Campylobacter kültürünün zorluğu, hastalık üretmek için ne kadar az bakteriye ihtiyaç duyulduğu gibi temel çalışmaları engellemiştir. Burada kullanılan bu birleştirilmiş analitik ve contrived örnekleri bu sorunu giderebilir. Bu teknik, klinik ilgili hasta semptomlarının pozitif dışkı kültürü sonucu ve ilk kez gerçek sayıda bakteri ile ilişkili olmasını sağlar.
Kaç bakteri hastalık ile ilişkili öğrenme tanı, algılama için önemli bir hedef ve suşları veya Campylobacter türleri arasında virülans karşılaştırmak için sağlam bir yöntem sağlayacaktır. Campylobacter kültür basit ama kantitatif canlılık korumak için hızlı ve organize hazırlık gerektirir. Bir tabakta rakip dışkı florası arasında Campylobacter kolonileri tanımlamak için önemli bir yargı da gereklidir.
C.jejuni veya C.coli kültürüne başlamadan önce eldiven, laboratuvar önlüğü ve güvenlik gözlüğü takın ve dezenfekte edilmiş laminar akış güvenlik başlığının içine tek kullanımlık koruyucu bir levha yerleştirin. Steril tekniği kullanarak bir Campylobacter özel agar plaka üzerine her sulu veya çözülmüş bakteri stok çizgi ve bir mikroaerobik atmosfer gazı üreten poşet içeren bir anaerobik kavanozda 48 saat boyunca 37 derece santigrat plaka yerleştirin. 24 saat sonra, gevşek BHI suyu bir şişe kapağı ve 37 derece Santigrat bir gecede kuluçka için bir mikroaerobik ortam üretecek bir poşet ile yeni bir anaerobik kavanoziçine şişe yerleştirin.
Ertesi sabah campylobacter kültürünün başlangıç plaka kazımak için önceden azaltılmış suyu ve aşılama döngü üç mililitre kullanın. Bulamacı steril bir boruya aktarın ve kalan 97 mililitrelik azaltılmış suyu üç mililitre kazınmış bulamaç ile inoküle edin. Gaz poşeti ile kavanoza et suyu yerleştirin ve kültür 4daha fazla 600 nanometre bir optik yoğunluğu ulaşana kadar, 48 ila 72 saat boyunca sallayarak bir kuluçka üzerinde dakikada 37 derece santigrat ve 115 devrimler kültür kuluçka.
Bu saf stok kültüründe bakteri sayısını belirlemek için seyreltme 900 mikrolitre 100 mikrolitre suyu sekiz 10 kat seyreltme serisi gerçekleştirin. Steril kaplama boncuklar kullanarak, 10 kez 10 negatif beşinci 10 için negatif yedinci seyreltme ler için yinelenen önceden azaltılmış Campylobacter özel plakalar ve seyreltme konsantrasyonu ile etiket plakaları plakaları ikinci bir anaerobik kavanoza yerleştirmeden önce bir gaz üreten poşet ile 48 ila 72 saat için 37 derece santigrat. Büyüme döneminin sonunda saymak için 30 ila 300 kolonisi olan plakaları seçin.
Saydıktan sonra formüle göre stok suyu kültürünün mililitre başına koloni oluşturan birimleri belirlemek için sayıları kullanın. Bu çivili dışkı havuzu kullanarak tüm adımları destekleyen gibi analitik koloni sayıları doğru olması önemlidir. Gösterildiği gibi sayma için kaplama hemen sonra, et suyu ve Campylobacter negatif dışkı havuzu eşit hacimlerde karıştırın ve negatif dışkı havuzunda dokuz sonraki iki kat seyreltme yapmak, olmayan Campylobacter kolonileri belirlemeye yardımcı olmak için dışkı havuzuna hiçbir Campylobacter içeren et suyu içeren bir kontrol plakası ekleyerek.
Her Campylobacter dışkı seyreltme 10 mikrolitre çoğaltılabilir önceden azaltılmış Campylobacter özel agar plakaları ve yaklaşık 48 saat boyunca 37 santigrat derece bir gaz üreten poşet ile anaerobik kavanozda plakalar inkübün. Kuluçka sonunda, saf Campylobacter kültürlerinden gelenkolonilere benzeyen kolonilerin çizgili plakalarını görsel olarak inceleyin. Koloniler aslında Campylobacter gram boyama için koloniler gibi birden fazla Campylobacter seçin ve gram-negatif kavisli, spiral veya puro şeklinde küçük bakterileri tanımlamak için bir yağ daldırma lens kullanarak ışık mikroskobu ile ince çizgili bir alan görselleştirmek onaylamak için.
Campylobacter eklenmeden negatif bir kontrol plakası diğer dışkı florasını belirlemeye yardımcı olmak için önemlidir. Görsel bir Campylobacter benzeri gram-negatif koloni içeren son seyreltme kültür algılama sınırı düşünün. Ve formülü kullanarak, yapılan klinik dışkı örneğindeki pozitif seyreltmenin mililitrebaşına koloni oluşturan birimlerini hesaplayın.
Taşıma orta bir mililitre Campylobacter et suyu kültürünün bir mililitre negatif dışkı havuzu ile karıştırılmasında depolanan Campylobacter canlılığını belirlemek ve negatif dışkı havuzunda 10 adet iki katlı seri seyreltmeler hazırlamak. Cary-Blair ortamında her seyreltme bir ila dört oranında seyreltin ve 96 saat boyunca 2-8 santigrat derece kapak tüpleri cary-Blair orta ve negatif kontrol saklayın. Zaman sıfır başlayarak ve bundan sonra her 24 saatte bir Campylobacter seçici agar plakaları üzerine her seyreltme 10 mikrolitre aliquots çizgi ve 48 saat boyunca 37 derece santigrat plakaları kuluçka.
Hasta örneklerinden doğru bakteri sayılarını oluşturmak için bağımsız bir yöntem bulunmadığından, tek bir saf bakteri stoku ile iki eşzamanlı ölçüm yapılabilir. Bir test, campylobacter kolonilerinin fekal matriksteki stok bakterilerin seri seyreltmelerinden ve klinik numunelerin simüle edilmesinden elde edilen görsel algılamaiçin kullanılır. Diğer test analitik olarak kullanılır, aynı bakteri stok kültüründe bulunan mililitre başına koloni oluşturan birimleri ölçmek için kullanılan spiking için kullanılır.
Başarı için önemli bir parametre, çivili dışkı kültürünün bu temsili plaka gösterildiği gibi, rakip dışkı florası arasında kesin büyüklüktekoloniler belirlenmesidir. Burada, yedi bağımsız deneyden elde edilen tipik veriler gözlemlenebilir. Sadece dışkı kültürleri içinde Campylobacter benzer koloniler tespit yeterli değildir.
Tüm koloniler gram lekesi veya daha gelişmiş yöntemlerle doğrulanmalıdır. Biz c.upsaliensis veya C.lari gibi nadir türleri tespit etmek için kültürden daha doğru bir enzim immünoassay kullanın, hangi agar içeren standart antibiyotik kötü büyümek. Bu teknik Campylobacter non-semptomatik taşıma ve yüksek bakteriyel yükler Campylobacter enfeksiyonun ciddi sonuçları için daha yüksek risk altında bir hasta koymak gibi şeyler çalışmak için gerekli bir temel oluşturur.
Genellikle bulaşıcı ve tehlikeli olabilecek bakterilerle çalışırken ve sağlıklı bağışçılardan toplandığında bile bilinmeyen patojenler içerebilen negatif dışkı havuzu ile her zaman PPE takın.
