Name: ocular kinematics measured by in vitro stimulation of the cranial nerves in the turtle
Uploaded: 2018-06-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle at JoVE.com

Yazarlar Bayan Paulette McKenna ve sekreterlik desteği için bu çalışmada Lisa Pezzino ve Bay Phil Auerbach teknik destek için teşekkür ederiz. Yazarlar ayrıca Drs. Michael Ariel ve Michael S. Jones (Saint Louis Üniversitesi Tıp Fakültesi) izole vitro baş hazırlık için bize tanıtmak için teşekkür ederiz. Bu işbirliği destek için fon Biyoloji bölümü (Robert S. Chase Fonu), akademik araştırma komitesi ve Lafayette Koleji'nde sinirbilim programı tarafından sağlandı. Son olarak, bu eser 28 Eylül 2016 yılında vefat eden Bay Phil Auerbach adanmıştır; taramalı elektron mikroskobu hizmet dışı ve 5 eksenli sahne bu iletişim kuralını kullanmak için kullanışlılığı tanıdı. Onun dostluk ve güçlülük çok özleyeceğiz.

Not: Kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağalar, erkek ve kadın, bir satıcıdan satın alındı. Kaplumbağalar, sıcak bir hayvan paketi 250 W kızılötesi ışıkları altında sunning için tuğla Adaları ile donatılmış iki 60 litrelik küvetleri içeren yer. Çevre su sıcaklığı 22 ° C'de ile 14/10-h açık/koyu döngüsü devam edildi Işıklar 6: 00'de açık ve 8:00 de devre dışı. Filtreleme sistemleri ile donatılmış tankları haftalık temizlenmiştir ve kaplumbağalar ad libitum her geçen gün beslenen edildi. Kırmızı kulaklı kaymak bakım kaplumbağaları ve tüm aşağıdaki deneysel prosedürler açıklanan burada32,33 kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Lafayette Koleji tarafından kabul edildi.
1. ekipman kurulumu
<ol><li>Kaplumbağa zil'ın çözüm hazırlamak. Bu sırada distile su için aşağıdakileri ekleyin: sodyum klorür 96.5 mM (58.44 g/mol), potasyum klorür 2.6 mM (74.56 g/mol), magnezyum klorür 2.0 mM (203.31 g/mol), sodyum bikarbonat 31.5 mM (84.01 g/mol), dekstroz 20,0 mM (180.16 g/mol), konsantre hidroklorik asit pH 7,51 ve kalsiyum klorür 4.0 mM (110.98 g/mol) ayarlamak için (bkz. Tablo malzeme). Çözüm süre her tuz ekleyerek karıştırın. Dikkat: Konsantre HCl tehlikeli (Cilt, gözleri, solunum ve sindirim tehlikeler) olduğunu.</li>
	<li>İpuçları üzerinden 5 cm uzunluğunda kılcal emme elektrotlar için make kranial sinirler değişen kalınlıkta ağırlama cam iç çapları farklı boyutlarda yangın parlatma tarafından (bkz. Tablo malzeme).<ol>
<li>Küçük bir dosya kapiller cam parçası arasında bir çizgi etch için kullanın. Doku sayfa yerleştirin ve ikiye böl.</li>
		<li>Yavaş yavaş kapiller cam ucuna birini Bunsen burner alevin içine at. Düzenli olarak incelemek boyutu, pürüzsüzlük ve simetri bir diseksiyon kullanma için belgili tanımlık uç kapsam ve fiber optik ışık kaynağı ( Malzeme tablobakınız). Not: kafa genişliği 20 ve 30 mm arasında olan kaplumbağaları için en uygun uygun iç çapı genellikle oculomotor sinir (nIII), için 0.8 mm ile 0,4 arasındadır trochlear sinir (NIV) için 0.3-0.6 mm ve abducens sinir (in) için 0,2-0,4 mm boyutlandırır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Temiz ve Rongeurs, bir künt diseksiyon sonda, microscissors, iyi forseps, Kıvrımlı pensler ve neşter kulpu ( Tablo malzemelerigörmek) kanatları diseksiyon ile organize edin. Not: Sterilizasyon aletleri seçime bağlıdır.</li>
</ol>2. anestezi ve ötenazi
<ol><li>Yer bir buz kaplumbağa kova cryoanesthetize için 60 dk için o.</li>
	<li>Kaplumbağayı kullanarak küçük bir hayvan Giyotin işten çıkarma tarafından ötenazi ( Tablo malzemelerigörmek).<ol>
<li>Böylece bir kanca takılı ve üst çene ucu altında uygun ortaya yavaşça küçük bir tartı spatula ile Hayvansal açık çene Gözetlemek.</li>
		<li>Hayvanın kafasını giyotin ile genişletmek için sabit basınç ile çek. Hızla hayvan başını kesmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kaplumbağa kafasını bir diseksiyon tabak yerleştirin. Yandan doku sulamak için yeterli kaplumbağa zil'ın çözüm var. 95/5 O2Co2 çözümle oxygenize (bkz. Tablo malzeme).</li>
	<li>4 ° C'de doku çanak dış buz yerleştirerek korumak.</li>
</ol>3. diseksiyon
<ol><li>Diseksiyon kapsamlı bir fiber optik ışık kaynağı ile diseksiyon taşımak için kullanın.</li>
	<li>Alt çene kaldırın. Başın daha kolay kullanım sağlamak için ağız yoluyla bir künt diseksiyon sondası yerleştirin. Bir neşter ile kafatası dentary kemik bağlanma ortak kesti. Rongeurs kafatası uzak alt çene çekmek için kullanın. Rongeurs deri ve kaslar onların eklerinden kafatası dorsal ve yanal bölgeler koparmak için kullanın.</li>
	<li>Vertebral sütun kaldırmak.<ol>
<li>Kafatası kaudal sonundaki vertebral sütun tanımlayın. Spinal kord ventrally maruz vertebral sütunun viraj. Spinal kord makasla kesme için microscissors kullanın. Rongeurs vertebral sütunun ve diğer doku caudally çekerek kafatası kaldırmak için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Beyin kranial sinirler kesme sonra kafatası kaldırın.<ol>
<li>Deliği magnum başlayarak, rongeurs iki insizyon dorsal kafatası üzerinde kesmek için kullanın. Kesikler yüzeysel altında beyin zarar görmesini önlemek için yapmak.</li>
		<li>Rongeurs dikkatli bir şekilde dorsal kafatası çekmek için kullanın. Microscissors beyin kalan ortaya çıkarmak için meninx kaldırmak için kullanın. Olfaktör ampuller anterior kranial boşluğunda belirlenebilir kadar yeterli meninx kaldırmak ( Şekil 1A' ya bakınız). Gerektiği gibi kaplumbağa zil'ın çözüm ile beyin sulamak devam edin.</li>
		<li>Kıvrımlı pensler yavaşça cerebrum caudally çekin ve kranial sinir hafif gerginlik üretmek için kullanın. Dikkatle kes gitsin ve olfaktör ampuller ve cerebrum eğri forseps ile kaldırın.</li>
		<li>Microscissors orta kranial sinirler ortaya çıkarmak için orta hat doğru yavaşça itin için kullanın; nIII, yaklaşık 0,6 mm, NIV önünde görülebilir ve NIV çapını biraz nIII daha az olacaktır. Kesilmiş nIII ve NIV nerede onlar için orta eklemek (bkz. Şekil 1B). Bunu diğer tarafta tekrarlayın.</li>
		<li>Sol ve sağ optik siniri (nII) microscissors ile kesti. O zaman beyin sapı bir tarafa eğin. İn pons ve medulla yakınındaki ventral yüzeyinden yükselen gözlemlemek (bkz. Şekil 1 c); İn çapı küçük ve yaklaşık 0.3 mm. hem sol ve sağ in kes.</li>
		<li>Beyin kalan bölümlerini kaplumbağa iyi forseps ve microscissors ile kaldırın. Kafatası boş olduğunda, kafatası boşluğu kat inceleyin. NIII, NIV ve in tanımlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Alt ve üst göz-göz kapakları ile iyi forseps ve microscissors kaldırmak.</li>
</ol>4. göz hareketleri kalibrasyonu
<ol><li>Katı bir tabloyu kullanın (gimbal ve diğer enstrümanlar yerleşimini desteklemek için Malzemeler tablobkz:). Kaplumbağa kafa baş sırt yüzeyine paralel olarak küçük bir kabarcık düzeyi arasında kafatası dinlenme kullanarak ufuk gimbal chuck yerleştirin. Kabaca gözleri gimbal'ın yatay ve dikey döndürme merkezinde getirin.</li>
	<li>Bir kızılötesi ışık yayan diyot (LED), video tabanlı göz izleme sistemi parçası olan ile donatılmış kızılötesi kamera yerleştirin (bkz. Tablo malzemeler), yaklaşık 12 cm kaplumbağanın göz görüş uzaklığı olarak.<ol>
<li>Kameranın göz yukarıda bakış açısı 45 derece açı. LED kamera objektifi bakıldığında 11: 00 konumda olmalıdır. Merkezi LED gözün optik eksen boyunca. Kamerayı biraz ekseni (göz yukarıdan bakıldığında) olacaktır.</li>
		<li>Kamera görünümü sonuna kadar gözü tarafından doldurulur göz fotoğraf makinesinin mesafeyi ayarlayın. Gözler (canthi) köşe yatay görünüm kenarlarında olduğundan emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kamera izleme sistemi verileri işlemek için video tabanlı göz bağlayın. Ham video yakalamak için bir DVD kaydedici için sinyal bölün. Gözün net bir görüntü elde etmek için kamera odaklama. Güzel pozisyonlu linear ayar (x, y, z) üç derece kullanarak kamera görünümü ortasındaki göz gimbal ile sağlanan için dikkat ediniz.</li>
	<li>Karanlık gözbebeği uygun takip sistemi video tabanlı göz ile sağlanan program kullanarak kontrast ve eşik ayarlayarak algılamak.<ol>
<li>Fareyi kullanarak, "Video" menüsünde'i tıklatın ve "Mode" altında "Yüksek hassasiyetli 30 Hz (kararlılık-in 640 piksel x 480 satırları) örnekleme hızında çekim" seçin. Ayrıca "Görüntü'nün altında", "Karanlık gözbebeği" "Öğrenci türü" ve "Elips (döndürülmüş elips)" için "öğrenci segmentasyon yöntemi için" seçin.</li>
		<li>"EyeCamera" penceresinde, "Öğrenci arama alanı ayarlama" simgesini (merkezi bir nokta ile küçük dikey dikdörtgen) tıklayın. Öğrenci bir çevresi sınırlar bir dikdörtgen dışarı sürüklemek için fareyi kullanın. Karışık karanlık bölgeler ile öğrenci kaçının.</li>
		<li>"Denetim" penceresinde, "Otomatik görüntü" ve "pozitif-kilidi eşik izleme" kutularını işaretli olduğundan emin olun. "Auto-tarama, yoğunluk en iyi duruma getirmek için üzerinde karanlık bir öğrencisi yeşil noktalar poliçelerinizin eşik" tıklayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yatay ekseni çevresinde ve (+/-) 10 ° dikey ekseni etrafında gimbal 12.5 ° (+/-) rotasyonları için programı izleme video tabanlı göz video görüntüsünü ayarlama.<ol>
<li>"Denetim" penceresinde, "Ekranda"'ı tıklatın. Kutuları "Gaze" ve "Stim" altında "Gaze Point", "Calib bölge" ve "Geometri kılavuz" için işaretleyin. "Geometri kılavuz" altındaki kutuları kontrol ettikten sonra bir penceresi açılır ve demek, "geometri kılavuz görüntülenebilir önce uyarıcı ekran geometri ölçülmesi gerekir. Sana bunu şimdi yapmak istiyor musunuz?" "Y" için Evet'i seçin.</li>
		<li>Fareyi kullanarak, "Windows" menüsünü tıklatın ve "Uyarıcı" seçin. Ekranın ortasındaki bir dikey ve yatay çizgi geçiş gösterilen "Uyarıcı" penceresi açılacaktır. En yakın mm. "Esc" tuşuna basın satırlarına uzunlukları "Uyarıcı" penceresinden çıkmak için klavyedeki ölçmek.</li>
		<li>Fareyi kullanarak, "Uyarıcı" menüsünde'i tıklatın ve "geometri" seçin. Sadece ölçüldü çizgi uzunlukları girdi. Derece/satır eşit yatay çizgi ve dikey çizgi için 20 ° 25 ° görüş uzaklığı ayarlayın. "Store" butonuna tıklayın ve pencereyi kapatın.</li>
		<li>"EyeSpace" penceresinde, kalibrasyon "Veri noktasını" "9" olarak sayısını seçin. Merkezde konumlandırılmış kaplumbağanın göz ile üstünde belgili tanımlık merkez veri üzerine gelin ve "burada yeniden" düğmesini tıklatın. Not: "Uyarıcı" pencere-ecek açık ve ekranın merkezinde "Hazır olsun" görünecektir. Bir kutu merkezi konumda görünür ve sonra kaybolur. Onun kayboluşu "Uyarıcı" penceresi kapatılacak. Merkezi konumu şimdi ayarlanması.</li>
		<li>Sağa/sola yalpa +12.5 ° / °-12.5, dönen tarafından ve yukarı/aşağı + 10 ° /-10 kalan veri noktaları ayarlamak için ° yordamı yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Burulma döndürmeyi ayarlamak için algoritma programı izleme video tabanlı göz ile sağlanan uygun şablonu kullanın. Algoritma üzerindeki iris işaretleri dayalı bir sıfır noktasını ayarlar ve işaretler öğrenci centroid ofset haline ne zaman bir dönüş açısını hesaplar.<ol>
<li>Fare işaretçisi, "Windows" menüsünü tıklatın ve "Burulma" seçin. "Burulma" penceresinde "Başlat" düğmesini tıklatın. "EyeCamera" penceresinde, bir yay göz görüntüleri üzerinde gösterilir.</li>
		<li>Yarıçapı, açı ve düzensiz işaretler iris mevcut nerede bir yerde kaydırıcıları kullanarak ark uzunluğu ayarlayın. "Gerçek zamanlı" grafik"ve"Auto-Set sonra ayarlama"için kutuları işaretleyin. Gerekirse, parlaklığı ayarlayın ve denetimleri pencere ve re-eşik karanlık gözbebeği kontrast (bkz. Adım 4). "Şablon ayarla" düğmesini tıklatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aynı odak düzlemi öğrenci olarak bir cetvel yerleştirin ve tam Kamera görünümünün kaydedin. Değer daha sonra öğrenci gerçek genişliğini belirlemek için kullanılır.</li>
</ol>5. kranial sinir göz hareketleri uyandırmak için üzerinde emme elektrot konumlandırma
<ol><li>Dikkatli bir PIN referans elektrot kafasına kalan bağ veya kas dokusu içine koyun.</li>
	<li>Emme elektrot yerleştirin (bkz. Tablo reçetesi) kranial sinir micromanipulator ve diseksiyon kapsamı kullanan bir patlama monte edilmiş. Görüntülemek ve Yerleştirme Kılavuzu için bir fiber optik ışık kaynağı kullanın.<ol>
<li>Bir sinir kapiller cam bahşiş için uygun. Deneme yanılma bir sinir çapı çevresinde en iyi bir uyum elde etmek gereklidir (bkz. Adım 1.2 boyut önerileri için). Cam ucu emme elektrot üzerine yerleştirin. Emme elektrot zil'ın çözüm ile doldurun ve şırınga yaklaşık içinde ses seviyesini kapasitesini yarısı.</li>
		<li>Dikkatle micromanipulator kullanarak seçili sinir kesme uç yukarıda bir pozisyon elektrot cam ucu taşıyın. Zil'ın çözüm kafatası doldurur ve belgili tanımlık uç yüzeyi altında olduğundan emin olun. Gerekirse, modelleme kil nerede zil'ın çözüm kafatası dışarı sızdırıyor mekanlar baraj için kullanın.</li>
		<li>Şırınga pistonu üzerinde geri çek. Not: Vakum sinir kapiler uç uç çekecek. İyi bir uyum içinde ipucu uygulanan az veya hiç ek vakum ile kalan sinir simgesiyle gösterilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. kranial sinir ve göz hareketleri Analizi uyarılması
<ol><li>Genel amaçlı sinir/kas Stimülatörü geçerli bir yalıtım aygıtıyla kullanmak (kranial sinir emme elektrot ile uyarmak için Malzemeler tablobkz:).<ol>
<li>Emme elektrot bir kablo kullanarak geçerli yalıtım cihaza bağlayın. Müşteri adayının yalıtım aygıt toprağa bağlama PIN referans elektrot bağlayın.</li>
		<li>Parametreleri dials kullanarak akıntılarının seçin ve uyarıcı ve yalıtım aygıtta geçer. 10 Hz. Kullanım 1 veya 2 ms 100, 500 ya da 1000 ms süren tren bakliyat 400 sıklığı ile a sıra-in 100 µA 1 akımları kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Elektrodlar zamanlamasını kaydedin. Not: Transistör transistör mantığı (TTL) bakliyat akımları teslimatlar üzerinden uyarıcı ile eşitlenir ve iletişim kablo giriş kanalları izleme sistemi video tabanlı göz ile gerçek zamanlı. Bir yazılım modülü program denetimleri iletişim izleme video tabanlı göz ile sağlanan.<ol>
<li>Mevcut uygulamalar ve göz hareketleri onların etkisi zamanlaması görselleştirmek için "PenPlots" menüsünde tıklatın. "Seç X Gaze konum", "Y Gaze konumu", "Burulma" ve "Öğrenci genişliği" göz pozisyonları, burulma ve öğrenci Genişlik X ve Y için gerçek zamanlı ham veri araziler göstermek için. Ayrıca "Saniye & işaretleyicileri" bir zamanlama komplo 1 s aralıklarla görünür onay işaretleri ile göstermek için "PenPlots" menüsünden seçin. Not: Aynı anda geçerli uygulama ile meydana gelen TTL darbe başlangıcı işaretleme bir büyük harf "T" görünür.</li>
		<li>Göz hareketleri akımlar tarafından uyarılmış verileri depolamak için "Dosya" menüsünü tıklatın ve "Veri" altında "yeni veri dosyası" seçin. Bir dosya adı girin ve "Enter" tuşuna basın. Kaydetme veri duraklatılmış ve tuş komutları, "Ctrl" + "p" kullanarak yeniden başlatılır. Deneysel bir oturum tamamlandığında, "Yakın veri dosyası" "Dosya" menüsünden "Veri" altında kapalı seçeneğini belirleyin.</li>
		<li>Uygulanan akımları türünü izlemenize yardımcı olmak için "Windows" menüsünü tıklatın ve "Veri Pad" seçin. "Tuş takımı/DataMarker" pencere-ecek gözükmek. Tıkırtı üstünde bir mektup ya da sinir için teslim edilen geçerli elektrodlar parametrelerini tanımlamak için bir sayı. Not: Örneğin, "X" duramazdı 10 µA. için "X" üzerine tıklamak onun giriş içine veri dosyasının post hoc analizi için gerçek zamanlı depolar. Ayrıca "PenPlot" "Saniye & işaretleri" sürekli gözlem altında görünür.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Göz izci sistemi veri analiz.<ol>
<li>Verileri düzenlemek ve istatistiksel analizlerini seçtikleri bir forma levha programına ayrılmış metin biçimindedir, kaydedilen veri dosyasını açın.<ol>
<li>Gerçek boyutları mm dosyasında depolanan öğrenci genişlik değerleri dönüştürmek.</li>
			<li>X değerleri dönüştürmek ve Y konumları ve torsion birimlerine derecesi göz ve göz hareketleri tanımlamak için kuralları kullanın; Bu nedenle, rotasyonlar olumlu yönleri: intorsion, bakış açısını ve dıştan; ve negatif döndürme yönleri: extorsion, depresyon ve kaçırma.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Başlık bilgilerini yeni bir çalışma sayfası üzerine kopyalayın. Bu ekran boyutu (genişlik ve yükseklik) ve görüntüleme mesafe değerleri yer alacak. Sekiz 30 Hz oranında toplanan veri sütunlarının başlık bilgilerini takip eder.</li>
		<li>Ham verileri içeren çalışma sayfasına dön. A "bulmak" "" işareti nerede stimülasyon 10 µA. ile uygulanan "T" geçerli stimülasyon başlangıcı işaretleme, bul insidansı bulmak için"başlıklı X için" son sütun var. 15 satır kopyalamak (0,5 s) "T" ve 90 kare daha önce "T" sonra meydana gelen veri (3.0 s); yani, 3.5 s toplam. Verileri yeni çalışma sayfasının başlık bilgilerini aşağıda yapıştırın.</li>
		<li>"PupilWidth" sonra boş bir sütun ekleyin. Boş sütun, mm kalibre edilmiş boyut dönüştürmek: Yatay öğrenci çapı = "PupilWidth" × kamera görünümü Genişlik boyutunu</li>
		<li>2 boş sütun "X_Gaze" ve "Y_Gaze" sonra ekleyin. Görüntüleme ekran boyutları konumlara normalize: koordinatları (0, 0) üst sol ekran için uzanan (1, 1) sağ alt. İlk boş sütunda bir koordinat sistemi olan pozisyonlar çevirmek (0, 0) ekranın merkezinde. Ekran boyutları dönüştürmeye mm şunlardır: X = (0,5 × Genişlik) – ("X_Gaze" × Genişlik); Y = (0.5 x yükseklik) – ("Y_Gaze" x yükseklik) Not: Sol göz için işlem dizisidir. Sıra için sağ gözü kaçırma için negatif ve pozitif dıştan için Kongre izleyebilmek için tersine çevrilmesi gerekir.</li>
		<li>İkinci sütun, trigonometri işlevleri döndürme açıları (°) dönüştürmek için kullanın: Yatay döndürme arctan (X/viewing mesafe); = dikey döndürme arctan (Y/viewing mesafe) =</li>
		<li>Burulma zaten derece birimlerinde gösterilmiştir, ancak ölçüm sol göz kulak yapılır Eğer Kongre için intorsion, olumluluk uyması için -1 tarafından çarpın. Sağ gözü yok çarpma gereklidir. Program saat yönünde döndür olumlu olarak kodlar.</li>
		<li>Öğrenci çapı ve rotasyonlar bir fonksiyonu olarak arsa.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Kikillus, K. H., Hare, K. M., Hartley, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimizing+false-negatives+when+predicting+the+potential+distribution+of+an+invasive+species:+A+bioclimatic+envelope+for+the+red-eared+slider+at+global+and+regional+scales.">Minimizing false-negatives when predicting the potential distribution of an invasive species: A bioclimatic envelope for the red-eared slider at global and regional scales.</a> Anim Conserv. 13, 5-15 (2010).</li><li>Lutz, P. L., Rosenthal, M., Sick, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+without+oxygen:+turtle+brain+as+a+model+of+anaerobic+metabolism.">Living without oxygen: turtle brain as a model of anaerobic metabolism.</a> Mol Physiol. 8, 411-425 (1985).</li><li>Lutz, P. L., Milton, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negotiating+brain+anoxia+survival+in+the+turtle.">Negotiating brain anoxia survival in the turtle.</a> J Exp Biol. 207, 3141-3147 (2004).</li><li>Storey, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxia+tolerance+in+turtles:+Metabolic+regulation+and+gene+expression.">Anoxia tolerance in turtles: Metabolic regulation and gene expression.</a> Comp Biochem Physiol A-Mol Integr Physiol. 147 (2), 263-276 (2007).</li><li>Granda, A. M., Dearworth, J. R., Subramaniam, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balanced+interactions+in+ganglion-cell+receptive+fields.">Balanced interactions in ganglion-cell receptive fields.</a> Vis Neurosci. 16, 319-332 (1999).</li><li>Dearworth, J. R., Granda, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplied+functions+unify+shapes+of+ganglion-cell+receptive+fields+in+retina+of+turtle.">Multiplied functions unify shapes of ganglion-cell receptive fields in retina of turtle.</a> J Vis. 2 (3), 204-217 (2002).</li><li>Nesbit, S. C., Van Hoof, A. G., Le, C. C., Dearworth Jr, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+recording+of+light+responses+from+optic+nerve+fibers+and+the+caudal+photoreceptor+in+the+crayfish.">Extracellular recording of light responses from optic nerve fibers and the caudal photoreceptor in the crayfish.</a> J Undergrad Neurosci Educ. 14 (1), A29-A38 (2015).</li><li>McMahon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+and+circulatory+compensation+to+hypoxia+in+crustaceans.">Respiratory and circulatory compensation to hypoxia in crustaceans.</a> Resp Phsiol. 128 (3), 349-364 (2001).</li><li>Leigh, R. J., Zee, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The neurology of eye movements. , (1999).</li><li>Robinson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+measuring+eye+movement+using+a+scleral+search+coil+in+a+magnetic+field.">A method of measuring eye movement using a scleral search coil in a magnetic field.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 10, 137-145 (1963).</li><li>Judge, S. J., Richmond, B. J., Chu, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+magnetic+search+coils+for+measurement+of+eye+position:+an+improved+method.">Implantation of magnetic search coils for measurement of eye position: an improved method.</a> Vis Res. 20, 535-538 (1980).</li><li>Ong, J. K. Y., Halswanter, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+torsional+eye+movements+by+tracking+stable+iris+features.">Measuring torsional eye movements by tracking stable iris features.</a> J Neurosci Meth. 192, 261-267 (2010).</li><li>Kimmel, D. L., Mammo, D., Newsome, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+eye+non-invasively:+simultaneous+comparison+of+the+scleral+search+coil+and+optical+tracking+techniques+in+the+macaque+monkey.">Tracking the eye non-invasively: simultaneous comparison of the scleral search coil and optical tracking techniques in the macaque monkey.</a> Front Behav Neurosci. 6 (49), 1-17 (2012).</li><li>Otero-Millan, J., Roberts, D. C., Lasker, A., Zee, D. S., Kheradmand, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knowing+what+the+brain+is+seeing+in+three+dimensions:+A+novel,+noninvasive,+sensitive,+accurate,+and+low-noise+technique+for+measuring+ocular+torsion.">Knowing what the brain is seeing in three dimensions: A novel, noninvasive, sensitive, accurate, and low-noise technique for measuring ocular torsion.</a> J Vis. 15 (14), 1-15 (2015).</li><li>Demski, L. S., Bauer, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eye+movements+evoked+by+electrical+stimulation+of+the+brain+in+anesthetized+fishes.">Eye movements evoked by electrical stimulation of the brain in anesthetized fishes.</a> Brain Behav Evol. 11, 109-129 (1975).</li><li>Gioanni, H., Bennis, M., Sansonetti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+and+vestibular+reflexes+that+stabilize+gaze+in+the+chameleon.">Visual and vestibular reflexes that stabilize gaze in the chameleon.</a> Vis Neurosci. 10, 947-956 (1993).</li><li>Straka, H., Dieringer, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+organization+principles+of+the+VOR:+lessons+from+frogs.">Basic organization principles of the VOR: lessons from frogs.</a> Prog Neurobio. 73 (4), 259-309 (2004).</li><li>Voss, J., Bischof, H. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eye+movements+of+laterally+eyed+birds+are+not+independent.">Eye movements of laterally eyed birds are not independent.</a> J Exp Biol. 212 (10), 1568-1575 (2009).</li><li>Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+eye+movements+in+the+turtle.">Independent eye movements in the turtle.</a> Vis Neurosci. 5, 29-41 (1990).</li><li>Ariel, M., Rosenberg, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+synaptic+drugs+on+turtle+optokinetic+nystagmus+and+the+spike+responses+of+the+basal+optic+nucleus.">Effects of synaptic drugs on turtle optokinetic nystagmus and the spike responses of the basal optic nucleus.</a> Vis Neurosci. 7, 431-440 (1991).</li><li>Balaban, C. D., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+"beat-to-beat"+interval+generator+for+optokinetic+nystagmus.">A "beat-to-beat" interval generator for optokinetic nystagmus.</a> Biol Cybern. 66, 203-216 (1992).</li><li>Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+eye-blink+reflex+model:+Role+of+excitatory+amino+acid+receptors+and+labeling+of+network+activity+with+sulforhodamine.">In vitro eye-blink reflex model: Role of excitatory amino acid receptors and labeling of network activity with sulforhodamine.</a> Exp Brain Res. 97, 239-253 (1993).</li><li>Keifer, J., Armstrong, K. E., Houk, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+classical+conditioning+of+abducens+nerve+discharge+in+turtles.">In vitro classical conditioning of abducens nerve discharge in turtles.</a> J Neurosci. 15, 5036-5048 (1995).</li><li>Rosenberg, A. F., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+optokinetic+eye+movements+in+turtles+that+incorporates+properties+of+retinal+slip+neurons.">A model for optokinetic eye movements in turtles that incorporates properties of retinal slip neurons.</a> Vis Neurosci. 13, 375-383 (1996).</li><li>Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open-loop+optokinetic+responses+of+the+turtle.">Open-loop optokinetic responses of the turtle.</a> Vis Res. 37, 925-933 (1997).</li><li>Anderson, C. W., Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+conditioned+abducens+nerve+responses+in+a+highly+reduced+in+vitro+brainstem+preparation+from+the+turtle.">Properties of conditioned abducens nerve responses in a highly reduced in vitro brainstem preparation from the turtle.</a> J Neurophysiol. 81, 1242-1250 (1999).</li><li>Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+classical+conditioning+of+the+turtle+eyeblink+reflex:+Approaching+cellular+mechanisms+of+acquisition.">In vitro classical conditioning of the turtle eyeblink reflex: Approaching cellular mechanisms of acquisition.</a> Cerebell. 2, 55-61 (2003).</li><li>Zhu, D., Keifer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathways+controlling+trigeminal+and+auditory+nerve-evoked+abducens+eyeblink+reflexes+in+pond+turtles.">Pathways controlling trigeminal and auditory nerve-evoked abducens eyeblink reflexes in pond turtles.</a> Brain Behav Evol. 64, 207-222 (2004).</li><li>Jones, M. S., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+unilateral+eighth+nerve+block+on+fictive+VOR+in+the+turtle.">The effects of unilateral eighth nerve block on fictive VOR in the turtle.</a> Br Res. 1094, 149-162 (2006).</li><li>Jones, M. S., Ariel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology,+intrinsic+membrane+properties,+and+rotation-evoked+responses+of+trochlear+motoneurons+in+the+turtle.">Morphology, intrinsic membrane properties, and rotation-evoked responses of trochlear motoneurons in the turtle.</a> J Neurophysiol. 99 (3), 1187-1200 (2008).</li><li>Krenz, J. G., Naylor, G. J. P., Shaffer, H. B., Janzen, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+phylogenetics+and+evolution+of+turtles.">Molecular phylogenetics and evolution of turtles.</a> Mol Phylogenet Evol. 37 (1), 178-191 (2005).</li><li>Dearworth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+trochlear+nerve+in+eye+abduction+and+frontal+vision+of+the+red-eared+slider+turtle+(Trachemys+scripta+elegans).">Role of the trochlear nerve in eye abduction and frontal vision of the red-eared slider turtle (Trachemys scripta elegans).</a> J Comp Neur. 52, 3464-3477 (2013).</li><li>Dearworth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pupil+constriction+evoked+in+vitro+by+stimulation+of+the+oculomotor+nerve+in+the+turtle+(Trachemys+scripta+elegans).">Pupil constriction evoked in vitro by stimulation of the oculomotor nerve in the turtle (Trachemys scripta elegans).</a> Vis Neurosci. 26, 309-318 (2009).</li><li>Mead, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFEL+TOUR:+a+description+of+the+introduction+to+FUN+electrophysiology+labs+workshop+at+Bowdoin+College,+July+27-30,+and+the+resultant+faculty+learning+community.">IFEL TOUR: a description of the introduction to FUN electrophysiology labs workshop at Bowdoin College, July 27-30, and the resultant faculty learning community.</a> J Undergrad Neurosci Educ. 5, A42-A48 (2007).</li><li>Jackson, D. C., Ultsch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+hibernation+under+the+ice+by+turtles+and+frogs.">Physiology of hibernation under the ice by turtles and frogs.</a> J Exp Zool A Ecol Genet Physiol. 313 (6), 311-327 (2010).</li><li>Romano, J. M., Dearworth, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pupil+constriction+evoked+by+stimulation+of+the+ciliary+nerve+in+the+red-eared+slider+turtle+(Trachemys+scripta+elegans).">Pupil constriction evoked by stimulation of the ciliary nerve in the red-eared slider turtle (Trachemys scripta elegans).</a> J Penns Acad Sci. 85, 4-8 (2011).</li><li>Miller, J. M., Robins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraocular-muscle+forces+in+alert+monkey.">Extraocular-muscle forces in alert monkey.</a> Vis Res. 32, 1099-1113 (1992).</li><li>Gamlin, P. D., Miller, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraocular+muscle+motor+units+characterized+by+spike-triggered+averaging+in+alert+monkey.">Extraocular muscle motor units characterized by spike-triggered averaging in alert monkey.</a> J Neurosci Meth. 204, 159-167 (2011).</li><li>Quaia, C., Ying, H. S., Optican, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Viscoelastic+properties+of+passive+eye+muscle+in+primates.+III:+Force+elicited+by+natural+elongations.">The Viscoelastic properties of passive eye muscle in primates. III: Force elicited by natural elongations.</a> PLOS ONE. 5, A236-A254 (2010).</li><li>Anderson, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+primate+oculomotor+plant+revealed+by+effects+of+abducens+microstimulation.">Dynamics of primate oculomotor plant revealed by effects of abducens microstimulation.</a> J Neurophys. 101, 2907-2923 (2009).</li><li>Maxwell, J. H., Harless, M., Morlock, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthesia+and+surgery.">Anesthesia and surgery.</a> Turtles: Perspective and Research. , 127-152 (1979).</li><li>AVMA Panel on Euthanasia. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Veterinary+Medical+Association.">American Veterinary Medical Association.</a> J Am Vet Med Assoc. 218 (5), 669-696 (2001).</li><li>Clarke, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+the+pupil's+response+to+light+in+the+hooded+rat.">Shaping the pupil's response to light in the hooded rat.</a> Exp Br Res. 176, 641-651 (2007).</li><li>Bennett, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+anesthesia+and+chemical+restraint+in+reptiles.">A review of anesthesia and chemical restraint in reptiles.</a> J Zoo Wild Med. 22 (3), 282-303 (1991).</li><li>Bickler, P. E., Buck, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+Tolerance+in+Reptiles,+Amphibians,+and+Fishes:+Life+with+Variable+Oxygen+Availability.">Hypoxia Tolerance in Reptiles, Amphibians, and Fishes: Life with Variable Oxygen Availability.</a> Ann Rev Physiol. 69, 145-170 (2007).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kritik adımlar:
Bu iletişim kuralı içinde önemli adımlar şunlardır: 1) diseksiyon ve transected sinirler; canlılığı korumak için alınan bakım 2) boyutları kranial sinirler tutarlı yanıtlar sağlamak için emme elektrotlar tarafından eşleşen; ve 3) dönmenin gözün yeterli kalibrasyon sağlamak için yalpa kafasından yerleşimini.
Sorun giderme:
Diseksiyon zor olabilir, ama bir kaç kez tamamladıktan sonra adımları nisp...

Gerekçe kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların elektrofizyolojik deneylerde kullanmak için:
Kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağaları (Trachemys scripta elegans), dünyanın en kötü istilacı türlerin1 biri olarak kabul edilir ve bir ekosistem dertte belirtebilirsiniz. Neden kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların çok başarılı olduğunu neden kötü anlaşılmaktadır ama kısmen hoşgörülü fizyolojisi ve bulundurma hipoksik koşulları2,3altında,4 yaşayabilir gergin dokuların nedeniyle olabilir . Onları istimal o için deneme sayıları tehdit etmediğini ve en az çaba ile elektrofizyolojik hazırlıkları üzerinde genişletilmiş süreleri, 18 saat5,6sürece canlı kalabilir. Ayrıca oksijen8seviyesinin düşük dayanacak şekilde şifreleyebilirler kerevit7gibi omurgasız hayvanlar kullanmanın yararı için benzer bir şeydir.
Göz hareketleri Ölçme teknikleri:
Yaklaşımlar göz hareketleri içinde ön gözlü hayvan insan dışı primatlar kullanarak ölçmek için iyi gelişmiş9olmuştur. Göz yörüngede yaklaşık üç eksen döndürür: yatay, dikey ve burulma. Manyetik arama bobini yöntemi genellikle ölçüm rotasyonu için en güvenilir olarak kabul edilir, ancak invaziv, hayvanlar10,11scleras eklenecek küçük bobinleri gerektiren. Video tabanlı sistemler de rotasyonlar ölçebilir ve non-invaziv olma avantajına sahip. Yenilikçi görüntü işleme ile birlikte daha iyi fotoğraf makinesi gelişimi video tabanlı sistemler12,13,14düşünün için cazip bir alternatif yapmak işlevselliğini arttırmak.
Nonmammals göz hareketleri ölçmek için geliştirilmiş teknikleri daha az önemli olmuştur. Önlemler de düşük çözünürlükte ya da rotasyonlar15,16,17,18yalnızca bazıları açıklanmaktadır. Görsel hedefleri takip etmek eğitim nonmammals zorluk üzerinde geliştirme eksikliği kısmen sorumlu. Her ne kadar göz hareketleri de kırmızı kulaklı kaymak kaplumbağalar19,20,21,22,23,24,25 incelenmiştir ,26,27,28,29,30, hedefleri, izlemek için nedeniyle eğitim hayvanlarda göz hareketleri kesin kinematik mücadeledir kötü anladım.
Kaydırıcıyı kırmızı kulaklı kaplumbağaların genellikle lateral gözlü omurgalılar kabul, ama onlar tamamen kafalarının onların kabuk31geri çekmek, kabuğu tarafından yanal visual alanlarının önemli tıkanıklığı32oluşur. Onların görsel bakış açısı onları daha çok ön gözlü memeliler gibi çalışır hale önüne doğru zorlanır sonucudur. Bu nedenle, bunların kullanımı bir model olarak göz hareketleri ölçmek için yaklaşımlar geliştirmek için benzersiz bir evrimsel bakış açısı sunuyor.
Bu çalışmada açıklanan protokol bir izole vitro baş hazırlık kaymak kırmızı kulaklı kaplumbağaların göz hareketlerinde kinematik tanımlamak için kullanır. Beyin kranial sinirler dokunmadan kafatasları kesmiştim. Kafa göz hareketleri kalibre ve yanıt-e doğru anımsatmak için yalpa kranial sinirler göz kasları innerve elektriksel stimülasyon tarafından yerleştirilir. Önlemler dönmenin gözler tarafından karanlık bir öğrencisi ve iris işaretleri takip Yazılım algoritmaları kullanarak bir video tabanlı sistem tarafından yapılır. Hazırlık Gözdışı ikisinin kinematik (yani, yatay, dikey ve burulma rotasyonlar) ölçmek için fırsat sağlar32 ve göz içi (yani, öğrenci değişiklikleri)33 hareketleri.
Efferent sinirsel yollar analiz için sistem modeli:
Daha genel olarak, yaklaşım nasıl efferent sinir sinyalleri çalışma fırsatı oluşturmak göz hareketleri kaslar rahat durumlarına ve beyin32tarafındanişlenen entegre duyusal bilgi yokluğunda başlattığınızda müfettişler sağlar, 33. Bu nedenle, onlar sadece efferent sinir yolu bırakarak beyin ve kaslar synapsing tarafından işlenme bir modeli sistemi göz kinematik incelenebilir.

<table><tbody><tr><td>Red-eared slider turtles</td><td>Kons Scientific</td><td>&lt;em&gt;Trachemys scripta elegans&lt;/em&gt;</td><td>Large size (carapace length 15-20 cm)</td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>Potassium chloride</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium choride</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>M7304</td><td></td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>C5767</td><td></td></tr><tr><td>Concentrated hydrochloric acid</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>H7020</td><td></td></tr><tr><td>Calcium chloride</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>pH meter</td><td>Oakton</td><td>pH 6+</td><td></td></tr><tr><td>Suction stimulation electrode</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td>Bipolar suction electrode. Note that 573000 has been replaced with 573050.</td></tr><tr><td>Capillary glass</td><td>A-M systems</td><td>626000</td><td>Single-barrel borosilicate capillary glass without microfilament, length 10 cm, outside diameter 1.0 mm, inner diameter 0.50 mm</td></tr><tr><td>Alternative suction stimulation electrode</td><td>A-M Systems</td><td>573050</td><td>Bipolar suction electrode. Requires larger diameter capillary glass: 627000, outside diameter 1.2 mm, inner diameter 0.68 mm</td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Lieca</td><td>GZ7</td><td>Magnification range, 10x &amp;ndash; 70x</td></tr><tr><td>Fiber optic light source</td><td>Amscope</td><td>HL250-A</td><td>150W Fiber optical microscope illuminator light box</td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>625654</td><td>stainless steel, straight spring, 5.25&quot;</td></tr><tr><td>Blunt dissection probe</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>627405</td><td>Huber mall probe, double-ended probe and seeker, 6&quot;</td></tr><tr><td>Microscissors</td><td>Carolina Biological Supply Company</td><td>623555</td><td>Iris microdissecting scissors, stainless steel, 0.5&quot; blades, 4.75&quot; long</td></tr><tr><td>Fine forceps</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>F6521</td><td>Jewelers forceps, dumont No. 5, inox alloy, 4.25&quot;</td></tr><tr><td>Curved forceps</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>Z168696</td><td>Medium tip, curved forceps, stainless steel, 4&quot;</td></tr><tr><td>Scalpel handle</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>S2896</td><td>Scalpel handles, No. 3, stainless steel</td></tr><tr><td>Scalpel blade</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>S2771</td><td>Scalpel blades, No. 11, steel</td></tr><tr><td>Guillotine</td><td>Harvard Apparatus</td><td>73-1918</td><td>Kleine guillotine type 7575</td></tr><tr><td>Spatula</td><td>Sigma</td><td>Z648299</td><td>Micro spoon and spatula weighing set. Use small spatula: 5.9&amp;rdquo; long x 0.07&amp;rdquo; diameter handle with square end: 0.17&amp;rdquo; x 1.3&amp;rdquo; long, other end round: 0.17&amp;rdquo; x 1.27&amp;rdquo; long</td></tr><tr><td>Hook</td><td>Autozone</td><td>98069</td><td>SureBilt hook and pick set. Use grinder to dull sharp points of hook to prevent injury to animals mouth.</td></tr><tr><td>95/5% O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;/CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Airgas, Inc.</td><td>X02OX95C2003102</td><td>5% Carbon dioxide balance oxygen certified standard gas mixture, size 200 Cylinder, CGA-296</td></tr><tr><td>Regulator</td><td>Airgas, Inc.</td><td>Y11244D296-AG</td><td>Single stage brass 0-100 psi analytical cylinder regulator CGA-296 with needle outlet. Use brass adjustable airline pipe valve to go from 3/8&quot;, inner diameter, vinyl airline tubing connected to regulator to a 3/16&quot;, inner diameter, airline connection going to airstone or glass pasteur pipette.</td></tr><tr><td>Adjustable airline pipe valve</td><td>Doctors Foster and Smith</td><td>CD-12061</td><td>Brass valve</td></tr><tr><td>Rigid table</td><td>Unknown</td><td>Unknown</td><td>Auto-clave door laid on top of a sturdy table. Nine 5&quot; diameter tennis balls isolate vibrations from the top surface of the table.</td></tr><tr><td>5&quot; tennis ball</td><td>Petco Animal Supplies, Inc.</td><td>712868</td><td>Petco Jumbo Pet Tennis Ball: balls are unsliced and held within an integrated frame on the underside part of the autoclave door.</td></tr><tr><td>Alternative vibration isolation table</td><td>Newport Corporation</td><td>INT1-36-6-N</td><td>Rigid vibration control system, integrity 1: Surface dimensions, 3&#039; x 6&#039;</td></tr><tr><td>Gimbal</td><td>ISI, International Scientific Instruments, Inc.</td><td>Stage from SUPER III-A Scanning EM</td><td>5-axis eucentric stage: X, Y, and Z linear movements, &amp;plusmn;20 mm, 0.1 mm precision; Rotations, vertical, &amp;plusmn;10&amp;deg;, and horizontal, &amp;plusmn;12.5&amp;deg;, with 1.25&amp;deg; precision. Note: from decommission instrument.</td></tr><tr><td>Chuck for gimbal</td><td>Unknown</td><td>Unknown</td><td>Chuck from an old microtome of unknown manufacture was machined to fit the shaft of the specimen holder of the Scanning EM stage</td></tr><tr><td>Alternative gimbal</td><td>ThorLabs, Inc.</td><td>GN2/M with MBT602/M</td><td>Dual-axis goniometer (GN2/M) mounted on 3-axis microblock stage with thumbscrew adjusters (MBT602/M): design a chuck to hold turtle head with eye at 12.7 mm above top surface of goniometer (distance to point of rotation)</td></tr><tr><td>Video-based eye tracking system</td><td>Arrington Research, Inc.</td><td>ViewPoint EyeTracker, PC-60</td><td>Tracking method: Infrared video by dark pupil; Black and white camera (Item BC02): 30 Hz, 640 x 480; System requirements: Windows 2000, XP, 7, 8, 8.1, 10; Visual range: Horizontal +/- 44&amp;deg;; vertical +/- 20&amp;deg;; Accuracy ~0.5&amp;deg;; Spatial resolution ~0.15&amp;deg;; Pupil size resolution ~0.03 mm; Eye data: X, Y position of gaze, pupil height and width, torsion, delta time, total time, and regions of interest (ROI); Real-time communication (Item 0022): 4-Channel AnalogOut with eight TTL input channels to mark codes into the data file</td></tr><tr><td>Multi-position magnetic base</td><td>Harbor Freight Tools</td><td>Pittsburg, item #5645</td><td>Magnetic holder reaches up to 12&quot; and produces 45 lbs. of magnetic pull. Use to position camera. Machine thread holes onto the end of the rod to mount cameras.</td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Kopf</td><td>900</td><td>5 axis manipulation for mount of suction electrode: X, Y, Z linear travel, 2 axis of rotation</td></tr><tr><td>Dissection scope on boom</td><td>Lieca</td><td>GZ6</td><td>Magnification range, 6.7x &amp;ndash; 40x</td></tr><tr><td>Nerve/muscle stimulator</td><td>Astro-Med Grass Telefactor</td><td>Grass S88</td><td>Dual pulse voltage stimulator: two output channels that can be operated independently or synchronized to generate non-isolated constant voltage pulses (10 mv to 150 V). Pulses can be single (10 &amp;mu;sec to 10 sec), repetitive (0.01 Hz to 1 KHz), and trains (1 ms to 10 s) and synchronized with TTL inputs and output. Send TTL outputs via the output channels of a DB25 connector to the TTL input channels of the ViewPoint EyeTracker. Note: Astro-Med Grass Telefactor is no longer in business.</td></tr><tr><td>Current isolation device</td><td>Astro-Med Grass Telefactor</td><td>PSIU6</td><td>Current stimulus isolation unit: enables safe delivery of constant currents by the S88 to the preparation. The PSIU6 connects by a BNC cable to one of the output channels of the S88. Multiplier switches on the PSIU6 allow the S88 to generate a wide array of current amplitudes ranging from 0.1 &amp;micro;A to 15 mA.</td></tr><tr><td>Alternative nerve/muscle stimulator with isolation</td><td>A-M Systems</td><td>2100</td><td>Isolated Pulse Stimulator: Unit has built-in isolator to produce constant currents.</td></tr></tbody></table>

ocular kinematics measured by in vitro stimulation of the cranial nerves in the turtle

Hayvan are euthanized sonra onların dokular ölmeye başlar. Kaplumbağaları özellikle sıcak kanlı omurgalılar için karşılaştırıldığında onların dokular, bir daha uzun yaşam süresi nedeniyle bir avantaj sunuyor. Bu nedenle, uzun bir süre sinir sinyalleri araştırmaya ve hakim olmak-in onların hedef eylemler için kaplumbağaları vitro deneyler yapılabilir. İzole bir baş hazırlık kullanarak, kaplumbağalar göz hareketleri kinematik şiddetindeydi ve onların modülasyon tarafından elektrikle ilgili sinyal kranial sinirler tarafından taşınan. Kranial sinirler dokunmadan beyin kafatasından kaldırdıktan sonra disseke kafa göz hareketleri ayarlamak için bir yalpa yerleştirildi. Cam elektrotlar kranial sinirler için bağlı (oculomotor, trochlear ve abducens) ve göz hareketleri yaratamayacak akımların ile uyarılmış. Kızılötesi bir video izleme sistemi ve gözlerin quantified rotasyonlar ile göz hareketleri izlenir. Geçerli genlikleri, frekansları, bir dizi ile bakliyat ve tren süreleri yanıt üzerindeki etkileri gözlemlemek için kullanıldı. Hazırlık beyinden ayrılır çünkü sinir merkezi olarak işlenmiş duyusal bilginin yokluğunda sinyal araştırmak için izole kas hedefe gidiş efferent yol incelenebilir.

Şekil 1 fotoğraf diseksiyon açıklayan bir videodan alınan görüntülerin gösterir. Görüntüler sinir kesme beyin üzerinden önce tipik mekanlar sunar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56864/56864fig1.jpg"> Şekil 1: optik sinir (nII), oculomotor sinir (nIII), trochlear sinir (NIV) ve abducens sinir (in) konumları göstermek için fotoğraf diseksiyon v...

Watch this Scientific Journal Video about Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle at JoVE.com

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Bu iletişim kuralı bir vitro izole kaplumbağa kafa hazırlık onların göz hareketleri kinematik ölçmek için nasıl kullanılacağını açıklar. Kafatası beyin kaldırıldıktan sonra kranial sinirler rotasyonlar göz ve öğrenci boyutlarda değişiklikleri ölçmek için akımları ile uyarılmış.

Oküler kinematik Vitro uyarılması kaplumbağa kranial sinirler tarafından ölçülen

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

ocular-kinematics-measured-vitro-stimulation-cranial-nerves

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

8.4K Görüntüleme.  Lafayette College. Bu iletişim kuralı bir vitro izole kaplumbağa kafa hazırlık onların göz hareketleri kinematik ölçmek için nasıl kullanılacağını açıklar. Kafatası beyin kaldırıldıktan sonra kranial sinirler rotasyonlar göz ve öğrenci boyutlarda değişiklikleri ölçmek için akımları ile uyarılmış.

Video: Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Single-unit In vivo Recordings from the Optic Chiasm of Rat

Information about the visual world is transmitted to the brain in sequences of action potentials in retinal ganglion cell axons that make up the optic nerve. In vivo recordings of ganglion cell spike trains in several animal models have revealed much of what is known about how the early visual system processes and encodes visual information. However, such recordings have been rare in one of the most common animal models, the rat, possibly owing to difficulty in detecting spikes fired by small diameter axons. The many retinal disease models involving rats motivate a need for characterizing the functional properties of ganglion cells without disturbing the eye, as with intraocular or in vitro recordings. Here, we demonstrate a method for recording ganglion cell spike trains from the optic chiasm of the anesthetized rat. We first show how to fabricate tungsten-in-glass electrodes that can pick up electrical activity from single ganglion cell axons in rat. The electrodes outperform all commercial ones that we have tried. We then illustrate our custom-designed stereotaxic system for in vivo visual neurophysiology experiments and our procedures for animal preparation and reliable and stable electrode placement in the optic chiasm.

Single-unit In vivo Recordings from the Optic Chiasm of Rat

Retinal ganglion cells transmit visual information from the eye to the brain with sequences of action potentials. Here, we demonstrate how to record the action potentials of single ganglion cells in vivo from anesthetized rats.

Tek birim In vivo</emSıçan, optik kiazma> Kayıtlar

Information about the visual world is transmitted to the brain in sequences of action potentials in retinal ganglion cell axons that make up the optic ...

Nörobilim

Video-oculography in Mice

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the mouse, have a limited capacity to lock their eyes onto a target. In contrast to these target directed eye movements, compensatory ocular eye movements are easily elicited in afoveate animals1,2,3,4. Compensatory ocular movements are generated by processing vestibular and optokinetic information into a command signal that will drive the eye muscles. The processing of the vestibular and optokinetic information can be investigated separately and together, allowing the specification of a deficit in the oculomotor system. The oculomotor system can be tested by evoking an optokinetic reflex (OKR), vestibulo-ocular reflex (VOR) or a visually-enhanced vestibulo-ocular reflex (VVOR). The OKR is a reflex movement that compensates for "full-field" image movements on the retina, whereas the VOR is a reflex eye movement that compensates head movements. The VVOR is a reflex eye movement that uses both vestibular as well as optokinetic information to make the appropriate compensation. The cerebellum monitors and is able to adjust these compensatory eye movements. Therefore, oculography is a very powerful tool to investigate brain-behavior relationship under normal as well as under pathological conditions (f.e. of vestibular, ocular and/or cerebellar origin).
Testing the oculomotor system, as a behavioral paradigm, is interesting for several reasons. First, the oculomotor system is a well understood neural system5. Second, the oculomotor system is relative simple6; the amount of possible eye movement is limited by its ball-in-socket architecture ("single joint") and the three pairs of extra-ocular muscles7. Third, the behavioral output and sensory input can easily be measured, which makes this a highly accessible system for quantitative analysis8. Many behavioral tests lack this high level of quantitative power. And finally, both performance as well as plasticity of the oculomotor system can be tested, allowing research on learning and memory processes9.
Genetically modified mice are nowadays widely available and they form an important source for the exploration of brain functions at various levels10. In addition, they can be used as models to mimic human diseases. Applying oculography on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors under normal and pathological conditions. Here, we describe how to measure video-oculography in mice8.

Video-oculography is a very quantitative method to investigate ocular motor performance as well as motor learning. Here, we describe how to measure video-oculography in mice. Applying this technique on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors.

Farelerde Video-oculography

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the ...

Three Dimensional Vestibular Ocular Reflex Testing Using a Six Degrees of Freedom Motion Platform

The vestibular organ is a sensor that measures angular and linear accelerations with six degrees of freedom (6DF). Complete or partial defects in the vestibular organ results in mild to severe equilibrium problems, such as vertigo, dizziness, oscillopsia, gait unsteadiness nausea and/or vomiting. A good and frequently used measure to quantify gaze stabilization is the gain, which is defined as the magnitude of compensatory eye movements with respect to imposed head movements. To test vestibular function more fully one has to realize that 3D VOR ideally generates compensatory ocular rotations not only with a magnitude (gain) equal and opposite to the head rotation but also about an axis that is co-linear with the head rotation axis (alignment). Abnormal vestibular function thus results in changes in gain and changes in alignment of the 3D VOR response.
Here we describe a method to measure 3D VOR using whole body rotation on a 6DF motion platform. Although the method also allows testing translation VOR responses 1, we limit ourselves to a discussion of the method to measure 3D angular VOR. In addition, we restrict ourselves here to description of data collected in healthy subjects in response to angular sinusoidal and impulse stimulation.
Subjects are sitting upright and receive whole-body small amplitude sinusoidal and constant acceleration impulses. Sinusoidal stimuli (f = 1 Hz, A = 4&deg;) were delivered about the vertical axis and about axes in the horizontal plane varying between roll and pitch at increments of 22.5&deg; in azimuth. Impulses were delivered in yaw, roll and pitch and in the vertical canal planes. Eye movements were measured using the scleral search coil technique 2. Search coil signals were sampled at a frequency of 1 kHz.
The input-output ratio (gain) and misalignment (co-linearity) of the 3D VOR were calculated from the eye coil signals 3.
Gain and co-linearity of 3D VOR depended on the orientation of the stimulus axis. Systematic deviations were found in particular during horizontal axis stimulation. In the light the eye rotation axis was properly aligned with the stimulus axis at orientations 0&deg; and 90&deg; azimuth, but gradually deviated more and more towards 45&deg; azimuth.
The systematic deviations in misalignment for intermediate axes can be explained by a low gain for torsion (X-axis or roll-axis rotation) and a high gain for vertical eye movements (Y-axis or pitch-axis rotation (see Figure 2). Because intermediate axis stimulation leads a compensatory response based on vector summation of the individual eye rotation components, the net response axis will deviate because the gain for X- and Y-axis are different.
In darkness the gain of all eye rotation components had lower values. The result was that the misalignment in darkness and for impulses had different peaks and troughs than in the light: its minimum value was reached for pitch axis stimulation and its maximum for roll axis stimulation.
Case Presentation
Nine subjects participated in the experiment. All subjects gave their informed consent. The experimental procedure was approved by the Medical Ethics Committee of Erasmus University Medical Center and adhered to the Declaration of Helsinki for research involving human subjects.
Six subjects served as controls. Three subjects had a unilateral vestibular impairment due to a vestibular schwannoma. The age of control subjects (six males and three females) ranged from 22 to 55 years. None of the controls had visual or vestibular complaints due to neurological, cardio vascular and ophthalmic disorders.
The age of the patients with schwannoma varied between 44 and 64 years (two males and one female). All schwannoma subjects were under medical surveillance and/or had received treatment by a multidisciplinary team consisting of an othorhinolaryngologist and a neurosurgeon of the Erasmus University Medical Center. Tested patients all had a right side vestibular schwannoma and underwent a wait and watch policy (Table 1; subjects N1-N3) after being diagnosed with vestibular schwannoma. Their tumors had been stabile for over 8-10 years on magnetic resonance imaging.

A method is described to measure three-dimensional vestibulo ocular reflexes (3D VOR) in humans using a six degrees of freedom (6DF) motion simulator. The gain and misalignment of the 3D angular VOR provide a direct measure of the quality of vestibular function. Representative data on healthy subjects are provided

Özgürlük Hareket Platformu Six Degrees kullanarak Üç Boyutlu Vestibüler Oküler Refleks Testi

The vestibular organ is a sensor that measures angular and linear accelerations with six degrees of freedom (6DF). Complete or partial defects in the ...

Using the Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus, in Vision Research

The American horseshoe crab, Limulus Polyphemus is one of the oldest creatures on earth, and the animal continues to play an indispensable role in biomedical research. Not only does their blood contain special cells that scientists use to detect bacteriotoxins in our medicines, but their eyes also contain a neural network that has provided much insight about physiological processes operating in our visual system, such as light adaptation and lateral inhibition. The horseshoe crab remains an attractive model for vision research because the animal is large and hardy for an invertebrate, its retinal neurons are big and easily accessible, its visual system is compact and extensively studied, and its visual behavior is well defined. Moreover, the structure and function of the eyes are modulated on a daily basis by a circadian clock in the animal s brain. In short, the visual system of horseshoe crabs is simple enough to be understood yet complex enough to be interesting.
In this video we present three electrophysiological paradigms for investigating the neural basis of vision that can be performed in vivo with Limulus. They are electroretinogram recording, optic nerve recording, and intraretinal recording. Electroretinogram (ERG) recordings measure with a surface electrode the summed electrical response of all cells in the eye to a flash of light. They can be used to monitor the overall sensitivity of the eye for prolong periods of time. Optic nerve recordings measure the spiking activity of single nerve fibers with an extracellular microsuction electrode. They can be used to study visual messages conveyed from the eye to the brain as well as circadian-clock messages fed back from the brain to the eye. Intraretinal recordings measure with an intracellular microelectrode the voltage fluctuations induced by light in individual cells of the eye. They can be used to elucidate cellular mechanisms of retinal processing.

Using the Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus, in Vision Research

In this video we perform electroretinogram recording, optic nerve recording, and intraretinal recording with the American horseshoe crab, Limulus Polyphemus. These electrophysiological paradigms can be used for investigating the neural basis of vision in a research or teaching lab.

Horseshoe Yengeç kullanarak, Limulus Polyphemus&#39;un Vizyon Araştırma

The American horseshoe crab, Limulus Polyphemus is one of the oldest creatures on earth, and the animal continues to play an indispensable role in ...

Biyoloji

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for the investigation of processes of neurodegeneration, neuroprotection and neuro-repair involving the visual system, as these often correlate well with retinal changes. As a functional readout, visually evoked compensatory eye and head movements are commonly used in experimental models involving the visual function. Combining both techniques allows a quantitative in vivo investigation of structure and function, which can be used to investigate the pathological conditions or to evaluate the potential of novel therapeutics. A great benefit of the presented techniques is the possibility to perform longitudinal analyses allowing the investigation of dynamic processes, reducing variability and cuts down the number of animals needed for the experiments. The protocol described aims to provide a manual for acquisition and analysis of high quality retinal scans of mice and rats using a low cost customized holder with an option to deliver inhalational anesthesia. Additionally, the proposed guide is intended as an instructional manual for researchers using optokinetic response (OKR) analysis in rodents, which can be adapted to their specific needs and interests.

A detailed protocol for the assessment of structural and visual readouts in rodents by optical coherence tomography and optokinetic response is presented. The results provide valuable insights for ophthalmologic as well as neurologic research.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

Ex Vivo Oculomotor Slice Culture from Embryonic GFP-Expressing Mice for Time-Lapse Imaging of Oculomotor Nerve Outgrowth

Accurate eye movements are crucial for vision, but the development of the ocular motor system, especially the molecular pathways controlling axon guidance, has not been fully elucidated. This is partly due to technical limitations of traditional axon guidance assays. To identify additional axon guidance cues influencing the oculomotor nerve, an ex vivo slice assay to image the oculomotor nerve in real-time as it grows towards the eye was developed. E10.5 IslMN-GFP embryos are used to generate ex vivo slices by embedding them in agarose, slicing on a vibratome, then growing them in a microscope stage-top incubator with time-lapse photomicroscopy for 24-72 h. Control slices recapitulate the in vivo timing of outgrowth of axons from the nucleus to the orbit. Small molecule inhibitors or recombinant proteins can be added to the culture media to assess the role of different axon guidance pathways. This method has the advantages of maintaining more of the local microenvironment through which axons traverse, not axotomizing the growing axons, and assessing the axons at multiple points along their trajectory. It can also identify effects on specific subsets of axons. For example, inhibition of CXCR4 causes axons still within the midbrain to grow dorsally rather than ventrally, but axons that have already exited ventrally are not affected.

An ex vivo slice assay allows oculomotor nerve outgrowth to be imaged in real time. Slices are generated by embedding E10.5 IslMN:GFP embryos in agarose, slicing on a vibratome, and growing in a stage-top incubator. The role of axon guidance pathways is assessed by adding inhibitors to the culture media.

Olomotor sinir gelişimi için zaman aşımı görüntüleme için embriyonik GFP-Ifade fareler dan ex vivo okülomotor dilim kültürü

Accurate eye movements are crucial for vision, but the development of the ocular motor system, especially the molecular pathways controlling axon ...

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury are essential for translating novel therapeutic strategies from rodent models to clinical application due to their closer similarities to humans in size and anatomy. Here we describe some in vivo methods to evaluate the function and structure of the retinal ganglion cells (RGCs) and optic nerve (ON) in large animals, including visual evoked potential (VEP), pattern electroretinogram (PERG) and optical coherence tomography (OCT). Both goat and non-human primate were employed in this study. By presenting these in vivo methods step by step, we hope to increase experimental reproducibility among different labs and facilitate the usage of large animal models of optic neuropathies.

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

Here we demostrate several in vivo tests (flash visual evoked potential, pattern electroretinogram and optic coherence tomography) in goat and rhesus macaque to understand the structure and function of the optic nerve and its neurons.

In Vivo Büyük Hayvanlarda Retina Ganglion Hücre ve Optik Sinir Fonksiyonu ve Yapısını Değerlendirme Yöntemleri

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

A New Optokinetic Testing Method to Measure Rat Vision

Optokinetic nystagmus (OKN) is a reflexive eye movement initiated by the motion of visual stimuli in the field of vision. The head-tracking movement associated with OKN is commonly used as a measure of visual function in rodents. To record OKN responses in normal and experimental rats, a simple and inexpensive apparatus has been developed. This setup uses two tablet screens to display the OKN visual stimulus consisting of high contrast black and white stripes generated using the OKN Stripes Visualization Web Application, a freely available software. The rat is placed inside a clear Plexiglass holder that limits&#160;movement so that the&#160;rat&#39;s head continuously faces the OKN display screen. The position of the rat holder can be changed to adjust the distance between the rat and the display screen. A micro-camera positioned above the rat holder is used to record the rat&#39;s visual activities. These recordings can be used for quantitative assessments. Based on the presence or absence of clear head-tracking, the OKN responses at different spatial frequencies can be determined. The collected data demonstrates a novel technique for reliable measurement of visual acuity in normal and retinal degenerate rats.

The Optokinetic Nystagmus (OKN) behavioral testing method is used for the assessment of visual acuity in rodents. Here a simple method is demonstrated that can be easily set up in research laboratories for a reliable assessment of visual function in both normal and experimental rats.

Optokinetic nystagmus (OKN) is a reflexive eye movement initiated by the motion of visual stimuli in the field of vision. The head-tracking movement ...

Farelerde Optokinetik Refleks Tepkilerinin Değerlendirilmesi: Yeni Bir Yüksek Hassasiyetli Protokol

Quantification of Visual Feature Selectivity of the Optokinetic Reflex in Mice

The optokinetic reflex (OKR) is an essential innate eye movement that is triggered by the global motion of the visual environment and serves to stabilize retinal images. Due to its importance and robustness, the OKR has been used to study visual-motor learning and to evaluate the visual functions of mice with different genetic backgrounds, ages, and drug treatments. Here, we introduce a procedure for evaluating OKR responses of head-fixed mice with high accuracy. Head fixation can rule out the contribution of vestibular stimulation on eye movements, making it possible to measure eye movements triggered only by visual motion. The OKR is elicited by a virtual drum system, in which a vertical grating presented on three computer monitors drifts horizontally in an oscillatory manner or unidirectionally at a constant velocity. With this virtual reality system, we can systematically change visual parameters like spatial frequency, temporal/oscillation frequency, contrast, luminance, and the direction of gratings, and quantify tuning curves of visual feature selectivity. High-speed infrared video-oculography ensures accurate measurement of the trajectory of eye movements. The eyes of individual mice are calibrated to provide opportunities to compare the OKRs between animals of different ages, genders, and genetic backgrounds. The quantitative power of this technique allows it to detect changes in the OKR when this behavior plastically adapts due to aging, sensory experience, or motor learning; thus, it makes this technique a valuable addition to the repertoire of tools used to investigate the plasticity of ocular behaviors.

Yazar Spotlight: Farelerde optokinetik refleksin görsel özellik seçiciliğini incelemek için doğru ve nicel bir yaklaşım 

Here, we describe a standard protocol for quantifying the optokinetic reflex. It combines virtual drum stimulation and video-oculography, and thus allows precise evaluation of the feature selectivity of the behavior and its adaptive plasticity.

Farelerde Optokinetik Refleksin Görsel Özellik Seçiciliğinin Ölçülmesi

The optokinetic reflex (OKR) is an essential innate eye movement that is triggered by the global motion of the visual environment and serves to stabilize ...

Oküler kinematik Vitro uyarılması kaplumbağa kranial sinirler tarafından ölçülen

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Tek birim In vivo Kayıtlar

Farelerde Video-oculography

Özgürlük Hareket Platformu Six Degrees kullanarak Üç Boyutlu Vestibüler Oküler Refleks Testi

Horseshoe Yengeç kullanarak, Limulus Polyphemus'un Vizyon Araştırma

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Olomotor sinir gelişimi için zaman aşımı görüntüleme için embriyonik GFP-Ifade fareler dan ex vivo okülomotor dilim kültürü

In Vivo Büyük Hayvanlarda Retina Ganglion Hücre ve Optik Sinir Fonksiyonu ve Yapısını Değerlendirme Yöntemleri

A New Optokinetic Testing Method to Measure Rat Vision

Farelerde Optokinetik Refleksin Görsel Özellik Seçiciliğinin Ölçülmesi

Farelerde Optokinetik Refleksin Görsel Özellik Seçiciliğinin Ölçülmesi