Parkinson hastalığının 6-hidroksidopamin sıçan modelinde L-DOPA ile indüklenen diskinezilerin derecelendirilmesi, etkili antidiskinetik müdahaleleri tanımlamak için önemli bir klinik öncesi araçtır. Bu model nispeten basittir, düşük maliyet sunar ve klinikte olanlarla benzerlikler gösterir. Prosedür, laboratuvarda doktora öğrencisi olan Danilo Leandro Ribeiro tarafından gösterilecek.
Deneye 200 ila 250 gram ağırlığındaki Sprague-Dawley erkek sıçanlarıyla başlayın. Standart laboratuvar koşullarında kafes başına iki ila üç hayvanı, yiyecek ve su mevcut ad libitum ile barındırın. Ameliyattan önce, norepinefrin taşıyıcı inhibitörü imipramin'i intraperitoneal olarak sıçana uygulayın.
Anesteziyi ayak parmağı sıkışmasına yanıt vermeyerek doğruladıktan sonra, sıçanı ısıtma yastığının üstündeki stereotaksik aparattaki eğilimli bir pozisyonda konumlandırın. Sıçan konumlandırıldıktan sonra, mikroenjeksiyonun gerçekleşeceği bölgede bir santimetre uzunluğunda bir kesi yapmak için bir neşter kullanın. Ardından, kafatası bölgesini pamuklu çubuklarla temizleyin ve bregma ve lambda'nın açığa çıktığından emin olun.
Medial ön beyin demetini veya MFB'yi, stereotaksik koordinatları bregma'dan 4.3 milimetre önde, 1.6 milimetre yanal olarak sağ tarafa ve durometreden 8.3 milimetre ventralde alın. Koordinatlara karar verildiğinde, 6-hidroksidopamin veya 6-OHDA'yı, 50 mikrolitrelik bir Hamilton cam şırıngası ile sağ MFB'de dakikada 0.4 mikrolitre oranında tek taraflı olarak uygulayın. Ameliyatın sonunda, kafa derisi insizyonunu dikin ve hayvanı kilogram başına 10 mililitre dozunda, deri altından sıcak, steril,% 0.9 tuzlu su çözeltisi ile yeniden sulandırın.
Hayvanı stereotaksik çerçeveden çıkarın ve bilinç yeniden kazanılana kadar izlerken sıcak bir kurtarma kafesine yerleştirin. Lezyondan sonraki dört haftada, lezyonun terlateral ön ayağının akinezisini değerlendirerek, bir basamak testi kullanarak dopaminerjik lezyonun etkinliğini ölçün. Kontralateral ön ayakla üç veya daha az ayarlama adımı sunan sıçanlar, varsayımsal, ciddi 6-OHDA lezyonlu sıçanlar olarak çalışmaya dahil edilmelidir.
6-OHDA lezyonlarından dört hafta sonra, Pazartesi günü kronik tedaviye başlayın ve Çarşamba günü anormal istemsiz hareketler kaydedin. Bunu yapmak için, sıçanı 20 santimetre çapında ve 40 santimetre yüksekliğinde şeffaf bir silindirin içine yerleştirin ve en az 15 dakika boyunca iklimlendirmesine izin verin. Zeminin yatak malzemesiyle kaplandığından ve hayvanı mümkün olan tüm açılardan gözlemlemek için aynaların silindirin arkasına yerleştirildiğinden emin olun.
Eksenel, uzuv ve orolingual anormal istemsiz hareketlerin görüntülenmesini sağlamak için yüksek çözünürlüklü bir video kamera konumlandırın. Silindirin arkasındaki aynalar, anormal istemsiz hareketlerin 360 derecelik bir açıyla izlenmesini sağlar. Kamera, orolingual anormal istemsiz hareketleri gözlemlemek için uçaktan 15 derecelik bir açıyla uçağın biraz altına yerleştirilebilir.
Konuma karar verildiğinde, kamerayı doğrudan tezgaha sabitleyin. Hayvan 15 dakika boyunca iklimlendirildikten sonra, hayvanı silindirden çıkarın ve kilogram başına beş miligram taze hazırlanmış L-dopamin veya L-DOPA'yı, deri altından kilogram başına 12.5 miligram ile birlikte uygulayın. Hayvanı tekrar silindire koyun ve anormal istemsiz hareketleri izlemek için bir zamanlayıcı başlatın.
Çevrimdışı puanlama yapmak için enjeksiyondan sonra 180 dakika boyunca anormal istemsiz hareketleri 30 dakikalık aralıklarla kaydetmek için bir video kamera kullanın. Altı gözlem periyodundan sonra, puanlar bir ila iki dakikalık dönemler boyunca verilmeli ve eksenel, uzuv veya orolingual olarak sınıflandırılmalıdır. Normal davranışları dahil etmediğinizden emin olun.
L-DOPA ve benserazid ile tedavi, pazartesiden cumaya günde bir kez, üç hafta boyunca devam ettirilmelidir. Temsili zaman kursu analizinde, üç haftalık kronik L-DOPA uygulaması boyunca eksenel, uzuv ve orolingual anormal istemsiz hareketlere uygulanan puanlar gösterilmiştir. L-DOPA ile indüklenen, pik doz diskinezilerin 30 ila 90 dakika arasında meydana geldiği ve enjeksiyondan 120 dakika sonra kademeli bir azalma olduğu belirtildi.
Ek olarak, aksiyel, uzuv ve orolingual anormal istemsiz hareketlerin toplamı, bireylerde, skorlama günlerinde ve haftada üç hafta boyunca kronik L-DOPA uygulaması sunuldu. Anormal istemsiz hareketler protokolü genellikle antidiskinetik translasyonel potansiyele sahip yeni terapötik araçların araştırılması içindir.
