Name: live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy
Uploaded: 2009-04-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

<p class="jove_content"> Veel dank aan Dr Jennifer Gutzman die als eerste deze techniek ontwikkeld in het Sive lab. Ook dank aan JB Green in het Dana-Farber Cancer Institute in Boston, MA, die zo vriendelijk op voorwaarde dat de plasmide coderend voor CAAX-GFP mRNA. De confocale imaging werd uitgevoerd op het WM Keck Foundation Biologische Imaging Facility bij de Whitehead. HS wordt ondersteund door NIHMH70926. EG wordt ondersteund door een NSF pre-doctorale beurs. </p>

<p class="jove_title"> 1. De voorbereiding van het mRNA voor injectie </p><ol><li> Het mRNA gebruikt in deze procedure is overgenomen uit een plasmide coderend voor CAAX-eGFP (memGFP) mRNA. Eerst het plasmide lineariseren volgens Gutzman et al., 2008. </li><li> Dan transcriberen memGFP mRNA met behulp van de mMessage mMachine kit. </li><li> Verdun het resulterende mRNA naar 1μg/μl, aliquoot, en bewaar bij -80 ° C. </li><li> Bereid een spuitgietmatrijs van 1% agarose met lanen de breedte van embryo&#39;s aan de ene cel podium. </li><li> Op de...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H., Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech Dev</em>. <b>125</b> (974), 11-12 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: a Guide for the Laboratory Use of Zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content"> In deze video tonen we een methode voor het mRNA injectie in een cel zebravis embryo&#39;s. Hier maken we gebruik van mRNA dat codeert voor een membraan-gerichte GFP aan elke cel label. Vervolgens hebben we laten zien hoe te monteren en het imago van de zich ontwikkelende hersenen van enkele cel resolutie. Deze techniek heeft ons toegelaten om een ​​nieuw type van de cel van vorm veranderen, basale vernauwing, die nodig zijn voor de vorming van de middenhersenen-achterhersenen grens (Gutzman et al., 2008) te bestude...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SeaKem GTG agarose</td>
<td>   Reagent</td>
<td>Lonza</td>
<td>50027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (Tricaine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>Borosil 1.0mmOD x 0.5mm ID/fiber 100mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Silicone vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR</td>
<td>W0S717</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11232-20</td>
<td>Dumont #5 Bio Inox</td>
</tr>
<tr>
<td>1-200 &#x03BC;l Pipette tips</td>
<td>Tool</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>111-0806</td>
<td>These are the correct size for 24 hpf embryos. </td>
</tr>
<tr>
<td>mMessage mMachine transcription kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1340</td>
<td>SP6 RNA polymerase</td>
</tr>
<tr>
<td>Zeiss LSM 510 scanning confocal </td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tool</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tool</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PLI-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette puller</td>
<td>Tool</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy

<p class="jove_content">In deze video, tonen we de methode ons lab heeft zich ontwikkeld tot de cel verandert de vorm en de herschikkingen nodig zijn om te buigen en vouwen de zich ontwikkelende hersenen zebravis (Gutzman et al., 2008) te analyseren. Een dergelijke analyse biedt een nieuw begrip van de onderliggende celbiologie die nodig zijn voor de ontwikkeling van de 3D-structuur van de gewervelde hersenen en verhoogt ons vermogen om neurale buis morfogenese bestuderen. De embryonale zebravis hersenen gevormd wordt vanaf 18 uur na de bevruchting (HPF) als de hartkamers binnen de neuroepithelium te blazen. Door 24 HPF, de eerste stappen van de neurale buis morfogenese zijn voltooid. Met behulp van de hier beschreven methode, worden embryo&#39;s aan de ene cel stadium geïnjecteerd met mRNA dat codeert voor membraan-gerichte groen fluorescerend eiwit (memGFP). Na injectie en incubatie, het embryo, nu tussen 18 en 24 HPF, is gemonteerd, omgekeerd, in beeld gebracht door agarose en confocale microscopie. Met name de zebravis embryo is doorzichtig, waardoor het een ideaal systeem voor fluorescerende beeldvorming. Terwijl onze analyses hebben zich geconcentreerd op de middenhersenen-achterhersenen grens en de achterhersenen, zou deze methode worden uitgebreid voor de analyse van elke regio in de zebravis op een diepte van 80-100 micrometer.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

<p class="jove_content">In deze video, demonstreren we een methode om de ontwikkeling van gewervelde hersenen te analyseren in levende zebravis embryo&#39;s bij enkele cel resolutie door confocale microscopie. Dit omvat de methode waarmee we injecteren van de single-cell zebravis embryo en vervolgens monteren en het imago van de zich ontwikkelende hersenen.</p>

Live-Imaging van de zebravis embryonale Brain door confocale microscopie

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Twee-foton axotomy en time-lapse confocale imaging in levende zebravis embryo&#39;s

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging Of <em>Drosophila melanogaster </em>Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live-beeldvorming van<em> Drosophila melanogaster</em> Embryonale Hemocyte Migraties

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescentie-gebaseerde waardering van Store-bediende Calcium Entry in levende cellen: van Cultured Cancer Cell op Skeletal Muscle Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

Imaging en 3D Reconstructie van cerebrovasculair Structuren in embryonale zebravis

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

Het analyseren Craniofacial Morphogenesis in zebravis behulp 4D confocale microscopie

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

<em>In Vivo</em> 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Live Cell Imaging and 3D Analysis of Angiotensin Receptor Type 1a Trafficking in Transfected Human Embryonic Kidney Cells Using Confocal Microscopy

Live-cell imaging en 3D analyse van angiotensine receptor type 1a Trafficking in getransfecteerde humane embryonale niercellen middels confocale microscopie

Live-cell imaging is used to simultaneously capture time-lapse images of angiotensin type 1a receptors (AT1aR) and intracellular compartments in ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Bereiding van de biologische monsters door hogedruk bevriezing, magnetron-bijgewoonde contrastverbetering, en minimale hars inbedding voor Volume Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Live Imaging of Microtubule Dynamics in Glioblastoma Cells Invading the Zebrafish Brain

Live imaging van microtubulidynamica in glioblastoomcellen die het zebravisbrein binnendringen

With a dismal median survival time in real populations-between 6 to 15 months-glioblastoma (GBM) is the most devastating malignant brain tumor. Treatment ...

Autofluorescence Imaging to Evaluate Red Algae Physiology

Autofluorescentie beeldvorming om de fysiologie van rode algen te evalueren

Red algae (Rhodophyta) contain phycobiliproteins and colonize habitats with dim light, however some (e.g., some Chroothece species) can also develop in ...