Name: live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy
Uploaded: 2009-04-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

<p class="jove_content"> Muito obrigado a Dr. Jennifer Gutzman quem primeiro desenvolveu essa técnica no laboratório Sive. Graças também ao JB Verde no Dana-Farber Cancer Institute em Boston, MA que gentilmente forneceu o plasmídeo CAAX-GFP mRNA. A imagem confocal foi realizada na Fundação WM Keck Facilidade de imagem Biológicas da Whitehead. HS é suportada por NIHMH70926. EG é apoiado por uma bolsa NSF pré-doutoramento. </p>

<p class="jove_title"> 1. Preparando o mRNA para Injeção </p><ol><li> O mRNA utilizado neste procedimento é transcrito a partir de um plasmídeo CAAX-eGFP (memGFP) mRNA. Primeira linearizar o plasmídeo de acordo com Gutzman et al, 2008. </li><li> Em seguida, transcrever mRNA memGFP usando o mMessage mMachine kit. </li><li> Diluir o mRNA resultante para 1μg/μl, alíquota, e armazenar a -80 ° C. </li><li> Prepare um molde de injeção de agarose 1% com faixas da largura de embriões no estágio uma célula. </li><li> No dia antes da injeç...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H., Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech Dev</em>. <b>125</b> (974), 11-12 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: a Guide for the Laboratory Use of Zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content"> Neste vídeo, demonstramos um método para injeção de mRNA em embriões de peixe-zebra única célula. Aqui, usamos mRNA que codifica uma membrana GFP-alvo para rotular cada célula. Nós, então, demonstrar como montar e imagem do cérebro em desenvolvimento na resolução única célula. Esta técnica permitiu-nos a estudar um novo tipo de célula mudar de forma, a constrição basal, necessária para a formação da fronteira mesencéfalo rombencéfalo (Gutzman et al, 2008). Análise semelhante de outros fenômenos...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SeaKem GTG agarose</td>
<td>   Reagent</td>
<td>Lonza</td>
<td>50027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (Tricaine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>Borosil 1.0mmOD x 0.5mm ID/fiber 100mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Silicone vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR</td>
<td>W0S717</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11232-20</td>
<td>Dumont #5 Bio Inox</td>
</tr>
<tr>
<td>1-200 &#x03BC;l Pipette tips</td>
<td>Tool</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>111-0806</td>
<td>These are the correct size for 24 hpf embryos. </td>
</tr>
<tr>
<td>mMessage mMachine transcription kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1340</td>
<td>SP6 RNA polymerase</td>
</tr>
<tr>
<td>Zeiss LSM 510 scanning confocal </td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tool</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tool</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PLI-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette puller</td>
<td>Tool</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy

<p class="jove_content">Neste vídeo, demonstramos o método de nosso laboratório tem desenvolvido para analisar as mudanças de células forma e rearranjos necessários para dobrar e dobrar o cérebro zebrafish em desenvolvimento (Gutzman et al, 2008). Essa análise permite uma nova compreensão da biologia das células subjacentes necessários para o desenvolvimento da estrutura 3D do cérebro de vertebrados, e aumenta significativamente a nossa capacidade de estudar a morfogênese do tubo neural. O cérebro zebrafish embrionárias é moldada a partir das 18 horas pós-fertilização (hpf) como os ventrículos dentro do neuroepitélio inflar. Por 24 hpf, os passos iniciais da morfogênese do tubo neural estão completos. Usando o método descrito aqui, embriões em fase de uma célula são injetados com a codificação do mRNA membrana-alvo a proteína verde fluorescente (memGFP). Após a injeção e de incubação, o embrião, agora entre 18 e 24 hpf, é montado, invertido, em agarose e visualizados por microscopia confocal. Nomeadamente, o embrião do zebrafish é transparente tornando-se um sistema ideal para imagens fluorescentes. Enquanto nossas análises se concentraram na fronteira mesencéfalo e rombencéfalo o rombencéfalo, este método pode ser estendido para a análise de qualquer região do peixe-zebra a uma profundidade de 8-10 mM.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

<p class="jove_content">Neste vídeo, demonstramos um método pelo qual para analisar o cérebro em desenvolvimento em embriões vertebrados zebrafish viver em resolução única célula por microscopia confocal. Isso inclui o método pelo qual injetamos o embrião do zebrafish de uma única célula e, posteriormente, montar e imagem do cérebro em desenvolvimento.</p>

Vivem de imagem do cérebro Zebrafish embrionárias por microscopia confocal

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Research

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Biology

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