs</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>SIGMAFAST 3,3&#039;-Diaminobenzidine tablets</td><td>Sigma</td><td>D4168</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogen peroxide solution</td><td>Sigma</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Pecam-1 (CD31) antibody</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound transmission gel, Gel Aquasonic 100</td><td>Parker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Linear ultrasound probe, L15-7io</td><td>Philips Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Echocardiograph, IE33 xMATRIX</td><td>Philips Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope, Leica DMi8</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence Filterset DAPI</td><td>Leica</td><td>11525304</td><td></td></tr><tr><td>Filterset TxR</td><td>Leica</td><td>11525310</td><td></td></tr><tr><td>Digital Camera, SPOT RT3 Color Slider</td><td>Spot Imaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaging Software, SPOT 5.2 Advanced and Basic Software</td><td>Spot Imaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaging Computer</td><td>Dell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fine Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Large Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14501-14</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel blades</td><td>Fine Science Tools</td><td>10023-00</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11650-10</td><td></td></tr><tr><td>Rodent shaver</td><td>Harvard Apparatus</td><td>34-0243</td><td></td></tr><tr><td>cassettes for paraffin embedding</td><td>Sakura</td><td>4155F</td><td></td></tr><tr><td>neutral buffered Formalin</td><td>Sakura</td><td>8727</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sakura</td><td>8733</td><td></td></tr><tr><td>Paraffine TEK III</td><td>Sakura</td><td>4511</td><td></td></tr><tr><td>automated embedding apparatus, Tissue-Tek VIP</td><td>Sakura</td><td>6032</td><td></td></tr><tr><td>paraffin-embedding station Tissue-Tek TEC 5</td><td>Sakura</td><td>5229</td><td></td></tr><tr><td>microtome blades,Accu-Edge S35</td><td>Sakura</td><td>4685</td><td></td></tr><tr><td>microscopy slides, Tissue-Tek</td><td>Sakura</td><td>9533</td><td></td></tr><tr><td>cover slips, Tissue-Tek</td><td>Sakura</td><td>9582</td><td></td></tr><tr><td>Mounting medium Tissue-Tek</td><td>Sakura</td><td>1408</td><td></td></tr><tr><td>slide boxes</td><td>Sakura</td><td>3958</td><td></td></tr><tr><td>eosine solution</td><td>Sakura</td><td>8703</td><td></td></tr><tr><td>hematoxyline solution</td><td>Sakura</td><td>8711</td><td></td></tr><tr><td>microtome, RM2125RT</td><td>Leica</td><td>720-1880 (VWR)</td><td></td></tr><tr><td>water bath, Leica HI1210</td><td>Leica</td><td>720-0113(VWR)</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>VWR</td><td>ACRO444220050</td><td></td></tr><tr><td>15 ml tubes</td><td>VWR</td><td>734-0451</td><td></td></tr><tr><td>staining glass dish</td><td>VWR</td><td>MARI4220004</td><td></td></tr><tr><td>staining jars</td><td>VWR</td><td>MARI4200005</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Binder</td><td>9010-0012</td><td></td></tr><tr><td>DAB and urea hydrogen peroxide tablets, SIGMAFAST 3,3&amp;prime;-Diaminobenzidine tablets</td><td>Sigma</td><td>D4293</td><td></td></tr><tr><td>PBS (10X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>70011044</td><td></td></tr></tbody></table>

echocardiographic and histological examination of cardiac morphology in the mouse

Genetiği değiştirilmiş fare modelleri artan sayıda son yıllarda kullanılabilir hale gelmiştir. Ayrıca, farmakolojik çalışmalar farelerde gerçekleştirilen sayısı yüksektir. Bu fare modelleri fenotipik karakterizasyonu de kardiyak fonksiyon ve Morfoloji incelenmesi gerekir. Ekokardiyografi ve manyetik rezonans görüntüleme (MRG) kardiyak fonksiyon ve Morfoloji farelerde karakterize etmek için yaygın olarak kullanılan yaklaşımlar vardır. Küçük kemirgen kullanımda ve pahalı bir özel alanı gerektirir için Ekokardiyografik ve MRI donanımları uzman. Bu iletişim kuralı bir 15 MHz insan vasküler sonda ile klinik bir Ekokardiyografik sistemiyle farelerde kardiyak ölçüleri açıklar. Ölçümler imzalat yetişkin fareler üzerinde gerçekleştirilir. En az üç görüntü sıralarını kaydedilir ve her hayvan için M-modu parasternal kısa eksenli görünümünde analiz. Daha sonra kardiyak histolojik inceleme yapılır ve cardiomyocyte çapları Hematoksilen üzerinde belirlenir-Eozin - ya da buğday tohumu agglutinin (WGA)-parafin kesitler lekeli. Gemi kararlı morphometrically Pecam-1 immunostaining sonra yoğunluğudur. Protokol farmakolojik çalışmalar başarıyla uygulanan ve farklı genetik hayvan modelleri temel koşullar altında hem de deneysel akut miyokard infarktüsü sol ön inen koroner arter (kalıcı ligasyonu tarafından sonra oldu ÇOCUK). Bizim deneyim, Ekokardiyografik inceleme imzalat hayvanlara sınırlıdır ve en az ağırlığında yetişkin farelerde uygulanabilirdir 25 gr.

Şekil 1' de, genetiği değiştirilmiş farelerde kardiyak fenotipleri tanımlamak için Ekokardiyografi kullanışlılığı temsilcisi Ekokardiyografik kayıtları gösterir. Bir fare ile normal kardiyak fonksiyon (şekil 1A) ve dilate sol ventrikül ve azaltılmış LV fonksiyonu (şekil 1B) bir hayvanla arasındaki fark kolayca tespit edilebilir. Resim 2 (<strong cl...

Watch this Scientific Journal Video about Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse at JoVE.com

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

Ekokardiyografik inceleme farelerde sık sık kullanılır. Bu amaç için pahalı yüksek çözünürlüklü ultrason cihazları geliştirilmiştir. Bu iletişim kuralı histolojik xarakteristikaları analizler ile kardiyak Morfoloji belirlemek için birlikte uygun fiyatlı bir Ekokardiyografik yordamı açıklar.

Kardiyak Morfoloji Ekokardiyografik ve histolojik muayene fare

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

echocardiographic-histological-examination-cardiac-morphology

Research

JoVE Journal

Medicine

21.4K Görüntüleme.  CNRS, INSERM, iBV. Ekokardiyografik inceleme farelerde sık sık kullanılır. Bu amaç için pahalı yüksek çözünürlüklü ultrason cihazları geliştirilmiştir. Bu iletişim kuralı histolojik xarakteristikaları analizler ile kardiyak Morfoloji belirlemek için birlikte uygun fiyatlı bir Ekokardiyografik yordamı açıklar.

Video: Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

Transthoracic Echocardiography in Mice

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene expression. Transgenic and gene targeting methods can be used to generate mice with altered cardiac size and function,1-3 and as a result, in vivo techniques are needed to evaluate their cardiac phenotype. Transthoracic echocardiography, pulse wave Doppler (PWD), and tissue Doppler imaging (TDI) can be used to provide dimensional measurements of the mouse heart and to quantify the degree of cardiac systolic and diastolic performance. Two-dimensional imaging is used to detect abnormal anatomy or movements of the left ventricle, whereas M-mode echo is used for quantification of cardiac dimensions and contractility.4,5 In addition, PWD is used to quantify localized velocity of turbulent flow,6 whereas TDI is used to measure the velocity of myocardial motion.7 Thus, transthoracic echocardiography offers a comprehensive method for the noninvasive evaluation of cardiac function in mice.

Transthoracic echocardiography offers a noninvasive method for the evaluation of cardiac function in mice. A combination of ultrasound and Doppler imaging modalities can be used to obtain dimensional measurements of the heart and intracardiac blood flow, which together provide an assessment of cardiac systolic and diastolic performance.

Fareler de Transtorasik Ekokardiyografi

In recent years, murine models have become the primary avenue for studying the molecular mechanisms of cardiac dysfunction resulting from changes in gene ...

Tıp

Murine Echocardiography and Ultrasound Imaging

Rodent models of cardiac pathophysiology represent a valuable research tool to investigate mechanism of disease as well as test new therapeutics.1 Echocardiography provides a powerful, non-invasive tool to serially assess cardiac morphometry and function in a living animal.2 However, using this technique on mice poses unique challenges owing to the small size and rapid heart rate of these animals.3 Until recently, few ultrasound systems were capable of performing quality echocardiography on mice, and those generally lacked the image resolution and frame rate necessary to obtain truly quantitative measurements. Newly released systems such as the VisualSonics Vevo2100 provide new tools for researchers to carefully and non-invasively investigate cardiac function in mice. This system generates high resolution images and provides analysis capabilities similar to those used with human patients. Although color Doppler has been available for over 30 years in humans, this valuable technology has only recently been possible in rodent ultrasound.4,5 Color Doppler has broad applications for echocardiography, including the ability to quickly assess flow directionality in vessels and through valves, and to rapidly identify valve regurgitation. Strain analysis is a critical advance that is utilized to quantitatively measure regional myocardial function.6 This technique has the potential to detect changes in pathology, or resolution of pathology, earlier than conventional techniques. Coupled with the addition of three-dimensional image reconstruction, volumetric assessment of whole-organs is possible, including visualization and assessment of cardiac and vascular structures. Murine-compatible contrast imaging can also allow for volumetric measurements and tissue perfusion assessment.

This video demonstrates use of a rail-mounted high-frequency ultrasound probe to perform echocardiography on an anesthetized mouse. The methods describe both conventional two-dimensional and M-mode measurements of cardiac function in addition to newer, more powerful tools such as color Doppler, strain analysis, as well as general and targeted contrast imaging.

Murin Ekokardiyografi ve Ultrasonik Görüntüleme

Rodent models of cardiac pathophysiology represent a valuable research tool to investigate mechanism of disease as well as test new therapeutics.1  ...

Echocardiographic Assessment of the Right Heart in Mice

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential therapies. Given the expense and time involved in creating animal models of disease, it is critical that researchers have tools to accurately assess phenotypic expression of disease. Right ventricular dysfunction is the major manifestation of pulmonary hypertension. Echocardiography is the mainstay of the noninvasive assessment of right ventricular function in rodent models and has the advantage of clear translation to humans in whom the same tool is used. Published echocardiography protocols in murine models of PAH are lacking.
In this article, we describe a protocol for assessing RV and pulmonary vascular function in a mouse model of PAH with a dominant negative BMPRII mutation; however, this protocol is applicable to any diseases affecting the pulmonary vasculature or right heart. We provide a detailed description of animal preparation, image acquisition and hemodynamic calculation of stroke volume, cardiac output and an estimate of pulmonary artery pressure.

This article provides a protocol for the echocardiographic assessment of right ventricular size and pulmonary hypertension in mice. Applications include phenotype determination and serial assessment in transgenic and toxin-induced mouse models of cardiomyopathy and pulmonary vascular disease.

Farelerde Sağ Kalp Ekokardiyografik Değerlendirilmesi

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential ...

Analysis of Congenital Heart Defects in Mouse Embryos Using Qualitative and Quantitative Histological Methods

Congenital heart defects (CHD) are the most common type of birth defect in humans, affecting up to 1% of all live births. However, the underlying causes for CHD are still poorly understood. The developing mouse constitutes a valuable model for the study of CHD, because cardiac developmental programs between mice and humans are highly conserved. The protocol describes in detail how to produce mouse embryos of the desired gestational stage, methods to isolate and preserve the heart for downstream processing, quantitative methods to identify common types of CHD by histology (e.g., ventricular septal defects, atrial septal defects, patent ductus arteriosus), and quantitative histomorphometry methods to measure common muscular compaction phenotypes. These methods articulate all the steps involved in sample preparation, collection, and analysis, allowing scientists to correctly and reproducibly measure CHD.

In this protocol, we describe procedures to qualitatively and quantitatively analyze developmental phenotypes in mice associated with congenital heart defects.

Nitel ve Nicel Histolojik Yöntemlerle Fare Embriyolarında Konjenital Kalp Defektlerinin Analizi

Congenital heart defects (CHD) are the most common type of birth defect in humans, affecting up to 1% of all live births. However, the underlying causes ...

Gelişim Biyolojisi

A Pipeline to Characterize Structural Heart Defects in the Fetal Mouse

Congenital heart diseases (CHDs) are major causes of infant death in the United States. In the 1980s and earlier, most patients with moderate or severe CHD died before adulthood, with the maximum mortality during the first week of life. Remarkable advances in surgical techniques, diagnostic approaches, and medical management have led to marked improvements in outcomes. To address the critical research needs of understanding congenital heart defects, murine models have provided an ideal research platform, as they have very similar heart anatomy to humans and short gestation rates. The combination of genetic engineering with high-throughput phenotyping tools has allowed for the replication and diagnosis of structural heart defects to further elucidate the molecular pathways behind CHDs. The use of noninvasive fetal echocardiography to screen the cardiac phenotypes in mouse models coupled with the high fidelity of Episcopic fluorescence image capture (EFIC) using Episcopic confocal microscopy (ECM) histopathology with three-dimensional (3D) reconstructions enables a detailed view into the anatomy of various congenital heart defects. This protocol outlines a complete workflow of these methods to obtain an accurate diagnosis of murine congenital heart defects. Applying this phenotyping protocol to model organisms will allow for accurate CHD diagnosis, yielding insights into the mechanisms of CHD. Identifying the underlying mechanisms of CHD provide opportunities for potential therapies and interventions.

This article details murine congenital heart disease (CHD) diagnostic methods using fetal echocardiography, necropsy, and Episcopic fluorescence image capture (EFIC) using Episcopic confocal microscopy (ECM) followed by three-dimensional (3D) reconstruction.

Fetal Faredeki Yapısal Kalp Kusurlarını Karakterize Etmek İçin Bir Boru Hattı

Congenital heart diseases (CHDs) are major causes of infant death in the United States. In the 1980s and earlier, most patients with moderate or severe ...

Assessment of Cardiac Morphological and Functional Changes in Mouse Model of Transverse Aortic Constriction by Echocardiographic Imaging

Transverse aortic constriction (TAC) in mice has been used as a valuable model to study mechanisms of cardiac hypertrophy and heart failure1. A reliable noninvasive method is essential to assess real-time cardiac morphological and functional changes in animal models of heart disease. Transthoracic echocardiography represents an important tool for noninvasive assessment of cardiac structure and function2. Here we used a high-resolution ultrasound imaging system to monitor myocardial remodeling and heart failure progression over time in a mouse model of TAC. B-mode, M-mode, and Doppler imaging were used to precisely assess cardiac hypertrophy, ventricular dilatation, and functional deterioration in mice following TAC. Color and pulse wave (PW) Doppler imaging was used to noninvasively measure pressure gradient across the aortic constriction created by TAC and to assess transmitral blood flow in mice. Thus transthoracic echocardiographic imaging provides comprehensive noninvasive measurements of cardiac dimensions and function in mouse models of heart disease.

The goal of this protocol is to noninvasively assess cardiac structural and functional changes in a mouse model of heart disease created by transverse aortic constriction, using B- and M-mode echocardiography and color/pulse wave Doppler imaging.

Ekokardiyografik Imaging tarafından Enine Aort Konstrüksiyon Mouse Modeli Kardiyak Morfolojik Değerlendirilmesi ve Fonksiyonel Değişiklikler

Transverse aortic constriction (TAC) in mice has been used as a valuable model to study mechanisms of cardiac hypertrophy and heart failure1. A reliable ...

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in rodents, with detailed descriptions of the appropriate methods for anesthesia, the echocardiographic windows used, the imaging planes and probe orientations for image acquisition, the methods for data analysis, and the limitations of emerging technologies for the evaluation of cardiac and valvular function. Importantly, we also highlight several future areas of research in cardiac and heart valve imaging that may be leveraged to gain insights into the pathogenesis of valve disease in preclinical animal models. We propose that using a systematic approach to evaluating cardiac and heart valve function in mice can result in more robust and reproducible data, as well as facilitate the discovery of previously underappreciated phenotypes in genetically-altered and/or physiologically-stressed mice.

This protocol provides a detailed description of the echocardiographic approach for comprehensive phenotyping of heart and heart valve function in mice.

Farelerde Kalp Kapak Hastalıkları Kapsamlı Fenotipik Karakterizasyonu için ekokardiyografik Yaklaşımlar ve Protokoller

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in ...

Murine Echocardiography of Left Atrium, Aorta, and Pulmonary Artery

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic pressure through echocardiography, as well as to obtain measurements of the Aorta and PA diameter in mice.
Mice older than 10 d of age can be analyzed using the present technique. The technique is composed of 3 main steps: set-up, image acquisition, and image analysis. The set-up step consists of getting the mouse anesthetized with 1% isoflurane, shaving it, and taping it in a supine position to a heated EKG board where the image acquisition will take place. The image acquisition step consists of learning to identify the cardiac structures and obtaining all the required images with its correspondent probe and axis in order to be able to calculate volumes and diameters. The image analysis step consists of measuring the previously acquired images with the aid of computer software.
Advantages of the proposed technique include a fast (15 min) procedure that would allow the researcher to evaluate interventions in a non-invasive, non-terminal approach and therefore follow the same mouse over time; each mouse can be used as its own control. This fact plus having the same operator perform all the acquisition and analysis for the entire experiment minimizes the limitation of operator-dependency. The present methodology is useful for mouse researchers in cardiovascular and pulmonary medicine.

The following protocol describes the methodology for the acquisition and analysis of echocardiographic images used to obtain the Left Atrial Volume (LAV), Aorta (Ao) diameter, and Pulmonary Artery (PA) diameter in mice. This technique is a non-invasive, non-terminal procedure that allows assessment of the cardiopulmonary function.

Sol Atrium, Aort ve Pulmoner Arter Murin Ekokardiyografi

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic ...

Echocardiographic Measurement of Right Ventricular Diastolic Parameters in Mouse

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV diastolic function is rarely quantified in experimental studies. This might be due to technical difficulties in the visualization of the RV in the apical four-chamber view in rodents. Here we describe two positions facilitating the visualization of the apical four-chamber view in mice to assess the RV diastolic function.
The apical four-chamber view is enabled by tilting the mouse fixation platform to the left and caudally (LeCa) or to the right and cranially (RiCr). Both positions provide images of comparable quality. The results of the RV diastolic function obtained from two positions are not significantly different. Both positions are comparably easy to perform. This protocol can be incorporated into published protocols and enables detailed investigations of the RV function.

Here we describe and compare two positions for obtaining the apical four-chamber view in mice. These positions enable the quantification of the right ventricular function, provide comparable results, and can be used interchangeably.

Fareyle sağ ventriküler diyastolik parametrelerin ekokardiyografik ölçümü

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV ...

Echocardiographic Characterization of Left Ventricular Structure, Function, and Coronary Flow in Neonate Mice

Echocardiography is a non-invasive procedure that enables the evaluation of structural and functional parameters in animal models of cardiovascular disease and is used to assess the impact of potential treatments in preclinical studies. Echocardiographic studies are usually conducted in young adult mice (i.e., 4-6 weeks of age). The evaluation of early neonatal cardiovascular function is not usually performed because of the small size of the mouse pups and the associated technical difficulties. One of the most important challenges is that the short length of the pups&#39; limbs prevents them from reaching the electrodes in the echocardiography platform. Body temperature is the other challenge, as pups are very susceptible to changes in temperature. Therefore, it is important to establish a practical guide for performing echocardiographic studies in small mouse pups to help researchers detect early pathological changes and study the progression of cardiovascular disease over time. The current work describes a protocol for performing echocardiography in mouse pups at the early age of 7 days old. The echocardiographic characterization of cardiac morphology, function, and coronary flow in neonatal mice is also described.

The present protocol describes the echocardiographic assessment of left ventricular morphology, function, and coronary blood flow in 7-day old neonate mice.

Yenidoğan Farelerde Sol Ventrikül Yapısının, Fonksiyonunun ve Koroner Akımın Ekokardiyografik Karakterizasyonu

Echocardiography is a non-invasive procedure that enables the evaluation of structural and functional parameters in animal models of cardiovascular ...