Name: in vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using ivis spectrum
Uploaded: 2009-04-29T00:00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum at JoVE.com

מגוון רחב של בלוציפראז שורות תאים סרטניים לבטא יכול לשמש למחקר טרום קליניים במודלים של העכבר. תאים אלה הם כאמור התרבות הפתוגן ללא קפוא, אשר בקלות לגדול בתקשורת סטנדרטי ללא צורך סמנים הבחירה. לצורך ניסוי שלנו, אנו נשתמש 4T1-luc2 תא Murine החלב הגידול קו, המבטא את הגן בלוציפראז המשמש כאינדיקטור אופטי של ביטוי גנים או tumorgenesis in vivo. אנו נשתמש בביטוי בלוציפראז כדי לעקוב אחר גדילת הגידול הראשוני הלא פולשני, אבל הם יכולים לשמש גם כדי לאתר ולעקוב אחר גרורות. פעילות בלוציפראז יש לוודא לפני הזריקה, ועל מנת לעשות זאת, בבקבוק ומחוברות 90% נאסף על ידי trypsinization, ואז ספרה. 50,000 תאים לוותר אז גם אחד של צלחת microtiter ו דילולים סדרתי מבוצעות. Luciferin מתווספת בארות 150ug לכל מ&quot;ל וטופחו במשך 2 דקות. Microplate ניתן הדמיה ב IVIS או בקורא צלחת זורח לקבוע רמות הביטוי. קו זה מבטא את התא עד 6500 פוטונים לכל תא לשנייה, אבל כל רמת הביטוי מעל 500 פוטונים לכל תא לשנייה ניתן הדמיה בהצלחה in vivo. עכשיו יש לנו את התאים לפעילות אופטימלית, נוכל להמשיך לשלב הזרקה תת עורית. על מנת להקל על איתור אופטימלי של הגידול, אנו משתמשים זן athymic immunocompromised עכבר בעירום. לפני הזריקה, בעלי חיים מורדמים אפקט עבור הרדמה עמוקה. הבא אנו להזריק עד 250,000 תאים 100ul PBS מוזרקים תת עורית לתוך האגף. טען התאים מזרק 1 מ&quot;ל ולצרף מחט מד 26. הרם את העור בעדינות עם מלקחיים לעשות &quot;האוהל&quot; ו להזריק את התאים בבסיס. התאים מוזרקים החדש ניתן הדמיה מיד. בכל פגישה הדמיה לסך של 150 מ&quot;ג של Luciferin לכל ק&quot;ג משקל גוף מנוהל באמצעות מכן שתי זריקות לתוך חלל הצפק. במחקר זה, בעלי חיים הם צילמו 10 דקות לאחר ההזרקה Luciferin כדי להבטיח זרימה פוטון עקבי. אנחנו נראה לך את זה לשלב הבא. Luciferin קינטיקה יכול להשתנות מיום ליום. במודל זה בפרט, למדידת 10 דקות לאחר ההזרקה Luciferin נתן תוצאה בטווח של השתנות של 15%. לצורך ניסוי שלנו נשתמש ספקטרום IVIS במערכת הדמיה vivo משתמש גב המכשיר דליל תשלום מצמידים מקורר -90 ° C כדי להשיג רגישות מרבית. כדי לתמוך quantitation מוחלט, מערכת האמצעים תשלום כהה בזמן כלפי מטה ומפעיל עצמית כיול במהלך האתחול. כדי להפעיל את ההדמיה, לאתחל את מערכת IVIS (לחיצה אחת) וכן להגדיר את הפרמטרים הדמיה לצורך הניסוי. בחר את שדה הראיה עבור מספר בעלי חיים להיות הדמיה. עד 5 בעלי חיים יכול להישמר במכשיר באמצעות סעפת הרדמה נפרד. הבמה ב 37 ° C קבוע כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של בעלי החיים. נמל א.ק. ג ניתן לפקח על בריאות בעלי החיים במהלך הליכי מלחיץ. לחיות תוכנה תמונה, זמן חשיפה, f-לעצור פיקסל binning יכול להיות מותאם לפי רמת הביטוי של הקו הסלולרי. הגדרות אלו ניתן לשנות בכל עת במהלך ניסוי מבלי להשפיע על תוצאה כמותית. IVIS רוכש תמונה צילום של החיה תחת אור לבן אות bioluminescent או פלורסנט כמותי, אשר כיסו על התמונה. האות bioluminescent מתבטא פוטונים לשנייה מוצגת המפה עוצמה. להציג את התמונה מותאם מספקים ניגוד ברזולוציה אופטימלית של התמונה מבלי להשפיע על quantitation. הארה מן התאים ניתן למדוד באתר באמצעות הזרקה לאזור של כלי הריבית. נתוני המדידה מוצגים בטבלה יחד עם כל הפרמטרים של הניסוי הנוגעים ללכוד את התמונה ניתן לשמור או לייצא לניתוח מספר תמונות ניתן לרכוש והשוו במחקרים ארוכי טווח המכסים שניות או חודשים בהתאם לאופי הניסוי. אנו מודדים שטף פוטון מן הגידול באפס זמן לפקח למשך 4 שבועות עם הדמיה דו שבועי במרווחים. השטף פוטון מן הגידול הוא יחסי למספר תאים חיים להביע בלוציפראז כך פליטת אור בקורלציה ישירה עם גודל הגידול. בשלב ההשרשה 5 ימים שלאחר הגידול עדיין לא מוחשי אבל התאים ניתן לכמת באמצעות פליטת אור ואת הגידול נתפסת להיות גדל באופן פעיל. בשלב זה את האות פליטת אור הרבה strongeר &#39; זמן חשיפה, f-לעצור binning פיקסל יכול להיות מותאם כך התמונה ברורה המצלמה אינה להרוות. IVIS מפצה באופן אוטומטי את השינויים אוסף כל כך קל מדידות אלה ניתן בהשוואה לאלה שנאספו מוקדם ומאוחר בניסוי. בשעה 7 ימים שלאחר השתלת גידולים הם מוחשי בפעם הראשונה מדידת פליטת אור יצרה כבר 7 ימים של נתונים. בשלב ההשתלה 28 ימים הודעה, גידולים הופכים נמקי ותאי מתחילים למות. גודל הגידול מוערך על ידי קליפר המדידה אינה משתנה במידה ניכרת, אך הארה מן הגידול יקטן המעיד על מוות של תאים. מדידות Caliper ומדידה פליטת אור יכול להיות נמשך עד הסיום אנושי הוא הגיע. נמק גידול עקב המשטרים היפוקסיה או טיפול תסומן על ידי פליטת אור מופחת, גם אם הם לא להפחית את מסת הגידול.

אני רוצה להבטיח כי כל הניסויים שבוצעו כדי לייצר את כתב העת מאמר ניסויים דמיינו בוצעו בהתאם לפרוטוקול שאושר על ידי 060 בעלי חיים טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש הוועדה (IACUC) בשעה Caliper מדעי החיים, Alameda CA Jae קים, Ph . ד, יו&quot;ר IACUC, Caliper מדעי החיים.

in vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using ivis spectrum

4T1 החלב העכבר תאים סרטניים יכולים להיות מושתלים תת cutaneously ב נו / נו עכברים כדי ליצור גידולים מוחשית ב 15 עד 20 ימים. מערכת זו xenograft מודל הגידול הוא בעל ערך עבור טרום קליניים בהערכת vivo של תרכובות antitumor המשוערת. קו התא 4T1 תוכנן כדי constitutively לבטא את הגן בלוציפראז גחלילית (luc2). כאשר עכברים שנשאו 4T1-luc2 גידולים מוזרקים עם Luciferin גידולים לפלוט אות אור חזותיים ניתן לנטר באמצעות מערכת דימות אופטי רגיש כמו הספקטרום IVIS. השטף פוטון מן הגידול הוא יחסי למספר תאים פולטי אור ואת האות ניתן למדוד כדי לפקח על גדילה והתפתחות הגידול. IVIS הוא מכויל כדי לאפשר quantitation מוחלטת של האות bioluminescent ועל מחקרים ארוכי טווח יכול להתבצע במשך חודשים רבים על צווים שונים של גודל האות מבלי להתפשר על תוצאה כמותית. הגידול יכול להיות במעקב במשך כמה ימים על ידי פליטת אור לפני גודל הגידול הופך להיות מוחשי או למדידה באמצעים פיזיים המסורתית. זה ניטור מהיר יכול לספק תובנה אירועים בתחילת התפתחות הגידול או להוביל הפרוצדורות קצר. מוות של תאים סרטניים ונמק בגלל חוסר חמצן או טיפול תרופה מצוינת מוקדם על ידי הפחתה של האות bioluminescent. מוות זה התא לא יכול להיות מלווה בירידה בגודל הגידול, כפי שהיא נמדדת על ידי אמצעים פיזיים. היכולת לראות אירועים בתחילת נמק הגידול יש השפעה משמעותית על הבחירה ופיתוח של סוכני טיפולית. הדמיה כמותי של הגידול באמצעות IVIS מספק quantitation מדויק מאיץ את תהליך ניסיוני להפקת תוצאות.

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum at JoVE.com

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

תאים סרטניים החלב להביע בלוציפראז מושתלים תת עורי בעכברים דמיינו באמצעות דימות אופטי כדי לפקח על גדילה והתפתחות הגידול הלא פולשני במחקר האורך.

בשנת vivo Bioluminescent הדמיה של גידולים החלב באמצעות ספקטרום IVIS

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window

Dendra2 Photoswitching דרך החלון דימות השד

In the last decade, intravital microscopy of breast tumors in mice and rats at single-cell resolution1-4  has resulted in important insights into ...

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

בתחום ההדמיה vivo של שכבות קליפתיים עמוק באמצעות Microprism

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence טומוגרפיה עבור In-vivo הדמיה של פיתוח תסיסנית</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

החלב להשתלות אפיתל נוהל

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

הדמיה חלבונים אינטראקציות In vivo</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage (CoTrAC)

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage CoTrAC

הדמית מולקולה הבודדה של רגולציה גנטית<em&gt; בחי</em&gt; שימוש הפעלת Cotranslational ידי מחשוף (CoTrAC)

We describe a fluorescence microscopy method, Co-Translational Activation by Cleavage (CoTrAC) to image the production of protein molecules in live cells ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA העשרה על ידי טכנולוגיה מבוססת Transposase לניתוח NGS של הרצף השלם של<em&gt; BRCA1</em&gt;,<em&gt; BRCA2</em&gt;, ו -9 גנים המעורבים בתיקון נזק לדנ&quot;א

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

A Screenable In Vivo Assay for Mitochondrial Modulators Using Transgenic Bioluminescent Caenorhabditis elegans

A Screenable In Vivo Assay for Mitochondrial Modulators Using Transgenic Bioluminescent Caenorhabditis elegans

Screenable<em&gt; In vivo</em&gt; Assay עבור מיטוכונדריאלי מאפנני שימוש הטרנסגניים Bioluminescent<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

The multicellular model organism Caenorhabditis elegans is a small nematode of approximately 1 mm in size in adulthood that is genetically and ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

מדידת הקשיחות של<em&gt; Ex Vivo</em&gt; עכבר Aortas באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...