该协议可用于通过微生物发酵对脑孢菌素进行生物合成，进而可用于在绿色和温和条件下合成含氮异循环。该技术的优点是，它可以作为微生物发酵方法和有机合成过程之间的桥梁。含氮杂物不仅是许多具有生物活性的天然产品的重要骨架，而且是许多农用化学品和药物的合成前体。
与菲利普·伊西沙卡一起演示这个程序的将是我实验室的技术员张燕。对于α-Halo-N-acyl-hydrazone制备，将10毫升酮和10毫摩尔苯甲酸红重入烧瓶中。在烧瓶中加入20毫升甲醇，并给烧瓶配备搅拌棒和橡胶塞。
慢慢地将250微升盐酸注入混合物中，并在室温下在空气中孵育烧瓶。一小时后，通过过滤收集反应后沉淀物，用丙酮清洗产品。然后用真空干燥沉淀物，然后通过 NMR 识别产品。
要准备脑膜孢素，用一升S-7介质为三升摇瓶充电，然后将产生脑孢素的菌株接种到奶昔瓶中。在光条件下培养混合物，每分钟135圈，摄氏25度，为期两周。在孵化结束时，使用真空泵对发酵汤进行真空过滤，并分别用三个50毫升体积的二氯甲烷提取颗粒和上经剂。
收集颗粒在冷冻干燥器中干燥，并结合有机相。用水清洗有机相两到三次，将溶液浓缩在真空下。用分析性甲醇重新溶解残留物，并通过18微米的有机微滤膜过滤产品。
然后用赛法德克斯 LH-20 列净化塞高素，然后根据标准协议通过 HPLC 识别产品。要准备 1、2、3-硫二甲醇，请将 1 毫克的 cercosporin、27 毫克的 Tert-丁氧化钾和 39 毫克硫化钾加入装有橡胶塞和搅拌棒的 10 毫米施伦克管中的整体积。在将两毫升干乙酰酸盐注入管中之前，用氧气清除施伦克管三次。
将管子从底部放在一个5瓦的蓝色LED上16小时，然后用15毫升饱和氯化钠溶液洗涤4次。上次洗涤后，结合水相，用四个15毫升的乙酸乙酯体积重新提取水相。结合有机相，干燥与无水硫酸钠。
用真空蒸发器去除溶剂。要用薄层色谱净化产品，在硅板上画一条直线，然后将溶解的产品加入生产线。将硅板放入色谱缸中，10 到 1 PE 到 EA。之后，在DCM中溶解二氧化硅。
通过过滤从产品中去除二氧化硅，然后用旋转蒸发器干燥 DCM。然后根据标准协议通过NNR识别化合物。要准备 1、4、5、6-四氢二丁，请将 α-Halo-N-acyl-hydrazone 的整个体积、2.7毫克的 cercosporin 和 195 毫克碳酸氢元素加入装有橡胶塞和搅拌棒的 10 毫升施伦克管中。
用氮气清洗施伦克管三次，并在水中注入两毫升乙酰酸盐。将施伦克管从底部放在一个5瓦的蓝色LED管上16小时，然后进行4次清洗，每次洗涤15毫升饱和氯化钠。结合水相，用四个15毫升的乙酸乙酯体积重新提取水相。
结合有机相，干燥与无水硫酸钠。用真空蒸发器去除溶剂。要用薄层色谱净化产品，在硅板上画一条直线，然后将溶解的产品加入生产线。
将硅板放入色谱缸中，10 到 1 PE 到 EA。之后，在DCM中溶解二氧化硅。通过过滤从产品中去除二氧化硅，然后用旋转蒸发器干燥 DCM。然后根据标准协议通过NNR识别化合物。
这些代表性的结果表明，4-aryl-1、2、3-硫化物和1、4、5、6-四氢化物如何通过α-Halo-N-acyl-hydrazone的脑孔催化光催化反应方便地合成。4-aryl-1、2、3-硫自酮采集程序适用于苯基环中同时具有电子捐赠和电子接受群的基材，提供具有中到好产量所需的产品。始终记得使用氮气和氧气两种不同的反应。
