Name: the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow
Uploaded: 2010-05-06T16:22:00
Duration: 14 min 33 s
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Arbeit unterstützt durch NIH HD-32116, der Sandler Familie Unterstützung Foundation, The John Bowes Stem Cell Fund, MEXT, MHLW und HFSP. ZM durch die Carlos Baldoceda Foundation und UCSF Krevans Fellowship unterstützt. AA-B. hält die Heather und Melanie Muss Stiftungslehrstuhl.

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	<li>Doetsch, F., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Network+of+tangential+pathways+for+neuronal+migration+in+adult+mammalian+brain.">Network of tangential pathways for neuronal migration in adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 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M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+confer+unique+pinwheel+architecture+to+the+ventricular+surface+in+neurogenic+regions+of+the+adult+brain.">Neural stem cells confer unique pinwheel architecture to the ventricular surface in neurogenic regions of the adult brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Han, Y. G., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+organize+ependymal+planar+polarity.">Cilia organize ependymal planar polarity.</a> J Neurosci. 30, 2600-2610 (2010).</li><li>Doetsch, F., Garcia-Verdugo, J. 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Die meisten Studien der Neurogenese in ventrikuläre und subventrikulären Zonen auf klassischen Schnitte Techniken verlassen, um die Mikroanatomie und zellulären Zusammenhänge in diesen Regionen zu untersuchen. Hier beschreiben wir eine alternative Technik, zuerst verwendet, um das Netzwerk der wandernden Ketten von Neuroblasten in der SVZ 1 erzeugt analysieren, dann verwendet werden, um die Regeneration des SVZ Vorläufer-Population nach anti-mitotische Behandlung 6, und in jüngster Zeit verwendet, um den genauen apikalen Studie Studie und basalen Zell-Zell-Interaktionen von Erwachsenen SVZ neuralen Stammzellen 2,3,4. Interessanterweise hat diese Technik ergeben, dass die neuralen Stammzellen, oder geben Sie B1-Zellen, der erwachsenen SVZ Teil eines gemischt Neuroepithel mit differenzierten nicht-teilenden Ependymzellen sind. En-face-Aufnahme nach wholemounts hat gezeigt, dass dieser gemischten Neuroepithel Windrad-Architektur, bestehend aus den apikalen Enden des Typs B1-Zellen durch große apikalen Oberflächen der Ependymzellen 4 umgeben ist. Das En-face-Analyse hat unser Verständnis von der Linie von neuralen Stammzellen in embryonalen und adulten Gehirn als bestehend aus Zellen mit apikalen Enden an den Ventrikel Oberfläche und basale Prozesse Kontaktaufnahme mit einem vaskulären Nische geklärt. Diese Ergebnisse würden beinahe unmöglich gewesen Verwendung klassischer Schnitte Techniken. Wholemounts auch die Identifizierung von neuralen Stammzellen über ihre Ventrikel-Kontakt apikale Prozess. Als weitere spezifische Marker für diese Stammzellen gefunden werden, wird wholemounts ein integraler Bestandteil der Identifizierung und Analyse von neuronalen Stammzellen Verhalten sein. Wholemounts der Seitenventrikel Wände bieten auch die ideale Perspektive für das Studium der planaren Polarität der Ependymzellen. Ependymzellen sind multiciliated Zellen entlang der Herzkammern, die CSF in einer koordinierten Art und Weise anzutreiben Funktion. Mit dem wholemount Technik wird die gesamte Ependymzellen Epithel en-face ausgesetzt und kann gebeizt und umfassend von der vorderen untersucht, um posterior und dorsal nach ventral Grenzen. Darüber hinaus Ependymzellen-Flow-Assays auf akut seziert durchgeführt, live wholemounts robust zeigen die ebene polarisierte flow von Ependymzellen Cilien erzeugt. Neuere Arbeiten mit wholemount Ansätze hat zellulären Determinanten dieser Ependymzellen planaren Polarität 5 freigelegt. Interessanterweise haben wholemount Studien auch vorgeschlagen, dass Ependymzellen-generated Liquorfluss Steigungen chemorepellents, dass die Abwanderung junger Neuronen in der SVZ 7 Leitfaden stellt. Wholemount Ansätze, die zunächst identifiziert das Netzwerk der wandernden Nervenzellen Ketten sind daher weiterhin Einblicke in Mechanismen, die Kette Migration. Die Analyse der VZ und SVZ durch wholemount Bildgebung wird ein neuer Ansatz für zukünftige Studien und ein Weg, um unser Verständnis der vorhandenen Studien zu klären. Zum Beispiel, schlug einer aktuellen Studie, dass neurale Stammzellen im erwachsenen SVZ CD133 + / CD24-Zellen wurden in Kontakt mit der Herzkammer 8. Basierend auf ihrer Immunfärbung in den Abschnitten, behauptete diese Autoren, dass diese Zellen eine Subpopulation von multiciliated Ependymzellen wurden. Doch in unserer Studie mit dem wholemount Ansatz, der eine umfassendere Sicht auf die gesamte Ependymzellen Epithel gibt, fanden wir, dass alle Ependymzellen ausdrückliche CD24 und die einzige Herzkammer-Kontakt-Zellen, die CD133 wurden + / CD24-waren eine Teilmenge des Typs B1 Zellen 4. Darüber hinaus verspricht die wholemount Technik, um auch in Zukunft Studien, die kürzlich beschriebenen Mosaik Organisation von neuronalen Stammzellen im erwachsenen Gehirn 9 Nützliche. Mehrere Studien haben gezeigt, dass neurale Stammzellen im erwachsenen Gehirn keine homogene Bevölkerung, sind aber regional festgelegt und produzieren normalerweise nur bestimmte Subtypen der Riechkolben Interneuronen. Diese Studien haben vorgeschlagen, dass verschiedene Subpopulationen von neuralen Stammzellen können entweder durch die Expression spezifischer Transkriptionsfaktoren 10,11,12,13,14 und / oder durch ihre regionale Lokalisation entlang der dorsal-ventral und anterior-posterior Ausdehnungen der unterschieden werden Seitenwand 9,15,16. Als weitere molekulare Marker der regional festgelegten Subpopulationen von adulten neuralen Stammzellen identifiziert sind, sollte wholemount Bildgebung bieten einen umfassenden Blick auf die parcelation dieser unterschiedlichen Vorläuferzellen Domänen entlang der Ventrikelwand. Die wholemount Dissektion und bildgebende Verfahren hier vorgestellten kann auch verwendet werden, um die Ventrikelwände in den Embryo zu analysieren. Die Zerlegung des embryonalen lateralen Wand durchgeführt wird, Schritt-für-Schritt, in der gleichen Weise. Es gibt nur geringe Unterschiede in der Schwierigkeit, die embryonale Ventrikel sind relativ größer machen die Präparation einfacher, aber das Gewebe weicher macht Manipulationen erschwert. Insbesondere kann eine ähnliche Darstellung des lateralen Ventrikel in Embry verwendet werdenos zu sezieren die kortikale Wand des Ventrikels auf kortikale Neurogenese zu studieren. Jüngsten Untersuchungen zufolge asymmetrische Zentrosom Erbe pflegt radialen Gliazellen an der ventrikulären Oberfläche während kortikale Neurogenese 17. En-face Bildgebung von radialen Gliazellen apikalen Oberflächen bieten Einblicke in die Zentrosomen in diesen teilende Zellen sind asymmetrisch vererbt. Wie bei den meisten Techniken, insbesondere solche, bei denen eine präzise Fingerfertigkeit erfordert Meisterschaft zu praktizieren. Es gibt jedoch einige Elemente in der Sektion, die Schlüssel zu einer besseren Ergebnisse sind: 1) Beleuchtung Anpassung der Beleuchtung der Probe, um Schatten zu schaffen liefert wertvolle Kontrast bei der Präparation von Gewebe, die sonst relativ homogen, 2) mit der Zange wie zwei Insektennadeln der Zange in dieser Technik sind nie verwendet werden, um Prise zusammen oder holen Sie sich Gewebe, sind aber als wendiger Stifte, die ständig nachjustiert, um das Gewebe zu stabilisieren können beim Schneiden, 3) ein ausgewogenes Verhältnis von sanften Einfahren und Schneiden der Messer sollte nicht nur verwendet werden, um geschnitten, sondern auch auf sanfte Rückzug liefern, um die medialen und lateralen Wände trennen, nicht vergessen, dass die Mehrheit dieser Sektion ist eigentlich durch sanfte Einziehen nur mit unterbrochenem Schnitt durchgeführt werden.

the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow

Die Wände der Seitenventrikel enthalten die größten germinal Region im erwachsenen Gehirn von Säugetieren. Die subventrikulären Zone (SVZ) in diesen Mauern ist ein umfassend untersucht Modellsystem für das Verständnis des Verhaltens von neuralen Stammzellen und die Regulation der adulten Neurogenese. Traditionell wurden diese Studien über klassische Schnitte Techniken für die histologische Analyse herangezogen. Hier präsentieren wir einen alternativen Ansatz, der wholemount Technik, die eine umfassende, en-face Angesichts dieser Keim Region bietet. Im Vergleich zu Abschnitten, zu bewahren wholemounts die komplette Zytoarchitektur und zelluläre Beziehungen innerhalb der SVZ. Dieser Ansatz hat kürzlich ergeben, dass die adulten neuralen Stammzellen, oder geben Sie B1-Zellen, Teil eines gemischt Neuroepithel mit differenzierten Ependymzellen Auskleidung der Seitenventrikel sind. Darüber hinaus hat dieser Ansatz verwendet worden, um die planare Polarisierung der Ependymzellen und der Liquor fließen sie erzeugen in den Ventrikel zu studieren. Mit den letzten Beweis dafür, dass adulte neurale Stammzellen eine heterogene Population, die regional angegeben wird, werden die wholemount Ansatz wahrscheinlich ein wesentliches Instrument für das Verständnis der Organisation und Parzellierung des Stammzell-Nische.

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The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Die Seitenventrikel Wände enthalten die größten germinal Region im erwachsenen Gehirn von Säugetieren. Traditionell haben die Studien auf die Neurogenese in dieser Region auf die klassische Schnitte Techniken für die histologische Analyse herangezogen. Hier präsentieren wir einen alternativen Ansatz, der wholemount Technik, die eine umfassende, en-face Angesichts dieser Keim Region bietet.

Die Subventrikularzone En-face: Wholemount Färbung und Ependymale Durchfluss

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Die Neuroblast Assay: Ein Test für die Erzeugung und Anreicherung von neuronalen Vorläuferzellen aus neuralen Stammzellen differenzieren Progeny mittels Durchflusszytometrie

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Forschung

Neurowissenschaften

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

Wholemount Immunhistochemie für die Aufdeckung von komplexen Gehirn Topographie

The repeated and well-understood cellular architecture of the cerebellum make it an ideal model system for exploring brain topography. Underlying its ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Vorbereitung der akuten Subventrikulärzone Slices für Calcium Imaging

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

Neonatal Subventrikulärzone Elektroporation

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Immunohistochemical and Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina

Immunhistochemischen und Calcium Imaging Methoden in der Wholemount Rat Retina

In this paper we describe the tools, reagents, and the practical steps that are needed for: 1) successful preparation of wholemount retinas for ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Komplette Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protokoll für spätere Wholemount<em&gt; In-situ</em&gt; Hybridisierung in Larven Seeneunauge

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Live-Imaging des Ependymale Cilia in der Seitenventrikel des Maus-Gehirn-

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Zellsortierung von Neural Stamm- und Vorläuferzellen aus dem erwachsenen Maus Subventrikularzone und Live-Bildgebung ihrer Zellzyklus Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolierung und Kultur von adulten neuralen Stammzellen aus der Maus subcallosa Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

Messung des Abbaus von Hirnödem nach dem Schlaganfall, Infarktzone und Blut-Hirn-Barrierenabbau in einem einzigen Satz von Nagetier-Gehirnproben

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...