Bu protokol, temporal kemik işleme süresini 9 ila 10 aydan 10 ila 14 güne düşürür. Bu tekniğin temel avantajı, bizim durumumuzda COVID-19 ile ilişkili orta kulak patolojisinin değerlendirilmesi ile ilgili olan otopatolojinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesine izin vermesidir. Bu teknik, temporal kemiğin zamana duyarlı çalışmaları için özellikle yararlı olabilir.
Gelecekte, iç kulak patolojisini incelemek için kullanım için daha da optimize edilebilir. Otopsi sırasında hasada başlayın ve kraniyal sinirleri keskin bir şekilde iç işitsel kanala bölün. Osteotom ile ilk kemik insizyonunu temporal kemiğin skuamöz kısmına paralel ve sadece medial yapın.
Ardından, temporal kemiğin medial sınırında birincisine paralel olarak ikinci kemik kesisini gerçekleştirin. Üçüncü kesiyi üç ila dört santimetre ön tarafta ve petroz sırtına paralel olarak yapın. Daha sonra, dördüncü insizyonu petrous sırtının iki santimetre gerisinde kabaca üçüncüye paralel yapın.
Numunenin alt kenarı boyunca tutturulmuş yumuşak dokuyu serbest bırakmak ve temporal kemiği çıkarmak için keskin diseksiyon kullanın. Hasattan sonra, dokuyu hemen 200 ila 300 mililitre% 10 tamponlu formalin içine batırın. Ardından, ikiz elmas bıçaklı hassas bir mikro testereyi beş milimetrelik bir mesafeye ayarlayın.
Hızlı doku dekalsifikasyonu için, her bir numuneyi temporal kemiğin orta kısmı beş milimetre kalınlığında ve her iki uçtakiler üç ila beş milimetre kalınlığında olacak şekilde üç bölüme ayırın. Bölümleri yumuşatma için oda sıcaklığında yedi ila 10 gün boyunca 200 ila 300 mililitre 0.37 molar EDTA'ya yerleştirin. Orta kulak mukozası ve östaki tüpünün hematoksilin ve eozin boyaması, bu protokol kullanılarak işlendikten sonra dokunun korunduğunu göstermiştir.
İmmünohistokimyasal analizler, bu dokularda ACE2, transmembran proteaz serin ve furin proteinlerinin varlığını gösterdi ve orta kulağın solunum epitelinde SARS-CoV2 enfeksiyonu için olası bir kök sağladı. Temporal kemik dokusunun elmas testere içinde uygun şekilde konumlandırılması önemlidir. Bu yöntemle birleştirilebilecek alternatif teknikler arasında farklı proteinler için immünohistokimya, farklı doku lekeleri ve transkriptomikler bulunur.
Bu teknik, COVID-19 pandemisi sırasında orta kulakta SARS-CoV2 enfeksiyonunda rol oynayan proteinlerin varlığını hızlı bir şekilde değerlendirmemizi sağladı.
