Name: zebrafish brain ventricle injection
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

<p class="jove_content"> Die Autoren bedanken sich bei Laura Anne Lowery, der diese Technik im Labor entwickelt danken. HS wird durch NIHMH70926 unterstützt. Jennifer Gutzman wurde von der CSBI / Merck Postdoc-Stipendium unterstützt. </p>

<p class="jove_title"> Protokoll </p><p class="jove_step"> Teil 1: Vorbereitung für die Mikroinjektion </p><ol><li> Bereiten Sie für die Injektion durch Ziehen Kapillare Nadeln mit Sutter Instruments Nadel Abzieher. </li><li> Füllen Sie die Nadel mit einem Fluoreszenzfarbstoff (z. B. Texas-Red Dextran). </li><li> Montieren Sie die Nadel in einem Mikromanipulator und Mikroinjektion Apparat. </li><li> Schneiden Sie die Nadel auf die entsprechende Größe in einem Winkel zu einer abgeschrägten Spitze zu schaffen. </li><li> Messen Sie die Tropf...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech. Dev</em>. <b>125</b>, 974-983 (2008).</li><li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants.">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> <em style='font-style: italic'>Anat. Rec. (Hoboken)</em>. <b>292</b>, 94-106 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>132</b>, 2057-2067 (2005).</li><li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> <em style='font-style: italic'>Dev. Dyn</em>. <b>203</b>, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content"> In diesem Video zeigen wir, wie man Fluoreszenzfarbstoff (Texas-Red Dextran) in die Entwicklung Zebrafisch Hirnventrikel zu injizieren. Diese Methode wird verwendet, um das Gehirn Ventrikels Raum im Gegensatz zu den umliegenden Neuroepithel visualisieren und ist äußerst nützlich für die Bestimmung der Form der Ventrikel Raum sowie die Form des umgebenden Hirngewebes. Es ermöglicht uns, besser zu verstehen, den Prozess des Gehirns Ventrikel Bildung und Gehirn Morphogenese im Laufe der Zeit in der Live-Embryo. Diese ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary Tubes (needles)</td>
<td>Tools</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose-Coated dishes</td>
<td>Tools</td>
<td>Agarose (Seakem GTG; Lonza)  Dishes (Corning) </td>
<td>Agarose (50027)<br />Dishes (430166) </td>
<td>Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-200 &mu; pipette tips</td>
<td>Tools</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>1111-0806</td>
<td>These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.</td>
</tr>
<tr>
<td>Photoshop</td>
<td>Image Analysis</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Loop</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tools</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PL1-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Puller</td>
<td>Tools</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tools</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent dye Texas-Red Dextran  70,000MW</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>D1830</td>
<td>Other Molecular weights are available if desired.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>According to Westerfield (5)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

zebrafish brain ventricle injection

<p class="jove_content">Proper Gehirn Ventrikels Bildung während der embryonalen Entwicklung des Gehirns ist für die normale Funktion des Gehirns benötigt. Hirnventrikel sind die hochkonservierten Hohlräume im Gehirn, die mit Liquor gefüllt sind. In Zebrafisch, nachdem Neuralrohr Bildung erfährt der Neuroepithel eine Reihe von Einschnürungen und Falten, während sie mit Flüssigkeit führt Gehirn Ventrikels Bildung füllt. Um den Prozess der Ventrikel Bildung und der neuro-Form verändert, dass zur gleichen Zeit auftreten zu verstehen, brauchen wir einen Weg, um den Ventrikel Raum im Vergleich zu den Hirngewebe zu visualisieren. Allerdings macht die Natur transparent Zebrafischembryonen es schwierig, das Gewebe aus der Herzkammer Raum zu unterscheiden. Deshalb entwickelten wir ein Gehirn Ventrikels Injektionstechnik, wo die Ventrikel Raum mit einem Fluoreszenzfarbstoff gefüllt und bebildert von Hellfeld-und Fluoreszenz-Mikroskopie. Die Hellfeld und Fluoreszenz-Bilder werden dann bearbeitet und überlagert in Photoshop. Diese Technik ermöglicht eine Visualisierung der Ventrikel Raum mit dem Fluoreszenzfarbstoff, im Vergleich zu der Form des Neuroepithel im Hellfeld Bild. Gehirn-Ventrikel Injektion in Zebrafisch kann von 18 Stunden nach der Befruchtung durch frühe Larvenstadien eingesetzt werden. Wir haben diese Technik ausgiebig in unseren Studien des Gehirns Ventrikel Bildung und Morphogenese sowie bei der Charakterisierung von Hirn-Morphogenese-Mutanten (1-3) verwendet.</p>

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Zebrafish Brain Ventricle Injection

<p class="jove_content">Nach Neuralrohr Bildung, verengt die Neuroepithel und Falten, während der Schlauch füllt sich mit embryonalen Liquor (eCSF), um die embryonale Hirnventrikel bilden. Wir haben dieses Ventrikels Injektionstechnik zur besseren Visualisierung der Flüssigkeit gefüllten Raum im Gegensatz zu den neuro-Form in einer Live-Embryo.</p>

Zebrafisch Gehirn Ventrikel Injection

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Live-Imaging der Zebrafisch embryonalen Gehirn durch konfokale Mikroskopie

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Forschung

Biologie

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Retro-Orbital-Injection in Adult Zebrafisch

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

Die Transplantation von GFP-exprimierenden Blastomeren für Live Imaging von Retinal und Entwicklung des Gehirns in Chimäre Zebrafischembryonen

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

Intraperitoneale Injektion in Adult Zebrafisch

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Direct Delivery of MIF Morpholinos Into the Zebrafish Otocyst by Injection and Electroporation Affects Inner Ear Development

Direkte Lieferung von MIF Morpholinos Into the Zebrafisch Otocyst durch Injektion und Elektroporation Beeinflusst Inner Ear Entwicklung

In recent years, electroporation has become a popular technique for in vivo transfection of DNA, RNA, and morpholinos into various tissues, including the ...

<em>In vivo</em> Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

<em>In-vivo-Elektroporation</em> von Morpholinos in die Adult Zebrafisch Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

<em>In vivo</em> Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

<em>In-vivo-Elektroporation</em> von Morpholinos in das Regenerations Adult Zebrafisch Leitwerk

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging Adult Zebrafisch

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

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Rückwärts Genetische Morpholino Ansatz mit Herz ventrikuläre Injektion auf mehrere Schwer zu Zielgeweben in der Zebrafisch-Larve Transfektion

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Nephrotoxin Mikroinjektion in Zebrabärbling akuten Nierenschädigung zu Modell

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