Name: zebrafish brain ventricle injection
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

著者らは実験室でこのテクニックを開発したローラアンのロウリーを感謝したいと思います。 HSはNIHMH70926によってサポートされています。ジェニファーGutzmanはCSBi /メルクポスドクによってサポートされていました。

プロトコルパート1：マイクロインジェクションのための準備<ol><li>サターインスツルメンツの針プラーを使用してキャピラリー針を引いて、注射の準備。 </li><li>蛍光色素（例えばテキサスレッドデキストランなど）を使用してニードルを埋めます。 </li><li>マイクロマニピュレータ及びマイクロインジェクション装​​置で針をマウントします。 </li><li>斜めの先端を作成?...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech. Dev. 125, 974-983 (2008).</li><li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants.">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish. , (1995).</li></ol>

このビデオでは、ゼブラフィッシュの脳室の開発に蛍光色素（テキサスレッドデキストラン）を注入する方法を示しています。このメソッドは、周囲の神経上皮とは対照的に、脳室のスペースを視覚化するために使用し、心室空間の形状だけでなく、周囲の脳組織の形状を決定するための非常に便利です。それは、私たちはより良い生きている胎児の時間をかけて脳室の形成と脳の形態形成?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary Tubes (needles)</td>
<td>Tools</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose-Coated dishes</td>
<td>Tools</td>
<td>Agarose (Seakem GTG; Lonza) Dishes (Corning) </td>
<td>Agarose (50027) Dishes (430166) </td>
<td>Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-200 &mu; pipette tips</td>
<td>Tools</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>1111-0806</td>
<td>These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.</td>
</tr>
<tr>
<td>Photoshop</td>
<td>Image Analysis</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Loop</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tools</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PL1-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Puller</td>
<td>Tools</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tools</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent dye Texas-Red Dextran 70,000MW</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>D1830</td>
<td>Other Molecular weights are available if desired.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>According to Westerfield (5)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

zebrafish brain ventricle injection

胚の脳の発達の間に適切な脳室の形成は正常な脳機能に必要です。脳室は脳脊髄液で満たされている脳内で高度に保存されて空洞です。それは脳室の形成を生じる流体で満たされる間、ゼブラフィッシュでは、神経管形成後に、神経上皮では狭窄やひだのシリーズを受ける。心室形成の過程、および同時に発生する神経上皮の形状の変化を理解するために、我々は、脳組織に比較して心室の領域を可視化する方法が必要でした。しかし、透明なゼブラフィッシュの胚の性質は、それが困難な心室スペースから組織を区別することができます。したがって、我々は、心室のスペースが蛍光色素を充填し、明視野および蛍光顕微鏡によって撮像される脳室注入の技術を開発した。明視野および蛍光イメージは、処理され、Photoshopで重畳されています。この技法は、明視野像における神経上皮の形状と比較して、蛍光色素による心室空間の可視化が可能になります。ゼブラフィッシュの脳室注入は、初期の幼虫の段階を経て18時間後の受精から採用することができます。我々は、脳室の形成と形態形成の我々の研究だけでなく、脳の形態形成変異体（1-3）を特徴付けるに広くこの技術を使用している。

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Zebrafish Brain Ventricle Injection

神経管形成後に、神経上皮は収縮し、真空管が胚の脳室を形成するために胚性脳脊髄液（eCSF）でいっぱいにしながら折る。我々は、よりよい生きている胎児の神経上皮の形状とは対照的に、流体の満たされた空間を視覚化するために、この心室注入技術を開発した。

ゼブラフィッシュの脳室注入

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Gavagingアダルトゼブラフィッシュ

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