Bu eser Prof. Moritz Koch&#39;un anısına ithaf edilmiştir.

Burada sunulan hayvan deneyleri, kurumsal ve resmi bir Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi tarafından bağımsız olarak gözden geçirildi ve onaylandı ve FELASA (Laboratuar Hayvan Bilimi Dernekleri Federasyonu) kurallarına göre gerçekleştirildi. Anestezi ve analjezi ya da gerekirse erken ötanazi gibi acıyı en aza indirmek için olası tüm önlemler alındı. 1. Cerrahi Adeno-cre Enfeksiyonu ile Lokal Tümör İndüksiyonu <ol><li> Ameliyat için hayvanların hazırlanması NOT: Hemen hemen her şarta bağlı (&quot;floxed&quot;) mutasyon burada açıklanan yöntem vasıtasıyla indüklenebilir. Apc, Kras veya Tp53 gibi kolorektal kanserle ilgili genlerde mutasyonların kullanılması önerilir. Cre rekombinasyonunun etkinliği, eksize edilecek yapı büyüklüğüne bağlıdır. Büyük floxed sekanslar daha az verimli eksize edilir. Tüm allellerin rekombinasyonu tümörlerde PC ile teyit edilmelidirR. <ol><li> Kolorektal tümörlerin gelişimi için, CRC&#39;nin temel bir modeli (parantez içinde MGI veritabanı numarası) için aşağıdaki koşullu alellerin çaprazını kullanın: Apc tm2Rak (MGI: 3688435) 16 Kras tm4Tyj (MGI: 242.9948) 17 Tp53 tm2Tyj (MGI: 3039263) 18 </li><li> Bir floresan muhabir alleli gerekliyse ( örn. Mikrometastazları saptamak için), aşağıdaki alleli kullanın: Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze (MGI: 3809522) 19 NOT: Yukarıdaki tüm suşlara NCI Mouse Repository veya Jackson Laboratuarı aracılığıyla erişilebilir. Geri kalan tüm dışkı maddeleri, adenovirüs enfeksiyonundan önce yıkanabildiğinden, oruç tutmaya gerek yoktur. Preoperatif açlık, perioperatif mortaliteye yol açar ve küçük kemirgenler için muazzam stres oluşturur. </li><li> Genel anestezi için sevofluran&#39;ı% 3 - 3.5 hacimde kullanın. T kaybıO ayak parmağı refleksi yeterli anestezi gösterir. </li><li> İlk insizyon öncesinde subkutan olarak 0.05 mg / kg buprenorfin enjekte edin. </li><li> Anestezi uygulanmış farenin gözlerini oftalmik merhem ile örtün, kornea kurutulmasını önleyin. </li><li> Fareyi küçük bir masanın üzerine yatar pozisyonda tutun. Fareyi tutmak için travmatik olmayan yapışkan bantlar kullanın. </li><li> Karnınızı elektrikli bir tıraş makinesiyle tıraş edin (alternatif olarak kaşeleştirici krem ​​kullanılabilir) ve alkollü çubuk veya iyot ile dezenfekte edin. Üretici tarafından önerilen temas süresini kullanın. </li><li> Cerrahi alanı steril perdeler ile örtün. NOT: Perioperatif antibiyotik kullanımı isteğe bağlıdır ve kurumsal yönergelere tabidir. </li><li> Tüm cerrahi prosedürler için steril tek kullanımlık veya sterilize edilmiş aletler kullanın. </li></ol></li><li> Orta hat laparotomisi ve kolonun maruziyeti <ol><li> Orta hat kesi yapmak için makas kullanın (alternatif olarak kaşaklar da kullanılabilir)(~ 15 mm) alt karın üzerindeki cilt. </li><li> Forseps ile karın duvar kaslarını alın ve dikkatli bir şekilde makasla incise edin, böylece karın boşluğunu açar. </li><li> Distal kolonu tanımlayın, sadece atravmatik forseps ile dokundurun. Kolonu, anüsün yaklaşık olarak 15 mm kadar ince bir kelepçesi ( örn. , Bir Micro Serrefine vasküler kelepçe) ile sıkıştırın. NOT: Her zaman kolonun hassasiyetine özel dikkat gösterin. Perforasyon kaçınılmaz olarak peritonit ve sepsise yol açar ve hayvanın ötanazisi gerektirir. </li></ol></li><li> Adeno-cre virüsü ile Segmental kolon enfeksiyonu <ol><li> Esnek bir Teflon tüpünü transanal olarak yerleştirin ve daha önce anal vertikalden 15 mm&#39;ye yerleştirilen kelepçe ile elde edilen lümen oklüzyonuna erişene kadar dikkatli bir şekilde ilerletin. Fazla güç kullanmayın, zira delik açılabilir. </li><li> Tüpü bir 30G kanül ile kanüle edin, standart bir 1 mL şırınga takın ve kolonu boşaltınN, kalan fekal maddeyi boşaltmak için normal tuzlu su ile yıkayın. Bu birkaç mL serum fizyolojik gerektirir. </li><li> Distal kolon boşaldığında tüpü çıkarın ve onu yeni bir Teflon tüpü ile değiştirin ve yine yukarıda tarif edildiği gibi kelepçeye doğrudan uzak tutun. </li><li> Kolon, proksimal kelepçeye ~ 3 mm uzakta ( yani , yerleştirilen tüpün üzerinde, anal vertikal ~ 12 mm) ikinci bir kelepçe ile kapatın, böylece enfekte edilecek 3 mm izole bir segment elde edilir. NOT: Fogarty koroner arter klipslerinin kauçuklaştırılmış olması nedeniyle klemp darlığı arasındaki intraluminal boruya rağmen kolonun sıkıca oklüzyona uğramasına yol açarak segmentin distal oklüzyonu için en uygun oldukları kanıtlanmıştır. </li><li> Sıkıca kelepçeli kolon segmentine 0.25% Trypsin-EDTA 50 - 80 mcL enjekte etmek için ikinci bir şırınga (30G kanül ile standart 1 mL) kullanın ve 10 dakika inkübe edin. Sıvının geri sızmasını önlemek için kanülü ve şırıngayı Teflon tüpüne yapışkan bırakın. <li> Önce distal kelepçeyi ve sonra tripsin tüpünü çıkarın. </li><li> Kalan tripsin uzaklaştırmak için distal kolonu ~ 500 μL normal salinle yıkayın. </li><li> Yeni bir Teflon tüpü takın, distal kelepçeyi yerine geri koyun ve kolon segmentini 50 - 80 μL adenoviral solüsyon (fosfat tamponlu salin içinde 10 11 plak oluşturucu ünite (PFU) / mL) ile şişirin ve 30 dakika inkübe edin Şekil 2A ). NOT: Adenoc ile temas, koşullu mutant farelerin tüm dokularında tümör gelişimine neden olabileceğinden, viral çözeltiyi dökmeyin. </li><li> Kelepçeleri ve boruyu çıkartın. </li></ol></li><li> Karın kapanması ve postoperatif iyileşme <ol><li> Karın duvarını 6-0 hızlı emilebilen su ile kapatın(Poldioksanon (PDS) gibi). </li><li> Cerrahi yara klipsleri ile cildi kapatın. </li><li> Fareyi, anesteziden tamamen kuruyana kadar 38 ° C&#39;ye ayarlanmış ısıtma yastığı üzerine yerleştirin. </li><li> Ameliyattan 12 saat sonra başka bir 0.05 mg / kg buprenorfin bolusunu uygulayın, bunu takiben gerekirse 12 saatte bir ilave buprenorfin bolusları uygulayın. </li><li> Fareler, tümör gelişimine bağlı olarak sıkıntı işaretleri için günde en az bir kere izleyin. </li></ol></li></ol> 2. Kolonoskopi NOT: Kullanılan koşullu mutasyonlara bağlı olarak, adenoviral enfeksiyon, 2-4 hafta içinde endoskopik olarak görülebilir tümörlere neden olur. Bu nedenle, adenoviral indüksiyondan 2 hafta sonra ilk postoperatif kolonoskopi uygulayın ve her 2 haftada bir tekrarlayın. Sıçan kolonoskopisi için piyasada bulunan bir sistem önerilir. 20 <ol><li> Kolonoskopi için hayvanların hazırlanması NOT: Açlık yok required. Kalan fekal madde genellikle distal kolondan iyi oluşur ve kolonoskopi sırasında tümörün ötesine itilebilir, böylece tekrarlanan orucun stresli işlemi gereksiz hale getirilir. <ol><li> Genel anestezi için sevofluran&#39;ı% 3 - 3.5 hacimde kullanın. Parmak çakma refleksi kaybı, yeterli anestezi anlamına gelir. </li><li> Korneanın kurutulmasını önlemek için anestezi uygulanmış farelerin gözlerini oftalmik merhem ile örtün. </li><li> Fareleri küçük bir masanın üzerinde yatay bir konumda tutun. </li></ol></li><li> kolonoskopi <ol><li> Kapağı (çap 1.9 mm, uzunluk 10 cm) anüs yoluyla bağırsak yoluna sokun ve kolonu genişletmek için görsel kontrol altında havayı dikkatle yerleştirin. Muayene için gereken miktardan fazla havayı koymayın. NOT: Hava insuflasyonu için, kolonoskopi sisteminin sis önleyici hava pompası kullanılabilir. Hiçbir sis önleyici hava pompası yoksa, çok düşük basınç ayarları olan diğer herhangi bir hava pompası kullanılabilir veya önZarif bir basınç düşürücü valf ile püskürtülmüş hava. Karbondioksit (CO 2 ) küçük kemirgenlerde asidoza kolayca yol açar ve bu nedenle kaçınılmalıdır. </li><li> Distal kolondaki bir mukozal lezyon tanımlanıncaya kadar alanı dikkatle ileri itin ( Şekil 1A - 1D ). </li><li> Daha sonraki değerlendirme için endoskopik görüntüleri saklayın. Daha önce intralüminal tümörler için bir endoskopik skorlama sistemi tanımlanmıştır. 20 </li><li> Kapsamı dikkatlice çıkarın ve fareyi, anesteziden tamamen kuruyana kadar 38 ° C&#39;ye ayarlanmış ısıtma yastığı üzerine yerleştirin. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2016.">Cancer statistics, 2016.</a> CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).</li><li>Weitz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+cancer.">Colorectal cancer.</a> Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).</li><li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+relevance+of+minimal+residual+disease+in+colorectal+cancer.">Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer.</a> World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).</li><li>Steinert, G., Sch&#246;lch, S., Koch, M., Weitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+significance+of+circulating+and+disseminated+tumour+cells+in+colorectal+cancer.">Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer.</a> Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).</li><li>Garc&#237;a, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDB1+overexpression+is+a+negative+prognostic+factor+in+colorectal+cancer.">LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).</li><li>van Noort, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Drug+Candidates+for+the+Treatment+of+Metastatic+Colorectal+Cancer+through+Global+Inverse+Gene-Expression+Profiling.">Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling.</a> Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).</li><li>Nanduri, L. K., Garc&#237;a, S., Weitz, J., Sch&#246;lch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Colorectal+Cancer-Derived+Circulating+Tumor+Cells.">Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells.</a> Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).</li><li>Taketo, M. M., Edelmann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+colon+cancer.">Mouse models of colon cancer.</a> Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).</li><li>Sch&#246;lch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+exhibit+stem+cell+characteristics+in+an+orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer.">Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).</li><li>Sch&#246;lch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+combined+with+TLR7/8+activation+induces+strong+immune+responses+against+gastrointestinal+tumors.">Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors.</a> Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).</li><li>Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+induction+relationships+in+development+of+transplantable+cancers+of+the+colon+in+mice+for+chemotherapy+assays,+with+a+note+on+carcinogen+structure.">Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure.</a> Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).</li><li>Roper, J., Hung, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priceless+GEMMs:+genetically+engineered+mouse+models+for+colorectal+cancer+drug+development.">Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development.</a> Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).</li><li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment.">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li><li>Sharpless, N. E., Depinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mighty+mouse:+genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+drug+development.">The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).</li><li>Shibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorectal+adenoma+formation+initiated+by+conditional+targeting+of+the+Apc+gene.">Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene.</a> Science. 278 (5335), 120-123 (1997).</li><li>Kuraguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenomatous+polyposis+coli+(APC)+is+required+for+normal+development+of+skin+and+thymus.">Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus.</a> PLoS Genet. 2 (9), e146 (2006).</li><li>Jackson, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+lung+tumor+initiation+and+progression+using+conditional+expression+of+oncogenic+K-ras.">Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras.</a> Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).</li><li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant+p53+gain+of+function+in+two+mouse+models+of+Li-Fraumeni+syndrome.">Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome.</a> Cell. 119 (6), 847-860 (2004).</li><li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain.">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).</li><li>Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dominant+mutation+that+predisposes+to+multiple+intestinal+neoplasia+in+the+mouse.">A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse.</a> Science. 247 (4940), 322-324 (1990).</li><li>de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+mouse+Msh2+gene+results+in+mismatch+repair+deficiency,+methylation+tolerance,+hyperrecombination,+and+predisposition+to+cancer.">Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer.</a> Cell. 82 (2), 321-330 (1995).</li><li>Reitmair, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+intestinal+carcinomas+and+skin+neoplasms+in+Msh2-deficient+mice.">Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice.</a> Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).</li><li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice.">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li><li>Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., S&#248;rensen, D. B., Mikkelsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fasting+of+mice:+a+review.">Fasting of mice: a review.</a> Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Genellikle üretilmesi ve bakımı kolay olsa da, hücre çizgisi enjeksiyonuna dayanan klasik CRC fare modelleri yapaytır ve insan hastalığını tam olarak tekrar edememektedir. Sonuç olarak GEMM&#39;ler geliştirildi. İlk CRC GEMM, Apc geninde heterozigot boş bir mutasyona sahip Apc Min fare idi, bu nedenle insan kalıtsal hastalık ailevi adenomatöz polipozis (FAP) taklit eder. Bununla birlikte, Apc Min fare- lerinde her zaman kolond ile sınırlı olmayan çok sayıda bağırsak adenomu ...

Kolorektal kanser (ÇHS), batı ülkelerinde kansere bağlı ölümlerin başlıca nedenlerinden biri olmayı sürdürüyor. Erken evre hastalığı olan hastaların prognozu iyi olmakla birlikte, birçok tedavi seçeneği olmasına rağmen prognozu sınırlı olan sonraki aşamalarda birçok tümör tanısı konur. 2 , 3 , 4 , 5 Mevcut CRC fare modellerinin çoğunluğu, hücre hatlarından veya hasta tümörlerinden türetilen tümör hücrelerinin immün yetersiz farelere implante edilmesine dayanır. 6 , 7 , 8 Bu, lokal yol açar ve enjeksiyon yerine ve enjeksiyon için kullanılan tümör hücrelerine bağlı olarak, bazen metastatik tümörler oluşturur. Ancak, ortaya çıkan xenograft modelleri majo&#39;yduSınırlamaları. Bağışıklık eksikliği olan farelerde kurulmalılar, böylece tümör ve bağışıklık sistemi arasındaki karmaşık etkileşim ortadan kaldırılmalıdır. Buna ek olarak, tümör stroması konukçu hücrelerden türetildiğinde, insan tümörü parankimi ile mürin stroması arasındaki etkileşim kusurludur ve bu nedenle hastalığı temsil etmez. Bu eksiklikler, enjeksiyon için fare hücre dizilerinin kullanımı ile engellenebilir. Bununla birlikte, sadece birkaç fare CRC hücre çizgisi mevcuttur ve en çok bulunan insan CRC hücre çizgilerine benzer şekilde, monoklonal ve oldukça anaplastiktir. Özetle, halihazırda mevcut CRC fare modellerinin çoğu yapaytır ve insan hastalığını tam olarak temsil etmez. CRC&#39;nin genetik olarak tasarlanmış fare modelleri (GEMM&#39;ler), bu iki dezavantajdan kaçınılabildikleri için kolondaki CRC&#39;nin anahtar mutasyonlarının indüksiyonu yoluyla oluşturulan gerçek fare tümörleri özelliği taşırlar. 12 , 13 ,14 Bu, kolorektal mukozadaki kreatin recombinaz tarafından koşullu (ökelenmiş) tohum çizgisi mutasyonlarının aktivasyonu ile başarılabilir. Diğer pek çok tümör varlıklarının GEMM&#39;lerinde dokuya özgü hızlandırıcılar tarafından yönlendirilen germline (indüklenebilir) cre ifadesi kullanılırken, germline cre, kolondaki çok sayıda adenomaya yol açtığı için benign tümör yükü tarafından ölüm neden olur Çok genç yaş. Bu nedenle, burada tarif edilen modelde, cre&#39;yi ifade eden bir adenoviral vektör kısa bir kolon segmentini enfekte etmek için kullanılır. Bu, araştırmacı tarafından tanımlanan bir zaman noktasında, mukozanın bu segmenti içindeki tümörojenezin uyarılmasına yol açarak sonuçta invaziv ve metastatik karsinomaya ilerleyen adenomlarla sonuçlanır. Tümörler orijinal fare tümörleri olup bozulmamış bir mikro ortamda büyür ve bu nedenle tümör-konakçı etkileşimi ve metastatik kaskad da dahil olmak üzere kolorektal onkogenezin tamamını taklit edebilmektedir. Bu modelBu nedenle kanser biyolojisi ve klinik öncesi terapötik denemeler için çekici bir platform. CRC&#39;nin genetik olarak tasarlanmış fare modellerinin büyük bir dezavantajı teknik karmaşıklığıdır. Floxed Apc alelleri taşıyan farelerde rektal adeno-cre enema kullanan lokal cre doğum daha önce tanımlanmıştır; Bununla birlikte, bağırsak tümörlerinin insidansı, çokluğu ve lokalitesi, bu teknikle oldukça değişken olabilir. 15 Bu nedenle, adeno-cre enfeksiyonunun indüklenecek segmentin ameliyat klemplemesi ile sınırlandırılması tekniği geliştirilmiştir. 13 Bu prosedürü, hayvan refahını arttırmak için, ayrıca mortaliteyi ve ortaya çıkan tümör sayısını azaltmak için değiştirdik. Bu protokol ile, küçük kemirgen cerrahide deneyime sahip tüm laboratuarlar, modeli çoğaltmalı ve kolonoskopi için kolaylıkla erişilebilen ve oldukça tekrarlanabilir olan tümörler üretmelidir. Koşullu m&#39;ye bağlı olarakTümörigenez için kullanılan utasyonlar, adenomun tam spektrumu, invaziv karsinom ve metastazlar gözlenebilir. Tümörler distal kolondaki konumundan dolayı bu modelde seri endoskopik değerlendirme kolayca mümkündür.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents / consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies GmbH</td>
			<td>14190169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%, Phenol-Red)</td>
			<td>Life Technologies GmbH</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline 0.9% (E154)</td>
			<td>Serumwerk Bernburg AG</td>
			<td>10013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua ad injectabilia</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>235144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL)</td>
			<td>Gene Transfer Vector Core 
			University of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL, 50 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td>188271/227270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tubes 1.5 mL/ 2 mL</td>
			<td>Sarstedt AG &#38; Co.</td>
			<td>72,695,400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish PS 100/15 mm (sterile, Nuclon)</td>
			<td>Fisher Scientific GmbH</td>
			<td>10508921/ NUNC150350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe (without dead volume) - Injekt-F SOLO</td>
			<td>Braun/neoLab</td>
			<td>194291661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G injection needle</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analgesia / anesthesia</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie)</td>
			<td>AbbVie Germany GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen</td>
			<td>Air Liquide Medical GmbH</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Temgesic)</td>
			<td>Indivior Eu Ltd.</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen - ophthalmic ointment</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>10047757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table Top Research Anesthesia Machine x/O2 Flush w/ Sevoflurane Vaporizer</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>V3000PS/PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose swabs</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher Deutschland</td>
			<td>13356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe EMG 1 mL (with 30G cannula)</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>9161627S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Bore Tubing (bore: 0.28 mm/ diameter: 0.61mm)</td>
			<td>Smiths Medical Deutschland</td>
			<td>800/100/100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissor - ToughCut</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar Needle Holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip Kit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS Z1012H 6/0 C1 (surgical suture)</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH</td>
			<td>Z1012H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Micro Serrefine Vascular Clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fogarty Spring Clips</td>
			<td>Edwards</td>
			<td>CDSAFE 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot Plate 062</td>
			<td>Labotect</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isis - Hair shaver</td>
			<td>Aesculap - Braun</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colonoscopy</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Fountain XENON 175 SCB</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20132101-1</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Light Cable</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>69495NL</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRICAM Three-Chip Camera Head</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20221030</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRICAM SLII Camera Control Unit</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20223011-1</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15&#34; Flat Screen Monitor EndoVue</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>9415NN</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HOPKINS Straight Forward Telescope 
			diameter 1.9 mm; length 10 cm 
			autoclavable 
			fiber optic light transmission incorporated</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>64301AA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protection and Examination Sheath</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>61029C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a genetically engineered mouse model of sporadic colorectal cancer

Kolay uygulanabilirlik ve maliyet etkinliğinin avantajlarına rağmen, tümör hücresi enjeksiyonuna dayanan kolorektal kanserli fare modelleri ciddi sınırlamalara sahiptir ve tümör biyolojisi ve tümör hücresi yayılımını doğru şekilde simüle etmez. Genetik olarak tasarlanmış fare modelleri bu sınırlamaların üstesinden gelmek için sunulmuştur; Bununla birlikte, bu tür modeller, özellikle tek bir tümörün arzulanan kolon gibi büyük organlarda teknik olarak talep edilmektedir. Sonuç olarak, oldukça uyumlu tümörler geliştiren ve tümör biyolojisi çalışmaları ve terapötik denemeler için kullanılabilen, bağışıklık kazandırıcı, genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli geliştirildi. Tümör gelişimi, bileşik koşullu mutant farelerde distal kolonun adeno-cre virüsü ile cerrahi, segmental enfeksiyonu ile başlatılır. Kolonoskopi ile tümörler kolayca tespit edilebilir ve izlenebilir. Burada segmental adeno-cre enfeksiyonunun cerrahi tekniğini tanımlıyoruzKolon, yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile tümörün gözetimi ve oluşan kolorektal tümörler.

Yeterli şekilde uygulandığında, hayvanlar&gt; n% 85&#39;inde tümörler gelişir. Burada sunulan cerrahi prosedürün mortalitesi &lt;% 5, kolonoskopinin mortalitesi neredeyse mevcut değildir. Farelerin çoğunda tek bir lezyon tespit edilmiştir; Yaklaşık% 30 2-3 küçük adenom tespit edilebilir, bunlar genellikle tümör indüksiyonundan 2-3 hafta sonra tek bir tümöre bağlanır. Ortaya çıkan tümörlerin fenotip...

Watch this Scientific Journal Video about A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer at JoVE.com

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli kurulması ve yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile gözlemlenmesi için bir protokol sunulmuştur.

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

a-genetically-engineered-mouse-model-of-sporadic-colorectal-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

9.4K Görüntüleme.  Technische Universität Dresden.  Segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli kurulması ve yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile gözlemlenmesi için bir protokol sunulmuştur. 

Video: A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Kanser Araştırmaları

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. Here we describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. With appropriate shielding, the irradiation targets the lower abdominal/pelvic region of the mouse, sparing the brain, in an effort to model radiation treatment received by individuals with pelvic cancers. We deliver an irradiation dose that is sufficient to induce fatigue-like behavior in mice, measured by voluntary wheel-running activity (VWRA), without causing obvious morbidity. Since wheel running is a normal, voluntary behavior in mice, its use should have little confounding effect on other behavioral tests or biological measures. Hence, wheel running can be used as a feasible outcome measure in understanding the behavioral and biological correlates of fatigue. CRF is a complex condition with frequent comorbidities, and likely has causes related both to cancer and its various treatments. The methods described in this paper are useful for investigating radiation-induced changes that contribute to the development of CRF and, more generally, to explore the biological networks that can explain the development and persistence of a peripherally-triggered but centrally-driven behavior like fatigue.

We describe a method using targeted peripheral irradiation to induce fatigue-like behavior in mice. The selected non-lethal irradiation dose leads to a week-long reduction in voluntary wheel-running activity.

Periferik Radyasyonla Bağlı Yorgunluk A Fare Modeli

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Orthotopic mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in hollow organs such as the large bowel. In order to produce uniform tumors which reliably grow and metastasize, standardized techniques of tumor cell preparation and injection are critical. 
We have developed an orthotopic mouse model of colorectal cancer (CRC) which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor cells from either primary tumors, 2-dimensional (2D) cell lines or 3-dimensional (3D) organoids are injected into the cecum and, depending on the metastatic potential of the injected tumor cells, form highly metastatic tumors. In addition, CTCs can be found regularly. We here describe the technique of tumor cell preparation from both 2D cell lines and 3D organoids as well as primary tumor tissue, the surgical and injection techniques as well as the isolation of CTCs from the tumor-bearing mice, and present tips for troubleshooting.

We describe the establishment of orthotopic colorectal tumors via injection of tumor cells or organoids into the cecum of mice and the subsequent isolation of circulating tumor cells (CTCs) from this model.

Kolorektal kanserli bir Ortotopik Fare Modelinde Dolaşan Tümör Hücrelerinin İzolasyonu

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel therapies in pancreatic cancer. Tumor onset is variable in the KPC model between 8 weeks and several months. Therefore, non-invasive imaging tools are required to screen for tumor onset and monitor for response to treatment. To address this issue, different approaches have emerged over the last years. High resolution ultrasound has major advantages such as non-invasiveness, fast session times and a high image resolution without radiation exposure. However, ultrasound in mice is not trivial and sufficient anatomical knowledge and practical skills are required to successfully perform high resolution ultrasound in preclinical pancreatic cancer models. With the following article, a detailed hands-on guide for abdominal ultrasound in murine models with a particular focus on endogenous pancreatic cancer models is presented. Furthermore, a summary of common mistakes and how to avoid them is provided.

This article describes the utilization of high-resolution ultrasound in genetically engineered pancreatic cancer mice. The primary aim is to provide a detailed instruction for detection and evaluation of endogenous pancreatic tumors.

Yüksek çözünürlüklü ultrason monitör tümör başlangıçlı ve büyüme genetiği pankreas kanseri modellerinde kullanmak

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by introducing specific mutations in oncogenes and tumor suppressor genes, using clustered regulatory interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-based genome editing technology in mice. This technology allows us to accurately mimic the genetic changes that occur in human cancers using mice. By genetically transforming murine primary cells, we can better study cancer development, progression, treatment, and diagnosis. In this study, we used Cre-inducible Cas9 mouse tongue epithelial cells to enable genome editing using adeno-associated virus (AAV) in vitro. Specifically, by altering KRAS, p53, and APC in normal tongue epithelial cells, we generated a murine head and neck cancer (HNC) cell line in vitro,which is tumorigenic in syngeneic mice. The method presented here describes in detail how to generate HNC cell lines with specific genomic alterations and explains their suitability for predicting tumor progression in syngeneic mice. We envision that this promising method will be informative and useful to study tumor biology and therapy of HNC.

Development of murine models with specific genes mutated in head and neck cancer patients is required for understanding of neoplasia. Here, we present a protocol for in vitro transformation of primary murine tongue cells using an adeno-associated virus-Cas9 system to generate murine HNC cell lines with specific genomic alterations.

Adeno-Associated Virus-Cas9 Sistemi Kullanılarak Genetiği Değiştirilmiş Bir Murine Baş ve Boyun Kanseri Hücre Hattı In Vitro Kurulması

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Establishing a Competing Risk Regression Nomogram Model for Survival Data

The Kaplan&#8211;Meier method and Cox proportional hazards regression model are the most common analyses in the survival framework. These are relatively easy to apply and interpret and can be depicted visually. However, when competing events (e.g., cardiovascular and cerebrovascular accidents, treatment-related deaths, traffic accidents) are present, the standard survival methods should be applied with caution, and real-world data cannot be correctly interpreted. It may be desirable to distinguish different kinds of events that may lead to the failure and treat them differently in the analysis. Here, the methods focus on using the competing regression model to identify significant prognostic factors or risk factors when competing events are present. Additionally, nomograms based on a proportional hazard regression model and a competing regression model are established to help clinicians make individual assessments and risk stratifications in order to explain the impact of controversial factors on prognosis.

Presented here is a protocol to build nomograms based on the Cox proportional hazards regression model and competing risk regression model. The competing method is a more rational method to apply when competing events are present in the survival analysis.

Survival Data için Rakip Risk Regresyon Nomogram Modeli Oluşturma

The Kaplan&#8211;Meier method and Cox proportional hazards regression model are the most common analyses in the survival framework. These are relatively ...

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a primary tumor has been induced by tamoxifen treatment, an increase in metastatic burden is observed within 4-6 weeks after induction. This paper shows how Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) imaging can be exploited to monitor the increase in metastatic involvement of the inguinal lymph nodes by measuring the increase in their volume.
The UHFUS system is used to scan anesthetized mice with a UHFUS linear probe (22-55 MHz, axial resolution 40 &#181;m). B-mode images from the inguinal lymph nodes (both left and right sides) are acquired in a short-axis view, positioning the animals in dorsal recumbency. Ultrasound records are acquired using a 44 &#181;m step size on a motorized mechanical arm. Afterward, two-dimensional (2D) B-mode acquisitions are imported into the software platform for ultrasound image post-processing, and inguinal lymph nodes are identified and segmented semi-automatically in the acquired cross-sectional 2D images. Finally, a total reconstruction of the three-dimensional (3D) volume is automatically obtained along with the rendering of the lymph node volume, which is also expressed as an absolute measurement.
This non-invasive in vivo technique is very well tolerated and allows the scheduling of multiple imaging sessions on the same experimental animal over 2 weeks. It is, therefore, ideal to assess the impact of pharmacological treatment on metastatic disease.

Melanoma is a very aggressive disease that quickly spreads to other organs. This protocol describes the application of ultra-high-frequency ultrasound imaging, coupled with 3D rendering, to monitor the volume of the inguinal lymph nodes in the Braf/Pten mouse model of metastatic melanoma.

Braf/Pten Genetiği Mühendisliğiyle Tasarlanmış Melanom Fare Modelinde Ultra Yüksek Frekanslı Ultrason Görüntüleme ile Lenf Düğümü Hacminin Analizi

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the tumor microenvironment, play a crucial role in metastatic CRC progression and predict poor patient prognosis. However, there is a lack of satisfactory mouse models to study the crosstalk between metastatic cancer cells and CAFs. Here, we present a method to investigate how liver metastasis progression is regulated by the metastatic niche and possibly could be restrained by stroma-directed therapy. Portal vein injection of CRC organoids generated a desmoplastic reaction, which faithfully recapitulated the fibroblast-rich histology of human CRC liver metastases. This model was tissue-specific with a higher tumor burden in the liver when compared to an intra-splenic injection model, simplifying mouse survival analyses. By injecting luciferase-expressing tumor organoids, tumor growth kinetics could be monitored by in vivo imaging. Moreover, this preclinical model provides a useful platform to assess the efficacy of therapeutics targeting the tumor mesenchyme. We describe methods to examine whether adeno-associated virus-mediated delivery of a tumor-inhibiting stromal gene to hepatocytes could remodel the tumor microenvironment and improve mouse survival. This approach enables the development and assessment of novel therapeutic strategies to inhibit hepatic metastasis of CRC.

Portal vein injection of colorectal cancer (CRC) organoids generates stroma-rich liver metastasis. This mouse model of CRC hepatic metastasis represents a useful tool to study tumor-stroma interactions and develop novel stroma-directed therapeutics such as adeno-associated virus-mediated gene therapies.

Karaciğer Metastazı Stromasını İncelemek için Kolorektal Kanser Organoidlerinin Portal Ven Enjeksiyonu

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor types, numerous mouse models have been developed in order to investigate the next generation of cancer therapies. However, in GIST, most in vivo studies use xenograft mouse models which have inherent limitations. Here, we describe an immunocompetent, genetically engineered mouse model of gastrointestinal stromal tumor harboring a KitV558&#916;/+ mutation. In this model, mutant KIT, the oncogene responsible for most GISTs, is driven by its endogenous promoter leading to a GIST which mimics the histological appearance and immune infiltrate seen in human GISTs. Furthermore, this model has been used successfully to investigate both targeted molecular and immune therapies. Here, we describe the breeding and maintenance of a KitV558&#916;/+ mouse colony. Additionally, this paper details the treatment and procurement of GIST, draining mesenteric lymph node, and adjacent cecum in KitV558&#916;/+ mice, as well as sample preparation for molecular and immunologic analyses.

The goal of this manuscript is to describe the KitV558&#916;/+&#160;mouse model and techniques for successful dissection and processing of mouse specimens.

Gastrointestinal Stromal Tümörün Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Moleküler ve İmmünolojik Teknikler

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

An R-Based Landscape Validation of a Competing Risk Model

The Cox proportional hazard model is widely applied for survival analyses in clinical settings, but it is not able to cope with multiple survival outcomes. Different from the traditional Cox proportional hazard model, competing risk models consider the presence of competing events and their combination with a nomogram, a graphical calculating device, which is a useful tool for clinicians to conduct a precise prognostic prediction. In this study, we report a method for establishing the competing risk nomogram, that is, the evaluation of its discrimination (i.e., concordance index and area under the curve) and calibration (i.e., calibration curves) abilities, as well as the net benefit (i.e., decision curve analysis). In addition, internal validation using bootstrap resamples of the original dataset and external validation using an external dataset of the established competing risk nomogram were also performed to demonstrate its extrapolation ability. The competing risk nomogram should serve as a useful tool for clinicians to predict prognosis with the consideration of competing risks.

The present protocol describes codes in R for evaluating the discrimination and calibration abilities of a competing risk model, as well as codes for the internal and external validation of it.