Name: mating and tetrad separation of <em>chlamydomonas reinhardtii</em> for genetic analysis
Uploaded: 2009-08-12T19:00:00
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<p class="jove_content"> Dieses Protokoll basiert auf Techniken, die in dem Labor von Francis-André Wollman am Institut de Biologie Physikalisch-Chimique, Paris, Frankreich gelernt basiert. Die Autoren schulden Dank Jacqueline Girard-Bascou, die ursprünglich eingeführt DBS zu <em>Chlamydomonas</em> genetischen Techniken. <em>Chlamydomonas</em> Forschung in der Autoren-Labor von der National Science Foundation Award MCB-0646350 wird unterstützt. </p>

<p class="jove_title"> Teil 1: Vorbereitung der Stämme für Gametogenese </p><p class="jove_content"> Hinweis: Alle Manipulationen sollte bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Höhere oder niedrigere Temperaturen beeinträchtigen die Geschwindigkeit der Zygote Keimung und können sich negativ auf die Lebensfähigkeit. <br /> Wichtige Überlegung: Es ist wichtig, dass die Stämme zu paaren sind robust wachsen und sind frei von verunreinigenden Pilze oder Bakterien. Wenn die Stämme nicht regelmäßig übertragen worden sind, sollten Passage ...

<ol>
	<li>Harris, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Chlamydomonas+Sourcebook:+Introduction+to+Chlamydomonas+and+Its+Laboratory+Use.">The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use.</a> <em style='font-style: italic'>Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc</em>. , 119-273 (2005).</li></ol>

<p class="jove_content"> Genetische Analyse ist einfach in <em>Chlamydomonas,</em> aber es erfordert spezielle Techniken, um Gameten und separate Tetrade Nachkommen zu erzeugen. Mit gesunder Stämme sind die Techniken leicht erworben. Bei einigen Mutanten, wird es eher eine Kunst, und der Leser sollte Band 1 der kürzlich veröffentlichten <em>Chlamydomonas Sourcebook</em> für historische Anmerkungen und praktische Hinweise beziehen. Darüber hinaus ist anzumerken, dass es viele Variationen über das Grundthema oben beschrieben, von der Method...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>CC-125</td>
<td>Mating type <em>plus</em> strain</td>
<td><em>Chlamydomonas</em> Stock Center</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CC-124</td>
<td>Mating type <em>minus</em> strain</td>
<td><em>Chlamydomonas</em> Stock Center</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris-Acetate-Phosphate (TAP) </td>
<td>Growth medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N10</td>
<td>Growth medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Difco agar</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fisherbrand Stainless-Steel Blades</td>
<td>Tools</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-916-5B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Surgical Blade Handles</td>
<td>Tools</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-914-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fisherbrand Metal Scalpels</td>
<td>Tools</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-920A</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

mating and tetrad separation of <em>chlamydomonas reinhardtii</em> for genetic analysis

<p class="jove_content">Die einzellige Grünalge<em&gt; Chlamydomonas reinhardtii</em&gt; (<em&gt; Chlamydomonas</em&gt;) Hat sich zu einem beliebten Organismus für die Forschung in den verschiedensten Bereichen der Zellbiologie und Genetik wegen seiner einfachen Lebenszyklus, Leichtigkeit des Wachstums und der Manipulation der genetischen Analyse genomischer Ressourcen und Wandelbarkeit des Kerns und beide Organellen. Mating-Stämme ist eine gängige Praxis, wenn genetische Ansätze in werden<em&gt; Chlamydomonass</em&gt;, Um vegetative Diploiden für die Analyse von Dominanz zu erstellen, oder folgende Tetrade Dissektion feststellen nuklearen vs Organellen Erbe, auf Allelietest, um epistasy analysieren, oder die Bevölkerung zum Zwecke der map-basierte Klonen zu erzeugen. Darüber hinaus sind genetische Kreuze routinemäßig verwendet, um Organellen Genotypen mit bestimmten nuklearen Genotypen zu kombinieren. Hier zeigen wir Standard-Methoden zur Gametogenese, Paarung, Zygote Keimung und Tetrade Trennung. Dieses Protokoll besteht aus einem einfach zu folgen Reihe von Schritten, um genetische Ansätze zugänglich Wissenschaftler, die weniger vertraut sind werden<em&gt; Chlamydomonas</em&gt;. Key-Parameter und Krisenherde sind erläutert. Schließlich werden die Ressourcen für weitere Informationen und alternative Methoden zur Verfügung gestellt.</p>

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Mating and Tetrad Separation of Chlamydomonas reinhardtii for Genetic Analysis

<p class="jove_content">Paarung und Tetrade Trennung sind für die genetische Analyse benötigt<em&gt; Chlamydomonas reinhardtii</em&gt;. Hier zeigen wir Standard-Methoden zur Gametogenese, Paarung, Zygote Keimung und Tetrade Dissektion. Dieses Protokoll besteht aus einem einfach zu folgen Reihe von Schritten, um genetische Ansätze zugänglich Wissenschaftler, die weniger vertraut sind werden<em&gt; Chlamydomonas</em&gt;.</p>

Paarung und Tetrad Trennung von<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> Für genetische Analysen

The unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii (Chlamydomonas) has become a popular organism for research in diverse areas of cell biology and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Mating and Tetrad Separation of <em>Chlamydomonas reinhardtii</em> for Genetic Analysis

Light/dark Transition Test for Mice

Hell / Dunkel Transition Test für Mäuse

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Forschung

Biologie

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Method for Culture of Early Hühnerembryonen ex vivo (New Culture)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Doppel Whole Mount in situ Hybridisierung von Anfang Hühnerembryonen

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Verfahren zur Whole Mount Antikörper-Färbung in Küken

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

Assay für Neural Induction im Hühnerembryo

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Eine Neuronale und Astrocyte Co-Kultur-Assay für High Content Analyse der Neurotoxizität

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

Dissection der hippocampalen von erwachsenen Maus

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments

Agarosegel-Elektrophorese für die Trennung von DNA-Fragmenten

Agarose gel electrophoresis is the most effective way of separating DNA fragments of varying sizes ranging from 100 bp to 25 kb1. Agarose is isolated from ...

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Alternative Kulturen für menschlichen pluripotenten Stammzellen Produktion, Wartung und Genetic Analysis

Human pluripotent stem cells (hPSCs) hold great promise for regenerative medicine and biopharmaceutical applications. Currently, optimal culture and ...

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DNA Elektroporation, Isolierung und Imaging von Muskelfasern

Mature muscle has a unique structure that is amenable to live cell imaging. Herein, we describe the experimental protocol for expressing fluorescently ...

Paarung und Tetrad Trennung von Chlamydomonas reinhardtii Für genetische Analysen