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Extracción de ADN de la comunidad de colonias bacterianas

Overview

Fuente: Laboratorios del Dr. Ian Pepper y el Dr. Charles Gerba - Universidad de Arizona
Demostrando autor: Luisa Ikner

Métodos tradicionales de análisis de comunidades microbianas en suelos generalmente han implicado o ensayos culturales utilizando la dilución y metodología en medios selectivos y diferenciales o ensayos de recuento directo de la galjanoplastia. Conteo directo ofrece información sobre el número total de bacterias presentes, pero ninguna información sobre el número o la diversidad de las poblaciones presentes en la comunidad. Cuenta de placa permite enumeración total cultural o las poblaciones culturales y por lo tanto, proporciona información sobre las diferentes poblaciones presentes. Sin embargo, dado que menos del 1% de bacterias del suelo son fácilmente cultivable, información cultural ofrece sólo un pedazo de la imagen. La fracción real de la comunidad que puede ser cultivada depende el medio elegido para cuentas culturales. Selecciona cualquier medio solo para las poblaciones que mejor se adapten a ese medio particular.

En los últimos años han puesto de manifiesto las ventajas de estudiar la comunidad ADN extraído de muestras de suelo. Este enfoque basado en el nonculture se piensa para ser más representativo de la comunidad real presente que los enfoques basados en la cultura. Además de proporcionar información sobre los tipos de poblaciones presentes, este enfoque también puede proporcionar información acerca de su potencial genético. Como con cualquier técnica, existen limitaciones a los datos que pueden obtenerse con la extracción de ADN. Por lo tanto, muchos investigadores ahora utilizan la extracción de ADN junto con cuenta directa y cultural para aprovechar al máximo los datos obtenidos de una muestra ambiental.

Procedure

1. bacteriana comunitaria la extracción de ADN

  1. Para comenzar el procedimiento, pesar 100 g de suelo tamizado. Agregue esto a un recipiente de polipropileno y añadir 100 mL de tampón de extracción compuesta por Tris buffer modificado con EDTA para promover la liberación de bacterias de la matriz del suelo, luego agitar a mano.
  2. A continuación, pesar 100 g de perlas de vidrio y agregar al recipiente de mezcla. Agitar la muestra durante 5 min mediante una tira a dispositivo o agitador de muñeca-a...

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Application and Summary

Comunidad ADN de cultivo colonias o extraídos de suelo puede ser sometido a enfoques de la Bioinformática y la "omic" que permiten la caracterización de la bacteria original dentro de la muestra. Los omic los acercamientos incluyen metagenómica – determinación de "que" está dentro de la comunidad a través de rRNA 16S que ordena. Esto da una estimación de la diversidad dentro de la comunidad.

También se puede calcular el número de células bacterianas en la muestra de suelo original...

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Tags
Bacterial Community DNA ExtractionMicrobial CommunitiesSoil BacteriaNon culture Based ApproachDNA Quality And QuantityBacterial DiversityFractionation MethodBlendingCentrifugationLysozymes

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Principles of Bacterial Community DNA Extraction

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Bacterial Community DNA Extraction

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Applications

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