Bu çalışmada bölümlerini T. Pantel, Tıp Fakültesi Mainz Johannes Gutenberg-üniversite sunulan doktora tezi bir parçasıdır. Çalışma Friedhelm Stiftung serbest bırakır ve Stiftung Neurochirurgische Forschung (A.N. hibe) tarafından desteklenmiştir.

Hayvan deneyleri sorumlu hayvan bakımı Komitesi (Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz) tarafından onaylanmış ve Alman hayvan refah Yasası (TierSchG) uygun olarak yürütülmektedir. Bakım ve hayvanların kullanımı için ilgili tüm uluslararası, ulusal ve kurumsal yönergeleri takip edildi.
Bu çalışmada, Erkek C57BL6 fareler (10-12 hafta yaş) kullanılmıştır. Kısacası, subaraknoid kanama endovasküler filaman perforasyon isoflurane ile anestezi altında tarafından akımıdır. Sol dış karotid arter cerrahi olarak hazırlanmıştır. Sonra bir filament dış karotid arter eklenen ve intracranially karotis T, subaraknoid kanama inducing delikli iç karotis arter yoluyla gelişmiş. Kafa içi basınç artış başarılı endovasküler bir göstergesi olarak alınan delikli. Farelerde SAH bir endovasküler filaman perforasyon modeli detaylı bir protokol oldu başkaları tarafından8,14yayınlandı.
1. perfüzyon ve endovasküler döküm
<ol><li>Bu çalışmada, perfüzyon 72 saat sonra SAH indüksiyon gerçekleştirildi. Anestezi intraperitoneally 5 µg/g vücut ağırlığı (bw) midazolam, 30 ng/g bw fentanil ve 0,5 µg/g bw medetomidin enjekte edilerek ikna etmek. Sadece yeterli anestezi düzeyi, hangi acı uyaranlara karşı tepkiler yokluğunda tarafından onaylandıktan ulaşıldıktan sonra devam edin.</li>
	<li>Toraks açık, 21 G kanül ile sol ventrikül ponksiyon, sağ atrium açın ve azalan aort açıklandığı gibi başka bir yerde15kelepçe.</li>
	<li>Aşağıdaki çözümleri kullanarak bir transcardiac perfüzyon gerçekleştirmek: (i) Dulbecco'nın fosfat tamponlu MgCl2 ve CaCl2 pH 7.4 ile 1 g/M glikoz ve (ii) % 4 paraformaldehyde çözüm içeren serum fizyolojik.<ol>
<li>Perfüzyon çözüm ile (i) için 2 dakika başlarlar ve çözüm ile (II) 4 dakikadır.</li>
		<li>Çözümleri bir sıcaklık 37 ° C ve vasospasm fareler16çözümlemek için en uygun perfüzyon basıncı bulundu 70 mmHg sabit bir basınç ile sıvı için değişken perfüzyon oranı ile basınç kontrollü pompa kullanarak süzülür. Basınç kaybı çözüm (i) geçiş yaparken çözüm (II) kaçının.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Radyoopak döküm ajan ile Oda sıcaklığında 20 dakika perfüzyon çözümleri (i) ve (ii) ile perfüzyon sonra devam ( Tablo malzemelerigörmek) 0.2 ml/dk sabit bir hızda.</li>
	<li>4 ° C'de radyoopak döküm malzemenin gecede tedavi için izin verir. Sonra yukarıda açıklanan17olarak kafatası beyin kaldırmak, örnek % 4 İngiltere'de yılın eriyik-e doğru aktarın ve mikro CT tarama kadar örnek 4 ° C'de depolayın.</li>
</ol>2. mikro bilgisayarlı tomografi
<ol><li>Beyin bir künt anatomik forseps ile bir plastik tüp ortasına yerleştirin. Nesneyi resim alma sırasında taşımak değil emin olmak için örnek daha biraz daha büyük çaplı bir tüp seçin. Gazlı bez tüp kapatmak için kullanın.</li>
	<li>Bilgisayar-navigasyon-kontrol (CNC) konumlandırma sistemi, nesneyi yatay ekseni döndürüleceğini X-ray kabinde mikro adım motor plastik tüp takın.</li>
	<li>Alan bakış açısı altında x-ışını radyografi örnekte hizalayın. Maksimum büyütme elde etmek için x-ışını kaynağına mümkün olduğunca yakın nesneyi yerleştirmek ve belgili tanımlık bulmak mümkün olduğunca Uzaklik en üst düzeye çıkarmak.</li>
	<li>Bir adım ve çekim görüntü Alım Protokolü ile aşağıdaki tarama parametreleri kullanın: set çekim hızı 1 s sinyal-gürültü oranı (SNR) optimize etmek gerilim 80 tüp her projeksiyon için kV (geçerli 38 µA), 1000 projeksiyonlar sonucu 360 ° dönme.</li>
	<li>RAW veri yeniden inşası için 1024 x 1024 x 1024 voxels yeniden yapılanma yazılımını kullanarak bir matris ile Shepp-Logan filtre uygulama filtre uygulanmış arka projeksiyon algoritma kullanın (bkz. Tablo malzeme). Daha fazla çözümleme için 3 boyutlu görselleştirme yazılımı içine elde edilen DICOM veri alma ( Tablo malzemelerigörmek).</li>
</ol>3. 3 boyutlu rekonstrüksiyon kafa içi vasküler ağaç ve gemi birimleri belirlenmesi
Not: İşlevleri hakkında arka plan bilgileri görselleştirme yazılım işlevi Yardımkullanarak bulunabilir.
<ol><li>DICOM veri almaişlevini kullanarak görselleştirme yazılımı içine alın.</li>
	<li>Gemi ağaç Volrenişleviyle görselleştirin. Büyük serebral arterler keskin Anahatlarda tasvir edilmektedir görselleştirme eşik seçin. Deneysel serideki tüm veri kümesi için aynı görselleştirme eşik kullanmak önemlidir.</li>
	<li>Neredeyse bazal serebral arterler (Willis daire) işleviyle VolumeEdit gemiler imleç çevreleyen incelemek. O zaman hemen hemen çözümlenmesi için gemi segment incelemek. Bu nedenle, vasküler ağaç 3 boyutlu modelini tam olarak tüm küçük dalları ana arterin ayırmak için döndürün. Analiz edilecek gemi kesimi hariç tüm gemileri silmek daha fazla çözümleme için önemlidir.</li>
	<li>Küme oluşturur görselleştirme eşik için eşik ile Autoskeleton işlevi uygular bir Merkezi-çizgi - SpatialGraphdayalı.</li>
	<li>Uygula işlevi oluşturmak için SpatialGraphToLineSet bir satır kümesi. Onun tek alt segmentler el ile imleci ile tek alt segmentleri seçip "bölme" tıklayarak ayarla satırını bölmek. Tek alt segmentler birimleri hesaplamak için çok önemli bir adımdır.</li>
	<li>Tekrar kayma bir grafik oluşturmak için LineSetToSpatialGraph işlevini kullanın.</li>
	<li>Uzunluk, hacim ve her alt bölüm çapını belirlemek için SpatialGraphStatistics işlevini kullanın. Renk kodlu görselleştirme için işlevini kullanın damar çapı elbette temsil eden SpatialGraphView. "Damar çapı ile karşılıklı olarak ilişkilendirir kalınlığı" için boyama segment ayarlayın. Deneysel serideki tüm veri kümeleri için aynı renk eşlemi seçmek önemlidir.</li>
	<li>Hangi alt segmentler içinde daha fazla çözümleme dahil edileceğini belirlemek için alt segmentler uzunlukları ekleyin. Bu da çalışmanın iç karotid arter karotis T proksimal 1 mm ve 2.5 mm orta serebral arter karotis T. distal oluşan bir gemi kesimi değerlendirildi Sonra tanımlanmış gemi segment gemi hacmi belirlemek için birimleri ekleyin.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Macdonald, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+neurological+deterioration+after+subarachnoid+haemorrhage.">Delayed neurological deterioration after subarachnoid haemorrhage.</a> Nature Reviews Neurology. 10 (1), 44-58 (2014).</li><li>Dorsch, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+review+of+cerebral+vasospasm+and+delayed+ischaemia+following+aneurysm+rupture.">A clinical review of cerebral vasospasm and delayed ischaemia following aneurysm rupture.</a> Acta Neurochirurgica Supplement. 110 (Pt 1), 5-6 (2011).</li><li>Vergouwen, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Definition+of+delayed+cerebral+ischemia+after+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage+as+an+outcome+event+in+clinical+trials+and+observational+studies:+Proposal+of+a+multidisciplinary+research+group.">Definition of delayed cerebral ischemia after aneurysmal subarachnoid hemorrhage as an outcome event in clinical trials and observational studies: Proposal of a multidisciplinary research group.</a> Stroke. 41 (10), 2391-2395 (2010).</li><li>Friedrich, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CO2+has+no+therapeutic+effect+on+early+microvasospasm+after+experimental+subarachnoid+hemorrhage.">CO2 has no therapeutic effect on early microvasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 34 (8), e1-e6 (2014).</li><li>Friedrich, B., Muller, F., Feiler, S., Scholler, K., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+subarachnoid+hemorrhage+causes+early+and+long-lasting+microarterial+constriction+and+microthrombosis:+An+in+vivo+microscopy+study.">Experimental subarachnoid hemorrhage causes early and long-lasting microarterial constriction and microthrombosis: An in vivo microscopy study.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 32 (3), 447-455 (2012).</li><li>Terpolilli, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+inhalation+reduces+brain+damage,+prevents+mortality,+and+improves+neurological+outcome+after+subarachnoid+hemorrhage+by+resolving+early+pial+microvasospasms.">Nitric oxide inhalation reduces brain damage, prevents mortality, and improves neurological outcome after subarachnoid hemorrhage by resolving early pial microvasospasms.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 36 (12), 2096-2107 (2016).</li><li>Neulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+segmentation-based+volumetric+approach+to+localize+and+quantify+cerebral+vasospasm+based+on+tomographic+imaging+data.">A segmentation-based volumetric approach to localize and quantify cerebral vasospasm based on tomographic imaging data.</a> PLoS One. 12 (2), e0172010 (2017).</li><li>Schuller, K., Buhler, D., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+subarachnoid+hemorrhage.">A murine model of subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50845 (2013).</li><li>Altay, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+subarachnoid+hemorrhage+to+induce+vasospasm+in+mice.">A novel method for subarachnoid hemorrhage to induce vasospasm in mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 183 (2), 136-140 (2009).</li><li>Momin, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+delivery+of+nitric+oxide+inhibits+leukocyte+migration+and+prevents+vasospasm+in+haptoglobin+2-2+mice+after+subarachnoid+hemorrhage.">Controlled delivery of nitric oxide inhibits leukocyte migration and prevents vasospasm in haptoglobin 2-2 mice after subarachnoid hemorrhage.</a> Neurosurgery. 65 (5), 937-945 (2009).</li><li>Froehler, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasospasm+after+subarachnoid+hemorrhage+in+haptoglobin+2-2+mice+can+be+prevented+with+a+glutathione+peroxidase+mimetic.">Vasospasm after subarachnoid hemorrhage in haptoglobin 2-2 mice can be prevented with a glutathione peroxidase mimetic.</a> Journal of Clinical Neurocience. 17 (9), 1169-1172 (2010).</li><li>Lin, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+subarachnoid+hemorrhage-induced+cerebral+vasospasm.">A murine model of subarachnoid hemorrhage-induced cerebral vasospasm.</a> Journal of Neuroscience Methods. 123 (1), 89-97 (2003).</li><li>Marbacher, S., Fandino, J., Kitchen, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+intracranial+in+vivo+animal+models+of+delayed+cerebral+vasospasm.">Standard intracranial in vivo animal models of delayed cerebral vasospasm.</a> British Journal of Neurosurgery. 24 (4), 415-434 (2010).</li><li>Feiler, S., Friedrich, B., Scholler, K., Thal, S. C., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+induction+of+subarachnoid+hemorrhage+in+mice+by+intracranial+pressure+monitoring.">Standardized induction of subarachnoid hemorrhage in mice by intracranial pressure monitoring.</a> Journal of Neuroscience Methods. 190 (2), 164-170 (2010).</li><li>Ghanavati, S., Yu, L. X., Lerch, J. P., Sled, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perfusion+procedure+for+imaging+of+the+mouse+cerebral+vasculature+by+X-ray+micro-CT.">A perfusion procedure for imaging of the mouse cerebral vasculature by X-ray micro-CT.</a> Journal of Neuroscience Methods. 221, 70-77 (2014).</li><li>Parra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+subarachnoid+hemorrhage+associated+cerebral+vasospasm:+methodological+analysis.">Mouse model of subarachnoid hemorrhage associated cerebral vasospasm: methodological analysis.</a> Neurological research. 24 (5), 510-516 (2002).</li><li>Boulay, A. C., Saubamea, B., Decleves, X., Cohen-Salmon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Mouse+Brain+Vessels.">Purification of Mouse Brain Vessels.</a> Journal of Visualized Experiments. 105 (e53208), (2015).</li><li>Marjamaa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deletion+in+the+first+intron+of+the+Col1a1+gene+develop+dissection+and+rupture+of+aorta+in+the+absence+of+aneurysms:+High-resolution+magnetic+resonance+imaging,+at+4.7+T,+of+the+aorta+and+cerebral+arteries.">Mice with a deletion in the first intron of the Col1a1 gene develop dissection and rupture of aorta in the absence of aneurysms: High-resolution magnetic resonance imaging, at 4.7 T, of the aorta and cerebral arteries.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 55 (3), 592-597 (2006).</li><li>Schambach, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrafast+high-resolution+in+vivo+volume-CTA+of+mice+cerebral+vessels.">Ultrafast high-resolution in vivo volume-CTA of mice cerebral vessels.</a> Stroke. 40 (4), 1444-1450 (2009).</li><li>Figueiredo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+digital+subtraction+angiography,+micro-computed+tomography+angiography+and+magnetic+resonance+angiography+in+the+assessment+of+the+cerebrovascular+system+in+live+mice.">Comparison of digital subtraction angiography, micro-computed tomography angiography and magnetic resonance angiography in the assessment of the cerebrovascular system in live mice.</a> Clinical Neuroradiology. 22 (1), 21-28 (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Temel SAH araştırma için önemli bir araç fare SAH modellerdir. Serebral vasospasm sık sık deneysel çalışmalar için DCI SAH9,11' den sonra lider mekanizmaları araştıran bir son nokta olarak kullanılır. Ancak, farelerde serebral vasospasm miktar ya da diğer küçük hayvan modelleri SAH, meydan okuyor. Vasospasm gemi çapları endovasküler perfüzyon ve döküm7,9,12 sonra tanımlanmış anatomik noktalarda ex vivo belirlenmesi veya çevresi belirlenmesi genellikle, sayısal histolojik olarak tanımlanan gemilerin10,11bölümleri. Ancak, bu yöntemlerin bazı dezavantajları var: Vasospasm yalnızca tanımlanmış anatomik noktalarda; değerlendirilir vasospasm gemi parçaları komşu değerlendirme kaçış olabilir. Histolojik eserler hatalardan başka bir kaynak mevcut. Ayrıca, değerlendirme oldukça öznel olabilir çünkü tam olarak nerede damar çapı ölçülür araştırmacı tarafından belirlenir.
Amaç bu nedenle serebral vasospasm serebral gemiyi kesimleri kesitsel görüntü veri7gemi hacmi hesaplayarak quantifies bir yöntem kurmak oldu. Burada sunulan hacimsel yöntemin en önemli avantajı kesimleri incelenebilir o gemiyi var. Bu bir noktasının nerede damar çapı ölçülür tanımının engeller. Bir daha bütün gemi parçaları değerlendirilmesi o muhtemelen gemi çapları nerede vasospasm daha proksimal ve distal geminin kaçış olabilir tanımlanmış noktalarda belirlenmesi daha vasospasm ölçmek için daha objektif bir parametre armağan avantajdır değerlendirme. Damar çapı bir renk kodu kullanarak dijital gösterimi vasospasm derece sezgisel bir tahmin sağlar. Ayrıca, hacimsel değerlendirme değerlendirme temsilcisi sonuçlarında gösterildiği gibi damar çapı göre vazospastik gemiler arasındaki büyük farklar yol açar. Burada sunulan yöntemiyle elde sanal imar damar anatomi doğru şekilde yansıtır. Bu hangi gemi çap olarak ölçülen ve dijital rekonstrüksiyonlar benzerdi, bir önceki çalışma7gözlemleri üreyen temsilcisi serisi değerlendirme tarafından gösterilir. Ancak, avantajları rağmen daha fazla çalışmalar burada sunulan Yöntem vasospasm analiz geleneksel yöntemlerle üstün olup olmadığını değerlendirmek için ihtiyaç vardır.
Bir yöntemi burada sunulan bu mikroskopik analiz döküm beyin örnekleri ya da histolojik Analizi (mikro CT zaman beyin örnek, veri işleme beyin örnek başına 45 dakika başına 90 dakika tarama) göre daha fazla zaman tanıyor kısıtlamasıdır. Ayrıca, mikro CT tarayıcıları kullanılabilirliğini onun uygulama sınırlayabilir. Hayvanlar burada muayene sayısı bu el yazması açıklanan protokol fizibilite göstermek için yeterli idi. Ancak, protokol tedavi çalışmalarında kullanılması gerekiyorsa, hayvan numaraları hesaplanan gerekir gemi birimleri ve çapları beklenen etkileri dayalı. Bu ve diğer çalışmaların fare SAH modelleri kullanarak başka bir sınırlama bu vasospasm kararlı ex vivoolmasıdır. Bu uzunlamasına çalışmalar imkansız temel değerlerini SAH indüksiyon ve farklı zaman noktalarda vasospasm önce araştırmak sağlar. Çalışmalar bunun göstermiştir rağmen manyetik rezonans tomografisi18, bilgisayarlı tomografi anjiyo19veya dijital çıkarma kullanarak fare vivo içinde büyük kafa içi gemilerin anatomisi tasvir etmek mümkündür anjiyografi20, bizim bilgi, bu yöntemler henüz kullanılmamış fare SAH modelleri içinde vivoserebral vasospasm analiz etmek. Not, serebral damarlara dijital yeniden serebral vasospasm burada sunulan sonraki hacimsel değerlendirilmesi ile ex vivo mikro CT veriler üzerinde kullanılacak sınırlı değildir. Yüksek çözünürlüklü vasküler çapraz kesit beyin görüntüleme farelerde gelecekte kullanılabilir olacaktır vasospasm in vivohacimsel analizini gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Aneurysmatic subaraknoid kanama (SAH), hemorajik inme, bir alt tür neurointensive bakım ünitelerinde yaygın bir hastalıktır. Kanama olayı kendisi tarafından beyin hasarları oluşmaktadır, erken beyin hasarı yanı sıra (EBI), klinik tarafından tanımlanan gecikmeli serebral iskemi (şef), hasta sonucu belirleyen bir diğer önemli faktör olduğunu bozulma ile Engelli beyin perfüzyon veya beyin enfarktüsü girişimsel ve cerrahi1,2,3ile ilişkili değil. DCI için katkıda bulunan önemli vasospasms büyük beyin damarlarının bir yandan mekanizmasıdır; Öte yandan, vasospasm yüzdeki ve mikrotromboz ve kortikal yayılan depresyon ile ilgili iskemi ile microcirculatory disfonksiyon (gözden Madonald 20141içinde) bir rol oynar. Bu nedenle, vasospasm büyük beyin damarlarının tanısında klinik pratikte çok önemlidir ve birçok klinik ve deneysel çalışmalarda önemli bir bitiş noktasını görüntüler.
Vasospasm fare SAH modelleri özellikleri doğrudan değildir olmasına rağmen SAH insan hasta, fare modelleri için transfer edilebilir ilgili vasospasm-si olmak be önemi son yıllarda büyüyen. Bu modelleri SAH endovasküler filaman delikli4,5,6,7,8, cisternal gemiler9transeksiyon veya bos10 içine kan enjeksiyon tarafından indüklenen ,11,12. Geleneksel olarak vasospasm13eğitim için tasarlanmış büyük hayvan modelleri SAH aksine, fare modelleri çok sayıda transgenik fareler suşları kullanılabilir üstünlüğü var. Bu onları moleküler mekanizmalar vasospasm ve DCI lider eğitim için mükemmel bir araç yapar. Ancak, farelerde serebral vasospasm belirlenmesi zordur. Bunun nedeni, vasospasm klinik görüntüleme teknikleri kullanılarak incelenebilir büyük hayvan modeller aksine farelerde serebral vasospasm analiz etmek için Imaging vivo içinde henüz kullanılabilir değil. Bu nedenle, vasospasm yaygın olarak her iki histolojik kesitler10,11 kullanarak veya mikroskobik sonra beyin damarlarının7,9,12/ döküm belirlenir. Ancak, bu teknikler çapları sadece tanımlanmış noktalarda incelenir o gemiyi dezavantajı var.
Bir önceki çalışma7üzerinde bağlı olarak, bu el yazması bir fare SAH modelinde amaç ve vasospasm tekrarlanabilir analizi için bir yöntem sunar. Perfüzyon ve döküm beyin damarları, ex vivo mikro-CT tarama, dijital yeniden gemisi ağacının bağlı ve sonraki yöntemdir birimleri tüm beyin damarlarının değerlendirilmesi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1385px;" width="1385">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:503px;">Medetomidin&#160;</td>
			<td style="width:363px;">Pfizer, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:344px;">n.a.</td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Midazolam</td>
			<td>Ratiopharm, Ulm, Germany</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fentanyl&#160;</td>
			<td>Curamed, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Venofix 21G</td>
			<td>B Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>n.a.</td>
			<td>21G cannula&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline containing MgCl2 and CaCl2, pH 7.4&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td>D8662&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">4% paraformaldehyde solution&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td>100496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microfil MV-122&#160;</td>
			<td>Flowtech Inc., Carver, MA, USA</td>
			<td>n.a.</td>
			<td>Radiopaque</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Micro-CT system Y.Fox</td>
			<td>Yxlon, Garbsen, Germany</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">Reconstruction Studio software version 1.2.8.1</td>
			<td style="width:363px;">TeraRecon, Frankfurt am Main, Germany</td>
			<td style="width:344px;">n.a.</td>
			<td style="width:176px;">Reconstruction software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Amira software version 5.4.2&#160;</td>
			<td>FEI Visualization Sciences Group, Hillsboro, OR, USA</td>
			<td style="width:344px;">n.a.</td>
			<td>Visualization software</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:503px;">PHD ultra syringe pump</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>70-3</td>
			<td>Pressure controlled pump</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">anatomical forceps (blunt)</td>
			<td>B Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>160323_v&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Infinity X-21</td>
			<td>Deltapix, Maalov, Denmark</td>
			<td>n.a.</td>
			<td>high resolution camera</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DeltaPix Insight software version 2.0.1</td>
			<td>Deltapix, Maalov, Denmark</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">C57BL6 mice</td>
			<td>Charles River, Cologne, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a volumetric method for quantification of cerebral vasospasm in a murine model of subarachnoid hemorrhage

Subaraknoid kanama (SAH) hemorajik inme alt olduğunu. Kanama sonrasında oluşur beyin vasospasm hasta sonucu belirlemede önemli bir faktör olduğunu ve bu nedenle sık sık çalışma bitiş noktası olarak alınır. Ancak, küçük hayvan çalışmalarında SAH üzerinde serebral vasospasm miktar büyük bir sorun olduğunu. Burada, bir ex vivo yöntemi miktar serebral vasospasm ölçmek için objektif bir ölçü kullanılabilir tüm gemi parçaları hacimli sağlayan sunulur. Bir ilk adım olarak, beyin damarlara endovasküler döküm radyoopak döküm Aracı kullanılarak gerçekleştirilir. O zaman, kesitsel görüntü veri mikro bilgisayarlı tomografi ile elde edilir. Son adım 3 boyutlu inşası merkezi hatları ve seçilen gemi segmentlerinin birimleri hesaplamak için bir algoritma tarafından takip sanal vasküler ağacı içerir. Yöntem kendi sanal rekonstrüksiyonu ile anatomik örnekleri çapı tabanlı karşılaştırılması tarafından gösterilen serebrovasküler ağaç son derece hassas bir sanal yeniden inşası sonuçlandı. Yalnız gemi çapları ile karşılaştırıldığında, gemi birimleri SAH ve sham çalışan fareler bir dizide vazospastik ve vazospastik sigara damarları arasındaki farkları vurgulayın.

3 boyutlu beyin damar ağacının sanal yeniden yapılanma
3-boyutlu yeniden kafa içi vasküler ağaçlar son derece hassas bir damar anatomi (Şekil 1) sağlanan. Doğruluk değerlendirmek için biz çapı tabanlı karşılaştırma olarak belirlenen gemi çapları arasında ve 3 boyutlu sanal rekonstrüksiyonlar 2 anatomik olarak tanımlanmış noktalarda üzerinden yapılacak (1: 1 mm orta serebral arter (MCA), distal yaptı karotis T; 2: 1 mm karotis T distal MCA değil). Gemi çapları mikroskobik belirlenmesi için bir ölçüm ölçek için kalibre bir yüksek çözünürlüklü fotoğraf makinesi (sonsuz X-21, Deltapix) ile DeltaPix Insight yazılımı sürüm 2.0.1 kullanıldı. Bu değerlendirme için 10 beyin örnekleri (5 SAH, 5 sahte) analiz edildi. Bu 5 sahte ameliyat (ameliyat sonrası gün 1 ve 2, sırasıyla öldü SAH grubunun 2 hayvanlar) iken hangi bir SAH, akımıdır 7 12 fareler bir dizi vardı. Kafa içi damar anatomi (mikroskobik belirlenmesi vs sanal imar, doğru bir sanal yeniden inşası gösteren kesin ve neredeyse, belirlenen çapları arasında hiçbir önemli farklılıklar vardı ± Standart hata demek: MCA 150 ± 9 µm vs sol MCA 150 ± 8 µm; yaptı MCA 153 ± 8 µm vs154 ± 9 µm anda, Şekil 2bakın). 
SAH ile farelerde serebral vasospasm miktar
Serebral vasospasm ölçmek için (i ses, 1 mm iç karotid arter (ICA) ve 2.5 mm MCA sol ve (ii) damar çapı 2 anatomik olarak tanımlanmış noktalarda (sol ve sağ MCA) oluşan bir önceden tanımlanmış temsilcisi 3.5 mm gemi kesim olduğunu beyin örneklerinde SAH ve sham işletilen hayvanlardan belirlenen (n = 5). Gemi birim SAH sham için karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha düşük (36 ± 4 nL vs 71 ± 9 nL, p < 0,05). Gemi çapları SAH sham için karşılaştırıldığında daha düşük (MCA yaptı: 140 ± 10 µm vs 160 ± 11 µm, p 0,11; = sağ MCA: 130 ± 13 µm vs 158 ± 16 µm, p < 0,05; bkz. Şekil 3), düzey of önemi sadece analiz için ulaştı doğru MCA var.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57997/57997fig1.jpg"> Şekil 1. Kafa içi vasküler ağaç sanal inşası. (A) bir temsilci beyin örnek gösterir; (B) hemen hemen karşılık gelen vasküler ağaç yeniden gösterir. (C) renk kodlu sol MCA çapını görselleştirme. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57997/57997fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57997/57997fig2.jpg"> Resim 2 . Damarlara dijital yeniden inşası doğruluğunu. 3D yeniden oluşturulan beyin örneklerinden kesin kararlı olanlar karşılaştırıldığında ortalama çapı ölçüldü. Veri ortalama ± standart hata ortalamaya gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57997/57997fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57997/57997fig3.jpg"> Şekil 3 . Gemi hacmi ve damar çapı SAH sonra. (A) karşılaştırma MCA çapları SAH 3D yeniden oluşturulan damarlara itibaren ölçülen ve sham fareler. (B) gemi SAH hacmindeki ve sham fareler. Veri ortalama ± standart hata ortalamaya gösterilir. p < 0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57997/57997fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage at JoVE.com

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Bu makalenin amacı mikro bilgisayarlı tomografi ve serebral vasospasm ölçmek için kullanılan tüm gemi parçaları hacimleri belirlenmesi sonra farelerde serebrovasküler ağaç 3 boyutlu rekonstrüksiyon sağlayan bir yöntem sunmaktır fare modelleri subaraknoid kanama.

Subaraknoid kanama, bir fare modeli serebral Vasospasm miktar hacimsel bir yöntemi

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

a-volumetric-method-for-quantification-cerebral-vasospasm-murine

Research

JoVE Journal

Neuroscience

8.0K Görüntüleme.  Medical Center of the Johannes Gutenberg - University. Bu makalenin amacı mikro bilgisayarlı tomografi ve serebral vasospasm ölçmek için kullanılan tüm gemi parçaları hacimleri belirlenmesi sonra farelerde serebrovasküler ağaç 3 boyutlu rekonstrüksiyon sağlayan bir yöntem sunmaktır fare modelleri subaraknoid kanama.

Video: A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH
accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific
effective therapy. The autologous blood injection model in mice
involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal
ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The
response to hemorrhage can then be studied in vivo and the
neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the
ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The
procedure described in this protocol uses the double injection
technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no
anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space
and expandable tubing in the system.

The autologous blood injection model of intracerebral hemorrhage in mice described in this protocol uses the double injection technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space and expandable tubing in the system.

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Nörobilim

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall neural circuit function. Synapse strength critically depends on the abundance of neurotransmitter receptors clustered at synaptic sites on the postsynaptic membrane. Receptor levels are established developmentally, and can be altered by receptor trafficking between surface-localized, subsynaptic, and intracellular pools, representing important mechanisms of synaptic plasticity and neuromodulation. Rigorous methods to quantify synaptically-localized neurotransmitter receptor abundance are essential to study synaptic development and plasticity. Fluorescence microscopy is an optimal approach because it preserves spatial information, distinguishing synaptic from non-synaptic pools, and discriminating among receptor populations localized to different types of synapses. The genetic model organism Caenorhabditis elegans is particularly well suited for these studies due to the small size and relative simplicity of its nervous system, its transparency, and the availability of powerful genetic techniques, allowing examination of native synapses in intact animals.
Here we present a method for quantifying fluorescently-labeled synaptic neurotransmitter receptors in C. elegans. Its key feature is the automated identification and analysis of individual synapses in three dimensions in multi-plane confocal microscope output files, tabulating position, volume, fluorescence intensity, and total fluorescence for each synapse. This approach has two principal advantages over manual analysis of z-plane projections of confocal data. First, because every plane of the confocal data set is included, no data are lost through z-plane projection, typically based on pixel intensity averages or maxima. Second, identification of synapses is automated, but can be inspected by the experimenter as the data analysis proceeds, allowing fast and accurate extraction of data from large numbers of synapses. Hundreds to thousands of synapses per sample can easily be obtained, producing large data sets to maximize statistical power. Considerations for preparing C. elegans for analysis, and performing confocal imaging to minimize variability between animals within treatment groups are also discussed. Although developed to analyze C. elegans postsynaptic receptors, this method is generally useful for any type of synaptically-localized protein, or indeed, any fluorescence signal that is localized to discrete clusters, puncta, or organelles.
The procedure is performed in three steps: 1) preparation of samples, 2) confocal imaging, and 3) image analysis. Steps 1 and 2 are specific to C. elegans, while step 3 is generally applicable to any punctate fluorescence signal in confocal micrographs.

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

The abundance of neurotransmitter receptors clustered at synapses strongly influences synaptic strength. This method quantifies fluorescently-labeled neurotransmitter receptors in three dimensions with single-synapse resolution in C. elegans, allowing hundreds of synapses to be rapidly characterized within a single sample without distortions introduced by z-plane projection.

Içinde Synaptic florasan Otomatik Sayısallaştırma<em&gt; C. elegans</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs through activation of their ion channels and neurotransmitter receptors, and process information in part through activity-dependent release of gliotransmitters. Furthermore, astrocytes constitute the main uptake system for glutamate, contribute to potassium spatial buffering, as well as to GABA clearance. These cells therefore constantly monitor synaptic activity, and are thereby sensitive indicators for alterations in synaptically-released glutamate, GABA and extracellular potassium levels. Additionally, alterations in astroglial uptake activity or buffering capacity can have severe effects on neuronal functions, and might be overlooked when characterizing physiopathological situations or knockout mice. Dual recording of neuronal and astroglial activities is therefore an important method to study alterations in synaptic strength associated to concomitant changes in astroglial uptake and buffering capacities. Here we describe how to prepare hippocampal slices, how to identify stratum radiatum astrocytes, and how to record simultaneously neuronal and astroglial electrophysiological responses. Furthermore, we describe how to isolate pharmacologically the synaptically-evoked astroglial currents.

The preparation of acute brain slices from isolated hippocampi, as well as the simultaneous electrophysiological recordings of astrocytes and neurons in stratum radiatum during stimulation of schaffer collaterals is described. The pharmacological isolation of astroglial potassium and glutamate transporter currents is demonstrated.

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic neuroinflammatory state within the central nervous system (CNS), thought to be driven principally by virally-mediated activation of microglia and brain resident macrophages. HIV-1 infection is also accompanied by changes in cerebrovascular blood flow (CBF), raising the possibility that HIV-associated chronic neuroinflammation may lead to changes in CBF and/or in cerebral vascular architecture. To address this question, we have used a mouse model for HIV-induced neuroinflammation, and we have tested whether long-term exposure to this inflammatory environment may damage brain vasculature and result in rarefaction of capillary networks. In this paper we describe a method to quantify changes in cortical capillary density in a mouse model of neuroinflammatory disease (HIV-1 Tat transgenic mice). This generalizable approach employs in vivo two-photon imaging of cortical capillaries through a thin-skull cortical window, as well as ex vivo two-photon imaging of cortical capillaries in mouse brain sections. These procedures produce images and z-stack files of capillary networks, respectively, which can be then subjected to quantitative analysis in order to assess changes in cerebral vascular architecture.

This paper describes a method by which the vascular architecture in the brain can be quantified using in vivo and ex vivo two-photon microscopy.

HIV kaynaklı Nöroinflamasyondan bir Fare Modeli İki foton Mikroskop kullanarak Serebral Vasküler Mimarlık Niceleme

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies of this phenomenon have been performed in either models with severe intrauterine ischemia or models with gradient degree of intrauterine hypoperfusion. No study has been performed in a model on uniform mild intrauterine hypoperfusion (MIUH). Two models have been used for studies of MIUH: a model based on suture ligation of either side of the arterial arcade formed with the uterine and ovarian arteries, and a transient model based on clipping the bilateral ovarian arteries and aorta having patency. Those two rodent models of MIUH have some limitations, e.g., not all fetuses are subjected to MIUH, depending on their position in the uterine horn. In our MIUH model, all fetuses are subjected to a comparable level of intrauterine hypoperfusion. MIUH was achieved by mild stenosis of all four arteries feeding the uterus, i.e., the bilateral uterine and ovarian arteries.
Arterial stenosis was induced by metal microcoils wrapped around the feeding arteries. Producing arterial stenosis with microcoils allowed us to control, optimize, and reproduce decreased blood flow with very little inter-animal variability and a low mortality rate, thus enabling accurate evaluation. When microcoils with an inner diameter of 0.24 mm were used, the blood flow in both the placenta and fetus was mildly decreased (approximately 30% from the pre-stenosis level in the placenta). The offspring of our MIUH model clearly demonstrates long-lasting alterations in neurological, neuroanatomical and behavioral test results.

Mild intrauterine hypoperfusion was produced by artery stenosis with metal microcoils wrapped around the uterine and ovarian arteries in rats at embryonic day 17. This procedure produced prenatal hypoperfusion and intrauterine growth restriction.

Microcoil stenoz ile hafif intrauterin hipoperfüzyon fare modeli

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% of the total stroke-related mortality with an important morbidity in terms of neurological outcome. A delayed cerebral vasospasm (CVS) may occur most often in association with a delayed cerebral ischemia. Different animal models of SAH are now being used including endovascular perforation and direct injection of blood into the cisterna magna or even the prechiasmatic cistern, each exhibiting distinct advantages and disadvantages. In this article, a standardized mouse model of SAH by double direct injection of determined volumes of autologous whole blood into the cisterna magna is presented. Briefly, mice were weighed and then anesthetized by isoflurane inhalation. Then, the animal was placed in a reclining position on a heated blanket maintaining a rectal temperature of 37 &#176;C and positioned in a stereotactic frame with a cervical bend of about 30&#176;. Once in place, the tip of an elongated glass micropipette filled with the homologous arterial blood taken from carotid artery of another mouse of the same age and gender (C57Bl/6J) was positioned at a right angle in contact with the atlanto-occipital membrane by means of a micromanipulator. Then 60 &#181;L of blood was injected in the cisterna magna followed by a 30&#176; downward tilt of the animal for 2 minutes. The second infusion of 30 &#181;L of blood into the cisterna magna was performed 24 h after the first one. The individual follow-up of each animal is carried out daily (careful evaluation of weight and well-being). This procedure allows a predictable and highly reproducible distribution of blood, likely accompanied by intracranial pressure elevation that can be mimicked by an equivalent injection of an artificial cerebral spinal fluid (CSF), and represents an acute to mild-model of SAH inducing low mortality.

We described in this protocol a standardized subarachnoid hemorrhage (SAH) mouse model by a double injection of autologous whole-blood into the cisterna magna. The high degree of standardization of the double-injection procedure represents a middle-to-acute model of SAH with relative safety regarding mortality.

Subaraknoid Kanama Modeli olarak Cisterna Magna içine Kan Çift Doğrudan Enjeksiyon

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Analysis of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage with High Frequency Transcranial Duplex Ultrasound

Cerebral vasospasm that occurs in the weeks after subarachnoid hemorrhage, a type of hemorrhagic stroke, contributes to delayed cerebral ischemia. A problem encountered in experimental studies using murine models of SAH is that methods for in vivo monitoring of cerebral vasospasm in mice are lacking. Here, we demonstrate the application of high frequency ultrasound to perform transcranial Duplex sonography examinations on mice. Using the method, the internal carotid arteries (ICA) could be identified. The blood flow velocities in the intracranial ICAs were accelerated significantly after induction of SAH, while blood flow velocities in the extracranial ICAs remained low, indicating cerebral vasospasm. In conclusion, the method demonstrated here allows functional, noninvasive in vivo monitoring of cerebral vasospasm in a murine SAH model.

The aim of this manuscript is to present a sonography-based method that allows in vivo imaging of blood flow in cerebral arteries in mice. We demonstrate its application to determine changes in blood flow velocities associated with vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage (SAH).

Yüksek Frekanslı Transkraniyal Dubleks Ultrason ile Subaraknoid Kanamanın Murine Modelinde Serebral Vazospazm Analizi

Cerebral vasospasm that occurs in the weeks after subarachnoid hemorrhage, a type of hemorrhagic stroke, contributes to delayed cerebral ischemia. A ...

Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely afflicting a fairly young population. Several animal models of SAH have been developed to investigate the pathophysiological mechanisms behind SAH and to test pharmacological interventions. The pre-chiasmatic, single injection model in the rat presented in this article is an experimental model of SAH with a predetermined blood volume. Briefly, the animal is anesthetized, intubated, and kept under mechanical ventilation. Temperature is regulated with a heating pad. A catheter is placed in the tail artery, enabling continuous blood pressure measurement as well as blood sampling. The atlantooccipital membrane is incised and a catheter for pressure recording is placed in the cisterna magna to enable intracerebral pressure measurement. This catheter can also be used for intrathecal therapeutic interventions. The rat is placed in a stereotaxic frame, a burr hole is drilled anteriorly to the bregma, and a catheter is inserted through the burr hole and placed just anterior to the optic chiasm. Autologous blood (0.3 mL) is withdrawn from the tail catheter and manually injected. This results in a rise of intracerebral pressure and a decrease of cerebral blood flow. The animal is kept sedated for 30 min and given subcutaneous saline and analgesics. The animal is extubated and returned to its cage. The pre-chiasmatic model has a high reproducibility rate and limited variation between animals due to the pre-determined blood volume. It mimics SAH in humans making it a relevant model for SAH research.

Subarachnoid hemorrhage continues to carry a high burden of mortality and morbidity in man. To facilitate further research into the condition and its pathophysiology, a pre-chiasmatic, single injection model is presented.

Bir sıçan modelinde deneysel subaraknoid kanamayı indüklemek için kiazmatik öncesi, tek otolog kan enjeksiyonu

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely ...

Digital Droplet PCR Method for the Quantification of AAV Transduction Efficiency in Murine Retina

Many retinal cell biology laboratories now routinely use Adeno-associated viruses (AAVs) for gene editing and regulatory applications. The efficiency of AAV transduction is usually critical, which affects the overall experimental outcomes. One of the main determinants for transduction efficiency is the serotype or variant of the AAV vector. Currently, various artificial AAV serotypes and variants are available with different affinities to host cell surface receptors. For retinal gene therapy, this results in varying degrees of transduction efficiencies for different retinal cell types. In addition, the injection route and the quality of AAV production may also affect the retinal AAV transduction efficiencies. Therefore, it is essential to compare the efficiency of different variants, batches, and methodologies. The digital droplet PCR (dd-PCR) method quantifies the nucleic acids with high precision and allows performing absolute quantification of a given target without any standard or a reference. Using dd-PCR, it is also feasible to assess the transduction efficiencies of AAVs by absolute quantification of AAV genome copy numbers within an injected retina. Here, we provide a straightforward method to quantify the transduction rate of AAVs in retinal cells using dd-PCR. With minor modifications, this methodology can also be the basis for the copy number quantification of mitochondrial DNA as well as assessing the efficiency of base editing, critical for several retinal diseases and gene therapy applications.

This protocol presents how to quantify AAV transduction efficiency in mouse retina using digital droplet PCR (dd-PCR) together with small scale AAV production, intravitreal injection, retinal imaging, and retinal genomic DNA isolation.

Murine Retina'da AAV Transdüksiyon Verimliliğinin Nicelleştirilmesi için Dijital Damlacık PCR Yöntemi

Many retinal cell biology laboratories now routinely use Adeno-associated viruses (AAVs) for gene editing and regulatory applications. The efficiency of ...

Endovascular Perforation Model for Subarachnoid Hemorrhage Combined with Magnetic Resonance Imaging (MRI)

The endovascular filament perforation model to mimic subarachnoid hemorrhage (SAH) is a commonly used model - however, the technique can cause a high mortality rate as well as an uncontrollable volume of SAH and other intracranial complications such as stroke or intracranial hemorrhage. In this protocol, a standardized SAH mouse model is presented, induced by endovascular filament perforation, combined with magnetic resonance imaging (MRI) 24 h after operation to ensure the correct bleeding site and exclude other relevant intracranial pathologies. Briefly, C57BL/6J mice are anesthetized with an intraperitoneal ketamine/xylazine (70 mg/16 mg/kg body weight) injection and placed in a supine position. After midline neck incision, the common carotid artery (CCA) and carotid bifurcation are exposed, and a 5-0 non-absorbable monofilament polypropylene suture is inserted in a retrograde fashion into the external carotid artery (ECA) and advanced into the common carotid artery. Then, the filament is invaginated into the internal carotid artery (ICA) and pushed forward to perforate the anterior cerebral artery (ACA). After recovery from surgery, mice undergo a 7.0 T MRI 24 h later. The volume of bleeding can be quantified and graded via postoperative MRI, enabling a robust experimental SAH group with the option to perform further subgroup analyses based on blood quantity.

Endovascular Perforation Model for Subarachnoid Hemorrhage Combined with Magnetic Resonance Imaging MRI

Here we present a standardized SAH mouse model, induced by endovascular filament perforation, combined with magnetic resonance imaging (MRI) 24 h after operation to ensure the correct bleeding site and exclude other relevant intracranial pathologies.

Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRG) ile Kombine Subaraknoid Kanama için Endovasküler Perforasyon Modeli

The endovascular filament perforation model to mimic subarachnoid hemorrhage (SAH) is a commonly used model - however, the technique can cause a high ...