Name: zebrafish brain ventricle injection
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

<p class="jove_content"> 저자는 실험실에서이 기술을 개발 로라 앤 로우 어리 감사하고 싶습니다. HS는 NIHMH70926에 의해 지원됩니다. 제니퍼 구츠맨은 CSBi / 머크 박사 친교에 의해 지원되었다. </p>

<p class="jove_title"> 프로토콜 </p><p class="jove_step"> 1 부 : microinjection에 대비하여 </p><ol><li> 서터 인스 트루먼 트의 바늘 풀러를 사용하여 모세 바늘을 떼어하여 사출을위한 준비. </li><li> 형광 염료 (예 : 텍사스 - 레드 Dextran 등)로 바늘을 입력합니다. </li><li> micromanipulator과 microinjection 장치에 바늘을 탑재합니다. </li><li> beveled 팁을 만들 수있는 각도로 적절한 크기로 바늘을 잘라요. </li><li> 드롭 크기를 측정하고 기름 주입...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech. Dev</em>. <b>125</b>, 974-983 (2008).</li><li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants.">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> <em style='font-style: italic'>Anat. Rec. (Hoboken)</em>. <b>292</b>, 94-106 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>132</b>, 2057-2067 (2005).</li><li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> <em style='font-style: italic'>Dev. Dyn</em>. <b>203</b>, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content"> 이 비디오에서 우리는 zebrafish 두뇌 ​​심실 개발에 형광 염료 (텍사스 - 레드 Dextran)를 주입하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 주변 neuroepithelium 달리 뇌 뇌실 공간을 시각화하는 데 사용과 뇌실 공간의 형태뿐 아니라 주변의 뇌 조직의 모양을 결정하는 매우 유용합니다. 우리가 더 나은 살아있는 배아에서 시간이 지남에 따라 뇌 뇌실 형성 및 뇌 morphogenesis의 과정을 이해할 수 있습니다. 이 기술?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary Tubes (needles)</td>
<td>Tools</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose-Coated dishes</td>
<td>Tools</td>
<td>Agarose (Seakem GTG; Lonza)  Dishes (Corning) </td>
<td>Agarose (50027)<br />Dishes (430166) </td>
<td>Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-200 &mu; pipette tips</td>
<td>Tools</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>1111-0806</td>
<td>These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.</td>
</tr>
<tr>
<td>Photoshop</td>
<td>Image Analysis</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Loop</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tools</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PL1-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Puller</td>
<td>Tools</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tools</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent dye Texas-Red Dextran  70,000MW</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>D1830</td>
<td>Other Molecular weights are available if desired.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>According to Westerfield (5)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

zebrafish brain ventricle injection

<p class="jove_content">배아 두뇌 개발하는 동안 적절한 두뇌 뇌실 형성은 정상적인 뇌 기능이 필요합니다. 뇌 심실은 뇌척수로 가득하는 두뇌 내의 고도 보존 충치 있습니다. 그것이 두뇌 뇌실 형성의 결과로 액체로 채우고있는 동안 zebrafish에서 신경 튜브 형성 후, neuroepithelium는 constrictions과 주름 일련의를 겪습. 뇌실 형성 과정과 동시에 발생하는 neuroepithelial 모양의 변화를 이해하기 위해서, 우리는 뇌 조직에 비해 뇌실 공간을 시각화하는 방법이 필요했습니다. 그러나, 투명한 zebrafish의 배아의 본질은 어려운 뇌실 우주에서 조직을 차별화 수 있습니다. 따라서, 우리는 뇌실 공간이 형광 염료 가득한과 브라이트 및 형광 현미경으로 몇 군데있는 두뇌 뇌실 사출 기술을 개발했습니다. 브라이트과 형광 이미지는 다음 처리와 포토샵으로 겹쳐있다. 이 기법은 브라이트 이미지의 neuroepithelium의 형태 비교, 형광 염료와 뇌실 공간의 시각화를위한 수 있습니다. zebrafish의 뇌 뇌실 주입은 초기 애벌레 단계를 통해 18시간 게시물 수정에서 근무하실 수 있습니다. 우리는뿐만 아니라 두뇌 morphogenesis의 돌연변이 (1-3)를 특성화 같이 뇌실 뇌 형성과 morphogenesis 우리의 연구에 광범위하게이 기술을 사용했습니다.</p>

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Zebrafish Brain Ventricle Injection

<p class="jove_content">신경 튜브 형성 후, neuroepithelium은 수축과 튜브가 배아 두뇌 심실을 형성하기 위해 배아 뇌척수 (eCSF)로 채우고 동안 주름. 우리는 더 나은 라이브 배아에서 neuroepithelial 모양 대조적으로 액체 채워진 공간을 시각화이 뇌실 주입 기술을 개발했습니다.</p>

Zebrafish의 두뇌 뇌실 주입

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

공촛점 현미경으로 Zebrafish 배아 뇌 영상 라이브

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

연구

생물학

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

성인 Zebrafish에서 레트로 - 궤도 분사

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

의 이식 GFP - 표현 키메라 Zebrafish의 태아의 망막과 두뇌 개발의 라이브 영상에 대한 Blastomeres을

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

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<em>In vivo</em> Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

Morpholinos의 <em>생체내의 Electroporation에서</em> 성인 Zebrafish의 망막에

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

<em>In vivo</em> Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

생성중 성인 Zebrafish 테일 핀으로 Morpholinos의 <em>생체내 Electroporation에</em>

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

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성인 Zebrafish의를 Gavaging

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