Bu protokol mikrobiyal fermantasyon yoluyla cercosporinlerin biyosentezi için kullanılabilir, bu da yeşil ve hafif koşullarda azot içeren heterodöngüleri sentezlemek için kullanılabilir. Bu tekniğin bir avantajı mikrobiyal fermantasyon yöntemleri ve organik sentezlenmiş süreçler arasında bir köprü olarak kullanılabilir olmasıdır. Azot içeren heterocycles biyoaktivite ile birçok doğal ürün için sadece önemli bir iskelet, ama birçok tarımsal kimyasallar ve ilaçlar için sentetik öncüleri vardır.
Philippe Icyishaka ile prosedürü gösteren Yan Zhang, benim laboratuvar bir teknisyen olacaktır. Alfa-Halo-N-asil-hidrazon hazırlığı için, bir şişe içine keton 10 milimolar ve benzoil hidrazin 10 milimolar dışarı tartMak. Şişeye 20 mililitre metanol ekleyin ve şişeyi bir karıştırma çubuğu ve lastik durdurucu ile donatın.
Yavaşça karışıma 250 mikrolitre hidroklorik asit enjekte edin ve şişeyi oda sıcaklığında havada kuluçkaya yatırın. Bir saat sonra, filtrasyon tarafından reaksiyona sonra çökelti toplamak ve aseton ile ürün yıkayın. Sonra vakum ile çökelti kuru ve NMR tarafından ürün tanımlamak.
Cercosporin hazırlamak için, s-7 orta bir litre ile üç litrelik sallamak şişesi şarj, ve sallamak şişesi içine cercosporin üreten gerginlik aşılamak. Kültür iki hafta boyunca dakikada 135 devrimler ve 25 derece santigrat ışık koşullarında karışımı. Kuluçka sonunda, vakum filtrasyon için fermantasyon suyu tabi bir vakum pompası kullanın ve diklorometan üç 50 mililitrelik hacimleri ile ayrı ayrı pelet ve supernatant ayıklayın.
Bir dondurucu kurutucu kurutma için pelet toplamak ve organik aşamaları birleştirin. Organik fazları 2-3 kez suyla yıkayın ve çözeltiyi vakum altında yoğunlayın. Kalıntıyı analitik metanolle yeniden çözün ve ürünü 18 mikrometrelik organik mikrofiltrasyon zarından filtreleyin.
Daha sonra sephadex LH-20 kolon ile cercosporin arındırın ve standart protokollere göre HPLC ile ürün tanımlamak. Hazırlamak için 1, 2, 3-tiaydiazol, alfa-Halo-N-acyl-hidraz tüm hacmi ekleyin, cercosporin bir miligram, potasyum tert-butoksit 27 miligram, ve potasyum tiyosiyanat 39 miligram bir kauçuk stoper ve karıştırma çubuğu ile donatılmış 10 milimetrelik Schlenk tüp içine. Boruya iki mililitre kuru asetonit enjekte etmeden önce Schlenk tüpünü üç kez oksijenle temizle.
15 mililitre doymuş sodyum klorür çözeltisi ile dört kez yıkamadan önce tüpü 16 saat boyunca alttan beş watt, mavi LED'e tabi tonuyla tarayın. Son yıkamadan sonra, sulu fazı birleştirin ve sulu fazı dört adet 15 mililitrelik etil asetat hacmiyle yeniden ayıklayın. Organik faz birleştirin ve susuz sodyum sülfat ile kuru.
Bir vakum evaporatör ile çözücü çıkarın. Ürünü ince tabakakromatografi ile arındırmak için, silika plakaüzerine düz bir çizgi çizin ve çözünmüş ürünü çizgiye ekleyin. EA için 10-bir PE ile kromatografi silindirinde silika plaka koyun. Sonra, DCM silika eritin.
Filtrasyon ile üründen silika çıkarın ve bir döner evaporatör ile DCM kuru. Daha sonra bileşiği standart protokole göre NMR ile tanımlayın. Hazırlamak için 1, 4, 5, 6-tetrahidropyridazine, alfa-Halo-N-acyl-hydrazone tüm hacmi ekleyin, cercosporin 2.7 miligram, ve 195 sezyum karbonat miligram bir kauçuk stoper ve karıştırma çubuğu ile donatılmış 10 mililitrelik Schlenk tüp içine.
Schlenk tüpünü üç kez azotla temizleyin ve suya iki mililitre asetonite tüp enjekte edin. Schlenk tüpünü 16 saat boyunca alttan mavi LED'e ve ardından yıkama başına 15 mililitre doymuş sodyum klorür içeren dört yıkamaya tabi tutarak. Sulu fazı birleştirin ve sulu fazı dört adet 15 mililitrelik etil asetat hacmiyle yeniden ayıklayın.
Organik faz birleştirin ve susuz sodyum sülfat ile kuru. Bir vakum evaporatör ile çözücü çıkarın. Ürünü ince tabakakromatografi ile arındırmak için, silika plakaüzerine düz bir çizgi çizin ve çözünmüş ürünü çizgiye ekleyin.
EA için 10-bir PE ile kromatografi silindirinde silika plaka koyun. Sonra, DCM silika eritin. Filtrasyon ile üründen silika çıkarın ve bir döner evaporatör ile DCM kuru. Daha sonra bileşiği standart protokole göre NMR ile tanımlayın.
Bu temsili sonuçlar, 4-aryl-1, 2, 3-tiaydiazoller ve 1, 4, 5, 6-tetrahidroridazinlerin alfa-Halo-N-acyl-hidratonundan gelen cercosporin katalize fotokatalitik reaksiyonlar ile nasıl uygun bir şekilde sentezlenebileceğini göstermektedir. 4-aryl-1, 2, 3-tiaydiazol ler edinme prosedürü fenil halkasında hem elektron bağışlayan hem de elektron kabul eden grupları taşıyan substratlar için uygundur ve istenilen ürünleri orta ila iyi verim ile sağlar. Reaksiyonların iki farklı kategorisi için her zaman azot ve oksijen kullanmayı unutmayın.
