Name: zebrafish brain ventricle injection
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

Les auteurs tiennent à remercier Laura Anne Lowery qui a développé cette technique dans le laboratoire. SH est soutenue par NIHMH70926. Jennifer Gutzman a été soutenue par la bourse CSBI / Merck postdoctoraux.

Protocole Partie 1: Préparation pour la microinjection <ol><li> Préparez-vous à l&#39;injection en tirant des aiguilles capillaire en utilisant l&#39;aiguille extracteur Sutter Instruments. </li><li> Remplissez l&#39;aiguille avec un colorant fluorescent (comme le Texas-Red dextran). </li><li> Montez l&#39;aiguille dans un appareil de micromanipulateur et la microinjection. </li><li> Couper l&#39;aiguille à la taille appropriée à un angle de créer un embout biseauté. </li><li> Mesurer...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech. Dev. 125, 974-983 (2008).</li><li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants.">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish. , (1995).</li></ol>

Dans cette vidéo, nous démontrons comment injecter un colorant fluorescent (Texas Red dextran) dans le développement des ventricules cérébraux poisson zèbre. Cette méthode est utilisée pour visualiser l&#39;espace ventricule cérébral en contraste avec le neuroépithélium environnantes et est extrêmement utile pour déterminer la forme de l&#39;espace du ventricule, ainsi que la forme du tissu cérébral environnant. Il nous permet de mieux comprendre le processus de formation du ventricule du cerveau et du c...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary Tubes (needles)</td>
<td>Tools</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose-Coated dishes</td>
<td>Tools</td>
<td>Agarose (Seakem GTG; Lonza) Dishes (Corning) </td>
<td>Agarose (50027) Dishes (430166) </td>
<td>Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-200 &mu; pipette tips</td>
<td>Tools</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>1111-0806</td>
<td>These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.</td>
</tr>
<tr>
<td>Photoshop</td>
<td>Image Analysis</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Loop</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tools</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PL1-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Puller</td>
<td>Tools</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tools</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent dye Texas-Red Dextran 70,000MW</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>D1830</td>
<td>Other Molecular weights are available if desired.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>According to Westerfield (5)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

zebrafish brain ventricle injection

Une bonne formation de ventricule cérébral pendant le développement embryonnaire du cerveau est nécessaire pour une fonction cérébrale normale. Ventricules cérébraux sont des cavités très conservé au sein du cerveau qui sont remplis de liquide céphalo-rachidien. Dans le poisson zèbre, après la formation du tube neural, le neuroépithélium subit une série d&#39;étranglements et les plis tout en se remplissant de liquide entraînant la formation ventricule cérébral. Afin de comprendre le processus de formation du ventricule, et les changements de forme neuroépithéliales qui se produisent au même moment, nous avions besoin d&#39;un moyen de visualiser l&#39;espace ventricule en comparaison avec les tissus du cerveau. Cependant, la nature de l&#39;embryon de poisson zèbre transparent, il est difficile de différencier le tissu de l&#39;espace ventricule. Par conséquent, nous avons développé une technique d&#39;injection du cerveau ventricule où l&#39;espace le ventricule est rempli d&#39;un colorant fluorescent et imagée par microscopie à fond clair et fluorescentes. Le clair et les images fluorescentes sont ensuite traitées et superposées dans Photoshop. Cette technique permet la visualisation de l&#39;espace ventricule avec le colorant fluorescent, en comparaison à la forme du neuroépithélium dans l&#39;image en fond clair. D&#39;injection ventricule cérébral chez le poisson zèbre peut être employé à partir de 18 heures après fécondation par le biais premiers stades larvaires. Nous avons utilisé cette technique largement dans nos études de la formation et la morphogenèse ventricule cérébral ainsi que dans la caractérisation des mutants morphogenèse du cerveau (1-3).

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Zebrafish Brain Ventricle Injection

Après la formation du tube neural, le neuroépithélium resserre et se replie alors que le tube se remplit de liquide céphalorachidien embryonnaires (eCSF) pour former les ventricules du cerveau embryonnaire. Nous avons développé cette technique d&#39;injection du ventricule afin de mieux visualiser l&#39;espace rempli de liquide, contrairement à la forme neuroépithéliales dans un embryon vivant.

Injection Zebrafish ventricule cérébral

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

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In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

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