Name: in vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using ivis spectrum
Uploaded: 2009-04-29T00:00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum at JoVE.com

ويمكن استخدام مجموعة متنوعة من luciferase معربا عن خطوط الخلايا السرطانية للبحوث ما قبل السريرية في نماذج الماوس. وتقدم هذه الخلايا بوصفها ثقافة خالية من مسببات الأمراض المجمدة ، والتي سوف تنمو بسرعة في وسائل الاعلام القياسية مع عدم وجود حاجة لعلامات التحديد. لتجربتنا ، سنستخدم 4T1 - luc2 الفئران الخلايا السرطانية الثديية الخط ، الذي يعبر عن هذا الجين luciferase يخدم كمؤشر البصرية في التعبير الجيني أو tumorgenesis في الجسم الحي. سوف نستخدم التعبير luciferase لتتبع نمو الورم الرئيسي غير جراحية ، ولكن يمكن أيضا أن تستخدم لتحديد ورصد الآفات النقيلي. يجب التحقق من النشاط Luciferase قبل الحقن ، ومن أجل القيام بذلك ، يتم حصادها قارورة 90 ٪ متموجة والتي trypsinization ثم تحصى. ثم يتم الاستغناء عن 50000 الخلايا في بئر واحدة من لوحة microtiter والتخفيفات المتسلسلة يتم تنفيذها. يضاف إلى Luciferin آبار في 150ug لكل مل والمحتضنة لمدة 2 دقيقة. ولا يمكن تصوير وmicroplate في IVIS أو قارئ لوحة الانارة لتحديد مستويات التعبير. هذا الخط يعبر عن الخلية يصل إلى 6500 الفوتونات في كل خلية في الثانية الواحدة ، ولكن يمكن تصوير أي مستوى التعبير أعلاه 500 الفوتونات في كل خلية في الثانية بنجاح في الجسم الحي. الآن أن لدينا خلايا النشاط الأمثل ، ويمكن أن ننتقل الى الخطوة الحقن تحت الجلد. من أجل تسهيل الكشف الأمثل للورم ، ونحن باستخدام الماوس سلالة athymic المناعة عارية. قبل الحقن ، لتخدير الحيوانات هي أثر للتخدير عميق. يتم حقن القادم فإننا سوف تضخ ما يصل إلى 250،000 الخلايا في برنامج تلفزيوني 100ul تحت الجلد في الجناح. تحميل الخلايا في حقنة 1 مل ونعلق إبرة قياس 26. رفع الجلد بلطف مع ملقط لجعل &quot;خيمة&quot; وحقن الخلايا في القاعدة. ولا يمكن تصوير حقن الخلايا حديثا على الفور. في كل دورة التصوير يدار ثم مجموعه من 150mg Luciferin لكل كيلوغرام من وزن الجسم عن طريق حقنتين في التجويف البريتوني. في هذه الدراسة ، يتم تصوير الحيوانات بعد 10 دقائق من الحقن Luciferin لضمان تدفق ثابت الفوتون. سنوضح لك ذلك في الخطوة التالية. يمكن Luciferin حركية تختلف من يوم لآخر. في هذا نموذج معين ، وقياس 10 دقيقة بعد الحقن Luciferin أعطى نتيجة ضمن مجموعة من التقلبات 15 ٪. لدينا تجربة سنستخدم الطيف IVIS في نظام التصوير فيفو يستخدم الخلفية ضعيفة الجهاز المسؤول إلى جانب تبريدها إلى -90 درجة مئوية إلى تحقيق أقصى قدر من الحساسية. لدعم الكميات المطلقة ، ونظام الإجراءات تهمة الظلام أثناء وقت لأسفل ويدير الذاتي المعايرة أثناء التهيئة. لبدء التصوير ، وتهيئة نظام IVIS (نقرة واحدة) ، وتعيين المعلمات التصوير للتجربة. حدد مجال الرؤية بالنسبة لعدد الحيوانات التي يجري تصويرها. يمكن الحفاظ على ما يصل الى 5 في الحيوانات باستخدام أداة متعددة لا يتجزأ مخدر. المرحلة هو في 37 درجة مئوية ثابتة للحفاظ على درجة حرارة الجسم في الحيوانات. يتم توفير منفذ EKG لمراقبة صحة الحيوان خلال إجراءات مرهقة. يمكن العيش في برامج الصور ، وقت التعرض ، و توقف بكسل ويكون الأمثل binning استنادا إلى مستوى التعبير عن خط الخلية. ويمكن تغيير هذه الإعدادات في أي وقت خلال تجربة دون التأثير على نتيجة الكمية. IVIS يكتسب صورة فوتوغرافية للحيوان تحت الضوء الأبيض وإشارة أو الكمية bioluminescent فلوري ، وهو مضافين على الصورة. وأعرب عن إشارة bioluminescent الفوتونات في الثانية الواحدة وعرضها باعتبارها خريطة كثافة. يتم ضبط عرض الصور لتوفير النقيض الأمثل والقرار في الصورة دون التأثير على الكميات. ويمكن قياس التلألؤ من الخلايا في موقع الحقن باستخدام أداة المنطقة من الفائدة. يتم عرض بيانات القياس في الجدول جنبا إلى جنب مع كافة المعلمات التجريبية المتصلة التقاط الصور التي يمكن حفظها أو تصديرها للتحليل يمكن الحصول على صور متعددة ، ومقارنة في الدراسات الطولية التي تغطي ثانية أو شهور تبعا لطبيعة التجربة. سوف نقوم بقياس تدفق الفوتون من الورم عند مستوى الصفر مرة ومراقبة لمدة 4 أسابيع مع التصوير في فترات كل أسبوعين. تدفق الفوتون من الورم يتناسب مع عدد من الخلايا الحية لذلك معربا عن luciferase تلألؤ بيولوجي يرتبط مباشرة مع حجم الورم. في آخر أيام 5 زرع الورم ليس واضح حتى الآن ولكن يمكن أن يكون كميا الخلايا من خلال تلألؤ بيولوجي ويعتبر الورم أن بنشاط متزايد. في هذه المرحلة هو إشارة تلألؤ بيولوجي stronge بكثيرر. ويمكن تعديل وقت التعرض ، و توقف وbinning بكسل بحيث تكون الصورة واضحة والكاميرا لا تشبع لا. IVIS يعوض تلقائيا عن التغييرات في جمع ضوء ذلك يمكن مقارنة هذه القياسات لتلك التي جمعت في وقت سابق وبعد ذلك في التجربة. 7 أيام في الأورام وزرع آخر واضح للمرة الأولى وتلألؤ بيولوجي القياس قد ولدت بالفعل 7 أيام من البيانات. غرس في 28 يوما آخر ، والأورام أصبحت نخرية وتبدأ الخلايا في الموت. يقدر حجم الورم عن طريق قياس الفرجار لا يغير بشكل ملحوظ ، ولكن التألق من الورم سينخفض ​​مشيرا موت الخلية. لا يمكن أن تستمر القياسات الفرجار وقياس تلألؤ بيولوجي حتى يتم التوصل إلى نقطة النهاية إنسانية. وسترد نخر الورم بسبب نقص الأكسجين أو الأنظمة العلاج تلألؤ بيولوجي خفضت حتى لو كانت لا تقلل من كتلة الورم.

وأود أن أؤكد أنه تم إجراء جميع التجارب أجريت لإنتاج مجلة المادة التجارب متصور في الامتثال للبروتوكول الحيوانية التي وافق عليها 060 رعاية الحيوان واستخدام اللجنة المؤسسية (IACUC) في علوم الحياة الفرجار ، ألاميدا CA كيم جاي ، فتاه دال ، IACUC الرئيس ، الفرجار العلوم الحياتية.

in vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using ivis spectrum

ويمكن زرع الخلايا السرطانية الثديية 4T1 الماوس الفرعي cutaneously في نيو / نو الفئران لتشكيل الأورام واضح في 15 إلى 20 يوما. هذا النموذج هو نظام الورم طعم أجنبي قيمة لمرحلة ما قبل السريرية المجراة في تقييم المركبات انتيتومور المفترضة. وقد تم تصميم خط خلية 4T1 للتعبير عن constitutively الجين luciferase يراعة (luc2). عندما يتم حقن فئران تحمل 4T1 - luc2 الأورام مع Luciferin الأورام تبعث إشارة ضوئية البصرية التي يمكن رصدها باستخدام نظام التصوير الضوئي حساسة مثل الطيف IVIS. تدفق الفوتون من الورم يتناسب مع عدد الخلايا التي ينبعث منها ضوء ، ويمكن قياس الإشارات لمراقبة نمو الورم والتنمية. يتم معايرة IVIS لتمكين لا يمكن أن يؤديها الكميات المطلقة للإشارة bioluminescent والدراسات الطولية على مدى عدة أشهر وعلى مدى عدة أوامر من ضخامة إشارة دون المساس نتيجة الكمية. ويمكن رصد نمو الورم لعدة أيام قبل بواسطة تلألؤ بيولوجي يصبح حجم الورم واضح أو قياسها بواسطة الوسائل المادية التقليدية. يمكن لهذا الرصد السريع توفر نظرة متعمقة في الأحداث في وقت مبكر من تطوير ورم أو تؤدي إلى إجراءات أقصر التجريبية. يشار إلى موت الخلايا السرطانية ونخر بسبب نقص الأكسجين للعلاج أو دواء في وقت مبكر عن طريق تخفيض في إشارة bioluminescent. قد لا يكون هذا موت الخلايا يصاحبه انخفاض في حجم الورم مقاسا الوسائل المادية. القدرة على رؤية الأحداث في وقت مبكر من نخر الورم له تأثير كبير على اختيار وتطوير العوامل العلاجية. التصوير الكمي لنمو الورم باستخدام IVIS يوفر الكميات الدقيقة ويسرع عملية تجريبية لتوليد النتائج.

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum at JoVE.com

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

يتم زرع الخلايا السرطانية الثديية معربا عن luciferase تحت الجلد في الفئران وتصور باستخدام التصوير الضوئي لمراقبة نمو الورم والتنمية غير جراحية في دراسة طولية.

في التصوير Bioluminescent المجراة من أورام الثدي باستخدام IVIS الطيف

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window

Dendra2 Photoswitching من خلال نافذة التصوير الثديية

In the last decade, intravital microscopy of breast tumors in mice and rats at single-cell resolution1-4  has resulted in important insights into ...

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

في التصوير المجراة من الطبقات العميقة القشرية باستخدام Microprism

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

جرحشاعثزرحشرتاد الإسفار عن التصوير المقطعي في الجسم الحي. تصوير النامية ذبابة الفاكهة</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

زرع الثدي الداخلي طلائي

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

التصوير البروتين البروتين التفاعلات في الجسم الحي</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage (CoTrAC)

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage CoTrAC

واحدة جزيء التصوير من تنظيم الجينات<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; استخدام التنشيط بواسطة Cotranslational انشقاق (CoTrAC)

We describe a fluorescence microscopy method, Co-Translational Activation by Cleavage (CoTrAC) to image the production of protein molecules in live cells ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA التخصيب من قبل القائم على تقنية Transposase لتحليل NGS من تسلسل كامل ل<em&gt; BRCA1</em&gt;،<em&gt; BRCA2</em&gt;، و 9 الجينات المسؤولة عن إصلاح الحمض النووي الأضرار

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

A Screenable In Vivo Assay for Mitochondrial Modulators Using Transgenic Bioluminescent Caenorhabditis elegans

A Screenable In Vivo Assay for Mitochondrial Modulators Using Transgenic Bioluminescent Caenorhabditis elegans

A للمسح<em&gt; في فيفو</em&gt; الفحص للالميتوكوندريا المغيرون في الموجة الكهرومغناطيسية عن طريق المعدلة وراثيا للإضاءة الحيوية<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

The multicellular model organism Caenorhabditis elegans is a small nematode of approximately 1 mm in size in adulthood that is genetically and ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

قياس صلابة من<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; ماوس Aortas باستخدام مجهر القوة الذرية

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...