פרוטוקול זה יכול לשמש עבור biosynthesis של cercosporins באמצעות תסיסה מיקרוביאלית, אשר בתורו ניתן להשתמש כדי לסנתז הטרוצקלים המכילים חנקן בתנאים ירוקים ומתונים. היתרון של טכניקה זו הוא שניתן להשתמש בה כגשר בין שיטות התסיסה המיקרוביאליות לבין התהליכים הסינתזה האורגנית. הטרוציקלים המכילים חנקן הם לא רק שלד חשוב עבור מוצרים טבעיים רבים עם ביואקטיביות, אבל הם מבשרים סינתטיים עבור אגרוכימיקלים רבים וסמים.
הדגמת ההליך עם פיליפ Icyishaka יהיה יאן זאנג, טכנאי מהמעבדה שלי. להכנת אלפא-Halo-N-acyl-הידרזון, לשקול 10 מילימולר של קטון ו 10 מילימולר של בנזואיל הידראזין לתוך בקבוקון. מוסיפים 20 מיליליטר של מתנול לבקבוקון, וציידו את הבקבוק בבר ערבוב ופקקי גומי.
לאט להזריק 250 microliters של חומצה הידרוכלורית לתוך התערובת, ו דגירה הבקבוק באוויר בטמפרטורת החדר. לאחר שעה, לאסוף את המשקע לאחר התגובה על ידי סינון, ולשטוף את המוצר עם אצטון. לאחר מכן לייבש את המשקע על ידי ואקום, ולזהות את המוצר על ידי NMR.
להכנת סרקוספורין, יש לטעון בקבוק שייק באורך שלושה ליטרים בליטר אחד של S-7 בינוני, ולחסן את המתח המייצר סרקוספורין לתוך בקבוקון הרעידות. תרבות התערובת בתנאי אור ב 135 מהפכות לדקה ו 25 מעלות צלזיוס במשך שבועיים. בסוף הדגירה, השתמש במשאבת ואקום כדי לחשוף את מרק התסיסה לסינון ואקום, ולחלץ את גלולה ואת supernatant בנפרד עם שלושה 50 מיליליטר כרכים של דיכלורומתאן.
אוספים את גלולת הייבוש במייבש מקפיא, ומשלבים את השלבים האורגניים. לשטוף את השלבים האורגניים עם מים פעמיים עד שלוש פעמים, ולרכז את הפתרון תחת ואקום. להתיז מחדש את השאריות עם מתנול אנליטי, ולסנן את המוצר באמצעות קרום מיקרו-סינון אורגני 18 מיקרומטר.
לאחר מכן לטהר את cercosporin עם עמודה Sephadex LH-20, ולזהות את המוצר על ידי HPLC על פי פרוטוקולים סטנדרטיים. כדי להכין 1, 2, 3-thiadiazole, להוסיף את כל הנפח של אלפא-Halo-N-acyl-hydrazone, מיליגרם אחד של cercosporin, 27 מיליגרם של אשלגן tert-butoxide, ו 39 מיליגרם של תיוצ'יאנט אשלגן לתוך צינור שלנק 10 מילימטר מצויד פקק גומי לטהר את הצינור Schlenk עם חמצן שלוש פעמים לפני הזרקת שני מיליליטר של אצטוניטריל יבש לתוך הצינור.
חשוף את הצינור לחמישה ואט, LED כחול מלמטה במשך 16 שעות לפני שטיפה ארבע פעמים עם 15 מיליליטר של פתרון נתרן כלורי רווי. לאחר הכביסה האחרונה, לשלב את השלב הממיקי, ולחלץ מחדש את השלב הממיקי עם ארבעה 15 מיליליטר כרכים של אתיל אצטט. מערבבים את השלב האורגני, ויבשים עם נתרן גופרתי נטול מים.
הסר את הממס עם אידוי ואקום. כדי לטהר את המוצר עם כרומטוגרפיה בשכבה דקה, לצייר קו ישר על צלחת סיליקה, ולהוסיף את המוצר מומס לקו. שים את צלחת הסיליקה בצילינדר הכרומטוגרפיה עם 10 עד 1 PE ל- EA. לאחר מכן, להמיס את סיליקה ב DCM.
מוציאים את הסיליקה מהמוצר בסינון, ומייבשים את ה-DCM עם אידוי סיבובי. לאחר מכן לזהות את המתחם על ידי NMR על פי פרוטוקול סטנדרטי. כדי להכין 1, 4, 5, 6-tetrahydropyridazine, להוסיף את כל הנפח של אלפא-Halo-N-acyl-hydrazone, 2.7 מיליגרם של סרקוספורין, ו 195 מיליגרם של צסיום קרבונט לתוך צינור שלנק 10 מיליליטר מצויד פקק גומי ו bar stirring.
לטהר את צינור שלנק שלוש פעמים עם חנקן, ולהזריק שני מיליליטר של אצטוניטריל במים לתוך הצינור. נושא צינור שלנק לחמישה ואט, LED כחול מלמטה במשך 16 שעות ואחריו ארבע שטיפות עם 15 מיליליטר של נתרן כלורי רווי לכל לשטוף. שלבו את השלב הממימי, וחלץ מחדש את השלב הממימי עם ארבעה כרכים של 15 מיליליטר של אתיל אצטט.
מערבבים את השלב האורגני, ויבשים עם נתרן גופרתי נטול מים. הסר את הממס עם אידוי ואקום. כדי לטהר את המוצר עם כרומטוגרפיה בשכבה דקה, לצייר קו ישר על צלחת סיליקה, ולהוסיף את המוצר מומס לקו.
שים את צלחת הסיליקה בצילינדר הכרומטוגרפיה עם 10 עד 1 PE ל- EA. לאחר מכן, להמיס את סיליקה ב DCM. מוציאים את הסיליקה מהמוצר עם סינון, ומייבשים את ה- DCM עם אידוי סיבובי. לאחר מכן לזהות את המתחם על ידי NMR על פי פרוטוקול סטנדרטי.
תוצאות ייצוגיות אלה מדגימות כיצד 4-aryl-1, 2, 3-thiadiazoles ו 1, 4, 5, 6-tetrahydropyridazines יכול להיות מסונתז בנוחות על ידי תגובות פוטוקטליטיות cercosporin-קטליזציה מאלפא-Halo-N-acyl-hydrazone. הליך הרכישה 4-aryl-1, 2, 3-thiadiazoles מתאים מצעים הנושאים הן קבוצות תרומות אלקטרונים ואלקטרון מקבל בטבעת פניל, מתן המוצרים הרצויים עם תשואות בינוניות עד טובות. זכור תמיד להשתמש בחנקן וחמצן עבור שתי קטגוריות שונות של התגובות.
