Name: live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy
Uploaded: 2009-04-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> جزيل الشكر للدكتور جنيفر Gutzman الذين طوروا الاولى من هذا الأسلوب في مختبر SIVE. أيضا بفضل الخضراء JB في بوسطن دانا فاربر معهد السرطان ، MA الذين قدموا يرجى الترميز البلازميد CAAX - GFP مرنا. أجري التصوير مبائر في مرفق WM مؤسسة كيك التصوير البيولوجي في وايتهيد. معتمد من قبل النظام المنسق NIHMH70926. معتمد من قبل المصري الزمالة بعد الدكتوراه قبل جبهة الخلاص الوطني. </p>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1. إعداد مرنا للحقن </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وكتب على مرنا المستخدمة في هذا الإجراء من ترميز البلازميد CAAX - eGFP (memGFP) مرنا. يصبح خطي لأول مرة وفقا لبلازميد Gutzman آخرون ، 2008. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم نسخ مرنا memGFP باستخدام mMachine mMessage عدة. </li><li style="...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H., Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech Dev</em>. <b>125</b> (974), 11-12 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: a Guide for the Laboratory Use of Zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذا الفيديو ، ونحن يبرهن على وجود طريقة لحقن مرنا في واحد الأجنة الزرد الخلية. هنا ، فإننا نستخدم مرنا ترميز GFP غشاء استهداف لتسمية كل خلية. ثم نظهر كيفية تحميل وصورة الدماغ النامية في قرار خلية واحدة. وقد سمحت لنا هذه التقنية لدراسة نوع جديد من تغيير شكل الخلية ، وا?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SeaKem GTG agarose</td>
<td>   Reagent</td>
<td>Lonza</td>
<td>50027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (Tricaine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>Borosil 1.0mmOD x 0.5mm ID/fiber 100mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Silicone vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR</td>
<td>W0S717</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11232-20</td>
<td>Dumont #5 Bio Inox</td>
</tr>
<tr>
<td>1-200 &#x03BC;l Pipette tips</td>
<td>Tool</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>111-0806</td>
<td>These are the correct size for 24 hpf embryos. </td>
</tr>
<tr>
<td>mMessage mMachine transcription kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1340</td>
<td>SP6 RNA polymerase</td>
</tr>
<tr>
<td>Zeiss LSM 510 scanning confocal </td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tool</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tool</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PLI-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette puller</td>
<td>Tool</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy

<p class="jove_content">في هذا الفيديو ، ونحن لشرح طريقة مختبرنا وقد وضعت لتحليل التغييرات وإعادة ترتيب شكل الخلية المطلوبة لثني والطي الدماغ الزرد النامية (Gutzman وآخرون ، 2008). مثل هذا التحليل يعطي فهما جديدا للبيولوجيا الخلية الأساسية اللازمة لتطوير البنية 3D الفقاريات من الدماغ ، ويزيد بشكل كبير من قدرتنا على دراسة التشكل أنبوب العصبي. يتشكل الدماغ الزرد الجنينية ابتداء من الساعة 18 التسميد آخر ساعة (HPF) والبطينين داخل الظهارة العصبية تضخيم. بنسبة 24 HPF ، والخطوات الأولية التشكل الأنبوب العصبي كاملة. باستخدام الطريقة الموصوفة هنا ، يتم حقن الأجنة في مرحلة خلية واحدة مع ترميز الغشاء مرنا استهداف بروتين الفلورية الخضراء (memGFP). HPF بعد الحقن ، والحضانة ، وجنين ، وبين 18 و 24 الآن ، هي التي شنت ، مقلوب ، في agarose والتقط بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. ومن الجدير بالذكر أن الجنين الزرد شفافة مما يجعلها مثالية لنظام التصوير الفلورسنت. في حين ركزت تحليلاتنا على الحدود الدماغ المتوسط ​​، الدماغ المؤخر والدماغ المؤخر ويمكن تمديد هذه طريقة لتحليل أي منطقة في الزرد إلى عمق 8-10 ميكرون.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

<p class="jove_content">في هذا الفيديو ، ونحن يبرهن على وجود طريقة يمكن من خلالها تحليل الدماغ النامي في أجنة الفقاريات الزرد يعيش في قرار خلية واحدة بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. ويشمل هذا الأسلوب الذي كنا حقن الجنين الزرد وحيدة الخلية وجبل لاحقا وصورة الدماغ النامي.</p>

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

ثنائي الفوتون axotomy والوقت الفاصل بين التصوير مبائر يعيش في الأجنة الزرد

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging Of <em>Drosophila melanogaster </em>Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

يعيش تصوير<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> هجرات كرية دموية الجنينية

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

مضان القائم على القياس من دخول الكالسيوم المتجر الذي يعمل في الخلايا الحية: من خلية السرطان مثقف على عضلة

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

التصوير والإعمار 3D من الهياكل الدماغية في الجنينية اسماك الزرد

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

تحليل الجمجمة التشكل في الزرد عن طريق 4D متحد البؤر المجهري

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

<em>في فيفو</em> تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Live Cell Imaging and 3D Analysis of Angiotensin Receptor Type 1a Trafficking in Transfected Human Embryonic Kidney Cells Using Confocal Microscopy

يعيش التصوير خلية وتحليل 3D من أنجيوتنسين مستقبلات نوع 1A الاتجار في خلايا الكلى Transfected الجنينية البشرية عن طريق الميكروسكوب متحد البؤر

Live-cell imaging is used to simultaneously capture time-lapse images of angiotensin type 1a receptors (AT1aR) and intracellular compartments in ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

إعداد العينات البيولوجية بالتجميد ذات الضغط العالي، وتعزيز النقيض ساعدت الموجات الدقيقة، والحد الأدنى راتنج التضمين لتصوير حجم

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Live Imaging of Microtubule Dynamics in Glioblastoma Cells Invading the Zebrafish Brain

التصوير الحي لديناميات الأنابيب الدقيقة في خلايا الورم الأرومي الدبقي التي تغزو دماغ الزرد

With a dismal median survival time in real populations-between 6 to 15 months-glioblastoma (GBM) is the most devastating malignant brain tumor. Treatment ...

Autofluorescence Imaging to Evaluate Red Algae Physiology

التصوير الذاتي لتقييم فسيولوجيا الطحالب الحمراء

Red algae (Rhodophyta) contain phycobiliproteins and colonize habitats with dim light, however some (e.g., some Chroothece species) can also develop in ...