Name: live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy
Uploaded: 2009-04-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

<p class="jove_content"> Ett stort tack till Dr Jennifer Gutzman som först utvecklade denna teknik i Sive labbet. Tack även till JB Green på Dana-Farber Cancer Institute i Boston, MA som välvilligt lämnat plasmiden kodning CAAX-GFP mRNA. Den konfokala bildhantering genomfördes på WM Keck stiftelsen biologisk avbildning Facility vid Whitehead. HS stöds av NIHMH70926. EG stöds av en NSF doktorander gemenskap. </p>

<p class="jove_title"> 1. Förbereda mRNA för injektion </p><ol><li> MRNA används i detta förfarande är transkriberas från en plasmid kodning CAAX-EGFP (memGFP) mRNA. Först linjärisera plasmiden enligt Gutzman et al, 2008. </li><li> Sedan transkribera memGFP mRNA med mMessage mMachine kit. </li><li> Späd den resulterande mRNA 1μg/μl, uppmätt, och förvara vid -80 ° C. </li><li> Förbered en injektion mögel på 1% agaros med körfält bredden av embryon i en cell skede. </li><li> Dagen före injektionen, inrätta parning burar separ...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H., Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech Dev</em>. <b>125</b> (974), 11-12 (2008).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: a Guide for the Laboratory Use of Zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content"> I denna video visar vi en metod för mRNA injektion i enstaka embryon cell zebrafisk. Här använder vi mRNA som kodar för ett membran riktade GFP att etikettera varje cell. Vi visar sedan hur man monterar och bild den växande hjärnan på en enda cell upplösning. Denna teknik har gett oss möjlighet att studera en ny typ av celler formen förändring, basala sammandragning, som krävs för bildandet av mitthjärnan-hindbrain gränsen (Gutzman et al, 2008). Liknande analys av andra fenomen har potential att kraftigt ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>SeaKem GTG agarose</td>
<td>   Reagent</td>
<td>Lonza</td>
<td>50027</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (Tricaine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>Borosil 1.0mmOD x 0.5mm ID/fiber 100mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Silicone vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>VWR</td>
<td>W0S717</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11232-20</td>
<td>Dumont #5 Bio Inox</td>
</tr>
<tr>
<td>1-200 &#x03BC;l Pipette tips</td>
<td>Tool</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>111-0806</td>
<td>These are the correct size for 24 hpf embryos. </td>
</tr>
<tr>
<td>mMessage mMachine transcription kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ambion</td>
<td>AM1340</td>
<td>SP6 RNA polymerase</td>
</tr>
<tr>
<td>Zeiss LSM 510 scanning confocal </td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tool</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tool</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PLI-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette puller</td>
<td>Tool</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy

<p class="jove_content">I denna video visar vi metoden vårt laboratorium har utvecklats för att analysera de cellförändringar form och omflyttningar som krävs för att böja och vika utveckla zebrafisk hjärnan (Gutzman et al, 2008). En sådan analys ger en ny förståelse av de underliggande cellbiologi som krävs för utveckling av 3D-strukturen för ryggradsdjur hjärnan, och betydligt ökar vår förmåga att studera neuralrörsdefekter morfogenes. Den embryonala zebrafisk hjärnan är formad som börjar vid 18 timmar efter befruktning (HPF) som ventriklarna inom neuroepithelium blåsa. Genom 24 HPF, de första stegen i neuralrörsdefekter morfogenes är kompletta. Med hjälp av metoden som beskrivs här, är embryon till en cell scenen injiceras med mRNA kodning membran riktade grönt fluorescerande protein (memGFP). Efter injektion och inkubation, embryot, nu mellan 18 och 24 HPF, är monterad, inverterad, i agaros och avbildat av konfokalmikroskopi. Noterbart är zebrafisk embryot transparent vilket gör det till ett idealiskt system för lysrör avbildning. Medan våra analyser har fokuserat på mellanhjärnan-hindbrain gränsen och hindbrain, skulle denna metod förlängas för analys av en region i zebrafisk till ett djup av 80-100 ìm.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy at JoVE.com

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

<p class="jove_content">I denna video visar vi en metod för att analysera utvecklingen av ryggradsdjur hjärnan i levande zebrafisk embryon till en enda cell upplösning av konfokalmikroskopi. Detta inkluderar den metod som vi injicerar encelliga zebrafisk embryo och därefter montera och bild den växande hjärnan.</p>

Live avbildning av Zebrafish embryonal hjärna av konfokalmikroskopi

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Två-foton axotomy och Time-lapse konfokala imaging i levande zebrafisk embryon

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging Of <em>Drosophila melanogaster </em>Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live avbildning av<em> Drosophila melanogaster</em> Embryonala Hemocyte Flyttningar

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-baserad Mätning av Store-drivs kalcium Entry i levande celler: från odlade Cancer Cell till skelettmuskulatur Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

Imaging och 3D rekonstruktion av Cerebrovascular Structures i embryonala Zebrafish

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

Analysera Kraniofaciala Morphogenesis i Zebrafish Använda 4D konfokalmikroskopi

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Live Cell Imaging and 3D Analysis of Angiotensin Receptor Type 1a Trafficking in Transfected Human Embryonic Kidney Cells Using Confocal Microscopy

Levande cell imaging och 3D analys av angiotensinreceptor typ 1a handel i transfekterade humana embryonala njurceller med hjälp av konfokalmikroskopi

Live-cell imaging is used to simultaneously capture time-lapse images of angiotensin type 1a receptors (AT1aR) and intracellular compartments in ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Biologiska provberedning genom högtrycks frysning, mikrovågsugn-assisted kontrastförbättring, och Minimal harts inbäddning för volym Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Live Imaging of Microtubule Dynamics in Glioblastoma Cells Invading the Zebrafish Brain

Levande avbildning av mikrotubulidynamik i glioblastomceller som invaderar zebrafiskhjärnan

With a dismal median survival time in real populations-between 6 to 15 months-glioblastoma (GBM) is the most devastating malignant brain tumor. Treatment ...

Autofluorescence Imaging to Evaluate Red Algae Physiology

Autofluorescensavbildning för att utvärdera rödalgernas fysiologi

Red algae (Rhodophyta) contain phycobiliproteins and colonize habitats with dim light, however some (e.g., some Chroothece species) can also develop in ...