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Rilevamento di batteriofagi in campioni di matrici ambientali

Overview

Fonte: Laboratori del Dr. Ian Pepper e del Dr. Charles Gerba - Università dell'Arizona
Autore dimostrativo: Alex Wassimi

I virus sono un gruppo unico di entità biologiche che infettano sia gli organismi eucariotici che procariotici. Sono parassiti obbligati che non hanno capacità metabolica e, per replicarsi, si basano sul metabolismo dell'ospite per produrre parti virali che si auto-assemblano all'interno delle cellule ospiti.

I virus sono ultramicroscopici, troppo piccoli per essere visti con il microscopio ottico, visibili solo con la maggiore risoluzione del microscopio elettronico. Una particella virale è costituita da un genoma di acido nucleico, DNA o RNA, circondato da un rivestimento proteico, noto come capside, composto da subunità proteiche o capsomeri. In alcuni virus più complessi, il capside è circondato da un involucro lipidico aggiuntivo e alcuni hanno appendici superficiali o code simili a punte.

I virus che infettano il tratto intestinale di esseri umani e animali sono noti come virus enterici. Sono escreti nelle feci e possono essere isolati dalle acque reflue domestiche. I virus che infettano i batteri sono noti come batteriofagi e quelli che infettano i batteri coliformi sono chiamati colifagi (Figura 1). I fagi dei batteri coliformi si trovano ovunque si trovino i batteri coliformi.

Figure 1
Figura 1. Colifago T2.

Procedure
  1. Ottenere un campione di acque reflue o acqua contenente colifagi.
  2. Diluire il campione 1:10 e 1:100 utilizzando il buffer Tris. Fallo trasferendo 1,0 ml di coltura a 9 ml di tampone Tris e quindi effettuando una seconda diluizione di 10 volte.
  3. Sciogliere tre tubi di agar morbido (0,7% di agar nutriente o agar di soia triptasi per tubo da 3 ml) mettendoli in un bagno di vapore o in autoclave.
  4. Mettere l'agar a bagnomaria a 45-48 °C per 15 minuti per consentire alla temperatura dell'agar di adattarsi a 45 °C...

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Results

Diluizione del campione di acque reflue = 10-1

Numero di placche ottenute = 9

Pertanto, concentrazione di fagi nel campione di acque reflue
= 10 x 9 ÷ 1 ml
= 90 unità formanti placche / mL

Le acque reflue grezze contengono in genere10 310 4 colifagi per ml, con un intervallo di 102 – 108 per ml.

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Application and Summary

Ci sono molte potenziali applicazioni dei colifagi come indicatori ambientali. Questi includono il loro uso come indicatori di contaminazione delle acque reflue, l'efficienza del trattamento delle acque e delle acque reflue e la sopravvivenza di virus e batteri enterici nell'ambiente. L'uso di batteriofagi come indicatori della presenza e del comportamento di batteri enterici e virus animali è sempre stato attraente a causa della facilità di rilevamento e del basso costo associato ai saggi fagici. Inoltre, possono esse..

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DetectionBacteriophagesEnvironmental SamplesVirusesDiseasesColdFluHepatitisHIVDNARNA GenomeProtein CoatCapsidLipid EnvelopeMetabolic AbilityReproductive AbilityInvade Living CellsHijack Cellular MachineryProkaryotic CellsEukaryotic CellsBacteriaHumansSpecific Classes Of VirusesBacteriophagesColiphagesE ColiFood PoisoningFecal ContaminationWater SupplyPathogenic In HumansSurrogate IndicatorsEnterovirusesFecally transmitted DiseasesAssay MethodsPhage EnumerationPlaque Assay

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Overview

1:52

Principles of Phage Enumeration

4:03

Performing a Phage Plaque Assay with Environmental Samples

6:09

Representative Results

6:37

Applications

8:44

Summary

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