Name: zebrafish brain ventricle injection
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

<p class="jove_content"> Författarna vill tacka Laura Anne Lowery som utvecklat denna teknik i labbet. HS stöds av NIHMH70926. Jennifer Gutzman stöddes av CSBi / Merck postdoktorsstipendium. </p>

<p class="jove_title"> Protokoll </p><p class="jove_step"> Del 1: Förberedelser för mikroinjektion </p><ol><li> Förbered för injektion genom att dra kapillär nålar med Sutter Instrument nål avdragare. </li><li> Fyll nålen med en fluorescerande färg (till exempel Texas-Red Dextran). </li><li> Montera nålen i en mikromanipulator och mikroinjektion apparater. </li><li> Skär nålen till lämplig storlek i en vinkel för att skapa en fasad spets. </li><li> Mät droppstorlek och kontrollera att det är mellan 1-2nl per injektion i olja. </...

<ol>
	<li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction.">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> <em style='font-style: italic'>Mech. Dev</em>. <b>125</b>, 974-983 (2008).</li><li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants.">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> <em style='font-style: italic'>Anat. Rec. (Hoboken)</em>. <b>292</b>, 94-106 (2009).</li><li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>132</b>, 2057-2067 (2005).</li><li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> <em style='font-style: italic'>Dev. Dyn</em>. <b>203</b>, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish</em>. , (1995).</li></ol>

<p class="jove_content"> I denna video visar vi hur du ska injicera fluorescerande färg (Texas-Red Dextran) att utveckla zebrafisk hjärnans ventriklar. Denna metod används för att visualisera det utrymme hjärnan kammare i kontrast till det omgivande neuroepithelium och är mycket användbart för att bestämma formen på ventrikeln utrymme samt formen på den omgivande hjärnvävnaden. Det ger oss möjlighet att bättre förstå processen i hjärnan ventrikeln bildas och hjärnan morfogenes över tiden i den levande embryo. Denna teknik ä...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillary Tubes (needles)</td>
<td>Tools</td>
<td>Frederick Haer and Co.</td>
<td>30-30-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose-Coated dishes</td>
<td>Tools</td>
<td>Agarose (Seakem GTG; Lonza)  Dishes (Corning) </td>
<td>Agarose (50027)<br />Dishes (430166) </td>
<td>Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-200 &mu; pipette tips</td>
<td>Tools</td>
<td>Tip One, US Scientific</td>
<td>1111-0806</td>
<td>These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.</td>
</tr>
<tr>
<td>Photoshop</td>
<td>Image Analysis</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Loop</td>
<td>Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>Tools</td>
<td>Medical Systems Research Products Harvard Apparatus</td>
<td>PL1-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Puller</td>
<td>Tools</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Tools</td>
<td>Narishige</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent dye Texas-Red Dextran  70,000MW</td>
<td>Reagent</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>D1830</td>
<td>Other Molecular weights are available if desired.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid ethyl ester)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Embryo Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>According to Westerfield (5)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

zebrafish brain ventricle injection

<p class="jove_content">Korrekt hjärnan kammare bildas under fosterutvecklingen hjärnans utveckling behövs för normal hjärnfunktion. Ventriklar i hjärnan är de starkt konservativa hålrum i hjärnan som är fyllda med cerebrospinalvätska. I zebrafisk, efter neuralröret bildas, genomgår neuroepithelium en serie av sammandragningar och rynkor samtidigt som den fylls med vätska vilket resulterar i hjärnan kammare bildas. För att förstå processen att ventrikeln bildas, och neuroepiteliala ändrar form som sker samtidigt behövde vi ett sätt att visualisera ventrikeln utrymme i förhållande till hjärnvävnaden. Gör dock den typ av genomskinliga zebrafisk embryon svårt att skilja vävnad från ventrikeln rymden. Därför utvecklade vi en hjärna teknik kammare injektion där ventrikeln utrymmet är fyllt med en fluorescerande färg och avbildat av brightfield och fluorescerande mikroskopi. Den brightfield och fluorescerande bilderna bearbetas sedan och överlagras i Photoshop. Denna teknik gör det möjligt för visualisering av ventrikeln rymden med fluorescerande färg, i jämförelse med formen på neuroepithelium i brightfield bilden. Brain ventrikeln injektion i zebrafisk kan användas från 18 timmar efter befruktning genom tidiga larvstadier. Vi har använt denna teknik i stor utsträckning i våra studier av hjärnans ventrikeln bildning och morfogenes samt karakterisera mutanter hjärnan morfogenes (1-3).</p>

Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Brain Ventricle Injection at JoVE.com

Zebrafish Brain Ventricle Injection

<p class="jove_content">Efter neuralröret bildas kontraherar den neuroepithelium och veck medan röret fylls med embryonala cerebrospinalvätska (eCSF) för att bilda den embryonala hjärnan ventriklar. Vi utvecklade denna kammare injektionsteknik för att bättre visualisera vätskefyllda utrymme i kontrast till neuroepiteliala form i ett levande embryo.</p>

Zebrafisk Brain kammare Injection

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Live avbildning av Zebrafish embryonal hjärna av konfokalmikroskopi

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Retro-orbital injektionsvätska till vuxna Zebrafish

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

Transplantation av GFP-uttryckande blastomerer för Live avbildning av näthinnan och hjärnans utveckling hos chimära Zebrafish embryon

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

Intraperitoneal injektion i vuxen Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Direct Delivery of MIF Morpholinos Into the Zebrafish Otocyst by Injection and Electroporation Affects Inner Ear Development

Direkt Leverans av MIF Morpholinos Into the Zebrafish Otocyst med injektion och elektroporation Påverkar Inner Ear utveckling

In recent years, electroporation has become a popular technique for in vivo transfection of DNA, RNA, and morpholinos into various tissues, including the ...

<em>In vivo</em> Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

<em>In vivo</em> elektroporering av Morpholinos i Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

<em>In vivo</em> Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

<em>In vivo</em> Elektroporering av Morpholinos i Regenerating Adult Zebrafish stjärtfenan

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

Gavaging vuxna zebrafisk

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Reverse Genetic Morpholino Approach Using Cardiac Ventricular Injection to Transfect Multiple Difficult-to-target Tissues in the Zebrafish Larva

Omvänd Genetisk Morfolino Approach Använda Cardiac ventrikulär injektion att transfektera flera svår mål vävnader i Zebrafish Larva

The zebrafish is an important model to understand the cell and molecular biology of organ and appendage regeneration. However, molecular strategies to ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nefrotoxin mikroinjektion i Zebrafish till Model akut njursvikt

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...