Name: the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow
Uploaded: 2010-05-06T16:22:00
Duration: 14 min 33 s
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Les travaux pris en charge par NIH HD-32116, la famille Sandler Soutenir la Fondation, le Fonds John Bowes de cellules souches, le MEXT, le MHLW et HFSP. ZM soutenu par la Fondation Carlos Baldoceda et UCSF Krevans Bourse. AA-B. Heather détient la présidence et Melanie Muss Doté.

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	<li>Doetsch, F., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Network+of+tangential+pathways+for+neuronal+migration+in+adult+mammalian+brain.">Network of tangential pathways for neuronal migration in adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 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M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+confer+unique+pinwheel+architecture+to+the+ventricular+surface+in+neurogenic+regions+of+the+adult+brain.">Neural stem cells confer unique pinwheel architecture to the ventricular surface in neurogenic regions of the adult brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Han, Y. G., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+organize+ependymal+planar+polarity.">Cilia organize ependymal planar polarity.</a> J Neurosci. 30, 2600-2610 (2010).</li><li>Doetsch, F., Garcia-Verdugo, J. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zinc+finger+transcription+factor+Sp8+regulates+the+generation+and+diversity+of+olfactory+bulb+interneurons.">The zinc finger transcription factor Sp8 regulates the generation and diversity of olfactory bulb interneurons.</a> Neuron. 49, 503-516 (2006).</li><li>Kohwi, M., Osumi, N., Rubenstein, J. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+fate+determinants+of+adult+olfactory+bulb+neurogenesis.">Neuronal fate determinants of adult olfactory bulb neurogenesis.</a> Nat Neurosci. , (2005).</li><li>Ventura, R. E., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+radial+glia+generate+olfactory+bulb+interneurons+in+the+postnatal+murine+brain.">Dorsal radial glia generate olfactory bulb interneurons in the postnatal murine brain.</a> J Neurosci. 27, 4297-4302 (2007).</li><li>Kelsch, W., Mosley, C. P., Lin, C. W., Lois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+mammalian+precursors+are+committed+to+generate+neurons+with+defined+dendritic+projection+patterns.">Distinct mammalian precursors are committed to generate neurons with defined dendritic projection patterns.</a> PLoS Biol. 5, e300 (2007).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centrosome+inheritance+maintains+neural+progenitors.">Asymmetric centrosome inheritance maintains neural progenitors.</a> Nature. 461, 947-955 (2009).</li></ol>

La plupart des études de la neurogenèse dans les zones ventriculaires et sous-ventriculaire se sont appuyés sur des techniques classiques de sectionnement d&#39;examiner les relations microanatomie et cellulaires dans ces régions. Nous décrivons ici une technique alternative, d&#39;abord utilisé pour analyser le réseau de chaînes migratoires des neuroblastes générés dans le SVZ 1, puis utilisées pour étudier la régénération de la population progénitrices SVZ suivantes antimitotiques traitement de 6, et plus récemment utilisée pour étudier les apicale précise basale et interactions cellule-cellule des cellules souches neurales adultes SVZ 2,3,4. Fait intéressant, cette technique a révélé que les cellules souches neurales, ou des cellules de type B1, de l&#39;adulte SVZ font partie d&#39;un neuroépithélium mélangé avec différenciées ne se divisent cellules épendymaires. En face d&#39;imagerie utilisant des échantillons entiers a montré que ce mélange a une architecture neuroépithélium moulinet composé des terminaisons apicale des cellules de type B1 entouré par de grandes surfaces apicales des cellules épendymaires 4. Cette analyse en face a clarifié notre compréhension de la lignée de cellules souches neurales dans le cerveau embryonnaire et adulte comme étant composé de cellules avec des terminaisons à la surface apicale du ventricule et des processus basale contactant une niche vasculaire. Ces résultats aurait été presque impossible en utilisant les techniques classiques de sectionnement. Échantillons entiers aussi faciliter l&#39;identification des cellules souches neurales via leur ventricule contactant processus apical. Comme marqueurs plus spécifiques de ces cellules souches sont trouvées, des échantillons entiers seront une partie intégrante de l&#39;identification et l&#39;analyse de comportement des cellules souches neurales. Échantillons entiers des murs ventricule latéral fournissent également la perspective idéale pour étudier la polarité planaire des cellules épendymaires. Cellules épendymaires sont les cellules tapissant les ventricules multiciliated cette fonction pour propulser le LCR de façon coordonnée. Avec la technique wholemount, l&#39;épithélium épendymaire entière est exposée en face et peut être teinté et étudiées en détail de son avant vers l&#39;arrière et dorsale des frontières ventrale. Par ailleurs, des tests de débit effectués sur épendymaires aiguë disséqué, échantillons entiers vivent robuste montrer le flux planaire polarisée générés par les cils épendymaires. Des travaux récents utilisant des approches wholemount a découvert déterminants cellulaires de cette polarité planaire épendymaires 5. Fait intéressant, les études wholemount ont également suggéré que épendymaires-généré des flux de LCR établit des gradients de chemorepellents qui guident la migration des jeunes neurones dans le SVZ 7. Des approches Wholemount qu&#39;il a identifié le réseau de chaînes de neurones migratoires sont donc continuer à fournir des indications sur les mécanismes de régulation de la migration en chaîne. L&#39;analyse de la VZ et SVZ par wholemount imagerie ajoute une nouvelle approche à la fois pour les études futures et une façon de clarifier notre compréhension des études existantes. Par exemple, une étude récente suggère que les cellules souches neurales dans le SVZ adulte ont été CD133 + / CD24-cellules en contact avec les 8 ventricule. Basé sur leur immunomarquage dans les sections, ces auteurs ont prétendu que ces cellules ont été une sous-population de cellules épendymaires multiciliated. Cependant, dans notre étude en utilisant l&#39;approche wholemount, ce qui donne une vue plus complète de l&#39;épithélium toute épendymaires, nous avons constaté que toutes les cellules épendymaires exprimer CD24 et le seul ventricule contact de cellules qui ont été CD133 + / CD24-ont un sous-ensemble de l&#39;type B1 cellules 4. Par ailleurs, la technique wholemount promet d&#39;être utile dans de futures études examinant l&#39;organisation de mosaïque récemment décrit des cellules souches neurales dans le cerveau adulte 9. Plusieurs études ont montré que les cellules souches neurales dans le cerveau adulte ne sont pas une population homogène, mais sont spécifiées régionalement et, normalement, ne produisent que des sous-types spécifiques d&#39;interneurones bulbe olfactif. Ces études ont proposé que différentes sous-populations de cellules souches neurales peuvent être distingués soit par l&#39;expression des facteurs de transcription spécifiques 10,11,12,13,14 et / ou par leur localisation régionale le long de la dorsale des degrés-ventral et antéro-postérieure de la paroi latérale 9,15,16. Comme plusieurs marqueurs moléculaires de la sous-populations régionalement spécifié de cellules souches neurales adultes sont identifiés, l&#39;imagerie wholemount devrait fournir une vue complète de l&#39;parcelation de ces domaines progénitrices différents le long de la paroi ventriculaire. La dissection wholemount et des techniques d&#39;imagerie présentées ici peuvent également être utilisés pour analyser les parois ventriculaires chez l&#39;embryon. La dissection de la paroi latérale est réalisée embryonnaire, étape par étape, de la même manière. Il ya seulement de légères différences dans le niveau de difficulté; les ventricules embryonnaires sont relativement plus faire la dissection plus facile, mais le tissu est doux rendant la manipulation plus difficile. En particulier, une exposition similaire du ventricule latéral peut être utilisé dans EmbryOS pour disséquer la paroi corticale du ventricule pour étudier la neurogenèse corticale. Des données récentes suggèrent que l&#39;héritage asymétriques centrosome maintient glie radiaire à la surface ventriculaire pendant la neurogenèse corticale 17. En face de l&#39;imagerie radiale gliales surfaces apicales peuvent fournir des indications sur la manière dont les centrosomes au sein de ces cellules qui se divisent de façon asymétrique sont héréditaires. Comme avec la plupart des techniques, en particulier celles impliquant la dextérité précise, la maîtrise exige la pratique. Il ya, cependant, quelques éléments dans la dissection qui sont essentiels à de meilleurs résultats: 1) l&#39;éclairage ajuster l&#39;éclairage de l&#39;échantillon pour créer des ombres donne un contraste précieuse lors de la dissection du tissu qui est par ailleurs relativement homogène, 2) à l&#39;aide de la pince, comme deux broches d&#39;insectes de la pince dans cette technique sont jamais utilisés pour pincer ensemble ou ramasser des tissus, mais ils sont utilisés comme des épingles maniable qui peut être constamment réajustés afin de stabiliser le tissu tout en réduisant, 3) un équilibre de rétractation doux et la coupe du couteau ne doit pas seulement être utilisé pour couper, mais aussi de fournir la rétraction douce pour séparer les murs médial et latéral, en rappelant que la majorité de cette dissection est effectivement réalisé par le biais de rétraction douce avec seulement la coupe intermittente.

the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow

Les parois des ventricules latéraux contiennent la plus grande région germinales dans le cerveau adulte des mammifères. La zone sous-ventriculaire (SVZ) dans ces murs est un système modèle largement étudiés pour comprendre le comportement des cellules souches neurales et la régulation de la neurogenèse adulte. Traditionnellement, ces études se sont appuyés sur des techniques classiques de sectionnement pour l&#39;analyse histologique. Nous présentons ici une approche alternative, la technique wholemount, qui fournit une approche globale, en vue de face de cette région germinales. Comparé à des sections, des échantillons entiers de préserver la cytoarchitecture complète et les relations cellulaires dans le SVZ. Cette approche a récemment révélé que les cellules souches adultes de neurones, ou cellules de type B1, font partie d&#39;un neuroépithélium mélangé avec des cellules différenciées épendymaires tapissant les ventricules latéraux. En outre, cette approche a été utilisée pour étudier la polarisation planaire des cellules épendymaires et l&#39;écoulement du liquide céphalorachidien qu&#39;ils génèrent dans le ventricule. Avec des preuves récentes que cellules souches neurales adultes constituent une population hétérogène qui est régionalement spécifié, l&#39;approche wholemount sera probablement un outil essentiel pour comprendre l&#39;organisation et parcellisation de ce créneau de cellules souches.

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The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Les murs du ventricule latéral contiennent la plus grande région germinales dans le cerveau adulte des mammifères. Traditionnellement, les études sur la neurogenèse dans cette région se sont appuyés sur des techniques classiques de sectionnement pour l&#39;analyse histologique. Nous présentons ici une approche alternative, la technique wholemount, qui fournit une approche globale, en vue de face de cette région germinales.

La zone sous-ventriculaire Fr-face: Coloration Wholemount et Flow épendymaire

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