Name: live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy
Uploaded: 2009-04-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

<p class="jove_content"> डॉ. जेनिफर Gutzman जो पहले sive प्रयोगशाला में इस तकनीक विकसित करने के लिए बहुत धन्यवाद. दाना-Farber कैंसर संस्थान बोस्टन, MA, जो कृपया प्लाज्मिड एन्कोडिंग CAAX - GFP mRNA प्रदान पर भी जेबी ग्रीन धन्यवाद. confocal इमेजिंग WM उबकना फाउंडेशन जैव इमेजिंग सुविधा पर व्हाइटहेड में आयोजित किया गया. एच एस NIHMH70926 द्वारा समर्थित है. उदाहरण के एक NSF पूर्व डॉक्टरेट फैलोशिप द्वारा समर्थित है. </p>

<p class="jove_title"> 1. इंजेक्शन के लिए mRNA तैयारी </p><ol><li> इस प्रक्रिया में इस्तेमाल किया mRNA प्लाज्मिड एन्कोडिंग (memGFP) CAAX EGFP mRNA से लिखित है. पहले Gutzman एट अल, 2008 के अनुसार प्लाज्मिड linearize. </li><li> फिर memGFP mMessage mMachine किट का उपयोग कर mRNA टाइप करना. </li><li> -80 में...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H., Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech Dev</em>. <b>125</b> (974), 11-12 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: a Guide for the Laboratory Use of Zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content"> इस वीडियो में, हम एकल कक्ष zebrafish भ्रूण में mRNA इंजेक्शन के लिए एक विधि का प्रदर्शन. यहाँ, हम एक झिल्ली लक्षित करने के लिए प्रत्येक कक्ष लेबल GFP mRNA एन्कोडिंग का उपयोग करें. हम तो प्रदर्शित कैसे माउंट करने के लिए ...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SeaKem GTG agarose</td>
<td>   Reagent</td>
<td>Lonza</td>
<td>50027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (Tricaine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>Borosil 1.0mmOD x 0.5mm ID/fiber 100mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Silicone vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR</td>
<td>W0S717</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11232-20</td>
<td>Dumont #5 Bio Inox</td>
</tr>
<tr>
<td>1-200 &#x03BC;l Pipette tips</td>
<td>Tool</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>111-0806</td>
<td>These are the correct size for 24 hpf embryos. </td>
</tr>
<tr>
<td>mMessage mMachine transcription kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1340</td>
<td>SP6 RNA polymerase</td>
</tr>
<tr>
<td>Zeiss LSM 510 scanning confocal </td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tool</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tool</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PLI-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette puller</td>
<td>Tool</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy

<p class="jove_content">इस वीडियो में, हम हमारी प्रयोगशाला विधि सेल आकार में परिवर्तन और rearrangements मोड़ और विकासशील zebrafish मस्तिष्क (Gutzman एट अल, 2008) गुना करने की आवश्यकता का विश्लेषण करने के लिए विकसित किया गया है प्रदर्शित करता है. इस तरह के विश्लेषण अंतर्निहित कक्ष हड्डीवाला मस्तिष्क के 3D संरचना के विकास के लिए आवश्यक जीव विज्ञान की एक नई समझ देता है, और काफी हमारे न्यूरल ट्यूब morphogenesis अध्ययन करने की क्षमता बढ़ जाती है. भ्रूण zebrafish मस्तिष्क neuroepithelium बढ़ भीतर निलय के रूप में 18 घंटे पोस्ट निषेचन (HPF) पर शुरुआत करने के लिए आकार का है. 24 HPF करके, न्यूरल ट्यूब morphogenesis के प्रारंभिक चरणों को पूरा कर रहे हैं. पद्धति का उपयोग करके यहाँ वर्णित है, एक सेल स्तर पर भ्रूण mRNA एन्कोडिंग झिल्ली लक्षित हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (memGFP) के साथ अंतःक्षिप्त रहे हैं. घुड़सवार, इंजेक्शन और ऊष्मायन, भ्रूण, 18 और 24 के बीच अब HPF के बाद, है उलटा, agarose में और confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा imaged. विशेष रूप से, zebrafish भ्रूण पारदर्शी है यह फ्लोरोसेंट इमेजिंग के लिए एक आदर्श प्रणाली बनाने. जबकि हमारे विश्लेषण सीमा midbrain hindbrain और hindbrain पर ध्यान केंद्रित किया है, इस विधि 80-100 सुक्ष्ममापी की गहराई zebrafish में किसी भी क्षेत्र के विश्लेषण के लिए बढ़ाया जा सकता है.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

<p class="jove_content">इस वीडियो में, हम एक विधि जिसके द्वारा confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा एकल कक्ष संकल्प पर रहते zebrafish भ्रूण में विकसित हड्डीवाला मस्तिष्क का विश्लेषण करने के लिए प्रदर्शित करता है. यह विधि है जिसके द्वारा हम zebrafish एकल कोशिका भ्रूण इंजेक्षन और बाद में माउंट और छवि विकासशील मस्तिष्क भी शामिल है.</p>

Confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा Zebrafish भ्रूण मस्तिष्क की इमेजिंग लाइव

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

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Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

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Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

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इमेजिंग और भ्रूणीय Zebrafish में cerebrovascular संरचनाएं की 3 डी पुनर्निर्माण

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Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

4D confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग Zebrafish में Craniofacial Morphogenesis का विश्लेषण करना

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<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

वयस्क माउस Calvarial अस्थि मज्जा में hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के <em>Vivo</em> 4 आयामी ट्रैकिंग <em>में</em>

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Live Cell Imaging and 3D Analysis of Angiotensin Receptor Type 1a Trafficking in Transfected Human Embryonic Kidney Cells Using Confocal Microscopy

लाइव सेल इमेजिंग और ट्रांसफ़ेक्ट मानव भ्रूण गुर्दे की कोशिकाओं में Angiotensin के 3 डी विश्लेषण रिसेप्टर टाइप 1 ए तस्करी confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Live-cell imaging is used to simultaneously capture time-lapse images of angiotensin type 1a receptors (AT1aR) and intracellular compartments in ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

उच्च दबाव ठंड, माइक्रोवेव की सहायता के विपरीत वृद्धि, और मात्रा इमेजिंग के लिए ंयूनतम राल Embedding द्वारा जैविक नमूना तैयारी

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

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ज़ेबराफिश मस्तिष्क पर हमला करने वाले ग्लियोब्लास्टोमा कोशिकाओं में माइक्रोट्यूबुल्स डायनामिक्स की लाइव इमेजिंग

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Autofluorescence Imaging to Evaluate Red Algae Physiology

लाल शैवाल फिजियोलॉजी का मूल्यांकन करने के लिए ऑटोफ्लोरेसेंस इमेजिंग

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