Bu çalışma DK089016 ve L30 RR030244 (MAC), CA153036 (AS) ve P30-DK52574 (Washington Üniversitesi Sindirim Hastalıkları Araştırma Core) tarafından finanse edildi. AIT Howard Hughes Tıp Enstitüsü Tıbbi Araştırma Eğitim Görevlisi oldu.

1. Kolit ile ilişkili Kanser İndüksiyon <ol><li> Seks kafesleri ve deney ve kontrol grupları için kullanılacak yaştaki 6-8 haftalık farelere kenara koyun. Fare tek kuyruk işaretleri veya kulak klipleri ile etiketli olabilir. </li><li> 0. günde, kayıt baz ağırlıkları ve 10 AOM çalışma çözeltisi mg / kg (dH2O içinde 10 mg / ml stok solüsyonundan seyreltilmiştir izotonik salin içinde 1 mg / ml, -20 ° C de tutulur) ile her bir fare intraperitoneal (ip) enjekte . Deneyimlere dayanarak, bu doz 7-14 mg / kg ve / arasında ayarlanabilir veya erken denemede tekrar edilebilir. </li></ol> Dikkat: AOM bir uçucu genotoksik ajan ve ekteki MSDS göre dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır. Sulandırma, kimyasal bir davlumbaz hazırlanan buz üzerinde muhafaza ve kuruma özgü protokoller sonrasında atılmalıdır. <ol start="3"><li> 0.22 mikron selüloz asetat ile f (2,5 g/100 ml) distile su ve geçişte DSS çözüm% 2.5 olunvakum tarafından ilter. Bu doz fare zorlanma ve ortamına bağlı olarak 1-3,5% arasında ayarlanabilir. 1 hafta kadar için hazırlandıktan sonra, DSS çözümü buzdolabında muhafaza edilebilir. </li><li> On günde 7, içme suyu olarak farelere tedarik DSS çözüm. Yaklaşık 250 ml / kafes yeni DSS 5 fare / kafes bir süre için verilmektedir her zaman gerekli olacaktır, ancak, bunlar sadece tahmindir ve hayvan tesisinde kullanılan su şişeleri türüne bağlı olarak değişiklik gösterecektir. </li><li> Yedi gün boyunca DSS sürekli bir kaynağı sağlamak için, DSS çözüm bu dönemde temiz şişeler üç kez (2-3 gün) değiştirilmesi gerekir. Bazı araştırmacılar pozlama bir tedbir olarak yeni bir çözüm ile değiştirmeden önce tüketilen DSS miktarını ölçmek. </li><li> 14. günde, iki hafta için geri standart içme suyuna kafeslere geçiş. </li><li> Tekrar adım (1.4) - (1.6) gün 28 ve 49 üzerinde DSS bir ikinci ve üçüncü çevrimi sağlamaktır. Bir DSS &quot;döngüsü&quot; içme suyu DSS bir hafta oluşurDüzenli (otoklav) su 2 hafta izledi. </li></ol> 2. Klinik Değerlendirme Kolit ve Tümör progresyonu <ol><li> Fare tartılır / haftada 2-3 kez uyulmalıdır. Bazal yüzde ağırlık kaybını kolit şiddetinin bir vekil ölçüsü olarak kullanılır. Rektal kanama, ishal veya prolapsusu Düzenli değerlendirmeler çeşitli skorlama sistemlerine göre deneysel hedeflerine bağlı olarak yapılmış ve rapor edilebilir. 9, 10 </li><li> Ishal ve rektal kanama 2-3 gün ile birlikte% 10 kadar bir kilo kaybı DSS (günlük gözlem hemen bu post-DSS dönemde faydalı olabilir) tam bir döngü izleyen bir hafta içinde beklenebilir. </li></ol> Bazı fareler kurtarmaz olasıdır; kendi ağırlığının% 20&#39;den fazla kaybetme farelerin hayatta kalmak için daha az olasıdır ve erken ötenazi gerektirebilir. 0.5 tek bir IP enjeksiyon - Böyle farelerde 1.0 ml serum fizyolojik flui düzelterek doğru yararlı bir destekleyici tedbir olabilir<html> d hacmi ishal nedeniyle kaybetti. 3. Mürin Endoskopi (İsteğe bağlı) <ol><li> DSS ikinci ya da üçüncü döngü sonrasında Endoskop önce kurban in vivo tümör büyümesini teyit etmek için yapılabilir. AOM / DSS modelinde tümör üretiminde oldukça güvenilir olduğu için, bu genelde bir adım gerekli değildir. Bu fare tümörleri bozmaya potansiyeline sahip olarak sadece birkaç fare, bu yöntem kullanılarak değerlendirilmelidir. 11. </li><li> Inhale veya enjektabl sedasyon ile fare uyuştur. </li><li> Fare uyuşturulduktan sonra, kuyruk ve göğüs bandı ile düz bir tahta için fareyi sabitleyin. </li><li> Fare rektum yavaşça intralüminal görünümü iyileştirmek ve fekal içeriği kaldırmak için şişirmek ve sulanmasında tuzlu kullanarak içine fare endoskop ilerletin. (Endoskopi de tuzlu bir alternatif ve bu tekniği gibi hava insüflasyonu kullanılarak yapılabilir unutmayın tümörün gelişmiş görselleştirme sunabilir. 12) </li></ol>e &quot;&gt; 4. Fare Kurban ve Kolon Hasat <ol><li> Günde 70, her AOM / DSS tedavi fare birden kolon tümörlerinde liman ve değerlendirme için hazır olmalıdır. Büyük tümörler istendiğinde bu tarihten haftalar veya aylar gecikebilir. (Unutmayın ki, prolabe ciddi rektal ile farelerin kurumsal hayvan bakımı komiteleri başı olarak hayvanların aşırı rahatsızlık önlemek için erken ötenazi gerekebilir.) </li><li> Otopsi öncesinde, bireysel izofluran ve servikal dislokasyon (veya diğer kurumsal onaylı yöntem) ile fareler ötenazi. Nihai ağırlık ve diğer ölçümleri şu anda yapılabilir. </li><li> Bir kesme tahtası üzerinde maruz olan ventral tarafı fare yatırın. Kolon çıkarma sırasında karın içeriğinin karışmasını tüyleri önlemek için% 70 etanol ile karın örtün. </li><li> Karın orta hat kavramak ve periton açığa küçük bir kesi yapmak için forseps kullanın. </li><li> Kostal margi boyunca karın her tarafında bu kesi uzatınn. </li><li> Kolon anorektal kavşağına kadar hasat edilebilir böylece pelvis kesmek için makas kullanın. DSS kolit yaralanma distal rektum büyük olduğunu ve buna, bu büyük tümör gelişme bölgesi olduğu için bu önemlidir. </li><li> Böyle mezenterik lenf düğümleri gibi ek dokular da şu anda hasat edilebilir. </li></ol> 5. Makroskopik Analiz Kolon hazırlanması <ol><li> 5 ml&#39;lik bir şınngaya bağlanmış bir 18G iğne kullanılarak gavaj, buz gibi soğuk fizyolojik yönde sıvı çıkar ki salin (PBS) gibi fosfat-tamponlu kolon ile yıkayın. Kolon dokusundan RNA veya protein bazlı analiz için kullanılacaksa, önceden soğutulmuş işi tepsiler kullanılarak soğuk muhafaza edilebilir. </li><li> Soğuk tepsiye onun mezenter ve boya boyunca uzunlamasına kızarmış kolon açın. Tümörler kolon karanlık bir yüzeye yerleştirildiğinde daha kolaylıkla görülebilmektedir. Alternatif olarak,% 1 Alsiyan mavisi boya t vurgulamak için uygulanabilirumors. Bir cetvel veya dijital kumpas ile tümörün boyutunu ve sayısını değerlendirin. </li><li> Tümör ve komşu normal doku küçük bölümlerini histolojik değerlendirme için kalan kolon kısmını bırakarak, RNA, protein, veya immünohistokimyasal (İHK) yöntemlerle gelecek analizi için bu noktada eksize edilebilir. </li></ol> Derhal adım 5.2 izleyerek brüt kolon örneklerinin Dijital fotoğrafçılık yukarıda açıklandığı gibi iki nokta üst üste önemli bölümlerini analiz diğer formları için eksize, özellikle tümör yükünü hassas analizi için yararlı olabilir. Tümör yük (%) gibi ImageJ gibi serbest yazılım kullanarak tümör alanı / toplam kolon alanı olarak hesaplanır. 6. Histolojik Değerlendirme Kolon hazırlanması <ol><li> Şırınga veya parmak ile soğuk tepsi üzerinde kalan kolon% 10 formalin uygulayın. Dokusu bu şekilde en az 30 saniye düzeltmek için izin fiksasyon havza aktarımı sağlıyor. Formalin olun rezidüel wip olduğunued off öncesinde aynı tepsi üzerinde yeni açılan kolon boyama. </li><li> % 10 formalin ile dolu bir leğene kolonların aktarın ve kenarlarından aşağı pin. </li><li> Fiksasyon 3 saat sonra,% 70 etanol için kolonlar aktarın. Kolonlar süresiz% 70 etanol içinde muhafaza edilebilir. </li><li> Kolon (rektum / distal, orta, proksimal) Üç boyuna kesitlerde% 2 agar stabilize ve parafine gömme için sunulabilir. Proksimal kolon ve kolon / rektum distal her fare için düzgün bir şekilde odaklı olduğundan emin olunuz. </li><li> Displazi, crypt hasarı ve enflamasyon önce yayınlanmış protokolleri doğrultusunda deneyimli bir birey tarafından açıklanan ve değerlendirilmesi mümkün olabilir. Deneyci erken displastik olayları algılayabilecek ilgi ise 10, 13-15 Fare gün 70 öncesinde kurban edilebilir. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar Burada tarif AOM / DSS modeli araştırmacı güvenilir farelerde kolon tümörleri oluşturmasına olanak sağlar.Bu modelde Tümör büyüme direkt olarak ilişkili enflamatuar proses tarafından etkilenir. Kolit şiddeti diyare / hematokezya Zayıflama ve varlığı (Şekil 2) takip ederek klinik olarak izlenmelidir. Hastalık aktivitesi bu belirtileri DSS kaldırıldıktan sonra DSS kürün 5 ile ve dört veya daha fazla gün için başlamak eğilimindedir. Nadiren, önemli bir rektal tümör yükü olan farelerin rektal prolapsus gelişebilir. Ikinci veya üçüncü DSS döngüsü ishal kalıcı hale gelebilir sonra. Genellikle tümör öncesinde DSS üçüncü aşama (Şekil 3) murin kolonoskopi ile mevcut ve tanımlanabilir. Ek zaman ve hasat zamanı (Şekil 4), daha büyük tümörlerde DSS sonuçları üçüncü bir ders. Leke Topikal olarak uygulanan Alsiyan mavisi kullanarak tümör (Şekil 5) vurgulamak için kullanılır. Kolon tümörlerinin Fotoğraf kantitatif tümör üretim ve boyutunu karşılaştırmak için kullanılabilir tümör ölçümler yaratmaya yardımcı olacak,Deney grupları arasında (Şekil 6). Sabit ve parafin kolon örneklerinin ardından histolojik veya immünohistokimyasal boyanma kullanımı (Şekil 7 ve 8) ile değerlendirilebilir. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. AOM ve DSS yönetiminin şematik. AOM (10 mg / kg) 0. günde enjekte edilir. İkinci hafta (günde 7) başında,% 2.5 DSS çözümü kendi içme suyu farelere uygulanır. DSS Yedi gün boyunca otoklava su, iki hafta ile takip edilir. DSS ek bir iki kür feda öncesinde uygulanır. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig2.jpg" alt="Şekil 2," /> AOM ve DSS yönetimi sırasında başlangıca göre Şekil 2. Fare ağırlığı. Hafta, fareler los her DSS döngü sonrasında unutmayın<html> vücut ağırlığının e% 5-10. Bu deneyde Kilo kaybı kolit şiddeti için vekil marker olduğunu. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. AOM / DSS tedavi günde 50 murin endoskopi yoluyla distal kolonda tümör görüntüleme. Normal kolon göre distal kolon lümeni engelleyen çoklu polipoid kitle (b, c) (a) not edin. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig4.jpg" alt="Şekil 4," /> Şekil 4. Boyuna tümörlerin brüt görünümünü gösteren fare kolon açıldı. Kolon / rektum (sol üst resim) distal yüksek tümör yükü ve küçük bir tümör büyüme ile proksimal kolonda (sağ üst resim) karakteristik rugated doku unutmayın. Distal kolon görünümü kadar yakın bir farklı boyutlarda (aşağıda) çok sayıda tümörler gösterir. ove_content &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; always &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig5.jpg" alt="Şekil 5," /> Alcian blue uygulama tarafından vurgulanan Şekil 5. Tümörler leke. Boya kolon ve normal doku hem de her bir tümör sınırları vurgular kullanıldığını not edin. Bu tür boyama cetvel veya dijital ölçüm ile tümör alanlarının hassas ölçümü yararlı olabilir. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig6.jpg" alt="Şekil 6" /> Şekil 6. AOM / DSS ile tedavi fare başına tümörlerin ortalama sayısı Temsilcisi dağılımı. Tümörlerin çoğu distal kolon içinde yer alan not edin ve boyutunu &lt;2 mm &#39;dir. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig7.jpg" alt="Şekil 8," /> Şekil 7. Parafin (yukarıda) kaset kolon boyuna kesitlerH &amp; E izleyerek slayt d (aşağıda) leke. O artık Alcian leke mavi H &amp; E boyama ile karışmaz unutmayın. Büyük tümör slayt görüntüsü (işaretli) döndürülür. Belirtme &quot;distal&quot;, &quot;orta&quot; ve &quot;çekum ve anüs arasında üçte tüm kolon kesit proksimalinde&quot; sonucudur. <img src="/files/ftp_upload/4100/4100fig8.jpg" alt="Şekil 8," /> Şekil 8. Distal kolonda AOM / DSS yönetiminin kaynaklanan bir tümörün Temsilcisi histolojisi. H &amp; E, BrdU, ve (Üst panel) 50X ve 400X de β-katenin boyalı kesitler (Alt panel) sırasıyla kolon insan adenokarsinoma benzer displastik değişiklikler göstermektedir.

<ol>
	<li>Ekbom, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis+and+colorectal+cancer.+A+population-based+study.">Ulcerative colitis and colorectal cancer. A population-based study.</a> N. Engl. J. Med. 323, 1228-1233 (1990).</li><li>Terzic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+colon+cancer.">Inflammation and colon cancer.</a> Gastroenterology. 138, 2101-2114 (2010).</li><li>Ullman, T. A., Itzkowitz, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+inflammation+and+cancer.">Intestinal inflammation and cancer.</a> Gastroenterology. 140, 1807-1816 (2011).</li><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysplasia+and+carcinoma+development+in+a+repeated+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis+model.">Dysplasia and carcinoma development in a repeated dextran sulfate sodium-induced colitis model.</a> J. Gastroenterol. Hepatol. 17, 1078-1083 (2002).</li><li>Kanneganti, M., Mino-Kenudson, M., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+colitis-associated+carcinogenesis.">Animal models of colitis-associated carcinogenesis.</a> J. Biomed. Biotechnol. 342637, (2011).</li><li>Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+mouse+model+of+colon+carcinogenesis+for+the+analysis+of+sporadic+and+inflammation-driven+tumor+progression.">An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression.</a> Nat. Protoc. 2, 1998-2004 (2007).</li><li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+inflammation-related+mouse+colon+carcinogenesis+model+induced+by+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate.">A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate.</a> Cancer Sci. 94, 965-973 (2003).</li><li>De Robertis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AOM/DSS+murine+model+for+the+study+of+colon+carcinogenesis:+From+pathways+to+diagnosis+and+therapy+studies.">The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies.</a> J. Carcinog. 10, 9 (2011).</li><li>Wirtz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).</li><li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+study+of+dextran+sulfate+sodium+experimental+murine+colitis.">Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis.</a> Lab Invest. 69, 238-249 (1993).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Wirtz, S., Nikolaev, A., Kiesslich, R., Lehr, H. A., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy.">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li><li>Shaker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epimorphin+deletion+protects+mice+from+inflammation-induced+colon+carcinogenesis+and+alters+stem+cell+niche+myofibroblast+secretion.">Epimorphin deletion protects mice from inflammation-induced colon carcinogenesis and alters stem cell niche myofibroblast secretion.</a> J. Clin. Invest. 120, 2081-2093 (2010).</li><li>Boivin, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+mouse+models+of+intestinal+cancer:+consensus+report+and+recommendations.">Pathology of mouse models of intestinal cancer: consensus report and recommendations.</a> Gastroenterology. 124, 762-777 (2003).</li><li>Cooper, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysplasia+and+cancer+in+the+dextran+sulfate+sodium+mouse+colitis+model.+Relevance+to+colitis-associated+neoplasia+in+the+human:+a+study+of+histopathology,+B-catenin+and+p53+expression+and+the+role+of+inflammation.">Dysplasia and cancer in the dextran sulfate sodium mouse colitis model. Relevance to colitis-associated neoplasia in the human: a study of histopathology, B-catenin and p53 expression and the role of inflammation.</a> Carcinogenesis. 21, 757-768 (2000).</li><li>Yoshida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+forkhead+box+M1+transcription+factor+contributes+to+the+development+and+growth+of+mouse+colorectal+cancer.">The forkhead box M1 transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 132, 1420-1431 (2007).</li><li>Suzuki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+differences+in+the+susceptibility+to+azoxymethane+and+dextran+sodium+sulfate-induced+colon+carcinogenesis+in+mice.">Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice.</a> Carcinogenesis. 27, 162-169 (2006).</li><li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am. J. Physiol. 274, 544-551 (1998).</li><li>Nambiar, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+analysis+of+azoxymethane+induced+colon+tumors+in+inbred+mice+commonly+used+as+transgenic/knockout+progenitors.">Preliminary analysis of azoxymethane induced colon tumors in inbred mice commonly used as transgenic/knockout progenitors.</a> Int. J. Oncol. 22, 145-150 (2003).</li><li>Tanaka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+carcinogenesis:+Review+of+human+and+experimental+animal+studies.">Colorectal carcinogenesis: Review of human and experimental animal studies.</a> J Carcinog. 8, (2009).</li><li>Ciorba, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IDO-1+by+immunostimulatory+DNA+limits+severity+of+experimental+colitis.">Induction of IDO-1 by immunostimulatory DNA limits severity of experimental colitis.</a> J. Immunol. 184, 3907-3916 (2010).</li><li>Kerr, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification:+A+poly-A+purification+solution.">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: A poly-A purification solution.</a> Inflamm. Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li><li>Tang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=is+required+for+resection-induced+changes+in+apoptosis,+proliferation,+and+members+of+the+extrinsic+cell+death+pathways.">is required for resection-induced changes in apoptosis, proliferation, and members of the extrinsic cell death pathways.</a> Gastroenterology. 126, 220-230 (2004).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Hızlı ve etkili modeller insan kolit ile ilişkili kanser AOM ve DSS ile farelerin tedavisi. Kolit ile ilişkili kanserlerin katkıda bulunan faktörleri kalıtsal ilişkin Hipotezler kolayca genetiğiyle oynanmış farelerin ile ele alınabilir. 13. Alternatif 16, kolit ilişkili kanser farmakolojik hedefler etkisi wild-tip fareler kullanılarak incelenebilir. Bu model son derece inflamasyon ortamda kolon tümör gelişimini çalışmaya ilgilenenler tarafından değ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> C57BL/6J Fare </td><td> Jackson Laboratuvarı </td><td> 000664 </td><td></td></tr><tr><td> Azoxymethane (AOM) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5486-100mg </td><td> Stok çözeltisi: seyreltilir 10 0.5 kadar -20 ° C&#39;de muhafaza edilmesi için distile su içinde mg / ml - 1 ml alikotları. Çalışma çözüm: izotonik içinde 1 mg / ml (% 0.9) serum fizyolojik stok sulandırmak </td></tr><tr><td> Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) </td><td> TDB Danışmanlık </td><td> Db001 </td><td> MW 40 kDa (diğer kaynaklardan 36-50 kDa hazırlıklar kabul edilebilir; aynı lot tek bir deney için kullanılmalıdır) 6 </td></tr><tr><td> Coloviewminiendoscopic sistemi </td><td> Karl Storz </td><td> Çoklu </td><td> Ekipman ve kurulum ayrıntılı açıklama için Becker ve ark. Bkz. 11. </td></tr><tr><td> DYP Rapid FILTERMAX 500 ml Şişe-Filtre, 0.22 mikron PES </td><td> Midwest Scientific </td><td> TP99500 </td><td> Herhangi bir standart doku kültürü filtresi kabul edilebilir </td></tr><tr><td> Etil Alkol 200 Proof ASC / USP </td><td> Farmakoterapötik AAPER (veya diğer) </td><td> 11ACS200 </td><td> Distile su içinde% 70 sulandırınız </td></tr><tr><td> İzofluran, USP </td><td> Butler Hayvan Sağlığı Kaynağı </td><td> 4029405 </td><td> Gazlı bez ya da anestezi batırılmış küçük bir bezle cam kavanoza koyun fare </td></tr><tr><td> 18G Düz Gavaj İğne </td><td> Braintree Bilimsel </td><td> N-008 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfat Salin (PBS) Tamponlanmış </td><td> SigmaAldrich </td><td> P5493 </td><td> Distile su 1X (0.01 M) seyreltin </td></tr><tr><td> Soğuk Kaset (Tissue Tek II Soğuk Plate) </td><td> Fisher Scientific </td><td> NC9491941 </td><td> -20 ° C&#39;de saklayın </td></tr><tr><td> ImageJ Yazılım </td><td> NIH (ücretsiz) </td><td></td><td> <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> Formaldehit (% 37) </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-500 </td><td> PBS içinde% 10 ile seyreltilir </td></tr><tr><td> BD Bacto Agar </td><td> Fisher Scientific </td><td> DF0140-01-0 </td><td> Distile su içinde% 2 çözelti oluşturmak için ısı plakası kullanarak </td></tr><tr><td> Miltex Göz Giyinme Forseps </td><td> MedPlus A.Ş. </td><td> 18-780 </td><td></td></tr><tr><td> Miltex Göz Makas </td><td> MedPlus A.Ş. </td><td> 18-1430 </td> &lt;td&gt; Kavisli noktaları açılması sırasında kolon hasar görmesini engellemek. </td></tr><tr><td> Alsiyan Mavi 8GX (toz) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A5268 </td><td> 100 ml% 3 asetik asit (3 ml glasiyal asetik asit + 97 ml damıtılmış su) ile 1 g toz ekleme </td></tr><tr><td> Intradermal konik iğne ekli 26 G x 3/8 ile 1 ml tüberkülin şırıngası </td><td> BD </td><td> 305946 </td><td> AOM enjeksiyon için </td></tr></tbody></table>

modeling colitis-associated cancer with azoxymethane (aom) and dextran sulfate sodium (dss)

Gibi Crohn hastalığı (CH) ve ülseratif kolit (ÜK) gibi enflamatuar barsak hastalığı olan bireyler (İBH), sağlıklı bireyler üzerinde kolorektal kanser (CRC) yakalanma riski altındadır. Bu risk yaygın kolon tutulumu ile köklü UC olan bireylerin% 30 gibi yüksek bir kümülatif insidans, hastalık süresi ve kapsamı ile orantılıdır. İBH ve ilişkili kolit kansere (CAC) 1 Kolon displazi sonucunda geliştiği düşünülmektedir Bu hücrelerin kronik inflamatuar bir sitokin ortamda kalmış ise. 2 spontan ve kolit ile ilişkili kanserler olmak adenokarsinomların kalitesi paylaşmakla birlikte epitel hücre hasarı ve onarım tekrarlanan döngü, altta yatan moleküler olaylar dizisi farklı olduğuna inanılıyor. 3. Bu ayrım CAC belirli hayvan modelleri için ihtiyaç savunuyor. Birkaç fare modelleri anda CAC çalışma yapılmamış. Dekstran sülfat Sodium (DSS), kolon epiteli üzerine doğrudan toksik etkileri olan bir ajan, kronik inflamatuar bir devlet oluşturmak için birden fazla döngüleri farelere içme suyu tatbik edilebilir. Yeterli süre ile bu farelerin bazı tümörler gelişir. Yanlısı bir kanserojen ortamda yönetilen eğer 4 tümör gelişimi bu modelde hızlandırdı edilir. Bunlar, tümör oluşumunun yollar genetik mutasyonlar ile fareler (APC, p53, Msh2) yanı sıra, fareler genotoksik ajanlar (azoxymethane [AOM], 1,2-dimetilhidrazin [DMH]). 5 ile ön tedavi içermektedir Kolit ilişkili kanser için bir model olarak AOM ile DSS kombinasyonu, tekrarlanabilirlik, kudret, düşük fiyat ve kullanım kolaylığı için popülerlik kazanmıştır. Bunlar ortak bir mekanizmaya sahip olsa da, AOM DMH daha çözelti daha kuvvetli ve stabil olduğu tespit edilmiştir. Diğer modellerde tümör gelişme genellikle gerektirir iken birkaç ay, AOM ile enjekte ve sonradan DSS ile tedavi edilen farelerde bir yeterli tümörler gelişirnin 7-10 hafta kadar az. 6, 7 Son olarak, AOM ve DSS belirli bir tümörojenik suşu ile melezlenmesi herhangi bir genetik arka fareler (Transgenik, vs nakavt) ile tatbik edilebilmektedir. Burada, biz 10 haftalık dönemde DSS üç yedi günlük döngüleri takip AOM tek bir enjeksiyon kullanan farelerde inflamasyon odaklı kolonik tümörogenez için bir protokol göstermektedir. Bu model yakın insan CAC meydana benzeyen histolojik ve moleküler değişiklikler tümör uyarıcı ve bu hastalıkta karsinojeneze ve kemoprevensiyonu çalışması için son derece değerli bir model sunar. 8

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS at JoVE.com

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Biz hızla pro-inflamatuar ajan dekstran sülfat sodyum (DSS) üç kür takip ve sürekli insan kolit görülenler ile morfolojik ve moleküler benzerlikleri olan farelerde kolon tümörleri oluşturur genotoksik ajan azoxymethane (AOM) hangi yönetiminde bir protokol göstermek kanserle ilişkili.

Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

modeling-colitis-associated-cancer-with-azoxymethane-aom-dextran

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

46.5K Görüntüleme.  Washington University School of Medicine. Biz hızla pro-inflamatuar ajan dekstran sülfat sodyum (DSS) üç kür takip ve sürekli insan kolit görülenler ile morfolojik ve moleküler benzerlikleri olan farelerde kolon tümörleri oluşturur genotoksik ajan azoxymethane (AOM) hangi yönetiminde bir protokol göstermek kanserle ilişkili.

Video: Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Tıp

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy tissue is the root cause of disease and death. For other cancers (e.g. breast, lung, etc.), it is the process of metastasis, in which tumor cells move from a primary tumor mass, colonize distal sites and ultimately contribute to organ failure, that eventually leads to morbidity and mortality 3. It has been estimated that invasion and metastasis are responsible for 90&#37; of cancer deaths 4. As a result, there has been intense interest in identifying the molecular processes and critical protein mediators of invasion and metastasis for the purposes of improving diagnosis and treatment 5.
A challenge for cancer scientists is to develop invasion assays that sufficiently resemble the in vivo situation to enable accurate disease modeling 6. Two-dimensional cell motility assays are only informative about one aspect of invasion and do not take into account extracellular matrix (ECM) protein remodeling which is also a critical element. Recently, research has refined our understanding of tumor cell invasion and revealed that individual cells may move by elongated or rounded modes 7. In addition, there has been greater appreciation of the contribution of collective invasion, in which cells invade in strands, sheets and clusters, particularly in highly differentiated tumors that maintain epithelial characteristics, to the spread of cancer 8.
We present a refined method 9 for examining the contributions of candidate proteins to collective invasion 10. In particular, by engineering separate pools of cells to express different fluorescent proteins, it is possible to molecularly dissect the activities and proteins required in leading cells versus those required in following cells. The use of RNAi provides the molecular tool to experimentally disassemble the processes involved in individual cell invasion as well as in different positions of collective invasion. In this procedure, mixtures of fluorescently-labeled cells are plated on the bottom of a Transwell insert previously filled with Matrigel ECM protein, then allowed to invade "upwards" through the filter and into the Matrigel. Reconstruction of z-series image stacks, obtained by confocal imaging, into three-dimensional representations allows for visualization of collectively invading strands and analysis of the representation of fluorescently-labeled cells in leading versus following positions.

Models of tumor cell invasion into three-dimensional extracellular matrix better reflect the in vivo situation than two-dimensional motility assays. Using matrix invasion assays combined with confocal imaging of fluorescently-labeled cells, detailed information on invasion modes and the distinct contributions of leading versus following cells can be obtained.

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical treatments and improved platinum-based chemotherapies, there has been little improvement in EOC survival rates for more than four decades 1,2. Whilst stage I tumors have 5-year survival rates &gt;85%, survival rates for stage III/IV disease are &lt;40%. Thus, the high rates of mortality for EOC could be significantly decreased if tumors were detected at earlier, more treatable, stages 3-5. At present, the molecular genetic and biological basis of early stage disease development is poorly understood. More specifically, little is known about the role of the microenvironment during tumor initiation; but known risk factors for EOCs (e.g. age and parity) suggest that the microenvironment plays a key role in the early genesis of EOCs. We therefore developed three-dimensional heterotypic models of both the normal ovary and of early stage ovarian cancers. For the normal ovary, we co-cultured normal ovarian surface epithelial (IOSE) and normal stromal fibroblast (INOF)&nbsp;cells, immortalized by retrovrial transduction of the catalytic subunit of human telomerase holoenzyme (hTERT) to extend the lifespan of these cells in culture. To model the earliest stages of ovarian epithelial cell transformation, overexpression of the CMYC oncogene in IOSE cells, again co-cultured with INOF cells. These heterotypic models were used to investigate the effects of aging and senescence on the transformation and invasion of epithelial cells. Here we describe the methodological steps in development of these three-dimensional model; these methodologies aren't specific to the development of normal ovary and ovarian cancer tissues, and could be used to study other tissue types where stromal and epithelial cell interactions are a fundamental aspect of the tissue maintenance and disease development.

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

We describe methodologies for establishing in vitro heterotypic three-dimensional models comprising ovarian fibroblasts and normal ovarian surface or ovarian cancer epithelial cells. We discuss the use of these models to study stromal-epithelial interactions that occur during ovarian cancer development.

Üç boyutlu heterotipik<em&gt; In Vitro</emYumurtalık Kanseri Başlatma ve İlerleme sırasında Stromal-Epitel Etkileşimleri&gt; Modelleme

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully recapitulate early- and late-stage metastatic disease progression. Typical tumor implantation models utilize ectopic or orthotopic primary tumor implantation, but few include systemic spontaneous metastatic disease that mimics the clinical setting. This protocol describes the key steps to develop RCC disease progression stages similar to patients. First, it uses a highly metastatic mouse tumor cell line in a syngeneic model to show orthotopic tumor cell implantation. Methods include superficial and internal implantation into the sub-capsular space with cells combined with matrigel to prevent leakage and early spread. Next it describes the procedures for excision of tumor-bearing kidney (nephrectomy), with critical pre- and post- surgical mouse care. Finally, it outlines the steps necessary to monitor and assess micro-and macro-metastatic disease progression, including bioluminescent imaging as well provides a detailed visual necropsy guide to score systemic disease distribution. The goal of this protocol description is to facilitate the widespread use of clinically relevant metastatic RCC models to improve the predictive value of future therapeutic testing.&#160;

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Models of spontaneous metastatic renal cell carcinoma (RCC) disease progression can be used for evaluating treatments in a clinically relevant setting. This protocol demonstrates different procedures for orthotopic kidney tumor cell implantation, proper nephrectomy, and finally outlines a necropsy guide for visual and bioluminescent scoring of metastatic burden and localization.

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Translational Kanser Araştırma İnsan Doku ile Çalışma

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best advance translational objectives and uncover new therapeutic strategies for brain injury associated with preterm birth, preclinical models of EoP must include similar mechanisms of prenatal global injury observed in humans and involve multiple components of the maternal-placental-fetal system. Ideally, models should produce a similar spectrum of functional deficits in the mature animal and recapitulate multiple aspects of the pathophysiology. To mimic human systemic placental perfusion defects, placental underperfusion and/or chorioamnionitis associated with pathogen-induced inflammation in early preterm birth, we developed a model of prenatal transient systemic hypoxia-ischemia (TSHI) combined with intra-amniotic lipopolysaccharide (LPS). In pregnant Sprague Dawley rats, TSHI via uterine artery occlusion on embryonic day 18 (E18) induces a graded placental underperfusion defect associated with increasing CNS damage in the fetus. When combined with intra-amniotic LPS injections, placental inflammation is increased and CNS damage is compounded with associated white matter, gait and imaging abnormalities. Prenatal TSHI and TSHI+LPS prenatal insults meet several of the criteria of an EoP model including recapitulating the intrauterine insult, causing loss of neurons, oligodendrocytes and axons, loss of subplate, and functional deficits in adult animals that mimic those observed in children born extremely preterm. Moreover, this model allows for the dissection of inflammation induced by divergent injury types.

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

Prematüre Modelleme Ensefalopati Sıçanlarda İçi amniyotik Lipopolisakkarid ile Prenatal Hipoksi-iskemi kullanma

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

Modeling the Early Steps of Ovarian Cancer Dissemination in an Organotypic Culture of the Human Peritoneal Cavity

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. Instead, ovarian cancer cells exfoliated from the primary tumor are carried by peritoneal fluid to metastatic sites within the peritoneal cavity. These sites, most notably the abdominal peritoneum and omentum, are organs covered by a mesothelium-lined surface. To investigate the processes of ovarian cancer dissemination, we assembled a complex three-dimensional culture system that reconstructs the lining of the peritoneal cavity in vitro. Primary human fibroblasts and mesothelial cells were isolated from human omentum. The fibroblasts were then mixed with extracellular matrix and covered with a layer of the primary human mesothelial cells to mimic the peritoneal and omental surfaces encountered by metastasizing ovarian cancer cells. The resulting organotypic model is, as shown, used to examine the early steps of ovarian cancer dissemination, including cancer cell adhesion, invasion, and proliferation. This model has been used in a number of studies to investigate the role of the microenvironment (cellular and acellular) in early ovarian cancer dissemination. It has also been successfully adapted to high throughput screening and used to identify and test inhibitors of ovarian cancer metastasis.

Here, we present a protocol to construct a three-dimensional in vitro model of the lining of the peritoneal cavity, composed of primary human mesothelial cells and fibroblasts layered with extracellular matrix, as a tool to investigate ovarian cancer cell adhesion, invasion, and proliferation.

İnsan periton boşluğuna bir Organotipik Kültür Yumurtalık Kanseri Yaygınlaştırılması Erken Adımlar Modelleme

The pattern of ovarian cancer metastasis is markedly different from that of most other epithelial tumors, because it rarely spreads hematogenously. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and progress in this site. The model presented in the current report utilizes human primary bone marrow stromal cells and osteoblasts as two representative cell types from the marrow niche that influence tumor cell phenotype. The in vitro co-culture conditions described for human leukemic cells with these primary niche components support the generation of a chemoresistant subpopulation of tumor cells that can be efficiently recovered from culture for analysis by diverse techniques. A strict feeding schedule to prevent nutrient fluxes followed by gel type 10 cross-linked dextran (G10) particles recovery of the population of tumor cells that have migrated beneath the adherent bone marrow stromal cells (BMSC) or osteoblasts (OB) generating a "phase dim" (PD) population of tumor cells, provides a consistent source of purified therapy resistant leukemic cells. This clinically relevant population of tumor cells can be evaluated by standard methods to investigate apoptotic, metabolic, and cell cycle regulatory pathways as well as providing a more rigorous target in which to test novel therapeutic strategies prior to pre-clinical investigations targeted at minimal residual disease.

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

The current report summarizes a protocol that can be utilized to model the influence of the bone marrow microenvironment niche on leukemic cells with emphasis placed on enrichment of the most chemoresistant subpopulation.

Modelleme Kemoterapi Dayanıklı Lösemi<em&gt; İn Vitro</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...

Modeling and Simulations of Olfactory Drug Delivery with Passive and Active Controls of Nasally Inhaled Pharmaceutical Aerosols

There are many advantages of direct nose-to-brain drug delivery in the treatment of neurological disorders. However, its application is limited by the extremely low delivery efficiency (&#60; 1%) to the olfactory mucosa that directly connects the brain. It is crucial to develop novel techniques to deliver neurological medications more effectively to the olfactory region. The objective of this study is to develop a numerical platform to simulate and improve intranasal olfactory drug delivery. A coupled image-CFD method was presented that synthetized the image-based model development, quality meshing, fluid simulation, and magnetic particle tracking. With this method, performances of three intranasal delivery protocols were numerically assessed and compared. Influences of breathing maneuvers, magnet layout, magnetic field strength, drug release position, and particle size on the olfactory dosage were also numerically studied.
From the simulations, we found that clinically significant olfactory dosage (up to 45%) were feasible using the combination of magnet layout and selective drug release. A 64 -fold higher delivery of dosage was predicted in the case with magnetophoretic guidance compared to the case without it. However, precise guidance of nasally inhaled aerosols to the olfactory region remains challenging due to the unstable nature of magnetophoresis, as well as the high sensitivity of olfactory dosage to patient-, device-, and particle-related factors.

This manuscript reviews the modeling and simulations of different protocols to deliver medications to the olfactory region in image-based nasal airway models. Multiple software modules are used to develop the anatomically accurate nose model, generate computational mesh, simulate nasal airflows, and predict particle deposition at the olfactory region.

Genizden İnhale İlaç Aerosollerin Pasif ve Aktif Kontroller ile Modelleme ve Koku Drug Delivery Simülasyonlar

There are many advantages of direct nose-to-brain drug delivery in the treatment of neurological disorders. However, its application is limited by the ...