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Extraktion von DNA aus Bakterienkolonien

Overview

Quelle: Labors von Dr. Ian Pfeffer und Dr. Charles Gerba - Arizona University
Demonstrierende Autor: Luisa Ikner

Traditionellen Analysemethoden für mikrobielle Gemeinschaften in Böden sind in der Regel entweder kulturelle Assays Verwendung von Verdünnung und Plattieren Methodik auf selektive und differenzierte Medien oder direkte Graf Assays miteinbezogen. Direkte zählt bieten Informationen über die Gesamtzahl der Bakterien vorhanden, aber geben keine Auskunft über die Anzahl oder die Vielfalt der Bevölkerung innerhalb der Gemeinschaft. Platte Grafen Aufzählung aller kulturellen oder ausgewählten kulturellen Populationen zu ermöglichen und somit geben Auskunft über die verschiedenen Populationen vorhanden. Da weniger als 1 % der Bodenbakterien leicht kultivierbare sind, bietet kulturelle Informationen jedoch nur ein Teil des Bildes. Der tatsächliche Anteil der Gemeinschaft, die kultiviert werden kann hängt von der gewählten Mittel für kulturelle zählt. Jedes einzelnes Medium wählt für die Bevölkerung, die für diesen bestimmten Medium am besten geeignet sind.

In den letzten Jahren haben die Vorteile eines Studiums Gemeinschaft aus Bodenproben extrahierte DNA sichtbar. Dieser Nonculture Ansatz wird gedacht, um mehr repräsentativ für die tatsächliche Gemeinschaft anwesend als kulturbasierte Ansätze. Neben der Bereitstellung von Informationen über die Arten der Bevölkerung vorhanden, kann dieser Ansatz auch über ihr genetisches Potenzial informieren. Wie bei jeder Technik gibt es Beschränkungen in Bezug auf die Daten, die mit DNA-Extraktion gewonnen werden können. Daher verwenden viele Forscher jetzt DNA-Extraktion in Verbindung mit direkten und kulturelle zählt um zu die Daten aus einer ökologischen Probe zu maximieren.

Procedure

(1) Bakteriengemeinschaft DNA-Extraktion

  1. Um den Vorgang zu starten, 100 g gesiebten Bodens abwiegen. Fügen Sie diese in einen Behälter aus Polypropylen, und fügen Sie 100 mL Extraktionspuffer bestehend aus Tris-Puffer mit EDTA zu fördern die Freisetzung von Bakterien aus der Bodenmatrix, dann schütteln von hand geändert.
  2. Als nächstes wiegen Sie 100 g von Glasperlen, und fügen Sie diese in den Mischbehälter gefüllt. Agitieren Sie die Probe für 5 min mit eine Perle schlagen Gerät oder Hand...

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Application and Summary

Gemeinschaft DNA von den Kolonien kultiviert oder entzogene Boden Bioinformatik und "Omic" Ansätze, mit denen für die Charakterisierung der ursprünglichen Bakterien in der Probe unterzogen werden kann. Die Omic Ansätze beinhalten Metagenomik – Bestimmung der "who" innerhalb der Gemeinschaft über 16 s rRNA Sequenzierung ist. Dies gibt eine Schätzung der Vielfalt innerhalb der Gemeinschaft.

Die Anzahl der Bakterienzellen in der ursprünglichen Bodenprobe kann auch berechnet werden. Gemei...

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Tags
Bacterial Community DNA ExtractionMicrobial CommunitiesSoil BacteriaNon culture Based ApproachDNA Quality And QuantityBacterial DiversityFractionation MethodBlendingCentrifugationLysozymes

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Principles of Bacterial Community DNA Extraction

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Bacterial Community DNA Extraction

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Applications

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