Bayan Sonja Dufentester, Bayan Elke Weber ve Bayan Klaudia Niepagenkämper mükemmel teknik destek için teşekkür ederiz.

Tüm hayvan deneyleri Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) Nordrhein-Westfalen göre Alman hayvan koruma kanunu (Tierschutzgesetz) tarafından kabul edildi.
1. malzeme ve deneysel Kur
<ol>
	<li>Hayvan bakımı.
	<ol>
		<li>Cinsiyet ve yaş uyumlu fare DSS-duyarlı herhangi bir baskı (Örneğin, C57BL/6) 20-25 g vücut ağırlığı kullanın.</li>
		<li>Deney grubu ve ev başına en az beş veya daha fazla fare fareler yerel hayvan bakımı esaslarına göre planlayın.</li>
		<li>Standart bir kemirgen chow diyet ve autoclaved içme suyu ad libitumsağlar.</li>
		<li>Standart chow kaldırmak ve en az üç gün önce endoluminal auto-floresan azaltmak için tarama yonca-Alerjik chow ile değiştirin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Akut DSS kaynaklı kolit indüksiyon.
	<ol>
		<li>DSS 2 g dağıtılması (moleküler ağırlık ~ 40.000 Da) 100 ml autoclaved içme suyu %2 (w/v çözüm) elde etmek için.</li>
		<li>Fareler içme teminini sadece DSS çözüm ile doldurun ve 5 mL sıvı fare günlük ücret de tahmin ediyoruz. Denetim fare10DSS olmadan aynı içme suyu sağlar. Not: fareler günlük deneme sonuna kadar izleyin. Bunu kaybetmek onların ilk vücut ağırlığının % 20'den büyük veya can çekişen haline fareler ötenazi (Yani, ısrarla Kambur duruş, azalan hareket, nefes çok çalışan, belirgin dik kat) hayvan üzerinde yerel ilgili yönergelere göre refah.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Floresan-aracılı tomografi hazırlanması.
	<ol>
		<li>Floresans boya ile istenen antikor (Örneğin, fare Anti-fare F4/80) etiket (Örneğin, Cyanine7, λuyarma: 750 nm, λemisyon: 776 nm) üreticinin iletişim kuralında tanımlandığı gibi. Bir uygun diyaliz zarda arıtılmış antikor Diyaliz (gözenek boyutu &#60; 50-100 kDa) 0,15 M Sodyum Klorür için en az 2 h veya gecede 1 litre karşı.<ol>
			<li>1 litre 0.1 M NaHCO3 antikor transferi ve en az 2 h diyaliz.</li>
			<li>Dimetil sülfoksit (DMSO) floresan boya gerekli miktarda dağıtılması (10,8 µL/mg antikor) ve antikor ekleyin. Floresan boya 20-fold molar aşan bir boya protein oranı 1:3 elde etmek için kullanın.</li>
			<li>Karanlıkta 4 ° c için 1 h. çıkarmak diyaliz 0.15 M sodyum 1 L karşı veya PD-10 desalting sütun kullanarak etiketsiz antikor kuluçkaya ve fosfat tamponlu tuz (PBS) vivo uygulama için çözmek.</li>
			<li>Spectrophotometry tarafından son antikor konsantrasyon ve etiketleme oranı belirler.</li>
			<li>250-330 nm bir emilimini protein konsantrasyonu ölçmek ve boya tarafından ek emme düşünün. 280 en fazla emme düzeltmek nm (protein) 750 maksimum emilim % 11'i tarafından nm (sonraki adım) Cyanine7 etiketleme için.</li>
			<li>250-800 nm (genellikle 1:10) kampta seyreltme ölçmek ve hulâsa Cyanine7 konsantrasyonu 750 nm.</li>
			<li>Boya protein oranı olarak belirlemek: boya/antikor maksimum emilim 750 = nm / 200.000 / (en fazla emme 280 nm - max emme 750 x 0,11 nm) / 170.000.</li>
			<li>Antikor çözüm 4 ° C'de tutmak ve enjeksiyon önce beyazlatma önlemek için ışık kalkan.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Bu kullanılana kadar steril enjektör gerekli antikor çözüm hacmindeki hemen önce enjeksiyon ve ışık kalkan yükleyin.</li>
		<li>En iyi zamanlama sonda enjeksiyon ve tarama yordama bağlı olarak izleyici farmakokinetik belirler.</li>
		<li>Oksijen inhale % 1.5-2.5 isoflurane kullanarak fare anestezi veya güvenli bir şekilde etiketlenmiş antikorlar kuyruk ven enjeksiyon için adanmış bir restrainer yer onları.</li>
		<li>Tam uzunlukta antikor tarama önce etiketli antikor en az 24 h Anti-fare F4/80 makrofaj görselleştirme fare kolit gibi enjekte. Fareler intravenöz enjekte (IV) yolu ile kuyruk damar etiketli antikor boya 2.0 nmol için karşılık gelen bir miktar ile.</li>
		<li>Kullanım aynı derecede belirsiz antikorlar (Örneğin, fare IgG veya başka bir izotip birincil antikor miras için karşılık gelen) bir izotip kontrol dozlarda belirli inceleyebilirsek eşdeğer etiket aynı derecede. Not: Vivo sonuçları tarar sonra enjeksiyon kontrol bahçedeki veri görüntüleme belirli sonda yorumlanması için bir başvuru olarak hizmet verebilir.</li>
		<li>Tıraş ışık yansıması ve emilimi en aza indirmek için karın bölgesinde hayvan kürk tıraş için kullanın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. teknik ekipman
<ol>
	<li>Bir veteriner Floresans aracılı tomografi (FMT) aygıtı küçük hayvan floresan ( şekil 4) kullanın.</li>
	<li>Her proje için yeni bir çalışma "yeni çalışması" yi tıklatarak oluşturun düğmesini tıklatın ve çalışma açıklamasında görüntüleme parametreleri ve doz ileride de dahil olmak üzere ilgili izleyiciler içerir.</li>
	<li>Bu çalışma içinde "yeni çalışma grubu" yi tıklatarak çalışma grupları (Örneğin, belirli izleme ve belirsiz izotip kontrol için) ilgili çalışma tasarımına göre oluşturun düğmesini. Her çalışma grubu ile ilgili sayı hayvanların donatmak.</li>
	<li>İzleme yapıları için sistemi kalibre.<ol>
		<li>Her dizi izleyicileri etiketleme varyasyon için normal duruma getirmeye ve nicel ölçüm OI verilerden etkinleştirmek için kalibrasyon gerçekleştirin.</li>
		<li>Her bireysel sistem kalibrasyonu için araç üreticisinin kılavuzunu izleyin; "yeni eklemesini" seçimi, sistem bir kılavuz sayesinde adımları sağlar. Uygulamalı antikor çözüm seyreltme ve izleyici sonda içinde hesaplanan mutlak konsantrasyon sağlar.</li>
		<li>FMT, doku taklit eden hayalet (hayati doku benzeyen) tanımlanmış kalınlığı ve emme özellikleri kullanın ve kullanılan antikor çözüm belirli bir ses ile doldurun. FMT aygıtta ölçmek. Not: Sistem verilen konsantrasyonu ile birlikte sağlanan sonda referans ölçüm mutlak izleyici konsantrasyonları üzerinden gelecek vivo içinde ölçümleri hesaplamak için kullanır.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Isıtılabilen muayene kaset 42 ° c sıcaklık ile kullanma Not: Bu fareler muayene sırasında hipotermik olmasını engeller.</li>
</ol>
3. hayvan anestezi
<ol>
	<li>% 1.5-2 vol % isoflurane ([2-chloro-2-(difluoromethoxy)-1,1,1-trifluoro-ethane]) ve fareler anestezi için 1, 5 L O2/min., sürekli bir akış kullanın</li></ol>Özel olarak tasarlanmış inhalasyon sistemi kolayca anestezik derinliği kontrol ve personel pozlandırmayı en aza indirmek kemirgen anestezi (isoflurane Buharlaştırıcı) kullanır.
	<li>Sızıntı geçirmez indüksiyon odasında fareyi getirin ve Buharlaştırıcı isoflurane sağlama işleri (%100 (v/v), 5 vol % oksijen, 3 L/dak) açın. Yaslanmış ve bilinçsiz kadar fare izleyin.</li>
	<li>Tomografi, sürekli isoflurane inhalasyon yolu ile burun konisi, % 100 v/v, oksijen, muayene sırasında hareket eserlerin en aza indirmek için 1, 5 L/min 1,5 vol % bir doz ile muayene kaset yerleştirin. 5 dk daha uzun süren işlemler için kornea hasarı önlemek için fare gözleri göz merhem uygulamak.</li>
	<li>Anestezi derinliği refleksleri kontrol ederek değerlendirmek. Fare sırtında yatıyordu; Anestezi yeterliyse, fare geri dönmeliyiz değil. Fareyi yavaşça onun ayak parmakları arasında çimdik; Anestezi yeterliyse, bacak çekilen (sahne) cerrahi hoşgörü olmayacaktır.</li>

4. floresan-aracılı tomografi taraması
Not: Bu kullanılan FMT sistemine özgü aşağıdaki ayrıntıları uyum ( Tablo reçetesigörmek) alternatif Floresans yansıma görüntüleme aygıtları veya FMT sistemleri için gerektiği gibi çalışma.
<ol>
	<li>Muayene kaset sırtında imzalat fareyi getirin.</li>
	<li>Tarama yordamı gerçekleştirin.<ol>
		<li>Kaset görüntüleme sistemi yerleştirin ve hemen sürekli anestezi emin olmak için kapatın. Uygun örnek önceden oluşturulmuş çalışma grubundan seçin. Yönetilen izleyici izleyici konsantrasyon değerleri doğru hesaplanmasını sağlamak için açılır menüden seçin.</li>
		<li>Uygun dalga boyu Floresans yansıma görüntü elde etmek (720 nm Cyanine7 için) tarama planlamak ve anahat "elde görüntüsü" düğmesini tıklatarak tarama alanı için.</li>
		<li>Bkz: tarama alanı Floresans yansıma görüntü üzerinde bir kaplama olarak görüntülenir. Faiz (Örneğin, kolon veya karın), bölge için ayarlamak hava veya kalan kürk alanlarında kaçınarak. Görüntü hedef bağlı olarak görüntü sayısını orta ve ince tarama alanı çözünürlük sağdaki menüde kaba tercih ederek tarama alanı içinde veri noktaları ayarlayın. Not: bir iyi tarama alanını önemli ölçüde uzun süre scanning zaman pahasına daha iyi Uzaysal çözünürlük sunuyor olabilir unutmayın.</li>
		<li>Veri/resim alma seçili dalga boyu, "tarama" tıklayarak başlatın Not: Tüm karın bir orta-ince tarama tarama süresi yaklaşık 5 dk olacak; Bu süre içinde her bir veri noktasını ayrı ayrı uyarma lazer tarafından aydınlatılmış ve elde edilen floresan kaydedilir.</li>
		<li>Tarama sonunda görüntüleme kaset hayvan kaldırmak ve hayvan tamamen kafesin içine yerleştirmeden önce kurtarmak izin verir.</li>
		<li>FMT deneme sırasında çeşitli zaman noktalarda gerekli görüldüğü takdirde tekrar (Örneğin, 0, 5 ve 9-10 gün (son deneme)), ama bu nedenle arka plan Floresans sinyal artan vücutta antikor birikimi göz önünde bulundurun.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. sonrası tarama
<ol>
	<li>Bir kağıt havlunun bir kırmızı ışık Isınma lamba altında ayrı bir kafeste fareyi getirin ve fareyi rahatsızlık veya sıkıntı belirtileri için tam kurtarma kadar izlemek. Fareyi geri onun kendi kafesin içine ne zaman tam olarak uyanık getirin.</li>
	<li>Fareler bir doz %100 (v/v), izolatör CO2 teslimini tarafından deney sonunda, 100 vol % ve 3 L/dak ötenazi. CO2 yüksek konsantrasyonda ani bir pozlama sıkıntıya neden gibi odası CO2 ile önceden doldurmayın. Fare ötenazi hızlı servikal çıkık gibi bir sonraki ikincil mod tarafından nefes durduktan sonra ölüm doğrulayın.</li>
	<li>Kolon karın laparotomi tarafından explant ve adımları 4.2.1 - 4.2.4 açıklanmıştır explanted iki nokta üstüste, bir ex vivo tarama gerçekleştirin. Her kolon boyuna Metzenbaum Cerrahi makas kullanarak açın ve tuzlu çözüm ile daha ayrıntılı bir çözümleme için hazırlamadan önce iyice durulayın.</li>
	<li>Bir neşter distal kolon bir 0,5 cm parçası keser ve hemen bir 1.5 mL kriyojenik tüpe yerleştirir için kullanın. Daha fazla kadar kullanmak (Örneğin,myeloperoxidase (MPO) ölçüler) sıvı azot ve-70 ° C'de store durdur.</li>
	<li>Tahta bir sopa kullanmak ve kalan boyuna kadar rulo mukoza dışa ("İsviçre rulo tekniği") ile proksimal sonuna iki nokta üst üste gelen distal histolojik analizler için açtı. Hazırlık bir sabitleştirici yerleştirin (bkz. Tablo reçetesi) ve-80 ° C14, Don.</li>
</ol>
6. veri yeniden yapılanma ve yorumu
<ol>
	<li>3D maps-in Floresans dağıtım ham görüntü verilerinden oluşturma için ilgili düşsel bilgisayar yazılımı yeniden yapılandırma aracını kullanın; taramaları otomatik olarak tarama zaman üzerine imar aracına eklenir, işlev "Ekle yeniden yapılanma kuyruğuna" seçilir.<ol>
		<li>Aksi takdirde, taramaları ilgili çalışma altında açılır menüden seçin ve grup çalışması, tarama sağ tıklatın ve seçin "yeniden yapılmasına ekleyin."</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Daha fazla çözümleme için bir veri kümesi analiz yazılımı yükleyin. Üst çubuğundaki açılır menüsünden ilgili çalışma seçin ve ardından çalışma grubu ve bireysel hayvan sağ taraftaki menüden seçin; Bu hayvan için gerçekleştirilen tüm inceden inceye gözden geçirmek-ecek var olmak göstermek. Doğru Tara öğesini seçin ve "Yükle" seçeneğini tıklatın Not: İzleyici dağıtım 3D yeniden inşası başlangıçta alınan Floresans yansıma görüntü bir bindirme olarak sol tarafta görünür. Model döndürülmüş ve daha kolay çözümleme için büyütülmüş.</li>
	<li>Yeniden oluşturulan 3D haritalar üzerinde (Örneğin, karaciğer ve idrar kesesi) belirsiz etiket birikimi Foci belirlemek ve hedef dokulardan (Örneğin, bağırsak veya bağırsak) ayırt etmek.</li>
	<li>Üst çubuğu'ndan hedef için en uygun yatırım Getirisi şekli seçin. Etiket hedef doku bölgeleri analiz yazılımı ilgili ölçü araçları yerleştirerek ilgi (ROI) olarak; yazılım bir floresan yoğunluğu tarama için kalibre izleyici molar miktarda yatırım Getirisi, aynı zamanda için (pico-) sağlayacaktır.</li>
	<li>Hastalık aktivitesi (Histoloji) enflamatuar infiltrat ile ilişki içinde değerlendirilmesi için en uygun eşdeğer olarak yatırım Getirisi boyutu için normalleştirilmiş uygun yatırım Getirisi, izleyici toplam miktarı seçin. Not: Diğer şekil-in ROI uygunsa, belirli bir modeli temsilcisi olarak seçilebilir.</li>
</ol>
7.Ex Vivo Analizleri
<ol>
	<li>Hematoksilen ve Eozin boyama ve ayirt boyama.
	<ol>
		<li>Bölüm 2 min için % 70 etanol (alkol) yerleştirerek deparaffinize; daha sonra distile su ile durulayın. 5 min için Hematoksilen çözüm ile leke ve daha sonra 10 dk sıcak musluk suyu ile yıkayın.</li>
		<li>Counterstain için 2 dk, Eozin çözüm ile distile su ile durulama ve tekrar distile su ile durulayın.</li>
		<li>Yer % 70 alkol, %96 alkol, %99 alkol ve Ksilen (2 kez) için 2 dk her kurutmak ve bölümü temizlemek için. Reçineli montaj orta ile bağlayın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ayirt boyama.
	<ol>
		<li>Cryo-kesme bölümleri 7 µm hazırlamak ve ayirt boyama için daha önce alınan doku bölümler ("İsviçre rulo") kullanın.</li>
		<li>Aseton-sabit ve donmuş iki nokta üst üste bölümler için 10 dk % 5.0 sıçan Serumda engellemek ve gecede seyreltilmiş (1/500 v/v) biotinylated birincil fare Anti-fare F4/80 antikor ile kuluçkaya. Üç kez Tris tamponlanmış salin (TBS) bölümleri yıkama ve Streptavidin-FITC ile (1: 100 v/v) PBS/BSA içinde kuluçkaya (% 0,1 w/v) gecede 4 ° C'de</li>
		<li>TBS bölümlerde yıkama ve'ile 4, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, 1: 1000 v/v) kontrast elde etmek için leke. Confocal mikroskop altında floresan görüntü analiz (bakınız Tablo reçetesi; 40 x büyütme; filtre küp N2.1 uyarma filtreli 515-560) ve yüksek güç alan başına F4/80-pozitif hücreleri saymak. Not: antikor aynı klon ve biçimi içinde vivo FMT ve post mortem Histoloji analizleri immünhistokimya veya hedef bağlı olarak ayirt, boyama gibi birleştirirken kullanmayı düşünün. F4/80-pozitif makrofajlar içinde vivo ve ex vivotespiti için farklı biçimlerde kullanılmıştır.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>MPO ölçümlerde kolon örnekleri.
	<ol>
		<li>Taze elde, iki nokta üst üste örnekleri PBS durulanır ya da çözdürülen numune MPO ölçümler için kullanın. Tüm örneklerini tartmak ve doku homojenize ELISA içinde sağlanan lizis arabelleği ( Tablo reçetesigörmek) lizis arabelleği doku mg başına 20 µL hacmi, kit.</li>
		<li>15 için solüsyon içeren temizleyicide s (sonication frekans: 20 kHz, güç: 70 W) ve örnekleri için 200 g ve 4 ° c x 10 dk santrifüj kapasitesi</li>
		<li>Piyasada bulunan bir ELISA kiti ( Tablo reçetesigörmek) kullanmak üretmektedir açıklama göre. Çoğaltmaları testinde yerine getirir.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bruckner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+endoscopy+for+in+vivo+multimodal+imaging+of+carcinogenesis+and+assessment+of+intestinal+wound+healing+and+inflammation.">Murine endoscopy for in vivo multimodal imaging of carcinogenesis and assessment of intestinal wound healing and inflammation.</a> J Vis Exp. (90), (2014).</li><li>Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+imaging.+current+technology+and+perspectives+for+oncological+imaging.">Small animal imaging. current technology and perspectives for oncological imaging.</a> Eur J Cancer. 38 (16), 2173-2188 (2002).</li><li>Bettenworth, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+18F-FDG+PET/CT+imaging+to+monitor+lesion+activity+in+intestinal+inflammation.">Translational 18F-FDG PET/CT imaging to monitor lesion activity in intestinal inflammation.</a> J Nucl Med. 54 (5), 748-755 (2013).</li><li>Vowinkel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apolipoprotein+A-IV+inhibits+experimental+colitis.">Apolipoprotein A-IV inhibits experimental colitis.</a> J Clin Invest. 114 (2), 260-269 (2004).</li><li>Korlach, J., Schwille, P., Webb, W. W., Feigenson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+lipid+bilayer+phases+by+confocal+microscopy+and+fluorescence+correlation+spectroscopy.">Characterization of lipid bilayer phases by confocal microscopy and fluorescence correlation spectroscopy.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 96 (15), 8461-8466 (1999).</li><li>Ntziachristos, V., Tung, C. H., Bremer, C., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+molecular+tomography+resolves+protease+activity+in+vivo.">Fluorescence molecular tomography resolves protease activity in vivo.</a> Nat Med. 8 (7), 757-760 (2002).</li><li>Ntziachristos, V., Bremer, C., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+with+near-infrared+light:+new+technological+advances+that+enable+in+vivo+molecular+imaging.">Fluorescence imaging with near-infrared light: new technological advances that enable in vivo molecular imaging.</a> Eur Radiol. 13 (1), 195-208 (2003).</li><li>Ntziachristos, V., Bremer, C., Graves, E. E., Ripoll, J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+tomographic+imaging+of+near-infrared+fluorescent+probes.">In vivo tomographic imaging of near-infrared fluorescent probes.</a> Mol Imaging. 1 (2), 82-88 (2002).</li><li>Ballou, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+labeling+in+vivo+using+cyanine-conjugated+monoclonal+antibodies.">Tumor labeling in vivo using cyanine-conjugated monoclonal antibodies.</a> Cancer Immunol Immunother. 41 (4), 257-263 (1995).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat Protoc. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kawada, M., Arihiro, A., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+from+advances+in+research+of+chemically+induced+experimental+models+of+human+inflammatory+bowel+disease.">Insights from advances in research of chemically induced experimental models of human inflammatory bowel disease.</a> World J Gastroenterol. 13 (42), 5581-5593 (2007).</li><li>Nowacki, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+5A+apolipoprotein+A-I+(apoA-I)+mimetic+peptide+ameliorates+experimental+colitis+by+regulating+monocyte+infiltration.">The 5A apolipoprotein A-I (apoA-I) mimetic peptide ameliorates experimental colitis by regulating monocyte infiltration.</a> Br J Pharmacol. 173 (18), 2780-2792 (2016).</li><li>Hansch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+experimental+arthritis+with+near-infrared+fluorescence.">In vivo imaging of experimental arthritis with near-infrared fluorescence.</a> Arthritis Rheum. 50 (3), 961-967 (2004).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+Technique+for+Intestinal+Tissue+Preparation+for+Immunohistochemical+and+Immunofluorescent+Analyses.">Improved Swiss-rolling Technique for Intestinal Tissue Preparation for Immunohistochemical and Immunofluorescent Analyses.</a> J Vis Exp. (113), (2016).</li><li>Diaz-Granados, N., Howe, K., Lu, J., McKay, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium-induced+colonic+histopathology,+but+not+altered+epithelial+ion+transport,+is+reduced+by+inhibition+of+phosphodiesterase+activity.">Dextran sulfate sodium-induced colonic histopathology, but not altered epithelial ion transport, is reduced by inhibition of phosphodiesterase activity.</a> Am J Pathol. 156 (6), 2169-2177 (2000).</li><li>Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+intestinal+inflammation+in+DSS-induced+model+of+IBD.">Investigating intestinal inflammation in DSS-induced model of IBD.</a> J Vis Exp. (60), e3678 (2012).</li><li>Dieleman, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+experimental+colitis+induced+by+dextran+sulphate+sodium+(DSS)+is+characterized+by+Th1+and+Th2+cytokines.">Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines.</a> Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).</li><li>Kojouharoff, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralization+of+tumour+necrosis+factor+(TNF)+but+not+of+IL-1+reduces+inflammation+in+chronic+dextran+sulphate+sodium-induced+colitis+in+mice.">Neutralization of tumour necrosis factor (TNF) but not of IL-1 reduces inflammation in chronic dextran sulphate sodium-induced colitis in mice.</a> Clin Exp Immunol. 107 (2), 353-358 (1997).</li><li>Sunderkotter, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subpopulations+of+mouse+blood+monocytes+differ+in+maturation+stage+and+inflammatory+response.">Subpopulations of mouse blood monocytes differ in maturation stage and inflammatory response.</a> J Immunol. 172 (7), 4410-4417 (2004).</li><li>Willmann, J. K., van Bruggen, N., Dinkelborg, L. M., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+in+drug+development.">Molecular imaging in drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 7 (7), 591-607 (2008).</li><li>Ntziachristos, V., Ripoll, J., Wang, L. V., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Looking+and+listening+to+light:+the+evolution+of+whole-body+photonic+imaging.">Looking and listening to light: the evolution of whole-body photonic imaging.</a> Nat Biotechnol. 23 (3), 313-320 (2005).</li><li>Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Going+deeper+than+microscopy:+the+optical+imaging+frontier+in+biology.">Going deeper than microscopy: the optical imaging frontier in biology.</a> Nat Methods. 7 (8), 603-614 (2010).</li><li>Stuker, F., Ripoll, J., Rudin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+molecular+tomography:+principles+and+potential+for+pharmaceutical+research.">Fluorescence molecular tomography: principles and potential for pharmaceutical research.</a> Pharmaceutics. 3 (2), 229-274 (2011).</li><li>Beziere, N., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optoacoustic+imaging:+an+emerging+modality+for+the+gastrointestinal+tract.">Optoacoustic imaging: an emerging modality for the gastrointestinal tract.</a> Gastroenterology. 141 (6), 1979-1985 (2011).</li><li>Habtezion, A., Nguyen, L. P., Hadeiba, H., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+Trafficking+to+the+Small+Intestine+and+Colon.">Leukocyte Trafficking to the Small Intestine and Colon.</a> Gastroenterology. 150 (2), 340-354 (2016).</li><li>Ungar, B., Kopylov, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+development+of+new+biologics+in+inflammatory+bowel+disease.">Advances in the development of new biologics in inflammatory bowel disease.</a> Ann Gastroenterol. 29 (3), 243-248 (2016).</li><li>Sandborn, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vedolizumab+as+induction+and+maintenance+therapy+for+Crohn's+disease.">Vedolizumab as induction and maintenance therapy for Crohn's disease.</a> N Engl J Med. 369 (8), 711-721 (2013).</li><li>Vermeire, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etrolizumab+as+induction+therapy+for+ulcerative+colitis:+a+randomised,+controlled,+phase+2+trial.">Etrolizumab as induction therapy for ulcerative colitis: a randomised, controlled, phase 2 trial.</a> Lancet. 384 (9940), 309-318 (2014).</li><li>Coskun, M., Vermeire, S., Nielsen, O. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Targeted+Therapies+for+Inflammatory+Bowel+Disease.">Novel Targeted Therapies for Inflammatory Bowel Disease.</a> Trends Pharmacol Sci. , (2016).</li><li>Vermeire, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mucosal+addressin+cell+adhesion+molecule+antibody+PF-00547,659+in+ulcerative+colitis:+a+randomised+study.">The mucosal addressin cell adhesion molecule antibody PF-00547,659 in ulcerative colitis: a randomised study.</a> Gut. 60 (8), 1068-1075 (2011).</li><li>Terai, T., Nagano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+fluorophores+and+fluorescent+probes+for+bioimaging.">Small-molecule fluorophores and fluorescent probes for bioimaging.</a> Pflugers Arch. 465 (3), 347-359 (2013).</li><li>Ren, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Measurement+of+Tumor+Vascular+Permeability+and+Perfusion+using+a+Hybrid+System+for+Simultaneous+Magnetic+Resonance+and+Fluorescence+Imaging.">Dynamic Measurement of Tumor Vascular Permeability and Perfusion using a Hybrid System for Simultaneous Magnetic Resonance and Fluorescence Imaging.</a> Mol Imaging Biol. 18 (2), 191-200 (2016).</li><li>Ale, A., Ermolayev, V., Deliolanis, N. C., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+background+subtraction+technique+for+hybrid+fluorescence+molecular+tomography/x-ray+computed+tomography+imaging+of+a+mouse+model+of+early+stage+lung+cancer.">Fluorescence background subtraction technique for hybrid fluorescence molecular tomography/x-ray computed tomography imaging of a mouse model of early stage lung cancer.</a> J Biomed Opt. 18 (5), 56006 (2013).</li><li>Chames, P., Van Regenmortel, M., Weiss, E., Baty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+antibodies:+successes,+limitations+and+hopes+for+the+future.">Therapeutic antibodies: successes, limitations and hopes for the future.</a> Br J Pharmacol. 157 (2), 220-233 (2009).</li><li>Faust, A., Hermann, S., Schafers, M., Holtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+probes+and+their+potential+contribution+to+radiotracer+development.">Optical imaging probes and their potential contribution to radiotracer development.</a> Nuklearmedizin. 55 (2), 51-62 (2016).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274 (3 Pt 1), G544-G551 (1998).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Tıbbi görüntüleme teknikleri son yıllarda hızla geliştiğini rağmen biz hala bizim yetenek iltihabi süreçleri veya tümörler, hem de diğer hastalıklar erken onların geliştirme aşamalarında algılamak için sınırlıdır. Ancak, bu anlayış tümör büyüme, işgali, ya da metastaz kalkınma ve hücresel süreçler enflamatuar bozuklukları ve dejeneratif, kardiyovasküler ve immünolojik hastalıkların gelişiminde çok önemlidir. Geleneksel görüntüleme teknikleri fiziksel veya fizyolojik parametr...

Hayvan modelleri bilimsel araştırmalarda yaygın olarak kullanılır ve hastalık etkinliğini izleme ve canlılık, vücut ağırlığı değişiklikler miktar veya kan, idrar ve dışkı analizi gibi birçok non-invaziv prosedürleri var. Ancak, bu da tabi arası bireysel farklılıklarına sadece dolaylı temsilci parametre vardır. Onlar sık sık post mortem analizleri tekrarlanan zaman noktalarda seri gözlem engeller doku örnek tarafından tamamlanabilir gerekir ve gözlem fizyolojik veya patolojik içinde vivoişler doğrudan. Sofistike küçük hayvan görüntüleme teknikleri, çapraz kesit görüntüleme, optik görüntüleme ve Endoskopi, bu süreçlerin doğrudan görselleştirme ve ayrıca aynı hayvanlar1 tekrarlayan analizleri için sağlar bu da dahil olmak üzere ortaya çıkmıştır , 2 , 3. Ayrıca, sürekli aynı hayvan hastalığında çeşitli durumlarını izlemek için olasılık daha bir hayvan etik açıdan uygun olabilir gerekli, hayvan sayısını azaltmak.
Birkaç farklı optik görüntüleme teknikleri vivo içinde Floresans görüntüleme için mevcut. Aslında, confocal görüntüleme yüzey ve yeraltı floresan olayları4,5çalışmaya istihdam edildi. Son zamanlarda, ancak, nicel üç boyutlu doku değerlendirmeler için izin tomografik sistemleri gelişmiş6olmuştur. Bu düşük emilim, duyarlı detektörlerle ve monokromatik ışık kaynakları7sunan yakın kızılötesi (Nur) spektrumda ışık yayarlar floresan problar geliştirilmesi yoluyla gerçekleştirdi. Bilgisayarlı Tomografi (BT), manyetik rezonans görüntüleme (MRG) veya ultrason (ABD), çoğunlukla fiziksel parametrelere dayanan ve Morfoloji, görselleştirmek gibi geleneksel cross-sectioning görüntüleme teknikleri, ek bilgiler optik görüntüleme sağlar temel moleküler süreçleri endojen veya eksojen floresan kullanarak8sondalar.
Moleküler Biyoloji gelişmeler hedefler giderek artan sayıda için akıllı ve hedeflenen floresan moleküler probları nesil kolaylaştırmak için yardımcı oldu. Örneğin, reseptör aracılı alımı ve belirli hedef alan dağıtım carbocyanine türev etiketli antikorlar9kullanarak görüntülenmeyecektir. Vücudun aksi ulaşılmaz yerlerde belirli tarayıcıları olarak çalışmaya etiketli, mevcut antikorlar bolluk tumorigenesis ve nörodejeneratif modellerinin moleküler ve hücresel işlemlerinde benzersiz anlayışlar sağlar, kalp, immünolojik ve inflamatuar hastalıkları7.
Bu çalışmada, Floresans aracılı tomografi kolit, fare modeli nasıl kullanılacağını açıklar. Dextran sodyum sülfat (DSS)-bağlı kolit olan standart bir kimyasal olarak indüklenen fare modeli iltihabi bağırsak hastalığı (IBD)10benzer bağırsak iltihabı. Doğuştan gelen bağışıklık sistemi bağırsak iltihabı11gelişimine katkısını değerlendirmek özellikle yararlıdır. İşe alma, harekete geçirmek ve monosit ve makrofaj infiltrasyonu IBD patogenezinde önemli adımları temsil ettiğinden, onların işe alım görselleştirme ve Kinetik infiltrasyon, örneğin, etkisini kontrol için gerekli Preklinik ayarı12olası tedavi edici maddeler. DSS kolit indüksiyon tarif ve makrofaj infiltrasyon Floresans moleküler tomografi monosit/makrofaj işaretçiyi F4/80 belirli görselleştirme için kullanarak bağırsak mukozası içine tomografi-aracılı karakterizasyonu göstermek 13. Ayrıca, antikor etiketleme gibi; yardımcı ve tamamlayıcı yordamlara göstermek deneysel Kur; ve analizi ve yorumu elde edilen görüntülerin hastalık aktivite endeksi gibi geleneksel çıktıları ile korelasyon Akış Sitometresi ve histolojik analizi ve immünhistokimya. Biz bu tekniği ve karşılaştırmalar diğer görüntüleme yöntemleri için sınırlamalar tartışıyorlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1601">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:469px;">Reagents</td>
			<td style="width:423px;"></td>
			<td style="width:320px;"></td>
			<td style="width:389px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alfalfa-free diet</td>
			<td>Harlan Laboritories, Madison, USA</td>
			<td style="width:320px;">2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bepanthen eye ointment</td>
			<td style="width:423px;">Bayer, Leverkusen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">80469764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dextran sulphate sodium (DSS)</td>
			<td>TdB Consulatancy, Uppsala, Sweden</td>
			<td>DB001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Eosin</td>
			<td style="width:423px;">Sigma - Aldrich, Deisenhofen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">E 4382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:423px;">Sigma - Aldrich, Deisenhofen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">E 9884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Florene 100V/V</td>
			<td>Abbott, Wiesbaden, Germany</td>
			<td style="width:320px;">B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Haematoxylin&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:423px;">Sigma - Aldrich, Deisenhofen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">HHS32-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">O.C.T. Tissue Tek compound&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:423px;">Sakura, Zoeterwonde, Netherlands</td>
			<td style="width:320px;">4583</td>
			<td>fixative for histological analyses</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Phosphate buffered saline, PBS</td>
			<td style="width:423px;">Lonza, Verviers, Belgium</td>
			<td style="width:320px;">4629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Chloride 0,9%</td>
			<td>Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">5/12211095/0411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium bicarbonate powder</td>
			<td>Sigma Aldrich Deisenhofen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Standard diet</td>
			<td>Altromin, Lage, Germany</td>
			<td style="width:320px;">1320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tissue-Tek Cryomold</td>
			<td>Sakura, Leiden, Netherlands</td>
			<td style="width:320px;">4566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hemoccult (guaiac paper test)</td>
			<td>Beckmann Coulter, Germany</td>
			<td style="width:320px;">3060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Biotin rat-anti-mouse anti-F4/80 antibody</td>
			<td>Serotec, Oxford, UK</td>
			<td style="width:320px;">MCA497B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Biotin rat-anti-mouse anti-GR-1&#160;</td>
			<td>BD Pharmingen, Heidelberg Germany</td>
			<td>553125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Streptavidin-Alexa546</td>
			<td>Molecular Probes, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:320px;">S-11225</td>
			<td>excitation/emission maximum:&#160; 556/573nm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-CD11b rat-anti-mouse antibody TC</td>
			<td>Calteg, Burlingame, USA</td>
			<td style="width:320px;">R2b06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Purified anti-mouse F4/80 antibody</td>
			<td>BioLegend, London, UK</td>
			<td style="width:320px;">123102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FITC-conjugated anti-Ly6C rat-anti-mouse antibody</td>
			<td>BD Pharmingen, Heidelberg, Germany</td>
			<td>553104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FACS buffer</td>
			<td>BD Pharmingen, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:320px;">342003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cy7 NHS Ester</td>
			<td>GE Healthcare&#160;Europe, Freiburg, Germany</td>
			<td style="width:320px;">PA17104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MPO ELISA</td>
			<td>Immundiagnostik AG, Bensheim, Germany</td>
			<td>K 6631B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cy5.5 labeled anti-mouse F4/80 antibody</td>
			<td>BioLegend, London, UK</td>
			<td>123127</td>
			<td>ready to use labelled Antibodies (alternative)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-Mouse F4/80 Antigen PerCP-Cyanine5.5</td>
			<td>eBioscience, Waltham, USA</td>
			<td>45-4801-80</td>
			<td>ready to use labelled Antibodies (alternative)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMSO (Dimethyl sulfoxide)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td>792632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bovine Serum Albumins (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td>A4612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tris Buffered Saline Solution (TBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td>SRE0032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:469px;">Name</td>
			<td style="width:423px;">Company</td>
			<td style="width:320px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td style="width:320px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FACS Calibur Flow Cytometry System</td>
			<td>BD Biosciences GmbH, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:320px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FMT 2000 In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA</td>
			<td style="width:320px;">FMT2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">True Quant 3.1 Imaging Analysis Software</td>
			<td>PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA</td>
			<td style="width:320px;">included in FMT2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Leica DMLB Fluorescent Microscope</td>
			<td>Leica,&#160; 35578 Wetzlar, Germany&#160;</td>
			<td>DMLB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bandelin Sonopuls HD 2070</td>
			<td>Bandelin, 12207 Berlin, Germany</td>
			<td style="width:320px;">HD 2070</td>
			<td>ultrasonic homogenizer</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Disposable scalpel No 10</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td>Z692395-10EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">Metzenbaum scissors 14cm</td>
			<td>Ehrhardt Medizinprodukte GmbH, Geislingen, Germany</td>
			<td>22398330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">luer lock syringe 5ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td style="width:320px;">Z248010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:469px;">syringe needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany</td>
			<td>Z192368&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Falcon Tube 50ml</td>
			<td>BD Biosciences, Erembodegem, Belgium</td>
			<td style="width:320px;">352070</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fluorescence-mediated tomography for the detection and quantification of macrophage-related murine intestinal inflammation

Hastalığın fare modelleri bilimsel araştırma için vazgeçilmezdir. Ancak, endoskopi veya tomografik görüntüleme gibi birçok tanılama araçlarını düzenli olarak hayvan modellerinde istihdam değil. Geleneksel deneysel veriler çoğunlukla intra bireysel izleme sınavları önlemek ve çalışma hayvanların gerekli sayıda artışı post mortem ve ex vivo analizlere kullanır. Floresan-aracılı tomografi floresan problar non-invaziv, tekrarlayan, nicel, üç boyutlu bir değerlendirme sağlar. Son derece duyarlı ve özel algılama ve ayrı moleküler hedeflerin karakterizasyonu için izin veren moleküler yapımcıları, kullanımına izin verir. Özellikle, hedeflenen probları gen harekete geçirmek ve protein ekspresyonu inflamasyon, otoimmün hastalığı, enfeksiyon, damar hastalıkları, hücre göç, tumorigenesis, vbolarak analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Vivo algılama ve inflamasyon (Yani, F4/80-pozitif makrofaj infiltrasyonu), yaygın olarak kullanılan bir fare modeli karakterizasyonu için bu makalede, biz bu sofistike görüntüleme teknolojisi üzerinde adım adım yönergeler sağlar bağırsak iltihabı. Bu teknik de bağışıklık hücre veya kök hücre izleme gibi diğer araştırma alanlarda kullanılabilir.

Kolit değerlendirilmesi:
DSS kaynaklı kolit insan IBD benzer ve kilo kaybı, rektal kanama, yüzeysel ülserasyonun ve duyarlı fareler15Mukozal hasara yol açar bağırsak iltihabı kimyasal olarak indüklenen bir fare modeldir. Doğuştan gelen bağışıklık sistemi bağırsak iltihabı10,11gelişimine katkısını incelemek...

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation at JoVE.com

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

Hedef özgü probları protein ifade çeşitli hastalık (Örneğin, iltihap, enfeksiyon ve tumorigenesis) gibi moleküler mekanizmaları analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Bu çalışmada, bağırsak makrofaj infiltrasyonu F4/80 özel tomografi Floresans aracılı kullanarak kolit, fare modeli üç boyutlu bir nicel tomografik değerlendirilmesi açıklar.

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

fluorescence-mediated-tomography-for-detection-quantification

Research

JoVE Journal

Medicine

8.1K Görüntüleme.  University Hospital Münster. Hedef özgü probları protein ifade çeşitli hastalık (Örneğin, iltihap, enfeksiyon ve tumorigenesis) gibi moleküler mekanizmaları analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Bu çalışmada, bağırsak makrofaj infiltrasyonu F4/80 özel tomografi Floresans aracılı kullanarak kolit, fare modeli üç boyutlu bir nicel tomografik değerlendirilmesi açıklar.

Video: Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

Quantification of Atherosclerotic Plaque Activity and Vascular Inflammation using [18-F] Fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography/Computed Tomography (FDG-PET/CT)

Conventional non-invasive imaging modalities of atherosclerosis such as coronary artery calcium (CAC)1 and carotid intimal medial thickness (C-IMT)2 provide information about the burden of disease. However, despite multiple validation studies of CAC3-5, and C-IMT2,6, these modalities do not accurately assess plaque characteristics7,8, and the composition and inflammatory state of the plaque determine its stability and, therefore, the risk of clinical events9-13.
[18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose (FDG) imaging using positron-emission tomography (PET)/computed tomography (CT) has been extensively studied in oncologic metabolism14,15. Studies using animal models and immunohistochemistry in humans show that FDG-PET/CT is exquisitely sensitive for detecting macrophage activity16, an important source of cellular inflammation in vessel walls. More recently, we17,18 and others have shown that FDG-PET/CT enables highly precise, novel measurements of inflammatory activity of activity of atherosclerotic plaques in large and medium-sized arteries9,16,19,20. FDG-PET/CT studies have many advantages over other imaging modalities: 1) high contrast resolution; 2) quantification of plaque volume and metabolic activity allowing for multi-modal atherosclerotic plaque quantification; 3) dynamic, real-time, in vivo imaging; 4) minimal operator dependence. Finally, vascular inflammation detected by FDG-PET/CT has been shown to predict cardiovascular (CV) events independent of traditional risk factors21,22 and is also highly associated with overall burden of atherosclerosis23. Plaque activity by FDG-PET/CT is modulated by known beneficial CV interventions such as short term (12 week) statin therapy24 as well as longer term therapeutic lifestyle changes (16 months)25.
The current methodology for quantification of FDG uptake in atherosclerotic plaque involves measurement of the standardized uptake value (SUV) of an artery of interest and of the venous blood pool in order to calculate a target to background ratio (TBR), which is calculated by dividing the arterial SUV by the venous blood pool SUV. This method has shown to represent a stable, reproducible phenotype over time, has a high sensitivity for detection of vascular inflammation, and also has high inter-and intra-reader reliability26. Here we present our methodology for patient preparation, image acquisition, and quantification of atherosclerotic plaque activity and vascular inflammation using SUV, TBR, and a global parameter called the metabolic volumetric product (MVP). These approaches may be applied to assess vascular inflammation in various study samples of interest in a consistent fashion as we have shown in several prior publications.9,20,27,28

Quantification of Atherosclerotic Plaque Activity and Vascular Inflammation using [18-F] Fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography/Computed Tomography FDG-PET/CT

There is great need to identify atherosclerosis non-invasively, and here we demonstrate how FDG-PET/CT can be used to detect and quantify atherosclerotic plaque activity and vascular inflammation.

Aterosklerotik Plak Aktivite ve Damar İltihabı Kantitasyonu kullanarak [18-F] Florodeoksiglukoz Pozitron Emisyon Tomografisi / Bilgisayarlı Tomografi (FDG-PET/CT)

Conventional non-invasive imaging modalities of atherosclerosis such as coronary artery calcium (CAC)1 and carotid intimal medial thickness (C-IMT)2 ...

Tıp

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

Bağırsak Manipülasyon bir Standart Model Analizleri: Kemirgenler Barsak Motilite ve Gut Duvar İnflamasyon İşlevsel Değerlendirilmesi

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for Cancer Therapy Monitoring

In molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI) are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. PET is characterized by its excellent sensitivity and quantification ability while OI is notable for non-radiation, relative low cost, short scanning time, high throughput, and wide availability to basic researchers. However, both modalities have their shortcomings as well. PET suffers from poor spatial resolution and high cost, while OI is mostly limited to preclinical applications because of its limited tissue penetration along with prominent scattering optical signals through the thickness of living tissues.
 Recently a bridge between PET and OI has emerged with the discovery of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI)4-6. CLI is a new imaging modality that harnesses Cerenkov Radiation (CR) to image radionuclides with OI instruments. Russian Nobel laureate Alekseyevich Cerenkov and his colleagues originally discovered CR in 1934. It is a form of electromagnetic radiation emitted when a charged particle travels at a superluminal speed in a dielectric medium7,8. The charged particle, whether positron or electron, perturbs the electromagnetic field of the medium by displacing the electrons in its atoms. After passing of the disruption photons are emitted as the displaced electrons return to the ground state. For instance, one 18F decay was estimated to produce an average of 3 photons in water5. 
 Since its emergence, CLI has been investigated for its use in a variety of preclinical applications including in vivo tumor imaging, reporter gene imaging, radiotracer development, multimodality imaging, among others4,5,9,10,11. The most important reason why CLI has enjoyed much success so far is that this new technology takes advantage of the low cost and wide availability of OI to image radionuclides, which used to be imaged only by more expensive and less available nuclear imaging modalities such as PET.
 Here, we present the method of using CLI to monitor cancer drug therapy. Our group has recently investigated this new application and validated its feasibility by a proof-of-concept study12. We demonstrated that CLI and PET exhibited excellent correlations across different tumor xenografts and imaging probes. This is consistent with the overarching principle of CR that CLI essentially visualizes the same radionuclides as PET. We selected Bevacizumab (Avastin; Genentech/Roche) as our therapeutic agent because it is a well-known angiogenesis inhibitor13,14. Maturation of this technology in the near future can be envisioned to have a significant impact on preclinical drug development, screening, as well as therapy monitoring of patients receiving treatments.

Cerenkov Luminescence Imaging CLI for Cancer Therapy Monitoring

Use of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for monitoring preclinical cancer treatment is described here. This method takes advantage of Cerenkov Radiation (CR) and optical imaging (OI) to visualize radiolabeled probes and thus provides an alternative to PET in preclinical therapeutic monitoring and drug screening.

Kanser Tedavisi İzleme Cerenkov Lüminesans Görüntüleme (CLI)

In  molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI)  are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Murin için Endoskop<em&gt; In Vivo</em&gt; Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive nephropathy induced by unilateral ureteric obstruction (UUO), which can either be irreversible (UUO) or reversible (R-UUO). In the irreversible UUO model, the ureter may be obstructed for variable periods of time in order to induce increasingly severe renal inflammation and interstitial fibrotic scarring. In the reversible R-UUO model the ureter is obstructed to induce hydronephrosis, tubular dilation and inflammation. After a suitable period of time the ureteric obstruction is then surgically reversed by anastomosis of the severed previously obstructed ureter to the bladder in order to allow complete decompression of the kidney and restoration of urinary flow to the bladder. The irreversible UUO model has been used to investigate various aspects of renal inflammation and scarring including the pathogenesis of disease and the testing of potential anti-inflammatory or anti-fibrotic therapies. The more challenging model of R-UUO has been used by some investigators and does offer significant research potential as it allows the study of inflammatory and immune processes and tissue remodeling in an injured and scarred kidney following the removal of the injurious stimulus. As a result, the R-UUO model offers investigators the opportunity to explore the resolution of kidney inflammation together with key aspects of tissue repair. These experimental models are of relevance to human disease as patients often present with obstruction of the renal tract that requires decompression and are commonly left with significant residual kidney impairment that has no current treatment options and may lead to eventual end stage kidney failure.

The murine model of irreversible unilateral ureteric obstruction (UUO) is presented together with the model of reversible UUO in which the ureteric obstruction is relieved by anastomosis of the severed ureter into the bladder. These models enable the study of renal inflammation and scarring as well as tissue remodeling.

Geri dönüşümsüz ve Tersinir Tek taraflı Üreterik Obstrüksiyon bir fare modeli

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

Aort Kalsifikasyon ve Enflamasyon Vasküler düz kas hücrelerinin ve Görüntüleme Kalsifikasyon

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

A Fluorescence-based Assay for Characterization and Quantification of Lipid Droplet Formation in Human Intestinal Organoids

Dietary lipids are taken up as free fatty acids (FAs) by the intestinal epithelium. These FAs are intracellularly converted into triglyceride (TG) molecules, before they are packaged into chylomicrons for transport to the lymph or into cytosolic lipid droplets (LDs) for intracellular storage. A crucial step for the formation of LDs is the catalytic activity of diacylglycerol acyltransferases (DGAT) in the final step of TG synthesis. LDs are important to buffer toxic lipid species and regulate cellular metabolism in different cell types. Since the human intestinal epithelium is regularly confronted with high concentrations of lipids, LD formation is of great importance to regulate homeostasis. Here we describe a simple assay for the characterization and quantification of LD formation (LDF) upon stimulation with the most common unsaturated fatty acid, oleic acid, in human intestinal organoids. The LDF assay is based on the LD-specific fluorescent dye LD540, which allows for quantification of LDs by confocal microscopy, fluorescent plate reader, or flow cytometry. The LDF assay can be used to characterize LD formation in human intestinal epithelial cells, or to study human (genetic) disorders that affect LD metabolism, such as DGAT1 deficiency. Furthermore, this assay can also be used in a high-throughput pipeline to test novel therapeutic compounds, which restore defects in LD formation in intestinal or other types of organoids.

This protocol describes an assay for the characterization of lipid droplet (LD) formation in human intestinal organoids upon stimulation with fatty acids. We discuss how this assay is used for quantification of LD formation, and how it can be used for high throughput screening for drugs that affect LD formation.

İnsan Bağırsak Organoidlerinde Lipid Damlacık Oluşumunun Karakterizasyonu ve Niceliği için Floresan Esaslı Bir Test

Dietary lipids are taken up as free fatty acids (FAs) by the intestinal epithelium. These FAs are intracellularly converted into triglyceride (TG) ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing enterocolitis (NEC). However, a mechanistic link between these two conditions remains yet to be discovered. We have adopted a murine model of chorioamnionitis involving lipopolysaccharide (LPS)-induced fetal exposure to maternal inflammation (FEMI). This model of FEMI induces a sterile maternal, placental, and fetal inflammatory cascade, which is also present in many cases of clinical chorioamnionitis. Although models exist that utilize live bacteria and more accurately mimic the pathophysiology of an ascending infection resulting in chorioamnionitis, these methods may cause indirect effects on development of the immature intestinal tract and the associated developing microbiome. Using this protocol, we have demonstrated that LPS-induced FEMI results in a dose-dependent increase in pregnancy loss and preterm birth, as well as disruption of normal intestinal development in offspring. Further, we have demonstrated that FEMI significantly increases intestinal injury and serum cytokines in offspring, while simultaneously decreasing goblet and Paneth cells, both of which provide a first line of innate immunity against intestinal inflammation. Although a similar model of LPS-induced FEMI has been used to model the association between chorioamnionitis and subsequent abnormalities of the central nervous system, to our knowledge, this protocol is the first to attempt to elucidate a mechanistic link between chorioamnionitis and later perturbations in intestinal development as a potential link between chorioamnionitis and NEC.

We developed a model of chorioamnionitis to simulate fetal exposure to maternal inflammation (FEMI) without complications of live organisms to examine the effects of FEMI on development of the offspring&#8217;s intestinal tract. This allows for study of mechanistic causes for development of intestinal injury following chorioamnionitis.