Name: the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow
Uploaded: 2010-05-06T16:22:00
Duration: 14 min 33 s
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NIHの助成金HD - 32116、財団、ジョンボウズ幹細胞の基金、文部科学省、厚生労働省、及びHFSPの支援サンドラファミリーでサポートされて働く。 ZMはカルロスBaldoceda財団とUCSF Krevansフェローシップでサポート。 AA - B。ヘザーとメラニーは、寄附をクシャクシャに保持しています。

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	<li>Doetsch, F., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Network+of+tangential+pathways+for+neuronal+migration+in+adult+mammalian+brain.">Network of tangential pathways for neuronal migration in adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14895-14900 (1996).</li><li>Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+SVZ+stem+cells+lie+in+a+vascular+niche:+a+quantitative+analysis+of+niche+cell-cell+interactions.">Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions.</a> Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).</li><li>Tavazoie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specialized+vascular+niche+for+adult+neural+stem+cells.">A specialized vascular niche for adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+confer+unique+pinwheel+architecture+to+the+ventricular+surface+in+neurogenic+regions+of+the+adult+brain.">Neural stem cells confer unique pinwheel architecture to the ventricular surface in neurogenic regions of the adult brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Han, Y. G., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+organize+ependymal+planar+polarity.">Cilia organize ependymal planar polarity.</a> J Neurosci. 30, 2600-2610 (2010).</li><li>Doetsch, F., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+a+germinal+layer+in+the+adult+mammalian+brain.">Regeneration of a germinal layer in the adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 11619-11624 (1999).</li><li>Sawamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+follow+the+flow+of+cerebrospinal+fluid+in+the+adult+brain.">New neurons follow the flow of cerebrospinal fluid in the adult brain.</a> Science. 311, 629-632 (2006).</li><li>Coskun, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++neural+stem+cells+in+the+ependyma+of+mammalian+postnatal+forebrain.">CD133+ neural stem cells in the ependyma of mammalian postnatal forebrain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 1026-1031 (2008).</li><li>Merkle, F. T., Mirzadeh, Z., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+organization+of+neural+stem+cells+in+the+adult+brain.">Mosaic organization of neural stem cells in the adult brain.</a> Science. 317, 381-384 (2007).</li><li>Young, K. M., Fogarty, M., Kessaris, N., Richardson, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subventricular+zone+stem+cells+are+heterogeneous+with+respect+to+their+embryonic+origins+and+neurogenic+fates+in+the+adult+olfactory+bulb.">Subventricular zone stem cells are heterogeneous with respect to their embryonic origins and neurogenic fates in the adult olfactory bulb.</a> J Neurosci. 27, 8286-8296 (2007).</li><li>Waclaw, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zinc+finger+transcription+factor+Sp8+regulates+the+generation+and+diversity+of+olfactory+bulb+interneurons.">The zinc finger transcription factor Sp8 regulates the generation and diversity of olfactory bulb interneurons.</a> Neuron. 49, 503-516 (2006).</li><li>Kohwi, M., Osumi, N., Rubenstein, J. L., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6+is+required+for+making+specific+subpopulations+of+granule+and+periglomerular+neurons+in+the+olfactory+bulb.">Pax6 is required for making specific subpopulations of granule and periglomerular neurons in the olfactory bulb.</a> J Neurosci. 25, 6997-7003 (2005).</li><li>Kohwi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subpopulation+of+olfactory+bulb+GABAergic+interneurons+is+derived+from+Emx1-+and+Dlx5/6-expressing+progenitors.">A subpopulation of olfactory bulb GABAergic interneurons is derived from Emx1- and Dlx5/6-expressing progenitors.</a> J Neurosci. 27, 6878-6891 (2007).</li><li>Hack, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+fate+determinants+of+adult+olfactory+bulb+neurogenesis.">Neuronal fate determinants of adult olfactory bulb neurogenesis.</a> Nat Neurosci. , (2005).</li><li>Ventura, R. E., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+radial+glia+generate+olfactory+bulb+interneurons+in+the+postnatal+murine+brain.">Dorsal radial glia generate olfactory bulb interneurons in the postnatal murine brain.</a> J Neurosci. 27, 4297-4302 (2007).</li><li>Kelsch, W., Mosley, C. P., Lin, C. W., Lois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+mammalian+precursors+are+committed+to+generate+neurons+with+defined+dendritic+projection+patterns.">Distinct mammalian precursors are committed to generate neurons with defined dendritic projection patterns.</a> PLoS Biol. 5, e300 (2007).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centrosome+inheritance+maintains+neural+progenitors.">Asymmetric centrosome inheritance maintains neural progenitors.</a> Nature. 461, 947-955 (2009).</li></ol>

心室と脳室帯の神経発生のほとんどの研究は、これらの地域におけるミクロ解剖学と細胞の関係を調べるために古典的なセクショニングのテクニックに頼ってきた。ここでは、抗有糸分裂の治療6次のSVZの幹細胞集団の再生を研究するために使用された最初のSVZ 1で生成された神経芽細胞の遊走チェーンのネットワークを分析するために使用する別の方法を、、説明、および最近では正確な頂を研究するために使用と成体SVZの神経幹細胞2,3,4の基底細胞間の相互作用。興味深いことに、この手法は、成人SVZの神経幹細胞、またはタイプのB1細胞は、差別化された非分裂上衣細胞と混合した神経上皮の一部であることを明らかにした。 EN -顔のwholemountsを用いたイメージングでは、この混合神経上皮が上衣細胞の4大頂面に囲まタイプのB1細胞の頂端部のエンディングで構成される風車のアーキテクチャを持っていることを示しています。このエン顔分析は、血管ニッチに連絡心室表面における心尖部終末と基底のプロセスを持つ細胞で構成されるような胚と成体脳における神経幹細胞の系統の我々の理解を明確にしています。これらの知見は、古典的な切片の技術を使用して、ほぼ不可能だったろう。また、心室接触先端突起を介して神経幹細胞の識別を容易にWholemounts。これらの幹細胞が発見されたために、より特異的なマーカーとして、wholemountsは、神経幹細胞の振る舞い​​を識別し、分析の不可欠な部分となります。 側脳室の壁のWholemountsも上衣細胞の平面極性を研究するための理想的な視点を提供しています。上衣細胞は、協調的にCSFを推進するために機能する心室の内側を覆うmulticiliated細胞である。 wholemount手法では、全体の上衣上皮はen -顔を露出していると後部との背腹境界に染色し、その前から総合的に検討することができます。さらに、急性解剖、ライブwholemountsで実行上衣フローアッセイは、確実に上衣繊毛によって生成された平面偏光の流れを示しています。 wholemountアプローチを使用して最近の仕事は、この上衣平面極性5の細胞の決定要因を明らかにした。興味深いことに、wholemount研究はまた、上衣、生成されたCSFのフローは、SVZ 7の若い神経細胞の遊走を導くchemorepellentsの勾配を確立することを示唆している。当初は渡り鳥神経チェーンのネットワークを識別Wholemountアプローチはそのためチェーンの移行を調節する機構についての洞察を提供し続けている。 wholemountイメージングによるVZとSVZの分析は、両方とも今後の研究と既存研究の我々の理解を明確にする方法のための新しいアプローチが追加されます。例えば、最近の研究では、成人SVZにおける神経幹細胞が脳室8と接触してCD133 + / CD24 -細胞であることが示唆された。セクションでそれらの免疫染色に基づいて、これらの著者らは、これらの細胞はmulticiliated上衣細胞の亜集団であることを主張した。しかし、全体上衣上皮のより包括的なビューを与えるwholemountアプローチを、使用して私たちの研究で、我々はそのすべての上衣細胞はCD24とのみ心室接触CD133は+ / B1型のサブセットCD24 -であった細胞が見つかりました細胞4。さらに、wholemountテクニックは成人の脳9の神経幹細胞の最近記載されたモザイクの組織を調べ、今後の研究に有用であることを約束。いくつかの研究は、成体脳における神経幹細胞は均一な集団ではないことが示されているが、地域的に指定されており、通常は嗅球の介在ニューロンの特定のサブタイプを生成する。これらの研究は、神経幹細胞の異なる亜集団が特定の転写因子の発現10,11,12,13,14および/ ​​またはの背腹と前後のエクステントに沿ってそれらの局所的配置のいずれかによって区別される可能性があることを提案した側壁9,15,16。成体神経幹細胞の地域指定のサブポピュレーションのより多くの分子マーカーが同定されているとして、wholemountイメージングは​​、心室壁に沿ってこれらの異なる前駆細胞ドメインのparcelationの包括的なビューを提供する必要があります。 ここで提示wholemount解剖と画像化技術は、胚の心室壁を分析するために使用されることがあります。胚の外側の壁の解離についても同様に、ステップバイステップで、実行されます。難易度のわずかな違いがありますが、胚の心室は解剖が容易に比較的大きいですが、組織は、操作をより困難に柔らかいです。特に、側脳室の同様の暴露は、エンブリーで使用することができます。OSは、皮質神経発生を研究するために心室の皮質壁を細かく分析する。最近の証拠は、非対称中心体の継承は、皮質神経発生17中に心室の表面に放射状グリアを維持することを示唆している。放射状グリア頂面の専用バスの顔画像は、これらの分裂細胞内の中心体が非対称的にどのように継承されるかについての洞察を提供することがあります。 特にほとんどの技術、正確な器用さを伴うものと同様に、支配は練習が必要です。より良い結果への鍵となる解剖のいくつかの要素が、しかし、があります：1）照明は、影を作成するサンプルの照明を調整することのような鉗子を使用して）そうでなければ、2は比較的均質である組織の解剖中に貴重なコントラストを提供します。このテクニックの2つの昆虫ピン鉗子を一緒に挟んだり、組織をピックアップするために使用されることはありませんが、）、穏​​やかな収縮のバランス03を切断し、ナイフを切断いけないしながら組織を安定させるために継続的に再調整することができる機動性のピンとして使用されるのみカットするだけでなく、この解剖の大半は実際には断続切削で穏やかな収縮を介して実行されていることを思い出して、内側と外側の壁を分離するために穏やかな撤回を提供するために使用される。

the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow

側脳室の壁は、成体哺乳動物の脳の最大の胚の領域が含まれています。これらの壁の脳室下帯（SVZ）の神経幹細胞と成体のニューロン新生の制御の挙動を理解するための広範囲に研究のモデルシステムです。伝統的に、これらの研究は、組織学的分析のための古典的なセクショニングのテクニックに頼ってきた。ここでは、この胚地域の包括的な、EN -顔のビューを提供する代替的なアプローチ、wholemountテクニックを、提示する。セクションに比べて、wholemountsは完全な細胞構築とSVZ内の細胞の関係を維持する。このアプローチは、最近、大人の神経幹細胞、またはタイプのB1細胞は、側脳室の内側を覆う、分化上衣細胞と混合した神経上皮の一部であることを明らかにした。さらに、このアプローチは、彼らは脳室で生成上衣細胞と脳脊髄液の流れの平面偏光を研究するために使用されています。成体神経幹細胞は、地域的に指定されている不均一な集団であることが最近の証拠で、wholemountアプローチは、おそらくこの幹細胞のニッチの組織とparcellationを理解するために不可欠なツールとなります。

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The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

側脳室の壁は、成体哺乳動物の脳の最大の胚の領域が含まれています。伝統的に、この地域における神経新生の研究は、組織学的分析のための古典的なセクショニングのテクニックに頼ってきた。ここでは、この胚地域の包括的な、EN -顔のビューを提供する代替的なアプローチ、wholemountテクニックを、提示する。

脳室下帯恩顔：Wholemount染色と上衣の流れ

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

神経芽細胞アッセイ：フローサイトメトリーを用いて神経幹細胞の子孫を差別から神経前駆細胞の生成と濃縮のためのアッセイ

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

複雑な脳の地形を明らかにするためWholemount免疫組織化学

The repeated and well-understood cellular architecture of the cerebellum make it an ideal model system for exploring brain topography. Underlying its ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

カルシウムイメージングの急性脳室下帯スライスの調製

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

新生児の脳室下帯のエレクトロ

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Immunohistochemical and Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina

ホールマウントラット網膜における免疫組織化学的およびカルシウムイメージング法

In this paper we describe the tools, reagents, and the practical steps that are needed for: 1) successful preparation of wholemount retinas for ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

その後のホールマウントのための完全な脊髄損傷や脳解剖プロトコル<em&gt;その場で</em&gt;幼虫海ヤツメウナギにおけるハイブリダイゼーション

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

マウスの脳の側脳室における上衣繊毛のライブイメージング

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

セル成体マウス脳室下帯から神経幹細胞および前駆細胞の選別とその細胞周期ダイナミクスのライブイメージング

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

マウス梁下ゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

げっ歯類の脳サンプルの単一のセットで脳卒中後脳浮腫、梗塞ゾーンおよび血液脳関門破壊を測定する

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...