Name: zebrafish brain ventricle injection
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare Anna Laura Lowery che ha sviluppato questa tecnica in laboratorio. HS è supportato da NIHMH70926. Jennifer Gutzman è stato sostenuto dalla CSBI / Merck borsa di studio post-dottorato.

Protocollo Parte 1: Preparazione per la microiniezione <ol><li> Preparare l&#39;iniezione tirando aghi capillare utilizzando Sutter estrattore ago Instruments. </li><li> Riempire l&#39;ago con un colorante fluorescente (come il Texas-Red destrano). </li><li> Montare l&#39;ago in un apparato micromanipolatore e microiniezione. </li><li> Tagliare l&#39;ago per la dimensione appropriata in un angolo per creare una punta smussata. </li><li> Misurare la dimensione delle gocce e controllare che sia...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech. Dev. 125, 974-983 (2008).</li><li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants.">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish. , (1995).</li></ol>

In questo video ci dimostra come iniettare colorante fluorescente (Texas-Red destrano) nello sviluppo di zebrafish ventricoli del cervello. Questo metodo viene utilizzato per visualizzare lo spazio ventricolo del cervello in contrasto con la neuroepitelio circostante ed è estremamente utile per determinare la forma dello spazio ventricolo così come la forma del tessuto cerebrale circostante. Ci permette di comprendere meglio il processo di formazione del cervello del ventricolo e la morfogenesi del cervello nel tempo ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary Tubes (needles)</td>
<td>Tools</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose-Coated dishes</td>
<td>Tools</td>
<td>Agarose (Seakem GTG; Lonza) Dishes (Corning) </td>
<td>Agarose (50027) Dishes (430166) </td>
<td>Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-200 &mu; pipette tips</td>
<td>Tools</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>1111-0806</td>
<td>These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.</td>
</tr>
<tr>
<td>Photoshop</td>
<td>Image Analysis</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Loop</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tools</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PL1-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Puller</td>
<td>Tools</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tools</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent dye Texas-Red Dextran 70,000MW</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>D1830</td>
<td>Other Molecular weights are available if desired.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>According to Westerfield (5)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

zebrafish brain ventricle injection

Corretta formazione ventricolo del cervello durante lo sviluppo embrionale del cervello è necessario per normali funzioni cerebrali. Ventricoli cerebrali sono cavità altamente conservati all&#39;interno del cervello che sono pieni di liquido cerebrospinale. In zebrafish, dopo la formazione del tubo neurale, il neuroepitelio subisce una serie di costrizioni e pieghe mentre si riempie di liquido con conseguente formazione del cervello ventricolo. Al fine di comprendere il processo di formazione del ventricolo, e la forma cambia neuroepiteliale che si verificano allo stesso tempo, abbiamo bisogno di un modo per visualizzare la space ventricolo rispetto al tessuto cerebrale. Tuttavia, la natura di embrioni di zebrafish trasparente rende difficile distinguere il tessuto dallo spazio ventricolo. Pertanto, abbiamo sviluppato una tecnica di ventricolo cerebrale iniezione dove viene riempito lo spazio ventricolo con un colorante fluorescente e ripreso dal campo chiaro e microscopia a fluorescenza. Il campo chiaro e le immagini fluorescenti vengono poi elaborati e sovrapposti in Photoshop. Questa tecnica permette per la visualizzazione dello spazio ventricolo con il colorante fluorescente, rispetto alla forma del neuroepitelio nell&#39;immagine campo chiaro. Ventricolo iniezione cervello in zebrafish può essere impiegato da 18 ore dopo la fecondazione ai primi stadi larvali. Abbiamo usato questa tecnica ampiamente nei nostri studi di formazione del cervello del ventricolo e la morfogenesi e nella caratterizzazione di mutanti morfogenesi del cervello (1-3).

Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

Zebrafish Brain Ventricle Injection

Dopo la formazione del tubo neurale, il neuroepitelio restringe e le pieghe mentre il tubo si riempie di liquido cerebrospinale embrionale (eCSF) per formare i ventricoli del cervello embrionale. Abbiamo sviluppato questa tecnica ventricolo iniezione per visualizzare meglio lo spazio pieno di liquido in contrasto con la forma neuroepiteliale in un embrione vivo.

Zebrafish Cervello iniezione ventricolo

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Vivere Imaging of the Brain Zebrafish embrionali da microscopia confocale

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Ricerca

Biologia

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Retro-orbitale iniezione in Zebrafish adulti

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

Il trapianto di GFP che esprimono blastomeri per dell&#39;immagine in tempo reale dello sviluppo della retina e del cervello in embrioni di zebrafish Chimerico

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

Iniezione intraperitoneale in Zebrafish adulti

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Direct Delivery of MIF Morpholinos Into the Zebrafish Otocyst by Injection and Electroporation Affects Inner Ear Development

Consegna diretta di Morpholinos MIF Into the Otocyst Zebrafish di iniezione e di elettroporazione influenza lo sviluppo dell&#39;orecchio interno

In recent years, electroporation has become a popular technique for in vivo transfection of DNA, RNA, and morpholinos into various tissues, including the ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In elettroporazione in vivo dei Morpholinos nella retina Zebrafish per adulti

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In elettroporazione in vivo di Morpholinos nella Adult Regenerating Zebrafish Tail Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging Zebrafish adulti

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Reverse Genetic Morpholino Approach Using Cardiac Ventricular Injection to Transfect Multiple Difficult-to-target Tissues in the Zebrafish Larva

Reverse genetica Morpholino approccio Uso cardiaca ventricolare iniezione per transfettare diversi tessuti difficili da bersaglio in Zebrafish Larva

The zebrafish is an important model to understand the cell and molecular biology of organ and appendage regeneration. However, molecular strategies to ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nefrotossina microiniezione in Zebrafish per creare un modello danno renale acuto

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...