Name: in vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using ivis spectrum
Uploaded: 2009-04-29T00:00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum at JoVE.com

Широкий спектр люциферазы выражения линий раковых клеток может быть использован для доклинических исследованиях на мышах. Эти клетки предоставляются в качестве патогенов без замороженных культуры, которая будет легко расти в стандартных средствах массовой информации без необходимости выбора маркеров. Для нашего эксперимента, мы будем использовать 4T1-luc2 мышиной молочной линии клеток опухоли, которая выражает гена люциферазы, которая служит оптический индикатор экспрессии генов или tumorgenesis в естественных условиях. Мы будем использовать выражение люциферазы отслеживать рост первичной опухоли неинвазивным, но они также могут быть использованы для обнаружения и мониторинга метастатического поражения. Люциферазы деятельность должна быть проверена перед инъекцией, и для того, чтобы сделать это, 90% сливной колбу собирают трипсинизации а затем подсчитываются. 50000 клетки затем распределены в одну лунку планшет и серийные разведения выполняются. Люциферин добавляется скважин на 150ug на мл и инкубировали в течение 2 минут. Планшет может быть отображены в ИВИС или люминесцентные читателя пластины для определения уровня экспрессии. Эта клеточная линия выражает до 6500 фотонов в секунду на камеру, но любое выражение уровня выше 500 фотонов в секунду на ячейку может быть успешно отображаемого в естественных условиях. Теперь у нас есть клетки оптимальной деятельности, мы можем перейти к шагу подкожной инъекции. В целях содействия оптимального обнаружения опухоли, мы используем athymic иммунитетом обнаженной штамм мыши. До инъекции, животных под наркозом, чтобы эффект для глубокой анестезии. Далее мы будет вводить до 250000 клеток в 100 мкл PBS вводят подкожно в бок. Нагрузка клеток в 1 мл шприц и присоедините 26 иглы. Поднимите кожи осторожно пинцетом, чтобы сделать &quot;палатка&quot; и ввести клетки у основания. Вновь вводили клетки могут быть отображены немедленно. В каждом из изображений сессии в общей сложности 150 мг люциферина на кг массы тела затем вводят через две инъекции в брюшную полость. В этом исследовании, животные изображаются через 10 минут после инъекции люциферин для обеспечения последовательного потока фотонов. Мы покажем вам это в следующем шаге. Люциферин кинетики может меняться изо дня в день. В данной модели, размером 10 минут после инъекции люциферин дал результат в диапазоне от 15% изменчивости. Для нашего эксперимента мы будем использовать ИВИС спектра в системе естественных изображений использует резервные разбавленной с зарядовой связью устройство охлаждается до -90 ° С до достижения максимальной чувствительности. Для поддержки абсолютного количественного, система мер темно заряд в течение времени простоя и работает самокалибровка во время инициализации. Для начала обработки изображений, инициализации системы ИВИС (один клик) и установить параметры изображения для эксперимента. Выберите поле зрения числа перевозимых животных, образ. До 5 животные могут быть сохранены в приборе с использованием интегрального анестезии многообразия. Этапе при постоянной температуре 37 ° С для поддержания температуры тела у животных. ЭКГ порта обеспечивается для контроля здоровья животных во время стрессовых процедур. В живой образ программного обеспечения, время экспозиции, диафрагмы и пиксельные биннинга может быть оптимизирован на основе уровня экспрессии клеточной линии. Эти параметры могут быть изменены в любое время в течение эксперимента, не влияя на количественный результат. ИВИС приобретает фотографическое изображение животного под белым светом и количественные биолюминесцентного или флуоресцентный сигнал, который накладывается на изображение. Биолюминесцентного сигнала выражается в фотонов в секунду и отображается в виде интенсивности карте. Изображение дисплея регулируется, чтобы обеспечить оптимальную контрастность и разрешение в изображении, не затрагивая количественного определения. Люминесценция из клеток могут быть измерены на месте инъекции использованием область интереса инструмент. Данные измерений отображаются в таблице вместе со всеми экспериментальные параметры, касающиеся захвата изображения, которые могут быть сохранены или экспортированы для анализа Множественные изображения могут быть получены и сопоставлены в продольных исследований, охватывающих секунд или месяцев в зависимости от характера эксперимента. Мы будем измерять поток фотонов от опухоли в нулевой момент времени и контролировать в течение 4 недель с изображениями на двух-недельным интервалом. Поток фотонов от опухоли прямо пропорционально количеству живых клеток, экспрессирующих люциферазы так биолюминесценции в прямой зависимости размера опухоли. В 5 дней после имплантации опухоли еще не ощутима, но клетки могут быть количественно через биолюминесценции и опухоль видна активно растет. На данном этапе биолюминесценции сигнала значительно strongeг. Время экспозиции, диафрагмы и пиксельные биннинга можно отрегулировать так, что изображение четкое и камера не насыщает. ИВИС автоматически компенсирует изменения в свет коллекция поэтому эти измерения могут быть по сравнению с теми, собранные ранее, а затем в эксперименте. На 7 дней после имплантации опухоли являются ощутимыми в первый раз, и измерение биолюминесценции уже сформирован 7 дней данных. На 28 дней после имплантации, опухоли становятся некротических и клетки начинают отмирать. Размер опухоли оценивается суппорт измерения не изменяется заметно, но свечение от опухоли снизится указывает гибели клеток. Суппорт измерений и биолюминесценции измерения может быть продолжен до гуманного конечная точка достигнута. Некроза опухоли из-за гипоксии или режимов лечения будет обозначено снижение биолюминесценции, даже если они не уменьшают опухоли.

Я хотел бы заверить, что все эксперименты по производству Журнал Визуализированные статье Эксперименты проводились в соответствии с протоколом 060 животных утвержденным Институциональные уходу и использованию животных комитета (IACUC) на суппорт наук о жизни, Alameda CA Джей Ким, Ph . Д., IACUC председатель суппорт наук о жизни.

in vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using ivis spectrum

4T1 молочной железы мыши клетки опухоли могут быть имплантированы подкожно в ню / ню мышей форме ощутимой опухоли у 15 до 20 дней. Это ксенотрансплантата модели системы опухоли является ценным для доклинических в естественных условиях оценка предполагаемых соединений противоопухолевого. 4T1 клеточной линии был спроектирован, чтобы выразить конститутивно ген люциферазы светлячка (luc2). Когда мышей, несущих 4T1-luc2 опухоли вводили люциферин опухоли выделяют визуальный сигнал света, который можно контролировать с помощью чувствительной оптической системой визуализации, как Спектр ИВИС. Поток фотонов от опухоли прямо пропорционально числу светлых клеток и излучающих сигнал может быть измерен для контроля опухолевого роста и развития. ИВИС откалиброван чтобы абсолютное количественное биолюминесцентного сигнала и продольные исследования могут быть выполнены в течение многих месяцев и старше на несколько порядков величины сигнала без снижения количественного результата. Рост опухоли можно наблюдать в течение нескольких дней по биолюминесценции, прежде чем размер опухоли становится ощутимым или измеримым традиционными физическими средствами. Этот быстрый мониторинг может дать представление о ранних событиях в развитие опухоли или привести к более коротким экспериментальных процедур. Опухоль гибель клеток и некроз в результате лечения гипоксии или Препарат назначают досрочно сокращение биолюминесцентного сигнала. Это гибель клеток может не сопровождаться уменьшение размера опухоли, как измеряется физическими средствами. Способность видеть события в ранней некроза опухоли оказывает существенное влияние на выбор и разработку терапевтических средств. Количественная визуализация опухолевого роста использования ИВИС обеспечивает точный количественный и ускоряет экспериментальный процесс для получения результатов.

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum at JoVE.com

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

Молочные опухоль клеток, экспрессирующих люциферазы имплантируются под кожу мышей и визуализированы с использованием оптических изображений для контроля опухолевого роста и развития неинвазивно в продольном исследовании.

В естественных условиях Биолюминесцентный изображения опухоли молочной железы Использование ИВИС Спектра

4T1 mouse mammary tumor cells can be implanted sub-cutaneously in nu/nu mice to form palpable tumors in 15 to 20 days. This xenograft tumor model system ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum

Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window

Dendra2 Photoswitching через окно молочной изображений

In the last decade, intravital microscopy of breast tumors in mice and rats at single-cell resolution1-4  has resulted in important insights into ...

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

В естественных изображений из глубоких слоях коры использованием микропирамид

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Мезоскопические флуоресцентная томография для В естественных условиях Изображений развивающихся Drosophila</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

Молочные Эпителиальные Процедура трансплантации

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Изображениями белок-белковых взаимодействий В естественных условиях</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage (CoTrAC)

Single-molecule Imaging of Gene Regulation In vivo Using Cotranslational Activation by Cleavage CoTrAC

Одиночных молекул изображений регуляции генов<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Использование Cotranslational активацию путем расщепления (CoTrAC)

We describe a fluorescence microscopy method, Co-Translational Activation by Cleavage (CoTrAC) to image the production of protein molecules in live cells ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

В Vivo 4-мерном Tracking гемопоэтических стволовых и клеток-предшественников в взрослой мыши свода черепа костного мозга

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

гДНК Обогащение на транспозазу основе технологии для NGS Анализ всей последовательности<em&gt; BRCA1</em&gt;,<em&gt; BRCA2</em&gt;, и 9 генов, вовлеченных в ДНК Нанесенный Ремонт

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

A Screenable In Vivo Assay for Mitochondrial Modulators Using Transgenic Bioluminescent Caenorhabditis elegans

A Screenable In Vivo Assay for Mitochondrial Modulators Using Transgenic Bioluminescent Caenorhabditis elegans

Скринируемый<em&gt; В Vivo</em&gt; Анализ митохондриальных Модуляторы с использованием трансгенных БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em

The multicellular model organism Caenorhabditis elegans is a small nematode of approximately 1 mm in size in adulthood that is genetically and ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Измерение Жесткость<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Аорте при помощи мыши атомно-силовой микроскопии

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...