Name: zebrafish brain ventricle injection
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر لورا لوري آن الذين طوروا هذه التقنية في المختبر. معتمد من قبل النظام المنسق NIHMH70926. كان مدعوما من قبل جنيفر Gutzman الزمالة CSBi / ميرك ما بعد الدكتوراه.

بروتوكول الجزء 1 : الاستعداد للmicroinjection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحضير للحقن عن طريق سحب الإبر الشعرية باستخدام إبرة سوتر مجتذب الآلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شغل الإبرة مع صبغة الفلورسنت (مثل تكساس و?...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech. Dev. 125, 974-983 (2008).</li><li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants.">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish. , (1995).</li></ol>

نحن في هذا الفيديو لشرح كيفية حقن صبغة الفلورسنت (تكساس الأحمر ديكستران) في الدماغ الزرد النامية البطينين. وتستخدم هذه الطريقة لتصور الفضاء بطين الدماغ على النقيض من الظهارة العصبية المحيطة بها ومفيد للغاية في تحديد شكل مساحة البطين وكذلك على شكل أنسجة المخ المحيطة ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary Tubes (needles)</td>
<td>Tools</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose-Coated dishes</td>
<td>Tools</td>
<td>Agarose (Seakem GTG; Lonza) Dishes (Corning) </td>
<td>Agarose (50027) Dishes (430166) </td>
<td>Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-200 &mu; pipette tips</td>
<td>Tools</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>1111-0806</td>
<td>These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.</td>
</tr>
<tr>
<td>Photoshop</td>
<td>Image Analysis</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Loop</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tools</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PL1-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Puller</td>
<td>Tools</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tools</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent dye Texas-Red Dextran 70,000MW</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>D1830</td>
<td>Other Molecular weights are available if desired.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>According to Westerfield (5)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

zebrafish brain ventricle injection

مطلوب السليم تشكيل بطين الدماغ أثناء التطور الجنيني للدماغ وظيفة المخ المعتادة. البطينات الدماغية هي تجاويف الحفظ للغاية داخل المخ التي تمتلئ السائل النخاعي. في الزرد ، وبعد تشكيل الأنبوب العصبي ، والظهارة العصبية يخضع لسلسلة من التشنج والطيات في حين يملأ بسائل مما أدى إلى تشكيل بطين الدماغ. نحن في حاجة من أجل فهم عملية تشكيل البطين ، والتغيرات التي تحدث في شكل الظهارية العصبية في نفس الوقت ، وسيلة لتصور الفضاء البطين بالمقارنة مع أنسجة المخ. ومع ذلك ، فإن طبيعة الأجنة الزرد الشفافية يجعل من الصعب التفريق بين الأنسجة من الفضاء البطين. ولذلك ، قمنا بتطوير تقنية الحقن بطين الدماغ حيث يتم ملء الفراغ البطين مع صبغة الفلورسنت والتقط بواسطة المجهر وbrightfield الفلورسنت. ثم تتم معالجة brightfield والصور الفلورسنت وفرضه في Photoshop. هذا الأسلوب يسمح للتصور من الفضاء البطين مع صبغة الفلورسنت ، وبالمقارنة مع شكل الظهارة العصبية في صورة brightfield. ويمكن استخدام حقن الدماغ الزرد في البطين من 18 ساعة من خلال التسميد آخر مراحل اليرقات في وقت مبكر. وقد استخدمنا هذه التقنية على نطاق واسع في دراساتنا تشكيل بطين الدماغ والتشكل ، وكذلك في وصف المسوخ التشكل الدماغ (1-3).

Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

Zebrafish Brain Ventricle Injection

بعد تشكيل الأنبوب العصبي ، ويضيق الظهارة العصبية والطيات في حين أن أنبوب يملأ مع السائل النخاعي الجنينية (eCSF) لتشكيل البطينين المخ الجنينية. قمنا بتطوير هذه التقنية حقن البطين لتصور أفضل السوائل تملأ الفضاء على النقيض من الشكل ظهاري في جنين حي.

الزرد حقن الدماغ البطين

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

الرجعية المدارية في حقن اسماك الزرد الكبار

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

زرع GFP - معربا عن Blastomeres للتصوير لايف التنمية الشبكية والدماغ في الجنين اسماك الزرد همي

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

حقن داخل الصفاق الى اسماك الزرد الكبار

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Direct Delivery of MIF Morpholinos Into the Zebrafish Otocyst by Injection and Electroporation Affects Inner Ear Development

التسليم المباشر للMorpholinos MIF في Otocyst اسماك الزرد عن طريق الحقن وElectroporation يؤثر على التنمية الداخلية الأذن

In recent years, electroporation has become a popular technique for in vivo transfection of DNA, RNA, and morpholinos into various tissues, including the ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

في الجسم الحي من Electroporation Morpholinos في شبكية العين اسماك الزرد الكبار

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

في Electroporation المجراة من Morpholinos في الكبار التجديد زعنفة الذيل الزرد

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging اسماك الزرد الكبار

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Reverse Genetic Morpholino Approach Using Cardiac Ventricular Injection to Transfect Multiple Difficult-to-target Tissues in the Zebrafish Larva

عكس النهج الوراثية عن طريق القلب البطيني Morpholino حقن لبالنقل متعددة يصعب الهدف الأنسجة في الزرد اليرقة

The zebrafish is an important model to understand the cell and molecular biology of organ and appendage regeneration. However, molecular strategies to ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

سم كلوي حقن مكروي في الزرد لنموذج قصور كلوي حاد

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...