Name: preparation of oligomeric &beta;-amyloid1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices
Uploaded: 2010-07-14T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Oligomeric ÃŽÂ²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices at JoVE.com

Diese Arbeit wurde vom NIH National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) (NS049442) unterstützt.&gt;

Resuspendieren β-Amyloid-Peptid Bevor Sie beginnen müssen bereit: <ul><li> Aß 1-42 (gefriergetrocknetes Pulver) </li><li> 1,1,1,3,3,3-Hexafluor-2-propanol (HFIP) </li><li> Low-Bindung Polypropylen Mikrozentrifugenröhrchen (1,5 ml) </li><li> Gasdichte Hamilton-Spritze mit Teflon stürzen zu stoppen (250 ul) </li><li> Dimethylsulfoxid (DMSO) </li></ul><ol><li> Lassen lyophilisiert Aß 1-42 bei Raumtemperatur für 30 Minuten ins Gleichgewicht zu Kondensation beim Öf...

<ol>
	<li>Stine, W. B., Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+characterization+of+conditions+for+amyloid-beta+peptide+oligomerization+and+fibrillogenesis.">In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis.</a> J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).</li><li>Vitolo, O. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+beta+-peptide+inhibition+of+the+PKA/CREB+pathway+and+long-term+potentiation:+reversibility+by+drugs+that+enhance+cAMP+signaling.">Amyloid beta -peptide inhibition of the PKA/CREB pathway and long-term potentiation: reversibility by drugs that enhance cAMP signaling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 13217-13221 (2002).</li><li>Puzzo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picomolar+amyloid-beta+positively+modulates+synaptic+plasticity+and+memory+in+hippocampus.">Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus.</a> J Neurosci. 28, 14537-14545 (2008).</li><li>Lewczuk, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+sample+collection+tubes+on+cerebrospinal+fluid+concentrations+of+tau+proteins+and+amyloid+beta+peptides.">Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides.</a> Clin Chem. 52, 332-334 (2006).</li><li>Masliah, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+synaptic+dysfunction+in+Alzheimer's+disease.">Mechanisms of synaptic dysfunction in Alzheimer's disease.</a> Histol Histopathol. 10, 509-519 (1995).</li><li>Cullen, W. K., Suh, Y. H., Anwyl, R., Rowan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Block+of+LTP+in+rat+hippocampus+in+vivo+by+beta-amyloid+precursor+protein+fragments.">Block of LTP in rat hippocampus in vivo by beta-amyloid precursor protein fragments.</a> Neuroreport. 8, 3213-3217 (1997).</li><li>Itoh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impairments+of+long-term+potentiation+in+hippocampal+slices+of+beta-amyloid-infused+rats.">Impairments of long-term potentiation in hippocampal slices of beta-amyloid-infused rats.</a> Eur J Pharmacol. 382, 167-175 (1999).</li><li>Walsh, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+secreted+oligomers+of+amyloid+beta+protein+potently+inhibit+hippocampal+long-term+potentiation+in+vivo.">Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo.</a> Nature. 416, 535-539 (2002).</li><li>Lambert, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nonfibrillar+ligands+derived+from+Abeta1-42+are+potent+central+nervous+system+neurotoxins.">nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 6448-6453 (1998).</li><li>Gong, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ubiquitin+hydrolase+Uch-L1+rescues+beta-amyloid-induced+decreases+in+synaptic+function+and+contextual+memory.">Ubiquitin hydrolase Uch-L1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory.</a> Cell. 126, 775-788 (2006).</li><li>Trinchese, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+calpains+improves+memory+and+synaptic+transmission+in+a+mouse+model+of+Alzheimer+disease.">Inhibition of calpains improves memory and synaptic transmission in a mouse model of Alzheimer disease.</a> J Clin Invest. 118, 2796-2807 (2008).</li></ol>

Wie oben beschrieben, können verschiedene Probleme in der Herstellung von oligomeren Aß in unbeeinträchtigt LTP führen. Eine Möglichkeit zu prüfen, ob Aß Abbau oder der Mangel an Aß Oligomerisierung stattgefunden haben könnte ist, die Aß Vorbereitung mit Tris-Tricin PAGE / Western Blot-Analyse und analytische Ultrazentrifugation (noch nicht in diesem Protokoll beschrieben) zu bewerten. Als Western Blot Proben unter non-denaturing/non-reducing Bedingungen vorbereitet sind, sollte eine erfolgreiche Vorbereitung ...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>A&beta; 1-42 (lyophilized) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>American Peptide Co.</td>
<td>62-0-80</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>52517</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biotium</td>
<td>90082</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50mL Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>05-538-67</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Axygen</td>
<td>MCT-150-L-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate-Buffered Saline pH 7.4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen-Gibco</td>
<td>10010-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GASTIGHT Syringes 250 &mu;L</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>1725</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bath sonicator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Branson</td>
<td>3510</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Savant SpeedVac Concentrator System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Various distributors</td>
<td>SC 110A</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of oligomeric &beta;-amyloid1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices

Wertminderung von synaptischen Verbindungen geeignet ist, die subtilen amnesic Veränderungen in den frühen Stadien der Alzheimer-Krankheit (AD) zugrunde liegen. β-Amyloid (Aß), ein Peptid, in hohen Mengen in AD produziert, ist bekannt, dass Langzeit-Potenzierung (LTP), ein zelluläres Korrelat von Lernen und Gedächtnis zu reduzieren. In der Tat ist LTP Beeinträchtigung durch Aß verursacht eine nützliche experimentelle Paradigma zur Untersuchung synaptischer Funktionsstörungen in AD-Modellen und zum Screening von Drogen in der Lage zu mildern oder Zurücksetzen wie synaptic Beeinträchtigungen. Studien haben gezeigt, dass Aß die LTP Unterbrechung produziert bevorzugt über ihr oligomerer Form. Hier bieten wir Ihnen ein detailliertes Protokoll für beeinträchtigen LTP durch Perfusion von oligomerisierten synthetischen Aβ1-42-Peptid auf akuten Schnitten des Hippocampus. In diesem Video, skizzieren wir eine Schritt-für-Schritt-Verfahren zur Herstellung von oligomeren Aß<sub&gt; 1-42</sub&gt;. Dann folgen wir ein individuelles Experiment, bei dem LTP im Hippocampus Scheiben ausgesetzt oligomerisiert Aß reduziert wird<sub&gt; 1-42</sub&gt;, Um Scheiben in einem Kontrollexperiment, wo kein Aß im Vergleich<sub&gt; 1-42</sub&gt; Exposition stattgefunden hatte.

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Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Ein Merkmal der Alzheimer-Krankheit ist die Erhöhung der Aß<sub&gt; 1-42</sub&gt; Peptid. Hier bieten wir ein Protokoll zur Herstellung von synthetischen Aß<sub&gt; 1-42</sub&gt; Oligomere, die Hippocampus Langzeit-Potenzierung beeinträchtigt, ein zelluläres Korrelat der Erinnerung. Dieses Verfahren ist nützlich für die Untersuchung von Mechanismen der Aß-induzierte Pathologie und Wirkstoff-Screening.

Herstellung von oligomeren β-Amyloid 1-42 Und Induktion der synaptischen Plastizität Impairment auf Schnitten des Hippocampus

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Vorbereitung der akuten Schnitten des Hippocampus von Ratten und transgenen Mäusen für das Studium der Synaptic Veränderungen während des Alterns und Amyloid-Pathologie

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Forschung

Neurowissenschaften

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation von Neuronen aus Nager Hirnschnitten zu Study Synaptic Transmission and Image präsynaptischen

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

Laterale Diffusion und Exozytose von Membranproteinen in kultivierten Neuronen Veranlagte mit Fluorescence Recovery-und Fluoreszenz-Verlust Photobleaching

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation

Verbesserte Zubereitung und Konservierung von Hippocampus Maus Slices für eine sehr stabile und reproduzierbare Erfassung der Langzeit-Potenzierung

Long-term potentiation (LTP) is a type of synaptic plasticity characterized by an increase in synaptic strength and believed to be involved in memory ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Stereotaktische Infusion von oligomeren Amyloid-beta in die Maus-Hippocampus

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Untersuchung von Synaptic Tagging / Erfassung und Lang Capture mit akuten Schnitten des Hippocampus von Nagetiere

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Messung der synaptischen Vesikel Endozytose in kultivierten Hippocampal Neuronen

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Aufnahme synaptische Plastizität in akuten Hippocampal Scheiben gepflegt in einem kleinvolumigen Recycling - Perfusions- und untertauchen-Typ-Kammer-System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

Bewertung der Synapse Dichte im Hippokampus Nagetier Gehirnscheiben

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole-induzierten anzünden-Maus-Modell

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...