Détection de bactériophages dans des échantillons environnementaux
Source : Laboratoires du Dr Ian poivre et Dr Charles Gerba - Université de l’Arizona
Démonstration d’auteur : Alex Wassimi
Les virus sont un groupe unique d’entités biologiques qui infectent les organismes tant procaryotes et eucaryotes. Ils sont des parasites qui n’ont aucune capacité métabolique et afin de reproduire, s’appuient sur le métabolisme de l’hôte pour produire des pièces virales qui s’assemblent à l’intérieur des cellules de l’hôte.
Les virus sont ultramicroscopiques — trop petit pour être vu au microscope photonique, visible seulement avec la plus grande résolution du microscope électronique. Une particule virale se compose d’un génome d’acide nucléique, ADN ou ARN, entouré d’un manteau de protéine, appelé une capside, composée de sous-unités protéiques ou capsomères. Dans certains virus plus complexes, la capside est entourée d’une enveloppe lipidique supplémentaires, et certains ont des appendices surfaces spike ou queues.
Les virus qui infectent le tractus intestinal des animaux et les humains sont connus comme des virus entériques. Ils sont excrétés dans les selles et peuvent être isolés des eaux usées domestiques. Les virus qui infectent les bactéries sont appelés bactériophages, et ceux qui infectent les bactéries coliformes sont appelés les coliphages (Figure 1). Les phages de bactéries coliformes sont trouvent n’importe où sont trouvent les bactéries coliformes.
La figure 1. Coliphages T2.
- Obtenir un échantillon d’eaux usées ou de l’eau contenant les coliphages.
- Diluer l’échantillon 01:10 et 1/100 à l’aide d’un tampon Tris. Ce faire transférer 1,0 mL de la culture dans 9 mL de tampon Tris et puis faire une deuxième facteur 10 dilution.
- Faire fondre les trois tubes de gélose molle (0,7 % Gélose nutritive ou gélose trypticase-soja par tube de 3 mL) en les plaçant dans un bain de vapeur ou autoclave.
- Placer l’agar dans un bain d’eau à 45-48 ° C pendant 15 minutes pour...
Dilution de l’échantillon d’eaux usées = 10-1
Nombre de plaques obtenues = 9
Par conséquent, phage concentration en échantillon d’eaux usées
= 10 x 9 ÷ 1 mL
= 90 unités formatrices / mL
Eaux d’égout brute contient généralement 103 – 104 coliphage / mL, avec une gamme de 102 – 108 / mL.
Il y a beaucoup d’applications potentielles de coliphages comme indicateurs de l’environnement. Ceux-ci incluent leur utilisation comme indicateurs de contamination des eaux usées, l’efficacité de l’eau et de traitement des eaux usées et la survie des virus entériques et des bactéries dans l’environnement. L’utilisation des bactériophages comme indicateurs de la présence et le comportement de bactéries entériques et virus animaux a toujours été attrayante en raison de la facilité de détection et ...
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